Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Wychwyt nowych nanocząstek pokrytych lipidami zawierających falkarindiol przez ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste

8.5K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/59094

⸱

9 lutego 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Chemical Engineering, Biotechnology and Environmental Technology, University of Southern Denmark, 2Center for Single Particle Science and Engineering (SPSE), Institute for Molecular Medicine, Health Sciences, University of Southern Denmark, 3Department of Mechanical Engineering and Material Science, Duke University, 4School of Pharmacy, University of Nottingham

W tym artykule

Podsumowanie

Ten artykuł opisuje enkapsulację falkarindiolu w pokrytych lipidami nanocząstkach o długości fali 74 nm. Komórkowy wychwyt nanocząstek przez ludzkie komórki macierzyste do kropelek lipidów jest monitorowany za pomocą obrazowania fluorescencyjnego i konfokalnego. Nanocząstki są wytwarzane metodą szybkiego wstrzykiwania rozpuszczalnika, a ich rozmiar mierzy się za pomocą techniki dynamicznego rozpraszania światła.

Streszczenie

Nanocząsteczki są przedmiotem zwiększonego zainteresowania systemami dostarczania leków do terapii raka. Nanocząstki pokryte lipidami są inspirowane pod względem struktury i wielkości lipoproteinami o niskiej gęstości (LDL), ponieważ komórki rakowe mają zwiększone zapotrzebowanie na proliferację cholesterolu, co zostało wykorzystane jako mechanizm dostarczania leków przeciwnowotworowych do komórek rakowych. Ponadto, w zależności od składu chemicznego leku, kapsułkowanie leku może być korzystne, aby uniknąć degradacji leku podczas krążenia in vivo. Dlatego w tym badaniu projekt ten jest wykorzystywany do wytwarzania pokrytych lipidami nanocząstek leku przeciwnowotworowego falcarindiolu, zapewniając potencjalny nowy system dostarczania falkarindiolu w celu ustabilizowania jego struktury chemicznej przed degradacją i poprawy jego wychwytu przez nowotwory. Zaprojektowano nanocząstki falkarindiolu z monowarstwą fosfolipidów i cholesterolu otaczającą oczyszczony rdzeń cząsteczki leku. Jednowarstwowa powłoka lipidowa składa się z 1,2-distearoilo-sn-glicero-3-fosfocholiny (DSPC), cholesterolu (Chol) i 1,2-distearoilo-sn-glicero-3-fosfoetanoloaminy-N-[metoksy(glikolu polietylenowego)-2000] (DSPE PEG 2000) wraz z fluorescencyjnym znacznikiem DiI (stosunek molowy 43:50:5:2). Nanocząstki są wytwarzane przy użyciu metody szybkiego wstrzykiwania, która jest szybką i prostą techniką wytrącania nanocząstek za pomocą dobrego rozpuszczalnika w celu wymiany antyrozpuszczalnikowej. Polega ona na szybkim wstrzyknięciu roztworu etanolu zawierającego składniki nanocząstek do fazy wodnej. Wielkość fluorescencyjnych nanocząstek mierzy się za pomocą dynamicznego rozpraszania światła (DLS) przy długości fali 74,1 ± 6,7 nm. Wychwyt nanocząstek jest badany w ludzkich mezenchymalnych komórkach macierzystych (hMSC) i obrazowany za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej i konfokalnej. Wychwyt nanocząstek obserwuje się w hMSC, co sugeruje potencjał takiego stabilnego systemu dostarczania leku dla falkarindiolu.

