Artykuł metodologiczny

Model kancerogenezy skóry indukowanej chemicznie z wykorzystaniem dimetylobenz[a]antracenu i octanu 12-O-tetradekanoilu forbolu-13 (DMBA-TPA)

DOI:

10.3791/60445

⸱

19 grudnia 2019

 ,  ,  ,  , 
1Faculty of Medicine and Health Technology, Tampere University and Tampere University Hospital, 2Department of Clinical Microbiology, Fimlab Laboratories

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dwuetapowa kancerogeneza skóry jest indukowana przez dwie miejscowo stosowane substancje chemiczne. Mutagen 7,12-dimetylobenzantracen) powoduje mutacje w komórkach naskórka, a ciągłe stosowanie ogólnego stymulatora wzrostu octanu 12-O-tetradekanoiloforbol-13 przyspiesza powstawanie brodawczaków skóry.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rak jest jedną z najbardziej wyniszczających chorób człowieka. Eksperymentalne modele nowotworów są ważne, aby uzyskać wgląd w złożone wzajemne oddziaływanie różnych typów komórek i genów w promowaniu progresji nowotworu oraz zapewnić platformę do testowania skuteczności różnych podejść terapeutycznych. Jednym z najczęściej stosowanych eksperymentalnych modeli raka zapalnego jest dwuetapowy model kancerogenezy skóry DMBA-TPA. Powstawanie guza jest indukowane w tym modelu przez miejscowe stosowanie dwóch różnych substancji chemicznych, 7,12-dimetylobenz[a]antracenu (DMBA) i octanu 12-O-tetradekanolofral-13-forbolu (TPA), które razem powodują powstawanie brodawczaka w skórze. Ponieważ głównym wynikiem jest tworzenie się brodawczaka w skórze, model jest idealnym, niezawodnym i powtarzalnym sposobem radzenia sobie zarówno z inicjacją guza (przeżycie wolne od guza), jak i progresją guza (liczba i wielkość widocznych guzów). Efekty leczenia DMBA-TPA są przekazywane za pośrednictwem mechanizmu zapalnego, co sprawia, że model ten jest szczególnie odpowiedni do badania roli układu odpornościowego w tworzeniu nowotworów. Jednak ten model jest ograniczony do skóry i innych powierzchni, na które można nakładać chemikalia. W tym artykule znajduje się szczegółowy protokół umożliwiający pomyślne korzystanie z modelu.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rak jest jedną z głównych przyczyn zgonów na świecie. W związku z tym istnieje zapotrzebowanie na opracowanie wiarygodnych eksperymentalnych modeli chorób, aby lepiej zrozumieć chorobę, a także zbadać potencjalne podejścia terapeutyczne. Jednym z najczęściej stosowanych eksperymentalnych modeli in vivo do badania rozwoju raka skóry jest chemicznie indukowany dwuetapowy model kancerogenezy skóry1,2. Model dostarcza narzędzia do badania inicjacji, promocji i progresji guza, a także określonych zdarzeń, takich jak infiltracja komórek odpornościowych i angiogeneza.

Aby skorzystać z dwuetapowego modelu kancerogenezy skóry, tylna skóra myszy jest traktowana dwoma różnymi substancjami chemicznymi, które razem indukują powstawanie nowotworu. Model rozpoczyna się od podania niskiej dawki mutagenu, DMBA, po której następuje przedłużona ekspozycja na promotor nowotworu, TPA3 (Rysunek 1). DMBA mutuje DNA losowo, tworząc kowalencyjne addukty z DNA komórek naskórka i pierwotnych komórek macierzystych keratynocytów4,5,6,7. Niektóre z tych losowych mutacji zachodzą w protoonkogenie, takim jak Hras1 (wykrywane są również mutacje w Kras i Nras), a konwersja protoonkogenów do onkogenów napędza powstawanie guza pod wpływem odpowiednich bodźców. TPA z kolei jest najczęściej stosowanym środkiem wspomagającym wzrost nowotworu. Jego celem molekularnym jest kinaza białkowa C (PKC)8. TPA aktywuje również sygnalizację Wnt/β-kateniny, która jest kluczowa dla powstawania guza w modelu9. Powtarzające się i długotrwałe narażenie na środek promujący prowadzi do wzmocnienia sygnalizacji komórkowej, zwiększonej produkcji czynników wzrostu i miejscowej reakcji zapalnej, które są widoczne ze względu na zwiększoną syntezę DNA i infiltrację komórek zapalnych w leczonej skórze.

