Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Produkcja czułej na bliską podczerwień platformy do dostarczania szczepionek typu core-shell

4.4K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/60569

⸱

20 października 2020

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, Texas A&M University

W tym artykule

Podsumowanie

Ten artykuł opisuje protokoły używane do stworzenia nowatorskiej platformy dostarczania szczepionek, "polybubbles", która umożliwia opóźnione uwalnianie serii. Poliestry, w tym poli(kwas mlekowo-ko-glikolowy) i polikaprolakton, zostały użyte do utworzenia polipęcherzyków, a małe cząsteczki i antygen zostały użyte jako ładunek.

Streszczenie

Strategie dostarczania szczepionek, które mogą ograniczyć narażenie ładunku na rozpuszczalnik organiczny, a jednocześnie umożliwiają nowe profile uwalniania, są kluczowe dla poprawy zasięgu szczepień na całym świecie. W tym miejscu wprowadzono nowatorską platformę do wstrzykiwań, uleczalną ultrafioletem i o opóźnionym uwalnianiu impulsów, zwaną polipęcherzykami. Ładunek został wstrzyknięty do polipęcherzyków na bazie poliestru, które uformowano w 10% wodnym roztworze na bazie karboksymetylocelulozy. Niniejszy artykuł zawiera protokoły mające na celu utrzymanie sferycznego kształtu polipęcherzyków oraz optymalizację rozmieszczenia i zatrzymywania ładunku w celu maksymalizacji ilości ładunku w polipęcherzykach. Aby zapewnić bezpieczeństwo, zawartość chlorowanego rozpuszczalnika w polipęcherzykach analizowano za pomocą analizy aktywacji neutronów. Badania uwalniania przeprowadzono z małymi cząsteczkami jako ładunkiem w polipęcherzyku, aby potwierdzić opóźnione uwolnienie pęknięcia. Aby jeszcze bardziej ukazać potencjał dostawy ładunku na żądanie, złote nanopręty zostały zmieszane z polimerową powłoką, aby umożliwić aktywację lasera w bliskiej podczerwieni.

Wprowadzenie

Ograniczony zasięg szczepień powoduje śmierć 3 milionów osób spowodowaną chorobami, którym można zapobiec poprzez szczepienia1. Nieodpowiednie warunki przechowywania i transportu prowadzą do marnotrawstwa funkcjonalnych szczepionek, a tym samym przyczyniają się do zmniejszenia globalnej immunizacji. Ponadto niepełne szczepienie spowodowane nieprzestrzeganiem wymaganych harmonogramów szczepień również powoduje ograniczony zasięg szczepień, szczególnie w krajach rozwijających się2. W celu otrzymania dawek przypominających wymagane są wielokrotne wizyty u personelu medycznego w zalecanym okresie, co ogranicza odsetek populacji z pełnym zaszczepieniem. W związku z tym istnieje potrzeba opracowania nowatorskich strategii kontrolowanego dostarczania szczepionek w celu obejścia tych wyzwań.

Obecne wysiłki zmierzające do opracowania technologii dostarczania szczepionek obejmują systemy polimerowe oparte na emulsji3,4. Jednak ładunek jest często narażony na większą ilość rozpuszczalnika organicznego, który może potencjalnie powodować agregację i denaturację, szczególnie w kontekście ładunku na bazie białka5,6. Opracowaliśmy nowatorską platformę do dostarczania szczepionek, "polybubbles", która może potencjalnie pomieścić wiele przedziałów ładunkowych, jednocześnie minimalizując objętość ładunku narażonego na działanie rozpuszczalnika7. Na przykład w naszej platformie z rdzeniem i powłoką z tworzywa sztucznego jedna kieszeń ładunkowa o średnicy 0,38 mm (SEM) jest wtryskiwana w środek pęcherzyka foliowego o średnicy 1 mm. W tym przypadku powierzchnia ładunku narażonego na działanie rozpuszczalnika organicznego wynosiłaby około 0,453mm2. Po uwzględnieniu gęstości upakowania kulek (mikrocząstek) w kuli (magazynie towarowym), rzeczywista objętość mikrocząstek (o średnicy 10 μm), które mogłyby zmieścić się w magazynie, wynosi 0,17 mm3. Objętość jednej mikrocząstki wynosi 5,24x10-8 mm3, a zatem liczba mikrocząstek cząstek, które mogą zmieścić się w magazynie, wynosi ~3,2x106 cząstek. Jeśli każda mikrocząstka ma 20 kieszeni cargo (w wyniku podwójnej emulsji) o średnicy 0,25 μm, to powierzchnia ładunku wystawionego na działanie rozpuszczalnika organicznego wynosi 1274mm2. Magazyn ładunkowy w obrębie polipęcherzyków miałby zatem ~2800 razy mniejszą powierzchnię narażoną na działanie rozpuszczalnika organicznego w porównaniu z ładunkiem narażonym na działanie rozpuszczalnika organicznego w mikrocząsteczkach. Nasza platforma na bazie poliestru może zatem potencjalnie zmniejszyć ilość ładunku narażonego na działanie rozpuszczalnika organicznego, który w przeciwnym razie może powodować agregację i niestabilność ładunku.