Wprowadzenie

Nanocząstki pokryte lipidami cieszą się coraz większym zainteresowaniem ze względu na ich funkcję jako systemów dostarczania leków w terapii raka1. Nowotwory mają zmienione przeprogramowanie lipidowo-metaboliczne2 i zwiększone zapotrzebowanie na proliferację cholesterolu3. Wykazują nadekspresję LDLs1 i pobierają więcej LDL niż normalne komórki, do tego stopnia, że liczba LDL u pacjenta z rakiem może nawet spaść4. Wychwyt LDL sprzyja agresywnym fenotypom5, co prowadzi do proliferacji i inwazji raka piersi6. Obfitość receptorów LDL (LDLR) jest prognostycznym wskaźnikiem potencjału przerzutowego7. Zainspirowana LDL i jego wychwytem przez komórki nowotworowe, nowa strategia została nazwana: Spraw, aby lek wyglądał jak żywność dla raka8. Tak więc te nowe projekty dostarczania leków z nanocząsteczkami8,9,10 zostały zainspirowane stabilizowaną rdzeniem i lipidami konstrukcją naturalnych LDLs11 jako mechanizm dostarczania leków przeciwnowotworowych do komórek rakowych. Ten pasywny system dostarczania celowania wspiera kapsułkowanie, zwłaszcza leków hydrofobowych, które są zwykle podawane w postaci dawki doustnej, ale dostarczają tylko niewielką ilość leków do krwiobiegu, ograniczając w ten sposób ich oczekiwaną skuteczność12. Podobnie jak w przypadku liposomów ukrytych13, powłoka z glikolu polietylenowego (PEG) pomaga zmniejszyć odpowiedź immunologiczną i rozszerza krążenie w krwiobiegu w celu optymalnego wychwytu guza dzięki rzekomemu efektowi zwiększonej przenikania i zatrzymywania (EPR)14,15. Jednak oprócz w niektórych przypadkach niestabilności krążenia i niepożądanej dystrybucji w systemie16, niektóre przeszkody pozostają nierozwiązane, takie jak to, w jaki sposób i w jakim stopniu takie nanocząstki są pobierane przez komórki i jaki jest ich los wewnątrzkomórkowy. To właśnie w tym miejscu niniejsza praca dotyczy wychwytu nanocząstek przez konkretny hydrofobowy lek przeciwnowotworowy falcarindiol, przy użyciu technik obrazowania konfokalnego i epifluorescencyjnego.

Celem badania jest wytworzenie pokrytych lipidami nanocząsteczek falkarindiolu i zbadanie ich wewnątrzkomórkowego wychwytu w hMSC. W ten sposób potencjalnie stabilizując jego podawanie, pokonując wyzwania związane z dostarczaniem i poprawiając biodostępność. W ten sposób ocenia się nowy system dostarczania tego leku przeciwnowotworowego. Wcześniej falcarindiol był podawany doustnie w postaci oczyszczonego falkarindiolu o wysokim stężeniu jako suplement diety17. Istnieje jednak potrzeba bardziej ustrukturyzowanego podejścia do dostarczania tego obiecującego leku. W związku z tym zaprojektowano nanocząstki falkarindiolu, w których otoczkowaną monowarstwą fosfolipidów i cholesterolu znajduje się oczyszczony lek stanowiący rdzeń cząstki. Metoda szybkiego wstrzykiwania rozpuszczalnika, opracowana niedawno przez Needhama i wsp.8, jest używany w tym badaniu do enkapsulacji poliacetylenu falcarindiolu.

Metoda była wcześniej stosowana do wytwarzania nanocząsteczek lipidowych do enkapsulacji środków do obrazowania diagnostycznego18,19, a także molekuły testowe (trioleina)27 i leki (orlistat, stearynian niklosamidu)8,27,28. Jest to stosunkowo prosta technika, gdy jest przeprowadzana z odpowiednimi cząsteczkami. Tworzy nanocząsteczki, na granicy ich krytycznego zarodkowania (średnica ~20 nm), wysoce nierozpuszczalnych hydrofobowych substancji rozpuszczonych w rozpuszczalniku polarnym. Wymiana rozpuszczalnika odbywa się poprzez szybkie wstrzyknięcie roztworu organicznego do nadmiaru antyrozpuszczalnika (zwykle fazy wodnej w stosunku objętości organicznej do wodnej 1:9)20,21.