Kluczowe mediatory stanu zapalnego w modelu DMBA-TPA zostały zidentyfikowane10. Interleukina-17A (IL-17A) jest znana jako szczególnie rakotwórcza w modelu DMBA-TPA11,12. Działa w synergii z interleukiną 6 (IL-6) i uczestniczy w rekrutacji makrofagów i neutrofili13,14. Ponadto wykazano, że limfocyty T CD4 + i neutrofile są rakotwórcze w modelu DMBA-TPA. Wreszcie, makrofagi mogą również sprzyjać nowotworzeniu w modelu15,16,17.

Podczas fazy promocji, proliferacja zmutowanych komórek jest zwiększona i utrzymuje się utrzymujący się przerost naskórka1. Prowadzi to do rozwoju brodawczaka na skórze w ciągu 10–20 tygodni, po czym brodawczaki zaczynają przekształcać się w nowotwory złośliwe, raki płaskonabłonkowe (SCC)2. Jednak mniej niż 10% brodawczaków rozwija się w nowotwór złośliwy, chociaż odsetek ten zależy również od tła genetycznego myszy2,18. Przez dziesięciolecia nie było wiadomo, jaki typ komórek był początkowo zmutowany w guzach prowadzących do nowotworu złośliwego, mimo że niektóre badania wykazały wyraźnie wyraźne cechy nowotworów złośliwych w porównaniu z łagodnymi brodawczakami19,20. Jednak ostatnie badania znacznie poszerzyły naszą wiedzę na temat klonalnego pochodzenia powstawania nowotworów w modelu DMBA-TPA21.22.23. Wykazano, że zarówno komórki nabłonkowe pochodzące ze szpiku kostnego, jak i komórki macierzyste mieszków włosowych przyczyniają się do powstawania nowotworu22. Badania nad śledzeniem linii w poszczególnych etapach wykazały, że łagodne brodawczaki są pochodzenia monoklonalnego, ale rekrutują nowe populacje komórek nabłonkowych21,23. Jednak tylko jeden z klonów komórkowych pełni funkcję czynnika napędzającego kancerogenezę; zawiera mutację Hras23. Progresja do powstawania raka jest związana z klonalnym sweep23.

Rakotwórczy DMBA inicjuje powstawanie brodawczaka, a TPA sprzyja wzrostowi guza. W związku z tym inicjację guza można badać oddzielnie od promocji poprzez przerwanie eksperymentu przed okresem leczenia TPA. Ponieważ progresja guza jest badana co tydzień, stanowi to doskonałą okazję do szczegółowej analizy wzrostu guza przez cały czas trwania badania. Ponieważ guzy są generowane przez zewnętrzne substancje chemiczne, mutacja onkogenna w linii zarodkowej jest niepotrzebna. Tak więc badanie wpływu tła genetycznego (np. nokaut/transgen vs. typ dziki) na nowotworzenie jest proste2. Podsumowując, model raka skóry DMBA/TPA jest szczególnie przydatnym podejściem do badania roli układu odpornościowego w progresji guza, a także do oceny etapów inicjacji i promocji guza niezależnie lub współzależnie.

