Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Nowatorski proces druku 3D matryc bezkomórkowych

6.8K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/58720

⸱

7 stycznia 2019

 ,  ,  ,  , 

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół opisuje produkcję filamentu polikaprolaktonu (PCL) z wbudowanymi mikrosferami kwasu polimlekowego (PLA), które zawierają matryce decelularyzowane (DM) do druku 3D strukturalnych konstrukcji inżynierii tkankowej.

Streszczenie

Bioprinting 3D ma na celu stworzenie niestandardowych rusztowań, które są biologicznie aktywne i dostosują się do pożądanego rozmiaru i geometrii. Termoplastyczny szkielet może zapewnić stabilność mechaniczną podobną do tkanki natywnej, podczas gdy czynniki biologiczne oferują wskazówki dotyczące składu komórek progenitorowych, prowadząc do ich migracji, proliferacji i różnicowania w celu odtworzenia oryginalnych tkanek/narządów1,2. Niestety, wiele kompatybilnych z drukiem 3D, bioresorbowalnych polimerów (takich jak kwas polimlekowy, PLA) jest drukowanych w temperaturach 210 °C lub wyższych - temperaturach, które są szkodliwe dla leków biologicznych. Z drugiej strony, polikaprolakton (PCL), inny rodzaj poliestru, jest bioresorbowalnym materiałem do druku 3D, który ma łagodniejszą temperaturę drukowania 65 °C. W związku z tym postawiono hipotezę, że zdecelularyzowana macierz zewnątrzkomórkowa (DM) zawarta w termicznie ochronnej barierze PLA może zostać wydrukowana w włóknie PCL i pozostać w swojej funkcjonalnej konformacji. W tej pracy naprawa kostno-chrzęstna była zastosowaniem, dla którego hipoteza została przetestowana. W związku z tym chrząstka świni została zdecelularyzowana i zamknięta w mikrosferach kwasu polimlekowego (PLA), które następnie zostały wytłaczane z polikaprolaktonem (PCL) do włókna w celu wytworzenia konstruktów 3D za pomocą modelowania osadzania stopionego. Konstrukty z mikrosferami lub bez nich (odpowiednio PLA-DM/PCL i PCL(-)) oceniano pod kątem różnic w cechach powierzchni.

Wprowadzenie

Obecne techniki inżynierii tkankowej do zastosowań klinicznych, takich jak rekonstrukcja kości, chrząstek, ścięgien i więzadeł, wykorzystują auto- i alloprzeszczepy do naprawy uszkodzonej tkanki. Każda z tych technik jest rutynowo wykonywana jako "złoty standard" w praktyce klinicznej, polegająca na pierwszym pobraniu tkanki dawcy od pacjenta lub dopasowania zwłok, a następnie umieszczeniu tkanki dawcy w miejscu ubytku2. Strategie te są jednak ograniczone przez zachorowalność w miejscu dawczym, niedobór miejsc dawczych w przypadku dużych defektów, ryzyko infekcji i trudności ze znalezieniem przeszczepów pasujących do pożądanej geometrii. Ponadt....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Otrzymywanie i wstępne przetwarzanie mikrosfer