Konstrukcja składu nanocząsteczek daje wiele korzyści. Komponenty DSPC:Chol zapewniają bardzo szczelną, prawie nieprzepuszczalną, biokompatybilną i biodegradowalną monowarstwę. PEG zapewnia sterycznie stabilizujący interfejs, który działa jak tarcza przed opsonizacją przez układ odpornościowy, spowalniając wchłanianie przez układ siateczkowo-śródbłonkowy (wątroba i śledziona) i chroniąc przed jednojądrzastym układem fagocytów, zapobiegając ich zatrzymywaniu i degradacji przez układ odpornościowy, a tym samym zwiększając ich półczas krążenia we krwi22. Dzięki temu cząsteczki mogą krążyć, dopóki nie wynaczynią się w chorych miejscach, takich jak guzy, gdzie układ naczyniowy jest nieszczelny, co pozwala efektowi EPR spowodować bierną akumulację cząstek. Dodatkowo, płaszcz lipidowy pozwala na lepszą kontrolę nad rozmiarem nanocząstek poprzez kinetyczne uwięzienie rdzenia w jego krytycznym wymiarze jądra27,28. Lipidy indukują różne właściwości powierzchniowe (w tym celowanie peptydowe, które nie było jeszcze dostępne w tym projekcie), czysty rdzeń leku i niską polidyspersyjność22,27,28. Metodą stosowaną do analizy wielkości cząstek jest DLS, technika, która pozwala naukowcom mierzyć wielkość dużej liczby cząstek w tym samym czasie. Jednak ta metoda może zniekształcić pomiary do większych rozmiarów, jeśli nanocząstki nie są monorozproszone23. Problem ten jest również oceniany w przypadku płaszcza lipidowego. Więcej szczegółów na temat tych podstawowych projektów i ilościowe określenie wszystkich cech znajduje się w innych publikacjach27,28.

Lek zamknięty w nanocząsteczkach to falcarindiol, dietetyczny poliacetylen występujący w roślinach z rodziny Apiaceae. Jest to metabolit wtórny z alifatycznego typu poliacetylenów C17, w którym stwierdzono działanie prozdrowotne, w tym działanie przeciwzapalne, przeciwbakteryjne i cytotoksyczność wobec szerokiego zakresu linii komórek rakowych. Jego wysoka reaktywność jest związana ze zdolnością do interakcji z różnymi biomolekułami, działając jako bardzo reaktywny środek alkilujący przeciwko grupom merkapto i aminom24. Wcześniej wykazano, że falcarindiol zmniejsza liczbę zmian nowotworowych w okrężnicy17,25, chociaż mechanizmy biologiczne są nadal nieznane. Uważa się jednak, że oddziałuje z biomolekułami, takimi jak NF-κB, COX1, COX-2 i cytokinami, hamując ich progresję guza i procesy proliferacji komórek, prowadząc do zatrzymania cyklu komórkowego, stresu retikulum endoplazmatycznego (ER) i apoptozy17,26 w komórkach rakowych. Falcarindiol jest używany w tym badaniu jako przykładowy lek przeciwnowotworowy ze względu na jego potencjał przeciwnowotworowy i mechanizm, który jest obecnie badany, a także dlatego, że wykazuje obiecujące działanie przeciwnowotworowe. Wychwyt komórkowy nanocząstek jest badany w hMSC i obrazowany za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej i konfokalnej. Ten typ komórek został wybrany ze względu na jego duży rozmiar, dzięki czemu idealnie nadają się do mikroskopii.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Synteza nanocząstek techniką szybkiej zmiany rozpuszczalnika