Polipęcherzyki są tworzone na zasadzie separacji faz, gdzie poliester w fazie organicznej jest wstrzykiwany do roztworu wodnego, co skutkuje kulistym pęcherzykiem. Ładunek w fazie wodnej może być następnie wstrzykiwany do środka polipęcherzyka. Kolejny przedział ładunkowy można potencjalnie uzyskać w obrębie polipęcherzyków poprzez zmieszanie innego ładunku z polimerową powłoką. Polipęcherzyk na tym etapie będzie plastyczny, a następnie zostanie utwardzony, aby uzyskać solidną strukturę polipęcherzykową z ładunkiem pośrodku. Sferyczne polipęcherzyki zostały wybrane zamiast innych kształtów geometrycznych, aby zwiększyć ładowność w polipęcherzyku, jednocześnie minimalizując ogólny rozmiar polibańki. Polipęcherzyki z ładunkiem w środku zostały wybrane, aby zademonstrować opóźnione uwalnianie impulsu. Polipęcherzyki zostały również włączone do środka wrażliwego na bliską podczerwień (NIR) (tj. umożliwiającego teranostykę), a mianowicie nanoprętów złota (AuNR), aby spowodować wzrost temperatury polipęcherzyków. Efekt ten może potencjalnie ułatwić szybszą degradację i może zostać wykorzystany do kontrolowania kinetyki w przyszłych zastosowaniach. W tym artykule opisujemy nasze podejście do tworzenia i charakteryzowania polipęcherzyków, osiągania opóźnionego uwalniania pęknięć z polipęcherzyków oraz włączania AuNR do polipęcherzyków w celu wywołania aktywacji NIR.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Synteza triakrylanu polikaprolacjonu (PCLTA)

  1. Wysuszyć 3,2 ml triolu o stężeniu 400 Da polikaprolacjonu (PCL) przez noc w temperaturze 50 °C w otwartej kolbie okrągłodennej o pojemności 200 ml iK2CO3 w szklanej fiolce w temperaturze 90 °C.
  2. Zmieszać triol z 6,4 ml dichlorometanu (DCM) i 4,246 g węglanu potasu (K2CO3) pod wpływem argonu.
  3. Zmieszać 2,72 ml chlorku akryloylu z 27,2 ml DCM i dodawać kroplami do mieszaniny reakcyjnej w kolbie przez 5 minut.
  4. Przykryj mieszaninę reakcyjną folią aluminiową i pozostaw w spokoju w temperaturze pokojowej przez 24 godziny pod argonem.
  5. Po 24 godzinach przefiltrować mieszaninę reakcyjną za pomocą bibuły filtracyjnej na lejku Buchnera pod próżnią w celu usunięcia nadmiaru odczynników.
  6. Wytrącić przesącz z etapu 1.5, który zawiera polimer z końcówką w eterze dietylowym w stosunku 1:3 (obj./obj.) i rotowape, w temperaturze 30 °C w celu usunięcia eteru dietylowego.

2. Powstawanie polibańki

UWAGA: Wstrzyknięcie polimeru do wody dejonizowanej (DI) spowodowałoby migrację polipęcherzyków na dno fiolki, co spowodowałoby spłaszczenie dna. Użyj 10% (wag./obj.) karboksymetylocelulozy (CMC), zamiast tego napełnij szklaną fiolkę, aby uniknąć spłaszczania polipęcherzyków.