figure-introduction-1
Rycina 1: Zarys modelu kancerogenezy skóry wywołanej DMBA-TPA. Rakotwórczy DMBA jest stosowany miejscowo w celu indukowania mutacji DNA w fazie inicjacji modelu. Środek stymulujący wzrost TPA jest podawany 2 razy w tygodniu w celu zwiększenia proliferacji komórek w fazie promocji, co prowadzi do rozwoju brodawczaków skóry. Zwierzęta są uśmiercane po osiągnięciu plateau przez brodawczaka, zwykle w ciągu 15-20 tygodni, w zależności od tła genetycznego myszy. Niewielka część brodawczaków może dalej przekształcić się w SCC w ciągu 20-50 tygodni. W celu zbadania wczesnych zdarzeń w fazie inicjacji i wczesnej promocji można pobrać próbki (np. wkrótce po drugim zastosowaniu TPA). Pokazano reprezentatywną fotografię oraz przekrój brodawczaków barwionych hematoksyliną i eozyną na skórze myszy C57BL/6 po 19 tygodniach leczenia. Podziałka = 0,1 mm. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Opisany tutaj protokół został zatwierdzony przez Narodową Komisję Etyki Zwierząt Finlandii (numer protokołu ESAVI/23659/2018).

1. Zwierzęta doświadczalne, odczynniki i sprzęt

  1. Użyj myszy dopasowanych do wieku i płci. Rozpocznij badanie w wieku 7–9 tygodni, ponieważ skóra u większości myszy jest w fazie telogenu (faza spoczynku) mniej więcej w tym wieku2.
  2. Obserwuj zachowanie zwierząt podczas badania i jeśli walczą, co często zdarza się w przypadku samców, trzymaj je osobno. Walki mogą powodować skaleczenia skóry, które sprzyjają powstawaniu guza. Samice myszy są preferowane ze względu na ich mniej agresywne zachowanie. Typowa wielkość grupy doświadczalnej waha się między 8–20 zwierzętami na grupę24,25,26,27.
    UWAGA: Obliczenia mocy oparte na wariancji biologicznej zaobserwowanej we wcześniejszych badaniach pomagają wybrać wystarczająco dużą wielkość grupy. Szczepy użyte jako przykłady w tym artykule to Balb/c i C57BL/6. Jednak wiele innych szczepów myszy, takich jak SENCAR i FVB, zostało użytych z modelem DMBA-TPA, a także Wistar i Sprague-Dawley rats2,28,29. Przed rozpoczęciem badania potrzebna jest licencja od krajowej lub lokalnej komisji ds. pracy ze zwierzętami. Oprócz ogólnych względów związanych z dobrostanem, punktami końcowymi specyficznymi dla modelu są zazwyczaj rak płaskonabłonkowy (SCC) i zakażenie skóry. Zadrapania na skórze spowodowane swędzeniem po zastosowaniu rakotwórczych chemikaliów w acetonie są typowe, ale poza tym zwierzęta nie powinny wykazywać żadnych oznak dyskomfortu. Regularne ważenie (np. 2 razy w miesiącu) pomaga ocenić dobrostan zwierząt.
  3. Użyj DMBA i TPA, oba rozcieńczone w acetonie. Stężenie robocze DMBA wynosi 250 g/L. Dawka dla jednego zwierzęcia to 50 μg DMBA w 200 μL acetonu. Stężenie podstawowe TPA wynosi 125 g/l, a stężenie po zabiegu 25 g/l. Dawka TPA dla jednego zwierzęcia wynosi 5 μg w 200 μl acetonu.
    UWAGA: DMBA jest szkodliwy w przypadku połknięcia i może powodować raka. Aceton szybko odparowuje i jest łatwopalny. Może powodować zawroty głowy i podrażniać oczy. Używaj maski oddechowej i/lub pracuj pod przepływem podciśnienia. Zmień rękawice po kontakcie z którąkolwiek z tych substancji chemicznych. Indywidualnie wentylowane klatki zapobiegają rozprzestrzenianiu się chemikaliów podczas trzymania myszy. Po aplikacji należy zebrać końcówki pipet używane do obchodzenia się z DMBA i wyrzucić jako odpady niebezpieczne.
    UWAGA: DMBA musi być chroniony przed światłem. Rozcieńczony TPA jest przechowywany w temperaturze -20 °C, najlepiej chroniony przed światłem.
  4. Zaopatrz się w następujący sprzęt: wagę, zwykłą maszynkę do golenia sierści, pipety i końcówki o odpowiednim rozmiarze, zwykłą linijkę, aparat cyfrowy, notatnik i długopis lub komputer do rejestrowania brodawczaków, system do znieczulenia wziewnego lub ogranicznik myszy z otworem z tyłu oraz system narkozy dwutlenkiem węgla do składania ofiar z myszy.