  1. Do przygotowania nanocząstek należy przygotować następujące elementy: podgrzewacz blokowy/koncentrator próbki, eksykator, cyfrowy system dozowania ze szklaną strzykawką o pojemności 1 ml, szklaną fiolkę o pojemności 12 ml, mieszadło magnetyczne, pchłkę magnetyczną (15 mm x 4,5 mm, w kształcie cylindrycznym z powłoką z politetrafluoroetylenu [PTFE]) wewnątrz szklanej fiolki oraz parownik obrotowy.
  2. Dozować 2,4 ml 250 μM bulionu falcarindiolu rozpuszczonego w 70% mieszaninie wody EtOH w fiolce scyntylacyjnej.
  3. Odparować frakcję ciekłą za pomocą koncentratora próbek przez około 4 godziny, aby uzyskać suchy falkarindiol.
    1. Umieścić fiolkę scyntylacyjną w podgrzewaczu blokowym; koncentrator próbki dostarcza gaz do próbki za pomocą igieł ze stali nierdzewnej, zagęszczając próbkę. Odparować w temperaturze pokojowej; Nie używaj ciepła.
  4. Po wysuszeniu dodać następujące składniki powłoki lipidowej do wyżej wymienionej fiolki scyntylacyjnej: 16,3 μl 31,64 mM roztworu podstawowego chloroformu DSPC, 3,4 μl 17,82 mM roztworu podstawowego chloroformu DSPE PEG 2000, 24 μl 25 mM roztworu podstawowego chloroformu cholesterolu i 6 μl 4 mM roztworu podstawowego chloroformu DiI. Wyczyść strzykawkę chloroformem po dodaniu każdego składnika, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.
    UWAGA: Natychmiast zamknąć fiolki zawierające lipidy, aby rozpuszczalnik nie wyparował, a tym samym zmodyfikować stężenie. Praca pod wyciągiem.
    UWAGA: Stężenia roztworów podstawowych chloroformu mogą się różnić w zależności od dostawcy substancji chemicznej lub rozcieńczeń wykonanych w laboratorium.
  5. Owinąć fiolkę folią aluminiową, aby chronić DiI przed światłem. Pozostawić próbkę na noc w eksykatorze w celu odparowania chloroformu.
  6. Rozpuścić wysuszoną próbkę w absolutnym etanolu do końcowej objętości 1,2 ml, co daje końcowe stężenia DSPC, DSPE PEG 2000, cholesterolu i DiI odpowiednio 0,43 mM, 0,05 mM, 0,5 mM i 0,02 mM. To rozwiązanie reprezentuje fazę organiczną.
  7. Weź szklaną fiolkę o pojemności 12 ml, napełnij ją 9 ml oczyszczonej wody i dodaj pchłę magnetyczną do fiolki zawierającej 9 ml wody. Trzymaj fiolkę na mieszadle magnetycznym, mieszając z prędkością 500 obr./min (Rysunek 1).
  8. Podłącz szklaną strzykawkę o pojemności 1 ml do systemu dozującego i wyczyść ją chloroformem, aby uniknąć zanieczyszczenia. Odbywa się to poprzez powolne wciąganie chloroformu do szklanej strzykawki i ręczne dozowanie do pojemnika na odpady co najmniej 10 tiems.
    UWAGA: Należy to zrobić pod wyciągiem.
  9. Zalać strzykawkę etanolem. Zalewanie zastępuje stary rozpuszczalnik, a także usuwa wszelkie pęcherzyki powietrza.
    UWAGA: Należy to zrobić pod wyciągiem.
  10. Za pomocą strzykawki odessać 1 ml fazy organicznej.
  11. Włożyć strzykawkę do szklanej fiolki do połowy znaku wodnego o pojemności 9 ml i utrzymywać ją nieruchomo w środku fiolki (jak pokazano na Rysunek 1).
  12. Wstrzyknąć roztwór z wybraną prędkością wtrysku (833 μL/s), naciskając przycisk dozowania na systemie dozowania (Rysunek 2). W ten sposób powstaje 10 ml 50 μM pokrytych lipidami nanocząstek falkarindiolu w 10% wodzie zawierającej etanol.
    UWAGA: Stwierdzono, że ta prędkość wtrysku pozwala osiągnąć najdrobniejsze cząstki, uzyskując wąski rozkład wielkości cząstek. Bardzo ważne jest, aby upewnić się, że strzykawka znajduje się pośrodku, stabilnie i prosto podczas dozowania roztworu.
  13. Natychmiast po wstrzyknięciu wyjąć fiolkę z mieszadła i przenieść próbkę do kolby okrągłodennej o pojemności 50 ml (RBF).
  14. Podłączyć RBF do wyparki obrotowej i odparować 1 ml rozpuszczalnika organicznego za pomocą wyparki obrotowej w temperaturze pokojowej. Unikaj nadmiernego tworzenia się pęcherzyków.
    UWAGA: Ten krok zajmie ~5 minut.
  15. Przenieść zawiesinę nanocząstek z RBF do innej szklanej fiolki o pojemności 12 ml. Upewnij się, że objętość wynosi 9 ml. Podziel próbkę na dwie szklane fiolki o pojemności 12 ml (wlej 4,5 ml do każdej).
  16. Dodać 0,5 ml ultraczystej wody do jednej z fiolek i 0,5 ml 10x soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS) do drugiej fiolki. Pobrać 1 ml każdej próbki do pomiaru wielkości cząstek.