  1. Wytwarzaj mikrosfery z pożądaną matrycą w obudowie (PLA-DM)2.
    UWAGA: Konieczne jest, aby mikrosfery miały jednolitą wielkość. Z tego powodu niezbędne jest przesianie mikrosfer przed użyciem. Chociaż decelularyzacja i enkapsulacja matrycy zostały szczegółowo opisane w poprzednich publikacjach2, poniżej znajduje się krótkie podsumowanie tego procesu.
    1. Najpierw zbierz czopy chrzęstne z tylnych kończyn świń. Decelularyzacja chrząstki w serii płukań 0,05% trypsyny/0,5 mm tetrasodowego kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA), zmodyfikowanego podło....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Po przesiewaniu mikrosfery powinny wyglądać jednorodnie i być wolne od aglomeratów. W obrazowaniu SEM przesiane mikrosfery mogą wykazywać niewielkie pory na powierzchni, ale poza tym powinny być sferyczne i gładkie, co przedstawiono na ryc. 1. Wszystkie wytłoczone włókna powinny mieć jednorodną średnicę i okrągły przekrój poprzeczny. Włókno zawierające mikrosfery (PLA-DM/PCL) będzie miało nieco bardziej matowy wykończenie, natomiast włókno złożone wyłącznie z.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Niezależnie wykazano, że zarówno matryce bezkomórkowe, jak i drukowane w 3D rusztowania PCL umożliwiają adhezję i proliferację komórek, potwierdzając ich zastosowanie do naprawy chrzęstnejkości 10,11,12. Zastosowanie matrycy bezkomórkowej w podejściach inżynieryjnych do naprawy tkanek było przedmiotem dużego zainteresowania i sukcesu w niedalekiej przeszłości 2,3,14,15.<.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ten projekt został częściowo sfinansowany z grantu Pediatric Orthopaedic Society of North America (POSNA) oraz grantu National Institutes of Health NIBIB R21EB025378-01 (Exploratory Bioengineering Research Grant).

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Maszyna sitowaHaver & Boecker TylerRo-Tap RX 29-E Sito czyste
90 umFisherbrand170328156nr 170
Sito 53 umFisherbrand162513588Nr 270
Sito 106 umFisherbrand162018121nr 140
NapylarkaLeican/a
Skaningowy mikroskop elektronowyHitachi, USAnie dotyczy
Filabot EX2Filabot.comFB00061
Filabot SpoolerFilabot.comFB00073
CAPA 6506Perstorp24980-41-4
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami, PBSGibco10010023
6" FanComfort Zone, Amazonn/a
Ultradźwiękowa kąpiel wodnaCole ParmerSK-08895-13
DreamerFlashForgen/a
Mikser bębnowyWykonany na zamówienienie dotyczyPodobny element wyposażenia: https://www.coleparmer.com/i/argos-technologies-flexiroll-digital-tube-roller-shaker-120-vac/0439744?PubID=UX&persist=true&ip=
nie & gclid=CjwKCAjw-
dXaBRAEEiwAbwCi5khGDMz0
dTjsraEsBGfhMEH7ytx
LQWGUPNgUJYQ1p3vj_yxkYoI_
ixoC9GwQAvD_BwE
MikrowagaMettler Toledo, Fisher Scientific01-913-851
Simplify3DSimplify3Dn/a
SolidWorksSolidWorksn/a
Mikrosferyprodukowane we własnym zakresie, patrz równolegle zgłoszone JoVE zgłoszenie
fosforan p-nitrofenylu, sól disodowa, sześciowodnyMillipore4876-5GM
Fosfataza, alkalicznaRoche Diagnostics GmbH10 713 023 001
Czytnik absorbancjiTecanSunrise
Tris-HCl BuforSigma-AldrichT6455-100ML
Podgrzewany shakerNowość Brunswick ScientificExcella E24

Bibliografia

  1. Hutchmaker, D., Teoh, S., Zein, I., Ng, K. W., Schantz, J. -T., Leahy, J. C. Design and Fabrication of a 3D Scaffold for Tissue Engineering Bone. Synthetic Bioabsorbable Polymers and Implants. 15 (2), 845-847 (1988).
  2. Ghosh, P., Gruber, S. M. S., Lin, C. -Y., Whitlock, P. Microspheres containing decellularized cartilage induce chondrogenesis and remain functional after incorporation within a poly(caprolactone) filament useful for fabricating a 3D scaffold. Biofabrication. , (201....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Przeglądaj więcej artykułów

Biodruk 3Dmacierz decelularyzowanafilament z polikaprolaktonumikrosfery z kwasu polimlekowegomodelowanie przez stopienie osadzanych warstwprzygotowanie za pomocą wstrząsarki sitowejkontrola temperatury ekstruderaregulacja średnicy filamentuskaningowa mikroskopia elektronowarusztowania w inżynierii tkankowej