2. Indukcja i promocja brodawczaka skórnego

  1. Ogol skórę grzbietu i zważ zwierzę. Później należy ogolić skórę w razie potrzeby, ale nie w momencie ekspozycji na substancję chemiczną.
    UWAGA: Zachowaj ostrożność podczas golenia wokół brodawczaków i unikaj wykonywania jakichkolwiek nacięć na skórze. Waż każde zwierzę co 2 tygodnie, aby zauważyć potencjalną utratę wagi.
  2. Nanieś 50 μg DMBA w 200 μl acetonu miejscowo na ogolony obszar za pomocą pipety 48 godzin po zgoleniu sierści. W razie potrzeby unieruchomić zwierzę za pomocą lekkiego znieczulenia wziewnego lub przytrzymywania myszy.
  3. Po 7 dniach należy podać pierwszą dawkę TPA. Nakładać miejscowo 5 μg TPA w 200 μl acetonu pipetą 2x w tygodniu, najlepiej w poniedziałek i czwartek lub wtorek i piątek.
  4. Licz, rejestruj i fotografuj brodawczaki co tydzień. Wyczuwalna masa o średnicy większej niż 1 mm jest uważana za brodawczaka, jeśli utrzymuje się dłużej niż 1 tydzień. Zaznacz każdego brodawczaka na mapie i co tydzień wymieniaj jego rozmiar. Przechowuj zdjęcia cyfrowe.

3. Składanie ofiar ze zwierząt i pobieranie próbek

  1. Kontynuuj leczenie, aż odpowiedź guza osiągnie plateau. Ogólnie rzecz biorąc, oczekuje się, że obciążenie brodawczakiem wzrośnie 10-20 tygodni po rozpoczęciu, w zależności od użytego szczepu myszy. Plateau spodziewany jest za 15–20 tygodni. Niewielka część brodawczaków (poniżej 3%) może przekształcić się w SCC w ciągu 20–50 tygodni2.
  2. Uśmiercaj zwierzęta 24 godziny po ostatnim zastosowaniu TPA. Użyj narkozy dwutlenkiem węgla ze zwichnięciem szyjki macicy lub inną odpowiednią metodą.
  3. W zależności od pytania badawczego zbierz odpowiedni materiał próbny od zwierząt30,31.
    1. Na przykład, pobierz próbki krwi przed złożeniem ofiary i oddziel osocze.
    2. Wytnij kawałki skóry do barwienia immunohistochemicznego (IHC) (np. hematoksylina i eozyna, komórki proliferujące lub zapalne).
    3. Użyj stempli biopsyjnych, aby pobrać kawałki skóry z tkanką brodawczaka lub skórą bez brodawczaka (leczoną) w celu ekspresji genów (np. qPCR) i/lub analiz białek (np. Western blot lub ELISA).
    4. Pobrać fragment śledziony i węzłów chłonnych drenujących skórę do analizy cytometrii przepływowej, jeśli pożądana jest bardziej szczegółowa analiza populacji komórek odpornościowych. Można również oddzielić warstwę naskórka i skóry właściwej w celu dalszych analiz.