2. Analiza wielkości cząstek przy użyciu techniki DLS

UWAGA: Pomiary wielkości zostały przeprowadzone za pomocą analizatora DLS, który określa rozkład wielkości cząstek. Wyposażony jest w laser o mocy 100 mW, który działa na długości fali 662,2 nm oraz w detektor fotodiody lawinowej umieszczony pod kątem 90° do kąta padania. Wiązka jest rozpraszana przez nanocząstki i wykrywana przez fotodetektor.

  1. Włącz przyrząd DLS i ustaw żądaną temperaturę na 20 °C, aż się ustabilizuje.
  2. Ustaw parametry przyrządu w następujący sposób: czas akwizycji danych = 4 s, liczba akwizycji = 30, funkcja automatycznego tłumienia = włączona, a limity czasu automatycznego tłumienia = 0.
  3. Napełnij plastikową kuwetę 1 ml zawiesiny nanocząstek i rozpocznij pomiar.
  4. Podaj zmierzoną wielkość w zależności od użytego rozpuszczalnika (woda lub PBS).
    UWAGA: Pomiar w PBS ma na celu uzyskanie przybliżonego wyobrażenia o wielkości komórek w pożywce podczas leczenia komórek. Leczenie komórkowe zostanie wykonane za pomocą nanocząstek rozpuszczonych w wodzie.
  5. Powtórzyć pomiary 24 godziny po syntezie, aby sprawdzić agregację cząstek.

3. Leczenie komórkowe

  1. Hoduj hMSC w minimalnej pożywce niezbędnej (MEM) uzupełnionej 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS) i 1% penicyliną/streptomycyną, w wilgotnej komorze w temperaturze 37°C z 5% CO2,
    UWAGA: Pracuj w sterylnym okapie z przepływem laminarnym dla kroków 3.1, 3.2 i 3.3.
  2. Wysiewaj około 50 000 komórek, aby uzyskać gęstość komórek około 30% na wcześniej bezwzględnie sterylizowanych EtOH szkiełkach nakrywkowych #1,5 umieszczonych na płytkach 6-dołkowych. Dodaj MEM, aby uzyskać końcową objętość 3 ml w każdym dołku. Inkubować przez 24 godziny w takich samych warunkach, jak w kroku 3.1. Wysiewać komórki 24 godziny przed zabiegiem.
    UWAGA: Bardzo ważne jest, aby komórki zostały wysiane co najmniej 24 godziny przed obróbką nanocząsteczkami, aby upewnić się, że komórki znajdują się w odpowiednim zbiegu.
  3. Nie usuwając pożywki, dodać 3 μl roztworu nanocząstek, aby uzyskać końcowe stężenie falkarindiolu wynoszące 5 μM. Inkubować przez 24 godziny w takich samych warunkach, jak w kroku 3.1.
    UWAGA: Przygotowanie nanocząstek przeprowadzono w dniu leczenia komórkami, aby uniknąć agregacji cząstek.
  4. Następnie, po 24 godzinach leczenia, umyj komórki 2x PBS, utrwal je w 4% formaldehydzie przez 10 minut w temperaturze pokojowej i przechowuj w PBS w temperaturze 4°C przez okres do kilku miesięcy, aż do zobrazowania.
    UWAGA: Należy to zrobić pod wyciągiem.
    1. Alternatywnie, po utrwaleniu, można przeprowadzić barwienie jądrowe 4′,6-diamidyn-2-fenyloindolu (DAPI). W tym celu po utrwaleniu komórek należy je przepuszczać 0,1% Triton X-100 przez 30 minut, umyć je 2x PBS i zabarwić 250 μl 300 nM DAPI przez 5 minut, chroniąc przed światłem.

