Ten protokół opisuje produkcję filamentu polikaprolaktonu (PCL) z wbudowanymi mikrosferami kwasu polimlekowego (PLA), które zawierają matryce decelularyzowane (DM) do druku 3D strukturalnych konstrukcji inżynierii tkankowej.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Ten protokół opisuje produkcję filamentu polikaprolaktonu (PCL) z wbudowanymi mikrosferami kwasu polimlekowego (PLA), które zawierają matryce decelularyzowane (DM) do druku 3D strukturalnych konstrukcji inżynierii tkankowej.
Bioprinting 3D ma na celu stworzenie niestandardowych rusztowań, które są biologicznie aktywne i dostosują się do pożądanego rozmiaru i geometrii. Termoplastyczny szkielet może zapewnić stabilność mechaniczną podobną do tkanki natywnej, podczas gdy czynniki biologiczne oferują wskazówki dotyczące składu komórek progenitorowych, prowadząc do ich migracji, proliferacji i różnicowania w celu odtworzenia oryginalnych tkanek/narządów1,2. Niestety, wiele kompatybilnych z drukiem 3D, bioresorbowalnych polimerów (takich jak kwas polimlekowy, PLA) jest drukowanych w temperaturach 210 °C lub wyższych - temperaturach, które są szkodliwe dla leków biologicznych. Z drugiej strony, polikaprolakton (PCL), inny rodzaj poliestru, jest bioresorbowalnym materiałem do druku 3D, który ma łagodniejszą temperaturę drukowania 65 °C. W związku z tym postawiono hipotezę, że zdecelularyzowana macierz zewnątrzkomórkowa (DM) zawarta w termicznie ochronnej barierze PLA może zostać wydrukowana w włóknie PCL i pozostać w swojej funkcjonalnej konformacji. W tej pracy naprawa kostno-chrzęstna była zastosowaniem, dla którego hipoteza została przetestowana. W związku z tym chrząstka świni została zdecelularyzowana i zamknięta w mikrosferach kwasu polimlekowego (PLA), które następnie zostały wytłaczane z polikaprolaktonem (PCL) do włókna w celu wytworzenia konstruktów 3D za pomocą modelowania osadzania stopionego. Konstrukty z mikrosferami lub bez nich (odpowiednio PLA-DM/PCL i PCL(-)) oceniano pod kątem różnic w cechach powierzchni.
Obecne techniki inżynierii tkankowej do zastosowań klinicznych, takich jak rekonstrukcja kości, chrząstek, ścięgien i więzadeł, wykorzystują auto- i alloprzeszczepy do naprawy uszkodzonej tkanki. Każda z tych technik jest rutynowo wykonywana jako "złoty standard" w praktyce klinicznej, polegająca na pierwszym pobraniu tkanki dawcy od pacjenta lub dopasowania zwłok, a następnie umieszczeniu tkanki dawcy w miejscu ubytku2. Strategie te są jednak ograniczone przez zachorowalność w miejscu dawczym, niedobór miejsc dawczych w przypadku dużych defektów, ryzyko infekcji i trudności ze znalezieniem przeszczepów pasujących do pożądanej geometrii. Ponadt....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
1. Otrzymywanie i wstępne przetwarzanie mikrosfer
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Po przesiewaniu mikrosfery powinny wyglądać jednorodnie i być wolne od aglomeratów. W obrazowaniu SEM przesiane mikrosfery mogą wykazywać niewielkie pory na powierzchni, ale poza tym powinny być sferyczne i gładkie, co przedstawiono na ryc. 1. Wszystkie wytłoczone włókna powinny mieć jednorodną średnicę i okrągły przekrój poprzeczny. Włókno zawierające mikrosfery (PLA-DM/PCL) będzie miało nieco bardziej matowy wykończenie, natomiast włókno złożone wyłącznie z.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Niezależnie wykazano, że zarówno matryce bezkomórkowe, jak i drukowane w 3D rusztowania PCL umożliwiają adhezję i proliferację komórek, potwierdzając ich zastosowanie do naprawy chrzęstnejkości 10,11,12. Zastosowanie matrycy bezkomórkowej w podejściach inżynieryjnych do naprawy tkanek było przedmiotem dużego zainteresowania i sukcesu w niedalekiej przeszłości 2,3,14,15.<.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Ten projekt został częściowo sfinansowany z grantu Pediatric Orthopaedic Society of North America (POSNA) oraz grantu National Institutes of Health NIBIB R21EB025378-01 (Exploratory Bioengineering Research Grant).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Maszyna sitowa | Haver & Boecker Tyler | Ro-Tap RX 29-E Sito czyste | |
| 90 um | Fisherbrand | 170328156 | nr 170 |
| Sito 53 um | Fisherbrand | 162513588 | Nr 270 |
| Sito 106 um | Fisherbrand | 162018121 | nr 140 |
| Napylarka | Leica | n/a | |
| Skaningowy mikroskop elektronowy | Hitachi, USA | nie dotyczy | |
| Filabot EX2 | Filabot.com | FB00061 | |
| Filabot Spooler | Filabot.com | FB00073 | |
| CAPA 6506 | Perstorp | 24980-41-4 | |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanami, PBS | Gibco | 10010023 | |
| 6" Fan | Comfort Zone, Amazon | n/a | |
| Ultradźwiękowa kąpiel wodna | Cole Parmer | SK-08895-13 | |
| Dreamer | FlashForge | n/a | |
| Mikser bębnowy | Wykonany na zamówienie | nie dotyczy | Podobny element wyposażenia: https://www.coleparmer.com/i/argos-technologies-flexiroll-digital-tube-roller-shaker-120-vac/0439744?PubID=UX&persist=true&ip= nie & gclid=CjwKCAjw- dXaBRAEEiwAbwCi5khGDMz0 dTjsraEsBGfhMEH7ytx LQWGUPNgUJYQ1p3vj_yxkYoI_ ixoC9GwQAvD_BwE |
| Mikrowaga | Mettler Toledo, Fisher Scientific | 01-913-851 | |
| Simplify3D | Simplify3D | n/a | |
| SolidWorks | SolidWorks | n/a | |
| Mikrosfery | produkowane we własnym zakresie, patrz równolegle zgłoszone JoVE zgłoszenie | ||
| fosforan p-nitrofenylu, sól disodowa, sześciowodny | Millipore | 4876-5GM | |
| Fosfataza, alkaliczna | Roche Diagnostics GmbH | 10 713 023 001 | |
| Czytnik absorbancji | Tecan | Sunrise | |
| Tris-HCl Bufor | Sigma-Aldrich | T6455-100ML | |
| Podgrzewany shaker | Nowość Brunswick Scientific | Excella E24 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.