4. Statystyki

  1. Narysuj krzywą przeżycia Kaplana-Meiera w czasie wolnym od brodawczaka i użyj testu logarytmicznego Mantela-Coxa do przeżycia. Narysuj liniową krzywą liczby brodawczaków na tydzień. Ponieważ są to dane liczbowe, należy użyć modelu regresji nieliniowej. W razie potrzeby skonsultuj się ze statystykiem.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Głównym wynikiem jest czas przeżycia (tj. wolny od brodawczaka) pomiędzy grupą leczoną lub genotypem. Drugorzędnym wynikiem jest liczba brodawczaków w tygodniu w każdej grupie (Ryc. 2). Oczekiwane wyniki to istotna statystycznie różnica w czasie wolnym od brodawczaka oraz w liczbie brodawczaków pomiędzy grupami eksperymentalnymi (dwiema lub więcej). Zaleca się policzenie liczby brodawczaków i narysowanie krzywej podczas fazy promocji (TPA), aby zorientować się w różnicach między grupami na tym etapie....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rak skóry wywołany przez DMBA-TPA jest jednym z najczęściej stosowanych modeli raka, ponieważ jest wysoce powtarzalny i dostarcza informacji na temat progresji guza od inicjacji do złośliwości. Kluczowa miara wyniku, czyli tworzenie brodawczaka, jest łatwa i niezawodna ilościowo. Model odnosi się zarówno do inicjacji guza (przeżycia wolnego od guza), jak i progresji (liczby i rozmiarów guza) jednocześnie. Model nadaje się do badania różnych związków, takich jak potencjalne terapie i wpływ poszczególnych genów na progresj...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca została sfinansowana przez Akademię Fińską (granty 25013080481 i 25013142041 (I.J.), 286377 i 295814 (M.P.), 287907 (T.J.)), Fundację Päivikki i Sakari Sohlberg (M.P., T.J.), Fińską Fundację Medyczną (T.P.), Konkurencyjne Finansowanie Badań Państwowych w Obszarze Odpowiedzialności Eksperckiej Szpitala Uniwersyteckiego w Tampere (grant 9V049 i 9X044 (M.P.), 9X011 i 9V010 (T.J.)), Konkurencyjne finansowanie badań przez państwo w obszarze odpowiedzialności ekspertów laboratoriów Fimlab (grant X51409 (I.J.)), Tays Support Foundation (I.J., M.P., T.J.), Tampere Tuberculosis Foundation (I.J., M.P., T.J.), Fińska Fundacja Kulturalna (M.V.), Fundacja Paulo (T.P.), Fińskie Towarzystwo Walki z Rakiem (M.P.), oraz Fundacja Emila Aaltonena (T.P.).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
1000 ul RPT XL Końcówka filtra stopniowego (sterylna), WkładStarlabS1182-1730-C
300 ul RTP Końcówka filtra stopniowego (sterylna), WkładStarlabS1180-9710-C
7,12-Dimethylbenz[a]antracen (DMBA)SigmaD3254-100MGDziała szkodliwie w przypadku połknięcia i może powodować raka. Przechowywać w bezpiecznym miejscu.
AcetonSigma1000141011szybko odparowuje i jest łatwopalny.
Attane vet 1000 mg/gPiramal Critical Care LimitedPłynny izofluran do inhalacji
Maszynka do strzyżenia na baterie IsisAlbert Kerlb GmbHGT421Do golenia sierści
CONTRAfluran-RestgasfilterZeoSys GmbHDo znieczulenia
Linijka Linex Nature N1030 30 cmZszywki Business Advantage60383Do pomiaru brodawczaków
Średnia komora CO2 300 x 200 x 200 mm - RedVetTech Solutions LtdAN045ARNa ofiarę
MekasoftMekalasi23008Obrus
Myszy (Balb/c JRj)Janvier labsMożliwe również inne szczepy
Myszy (C57BL/6JRj)Janvier labsMożliwe również inne szczepy
cyfrowy Panasonic Lumix DMC-FS5
ParaformaldehydMerck30525-89-4Do próbek histologicznych
12-mirystynian 13-octan forbolu znany również jako 12-octan 12-Otetradecanoylphorbol-13 (TPA)EnzoBML-PE160-0001
Waga precyzyjna PLJ-C/PLJ-GKERN & SOHN GmbHPLJ 600-3CM
Pre-Set CO2 System-2 Chamber-S / S ObudowaVetTech Solutions LtdAN044BXDo poświęcenia
RNAlaterQiagen76104Do próbek kwasów nukleinowych
Pipeta Tacta 100-1000 ulSartoriusLH-729070
Pipeta Tacta 20-200 ulSartoriusLH-729060
UNO Anesthetic Key FillerOprzyrządowanie Scintica inc.Do znieczulenia
UNO Maska na twarz dla myszyScintica oprzyrządowanie inc.Do znieczulenia
UNO FM2200 PrzepływomierzScintica oprzyrządowanie inc.Do znieczulenia
UNO Gas Exhaust UnitOprzyrządowanie Scintica inc.Do znieczulenia
Skrzynka indukcyjna UNOOprzyrządowanie Scintica inc.Do znieczulenia
UNO200VAP VaporizerScintica oprzyrządowanie inc.Do znieczulenia
Aparat