4. Mikroskopia

  1. Mikroskopia fluorescencyjna
    1. Do pozyskiwania obrazów należy używać szerokokątnego mikroskopu fluorescencyjnego wyposażonego w kamerę CCD zwielokrotnioną elektronami. Użyj obiektywu olejowego 150x NA 1.45 i kanału GFP LP.
  2. Mikroskopia konfokalna
    1. Uzyskaj obrazy mikroskopii konfokalnej za pomocą obiektywu olejowego 63x NA 1.4, lasera argonowego (514 nm) dla DiI i lasera dwufotonowego (780 nm) dla DAPI, aby zweryfikować wchłanianie nanocząstek do komórek.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Wytworzono dwa różne typy nanocząsteczek: czyste nanocząsteczki falkarindiolu oraz nanocząsteczki falkarindiolu powlekane lipidami. Przebadano różne stężenia lipidów i cholesterolu. Jak pokazano w Tabeli 1, nanocząsteczki niepowlekane, utworzone w wodzie i zmierzone w PBS, miały średnicę 71 ± 20,3 nm przy indeksie polidyspersyjności (PDI) wynoszącym 0,571. Parametry te zmierzono za pomocą analizatora DLS. Powlekane lipidami nanocząsteczki falkarindiolu wykorzystane w eksp...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Szczegółowy protokół wytwarzania nanocząstek pokrytych lipidami do dostarczania leku za pomocą prostej, szybkiej, powtarzalnej i skalowalnej metody szybkiego wstrzykiwania przesunięcia rozpuszczalnika był przestrzegany 27,28 i przedstawiono go w niniejszej pracy w odniesieniu do falkarindiolu. Kontrolując szybkość wstrzykiwania fazy organicznej do fazy wodnej i stosując lipidy powlekające o odpowiednich stężeniach do pokrycia rdzenia falkarindiolu, można było z p...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Autorzy dziękują dr Moustapha Kassem (Szpital Uniwersytecki w Odense, Dania) za ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste. Autorzy dziękują Duńskiemu Centrum Bioobrazowania Medycznego za dostęp do ich mikroskopów. Autorzy dziękują fundacjom Carlsberg i Villum za wsparcie finansowe (dla E.A.C.). Autorzy dziękują za wsparcie finansowe w postaci profesury Nielsa Bohra przyznanej przez Duńską Narodową Fundację Badawczą.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Fiolka z szyjką 12 ml (przezroczyste szkło, gwint 15-425, 66 x 18,5 mm)Microlab Aarhus A/SML 33154LP
Płytki 6-dołkoweGreiner Bio One International GmbH657160
Absolutny etanolEMD Millipore (VWR)EM8.18760.1000
ChloroformRathburn Chemicals Ltd.RH1009
CholesterolAvanti Polar Lipids, Inc.700000P
Zeiss LSM510
Grubość szkiełek nakrywkowych #1.5Paul Marienfeld GmbH & Co117650
EksykatorSamodzielna budowa
DiIInvitrogenD282
DLSBeckman CoulterDelsaMAXpro 3167-DMP
DSPC (zapas chloroformu)Avanti Polar Lipids, Inc.850365C 
DSPE PEG 2000 (Chloroform)Avanti Polar Lipids, Inc.880120C
eVol XRSGE nauki analityczne, Trajan Scientific Australia Pty Ltd.2910200
Surowica bydlęca płoduGibco10270-106
Mikroskop fluorescencyjnyOlymous IX81z ręcznym inkubatorem TIRF i iXon EMCCD
Panasonic MCO-18AC
Pchła magnetycznaVWR Chemicals15 x 4,5 mmKształt cylindryczny z powłoką PTFE
Mieszadło magnetyczneIKART-10
Minimum Essential MediaGibco32561-029
Tabletki PBS do hodowli komórkowychVWR Chemicals97062-732
Długopis/paciorkowiecVWR Chemicals97063-708
Bufor fosforanowy Solanka (PBS, pH 7,4)Thermo Fisher10010031
Parownik obrotowyRotavapor, Bü chi Labortechnik AGR-210
Koncentrator próbek Stuart, Cole-Parmer Instrument Company, LLCSBHCONC/1
Mikroskop konfokalny

