Izolacja komórek jednojądrzastych blaszki właściwej z mysiej okrężnicy przy użyciu kolagenazy E

Duneia McManus; Horacio  J. Novaira; Anouk  A.J. Hamers; Asha  B. Pillai

doi:10.3791/59821

Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Izolacja komórek jednojądrzastych blaszki właściwej z mysiej okrężnicy przy użyciu kolagenazy E

16K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/59821

⸱

26 września 2019

Duneia McManus¹^,²^,³^,⁴ , Horacio J. Novaira¹^,²^,³^,⁴ , Anouk A.J. Hamers¹^,²^,³^,⁴ , Asha B. Pillai¹^,²^,³^,⁴^,⁵

¹Department of Pediatrics, Division of Hematology / Oncology and Bone Marrow Transplantation, University of Miami Miller School of Medicine, ²Batchelor Children's Research Institute, University of Miami Miller School of Medicine, ³Department of Microbiology & Immunology, University of Miami Miller School of Medicine, ⁴Sylvester Comprehensive Cancer Center, University of Miami Miller School of Medicine, ⁵Holtz Children's Hospital, University of Miami Miller School of Medicine

W tym artykule

Podsumowanie

Celem tego protokołu jest wyizolowanie komórek jednojądrzastych, które znajdują się w blaszce właściwej jelita grubego, poprzez enzymatyczne trawienie tkanki za pomocą kolagenazy. Protokół ten pozwala na efektywną izolację komórek jednojądrzastych, w wyniku której powstaje zawiesina pojedynczej komórki, która z kolei może być wykorzystana do solidnego immunofenotypowania.

Streszczenie

Jelito jest domem dla największej liczby komórek odpornościowych w organizmie. Układ odpornościowy jelita cienkiego i grubego kontroluje ekspozycję na antygeny egzogenne i moduluje odpowiedzi na silne bodźce immunologiczne pochodzenia mikrobiologicznego. Z tego powodu jelito jest głównym miejscem docelowym rozregulowania układu odpornościowego i stanu zapalnego w wielu chorobach, w tym między innymi w chorobach zapalnych jelit, takich jak choroba Leśniowskiego-Crohna i wrzodziejące zapalenie jelita grubego, choroba przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD) po przeszczepie szpiku kostnego (BMT) oraz wiele stanów alergicznych i zakaźnych. Mysie modele zapalenia przewodu pokarmowego i zapalenia jelita grubego są intensywnie wykorzystywane do badania powikłań przewodu pokarmowego oraz do przedklinicznej optymalizacji strategii zapobiegania i leczenia. Dane zebrane z tych modeli poprzez izolację i analizę fenotypową komórek odpornościowych z jelita mają kluczowe znaczenie dla dalszego zrozumienia układu odpornościowego, które można zastosować do poprawy zaburzeń zapalnych przewodu pokarmowego i układowego. W niniejszym raporcie opisano wysoce skuteczny protokół izolacji komórek jednojądrzastych (MNC) z jelita grubego przy użyciu mieszanego gradientu gęstości opartego na krzemionce. Metoda ta w powtarzalny sposób izoluje znaczną liczbę żywotnych leukocytów, jednocześnie minimalizując zanieczyszczenia zanieczyszczeń, umożliwiając późniejsze fenotypowanie immunologiczne za pomocą cytometrii przepływowej lub innych metod.

Wprowadzenie

Chociaż przewód pokarmowy (GI) jest głównie przeznaczony do przetwarzania i reabsorpcji składników odżywczych z pożywienia, przewód pokarmowy pełni również kluczową rolę w integralności układu naczyniowego, limfatycznego, nerwowego i wielu innych narządów poprzez swój śluzówkowy i podśluzówkowy układ odpornościowy¹. Układ odpornościowy przewodu pokarmowego odgrywa wpływową rolę zarówno w zdrowiu przewodu pokarmowego, jak i ogólnoustrojowego ze względu na ciągłą ekspozycję na obce antygeny z żywności, bakterie komensalne lub atakujące patogeny¹^,². W związku z tym układ odpornościowy prze....