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. DiGiovanni, J. Multistage carcinogenesis in mouse skin. Pharmacology & Therapeutics. 54 (1), 63-128 (1992).
  2. Abel, E. L., Angel, J. M., Kiguchi, K., DiGiovanni, J. Multi-stage chemical carcinogenesis in mouse skin: fundamentals and applications. Nature Protocols. 4 (9), 1350-1362 (2009).
  3. Perez-Losada, J., Balmain, A. Stem-cell hierarchy in skin cancer. Nature Reviews. Cancer. 3 (6), 434-443 (2003).
  4. Bonham, K., et al. Activation of the cellular Harvey ras gene in mouse skin tumors initiated with urethane. Molecular Carcinogenesis. 2 (1), 34-39 (1989).
  5. Quintanilla, M., Brown, K., Ramsden, M., Balmain, A. Carcinogen-specific mutation and amplification of Ha-ras during mouse skin carcinogenesis. Nature. 322 (6074), 78-80 (1986).
  6. Nelson, M. A., Futscher, B. W., Kinsella, T., Wymer, J., Bowden, G. T. Detection of mutant Ha-ras genes in chemically initiated mouse skin epidermis before the development of benign tumors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 89 (14), 6398-6402 (1992).
  7. Morris, R. J. A perspective on keratinocyte stem cells as targets for skin carcinogenesis. Differentiation. 72 (8), 381-386 (2004).
  8. Chung, Y. W., Kim, H. K., Kim, I. Y., Yim, M. B., Chock, P. B. Dual function of protein kinase C (PKC) in 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)-inducec manganese superoxide dismutase (MnSOD) expression: activation of CREB and FOXO3a by PKC-alpha phosphorylation and by PKC-mediated inactivation of Akt, respectively. The Journal of Biological Chemistry. 286 (34), 29681-29690 (2011).
  9. Su, Z., et al. Tumor promoter TPA activates Wnt/β-catenin signaling in a casein kinase 1-dependent manner. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (32), 7522-7531 (2018).
  10. Swann, J. B., et al. Demonstration of inflammation-induced cancer and cancer immunoediting during primary tumorigenesis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (2), 652-656 (2008).
  11. Wang, L., Yi, T., Zhang, W., Pardoll, D. M., Yu, H. IL-17 enhances tumor development in carcinogen-induced skin cancer. Cancer Research. 70 (24), 10112-10120 (2010).
  12. He, D., et al. IL-17 mediated inflammation promotes tumor growth and progression in the skin. PLoS One. 7 (2), 32126(2012).
  13. Roussel, L., et al. IL-17 promotes p38 MAPDK-dependent endothelial activation enhancing neutrophil recruitment to sites of inflammation. Journal of Immunology. 184 (8), 4531-4537 (2010).
  14. Wanqiu, H., Young-Hee, J., Hyun, S. K., Byung, S. K. Interleukin-6 (IL-6) and IL-17 synergistically promote viral persistence by inhibition cellular apoptosis and cytotoxic T cell function. Journal of Virology. 88 (15), 8479-8489 (2014).
  15. Yusuf, N., et al. Antagonistic roles of CD4+ and CD8+ T-cells in 7,12-dimethylbenz(a)anthracene cutaneous carcinogenesis. Cancer Research. 68 (10), 3924-3930 (2008).
  16. Gong, L., et al. Promoting effect of neutrophils on lung tumorigenesis is mediated by CXCR2 and neutrophil elastase. Molecular Cancer. 12 (1), 154(2013).