Bibliografia

  1. Firestone, R. A. Low-Density Lipoprotein as a Vehicle for Targeting Antitumor Compounds to Cancer Cells. Bioconjugate Chemistry. 5 (2), 105-113 (1994).
  2. Beloribi-Djefaflia, S., Vasseur, S., Guillaumond, F. Lipid metabolic reprogramming in cancer cells. Oncogenesis. 5 (1), 189(2016).
  3. Xin, Y., Yin, M., Zhao, L., Meng, F., Luo, L. Recent progress on nanoparticle-based drug delivery systems for cancer therapy. Cancer Biology & Medicine. 14 (3), 228(2017).
  4. Merriel, S. W. D., Carroll, R., Hamilton, F., Hamilton, W. Association between unexplained hypoalbuminaemia and new cancer diagnoses in UK primary care patients. Family Practice. 33 (5), 449-452 (2016).
  5. Yue, S., et al. Cholesteryl ester accumulation induced by PTEN loss and PI3K/AKT activation underlies human prostate cancer aggressiveness. Cell Metabolism. 19 (3), 393-406 (2014).
  6. dos Santos, R., et al. LDL-cholesterol signaling induces breast cancer proliferation and invasion. Lipids in Health and Disease. 13 (16), (2014).
  7. Gallagher, E. J., et al. Elevated tumor LDLR expression accelerates LDL cholesterol-mediated breast cancer growth in mouse models of hyperlipidemia HHS Public Access. Oncogene. 36 (46), 6462-6471 (2017).
  8. Needham, D., et al. Bottom up design of nanoparticles for anti-cancer diapeutics: "put the drug in the cancer's food". Journal of Drug Targeting. 24 (9), 836-856 (2016).
  9. Lacko, A. G., Mconnathy, W. J. Targeted cancer chemotherapy using synthetic nanoparticles. United States Patent Application Publication. , Pub. No.: US 2009/0110739 A1 (2009).
  10. Nikanjam, M., Gibbs, A. R., Hunt, C. A., Budinger, T. F., Forte, T. M. Synthetic nano-LDL with paclitaxel oleate as a targeted drug delivery vehicle for glioblastoma multiforme. Journal of Controlled Release. 124 (3), 163-171 (2007).
  11. Teerlink, T., Scheffer, P. G., Bakker, S. J. L., Heine, R. J. Combined data from LDL composition and size measurement are compatible with a discoid particle shape. Journal of Lipid Research. 45 (5), 954-966 (2004).
  12. Schweizer, M. T., et al. A phase I study of niclosamide in combination with enzalutamide in men with castration-resistant prostate cancer. PLoS ONE. 13 (8), 0202709(2018).
  13. Allen, T. M., Hansen, C. Pharmacokinetics of stealth versus conventional liposomes: effect of dose. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 1068 (2), 133-141 (1991).
  14. Maeda, H. The Enhanced Permeability and Retention (EPR) Effect in Tumor Vasculature: The Key Role of Tumor-Selective Macromolecular Drug Targeting. Advances in Enzyme Regulation. 41 (1), 189-207 (2001).
  15. Wong, A. D., Ye, M., Ulmschneider, M. B., Searson, P. C. Quantitative Analysis of the Enhanced Permeation and Retention (EPR) Effect. PLoS ONE. 10 (5), 0123461(2015).
  16. Khodabandehloo, H., Zahednasab, H., Hafez, A. A. Nanocarriers Usage for Drug Delivery in Cancer Therapy. Iranian Journal of Psychiatry and Behavioral Sciences. 9 (2), (2016).