  17. Vestweber, D., Wessel, F., Nottebaum, A. F. Similarities and differences in the regulation of leukocyte extravasation and vascular permeability. Seminars in Immunopathology. 36 (2), 177-192 (2014).
  18. Woodworth, C. D., et al. Strain-dependent differences in malignant conversion of mouse skin tumors is an inherent property of the epidermal keratinocyte. Carcinogenesis. 25 (9), 1771-1778 (2004).
  19. Tennenbaum, T., et al. The suprabasal expression of alpha 6 beta 4 integrin is associated with a high risk for malignant progression in mouse skin carcinogenesis. Cancer Research. 53 (20), 4803-4810 (1993).
  20. Hennings, H., Shores, R., Mitchell, P., Spangler, E. F., Yuspa, S. H. Induction of papillomas with a high probability of conversion to malignancy. Carcinogenesis. 6 (11), 1607-1610 (1985).
  21. Auto, Y., et al. Time-Series Analysis of Tumorigenesis in a Murine Skin Carcinogenesis Model. Scientific Reports. 8 (1), 12994(2018).
  22. Park, H., et al. Bone marrow-derived epithelial cells and hair follicle stem cells contribute to development of chronic cutaneous neoplasms. Nature Communications. 9 (1), 5293(2018).
  23. Reeves, M. Q., Kandyba, E., Harris, S., Del Rosario, R., Balmain, A. Multicolour lineage tracing reveals clonal dynamics of squamous carcinoma evolution from initiation to metastasis. Nature Cell Biology. 20 (6), 699-709 (2018).
  24. Dao, V., et al. Prevention of carcinogen and inflammation-induced dermal cancer by oral rapamycin includes reducing genetic damage. Cancer Prevention Research. 5, Philadelphia Pa. 400-409 (2015).
  25. Yeong, L. T., Abdul Hamid, R., Saiful Yazan, L., Khaza’ai, H., Mohtarrudin, N. Low dose triterpene-quinone fraction from Ardisia crispa root precludes chemical-induced mouse skin tumor promotion. BMC Complementary and Alternative Medicine. 15 (1), 431(2015).
  26. Kong, Y. H., Xu, S. P. Salidroside prevents skin carcinogenesis induced by DMBA/TPA in a mouse model through suppression of inflammation and promotion of apoptosis. Oncology Reports. 39 (6), 2513-2526 (2018).
  27. Jung, M., Bu, S. Y., Tak, K. H., Park, J. E., Kim, E. Anticarcinogenic effect of quercetin by inhibition of insulin-like growth factor (IGF)-1 signaling in mouse skin cancer. Nutrition Research and Practice. 7 (6), 439-445 (2013).
  28. Hu, Y. Q., Wang, J., Wu, J. H. Administration of resveratrol enhances cell-cycle arrest followed by apoptosis in DMBA-induced skin carcinogenesis in male Wistar rats. European review for medical and pharmacological sciences. 13, 2935-2946 (2016).
  29. Schweizer, J., Loehrke, H., Hesse, B., Goerttler, K. 7,12-Dimethylbenz[a]anthracene/12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate-mediated skin tumor initiation and promotion in male Sprague-Dawley rats. Carcinogenesis. 3 (7), 785-789 (1982).
  30. Vähätupa, M., et al. T-cell-expressed proprotein convertase FURIN inhibits DMBA/TPA-induced skin cancer development. Oncoimmunology. 5 (12), 1245266(2016).
  31. May, U., et al. Resistance of R-Ras knockout mice to skin tumour induction. Scientific Reports. 5, 11663(2015).
  32. Krajewska, M., et al. Image analysis algorithms for immunohistochemical assessment of cell death events and fibrosis in tissue sections. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (7), 649-663 (2009).
  33. Järvinen, T. A., Ruoslahti, E. Target-seeking antifibrotic compound enhances wound healing and suppresses scar formation in mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21671-21676 (2010).
  34. Schwarz, M., Münzel, P. A., Braeuning, A. Non-melanoma skin cancer in mouse and man. Archives of Toxicology. 87 (5), 783-798 (2013).
  35. Slaga, T. J. SENCAR mouse skin tumorigenesis model versus other strains and stocks of mice. Environmental Health Perspectives. 68, 27-32 (1986).
  36. Goerttler, K., Loehrke, H., Schweizer, J., Hesse, B. Systemic two-stage carcinogenesis in the epithelium of the forestomach of mice using 7,12-dimethylbenz(a)anthracene as initiator and the phorbol ester 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate as promoter. Cancer Research. 39 (4), 1293-1297 (1979).
  37. Topping, D. C., Nettesheim, P. Promotion-like enhancement of tracheal carcinogenesis in rats by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate. Cancer Research. 40, 4352-4355 (1980).
  38. Wille, J. J. Circadian rhythm of tumor promotion in the two-stage model of mouse tumorigenesis. Cancer Letters. 190 (2), 143-149 (2003).
  39. Lee, Y. S., et al. Inhibition of skin carcinogenesis by suppression of NF-κB dependent ITGAV and TIMP-1 expression in IL32γ overexpressed condition. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 37 (1), 293(2018).
  40. Kiss, A., et al. Cell type-specific p38δ targeting reveals a context-, stage-, and sex-dependent regulation of skin carcinogenesis. International Journal of Molecular Sciences. 20 (7), 1532(2019).
  41. Tomo-o, I., et al. Positron emission tomography imaging of DMBA/TPA mouse skin multi-step tumorigenesis. Molecular Oncology. 4 (2), 119-125 (2010).
  42. Mantovani, A., Allavena, P., Sica, A., Balkwill, F. Cancer-related inflammation. Nature. 454 (7203), 436-444 (2008).
  43. Crusz, S. M., Balkwill, F. R. Inflammation and cancer: advances and new agents. Nature Reviews. Clinical Oncology. 12 (10), 584-596 (2015).
  44. Hennings, L., et al. Malignant conversion and metastasis of mouse skin tumors: a comparison of SENCAR and CD-1 mice. Environmental Health Perspectives. 68, 69-74 (1986).
  45. Gómez-Cuadrado, L., Tracey, N., Ma, R., Qian, B., Brunton, V. G. Mouse models of metastasis: progress and prospects. Disease Models & Mechanisms. 10 (9), 1061-1074 (2017).
  46. Ouhtit, A., Ananthaswamy, H. N. A model for UV-induction of skin cancer. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 1 (1), 5-6 (2001).
  47. Day, C. -P., Marchalik, R., Merlino, G., Michael, H. T. Mouse models of UV-induced melanoma: genetics, pathology, and clinical relevance. Laboratory Investigation. 97 (6), 698-705 (2017).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Model DMBA TPAinicjacja nowotworuprogresja nowotworupowstawanie brodawczakaimmunohistochemiacytometria przep ywowaanaliza ekspresji gen wanaliza bia ekrodki bezpiecze stwa

Powiązane artykuły