  17. Kobaek-Larsen, M., El-Houri, R. B., Christensen, L. P., Al-Najami, I., Fretté, X., Baatrup, G. Dietary polyacetylenes, falcarinol and falcarindiol, isolated from carrots prevents the formation of neoplastic lesions in the colon of azoxymethane-induced rats. Food & Function. 8, 964-974 (2017).
  18. Hervella, P., Parra, E., Needham, D. Encapsulation and retention of chelated-copper inside hydrophobic nanoparticles: Liquid cored nanoparticles show better retention than a solid core formulation. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 102, 64-76 (2016).
  19. Hervella, P., et al. Chelation, formulation, encapsulation, retention, and in vivo biodistribution of hydrophobic nanoparticles labelled with 57Co-porphyrin: Octyl Amine ensures stable chelation of cobalt in Liquid Nanoparticles that accumulate in tumors. Journal of Controlled Release. , (2018).
  20. Zhigaltsev, I. V., et al. Bottom-up design and synthesis of limit size lipid nanoparticle systems with aqueous and triglyceride cores using millisecond microfluidic mixing. Langmuir. 28 (7), 3633-3640 (2012).
  21. Aubry, J., Ganachaud, F., Cohen Addad, J. -P., Cabane, B. Nanoprecipitation of Polymethylmethacrylate by Solvent Shifting:1 Boundaries. Langmuir. 25 (4), 1970-1979 (2009).
  22. Karnik, R., et al. Microfluidic Platform for Controlled Synthesis of Polymeric Nanoparticles. Nano Letters. 8 (9), 2906-2912 (2008).
  23. Gaumet, M., Vargas, A., Gurny, R., Delie, F. Nanoparticles for drug delivery: The need for precision in reporting particle size parameters. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 69 (1), 1-9 (2018).
  24. Christensen, L. P., Brandt, K. Bioactive polyacetylenes in food plants of the Apiaceae family: Occurrence, bioactivity and analysis. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 41 (3), 683-693 (2016).
  25. Kobaek-Larsen, M., Christensen, L. P., Vach, W., Ritskes-Hoitinga, J., Brandt, K. Inhibitory Effects of Feeding with Carrots or (-) -Falcarinol on Development of Azoxymethane-Induced Preneoplastic Lesions in the Rat Colon. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53, 1823-1827 (2005).
  26. Jin, H. R., et al. The antitumor natural compound falcarindiol promotes cancer cell death by inducing endoplasmic reticulum stress. CellDeath & Disease. 3, 1-9 (2012).
  27. Walke, P. Physico-Chemical Parameters of Nanoparticles that Govern Prodrug Design and Application in Anticancer Nanomedicine in Physics, Chemistry, Pharmacy. University of Southern Denmark (SDU). , (2018).
  28. Walke, P. B., Hervella, P., Needham, D. Lipid-Coated Stealth Nanoparticles of Novel Hydrophobic Prodrug, Niclosamide Stearate, as Cancer Therapeutic: Formulation and Physico-Chemical Characterization of Nanoparticles. 6th International Pharmaceutical Federation Pharmaceutical Sciences World Congress. , Stockholm, Sweden. (2017).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Dostarczanie falcarindiolumetoda szybkiego wstrzykiwaniadynamiczne rozpraszanie wiat amikroskopia konfokalnaobrazowanie fluorescencyjnepobieranie nanocz steczekenkapsulacja lekuanaliza wielko ci cz stek
Wychwyt nowych nanocząstek pokrytych lipidami zawierających falkarindiol przez ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.