  1. Przygotować 10% (wag./obj.) roztwór CMC w wodzie DI.
  2. Napełnij szklaną fiolkę o pojemności 0,92 ml 0,8 ml 10% CMC za pomocą pipety transferowej o pojemności 1 ml.
  3. Zmieszać 1000 mg/ml 14 kDa PCL w DCM i zsyntetyzować PCLTA w stosunku 1:3 (vol/vol) do całkowitej objętości 200 μl lub przygotować 200 μl 1000 mg/ml 5 kDa diakrylanu poli(kwasu mlekowo-ko-glikolowego) (PLGADA) w chloroformie.
  4. Zmieszać 2-hydroksy-4′-(2-hydroksyetoksy)-2-metylopropiofenon (fotoinicjator) z mieszaniną polimeru (PLGADA lub PCL/PCLTA) w proporcji 0,005:1 (obj./obj.).
  5. Załaduj 200 μl mieszaniny polimerów do szklanej strzykawki o pojemności 1 ml zamontowanej na pompie strzykawkowej, która jest podłączona do rurki dozującej ze stali nierdzewnej o średnicy wewnętrznej 0.016 cala.
  6. Użyj mikrosilnika, aby kontrolować ruch rurki polimerowej do przodu i do tyłu, aby wstrzyknąć polimer do 10% CMC w szklanej fiolce, aby utworzyć polipęcherzyk.
  7. Utwardzać polipęcherzyki w ultrafiolecie (UV) o długości fali 254 nm przez 60 s przy 2 W/cm2.
  8. Błyskawiczne zamrożenie polipęcherzyków w ciekłym azocie i liofilizację przez noc w próżni 0,010 mBar i w temperaturze -85 °C.
  9. Oddziel polibubbles od wysuszonego CMC za pomocą kleszczy i umyj polibubbles wodą DI, aby usunąć wszelkie pozostałości CMC. Należy pamiętać, że inne polimery mogą być używane prawdopodobnie z modyfikacjami w celu zmiany kinetyki uwalniania.

3. Modulacja średnicy polipęcherzyków

  1. Napełnij szklaną fiolkę o pojemności 0,92 ml 10% CMC za pomocą pipety transferowej o pojemności 1 ml.
  2. Wymieszaj PCL/PCLTA w stosunku 1:3 (vol/vol) z 1000mg/mL 14kDa PCL i zsyntetyzuj PCLTA. Wymieszać fotoinicjator z mieszaniną polimerów w stosunku 0,005:1 (obj./obj.).
  3. Załaduj mieszaninę polimerów do szklanej strzykawki o pojemności 1 ml zamontowanej na pompie strzykawkowej, która jest podłączona do rurki dozującej ze stali nierdzewnej o średnicy wewnętrznej 0.016 cala.
  4. Użyj mikrosilnika, aby kontrolować ruch rurki polimerowej do przodu i do tyłu, aby wstrzyknąć polimer do 10% CMC w szklanej fiolce, aby utworzyć polipęcherzyk.
  5. Aby uzyskać polipęcherzyki o różnych średnicach, należy zmieniać szybkość dozowania od 0,0005 do 1 μl/s.
  6. Zrób zdjęcia fiolki z polipęcherzykami o różnej średnicy.
  7. Użyj ImageJ, aby określić ilościowo średnicę polipęcherzyków i użyj rozmiaru fiolki jako skali.

4. Centrowanie ładunku w polybubble

  1. Modulacja lepkości PCL/PCLTA za pomocą K2CO3:
    UWAGA: Lepkość PLGADA nie musi być modyfikowana przy użyciu K2CO3 , ponieważ lepkość 5 kDa PLAGDA przy 1000 mg/ml jest wystarczająca do wyśrodkowania ładunku.
    1. DodaćK2CO3 (który został wyizolowany po reakcji PCLTA) do PCLTA w różnych stężeniach, w tym 0 mg / ml, 10 mg / mL, 20 mg / mL, 40 mg / ml i 60 mg / mL.
    2. Zmierz lepkość dynamiczną roztworów, zmieniając szybkość ścinania od 0 do 1000 1/s za pomocą reometrii.
    3. Ręcznie wstrzyknąć ładunek w środek (patrz krok 4.2 w celu przygotowania mieszaniny ładunku) polipęcherzyków, które zostały utworzone przy użyciu roztworów PCL/PCLTA o różnych stężeniachK2CO3 (krok 4.1.1). Określić optymalne stężenieK2CO3 poprzez obserwację, które rozwiązanie z kroku 4.1.1 może spowodować zatrzymanie ładunku w środku.
  2. Centrowanie ładunku (już wykazana wykonalność w przypadku małych cząsteczek) za pomocą CMC
    1. Wymieszaj ładunek z 5% (wag./obj.) CMC w rotatorze przez noc, aby zwiększyć lepkość ładunku.
    2. Ręcznie wstrzyknąć 2 μl mieszaniny ładunku do polipęcherzyka i kontynuować utwardzanie UV przy długości fali 254 nm przez 60 s przy 2 W/cm2.
    3. Błyskawiczne zamrożenie pęcherzyków w ciekłym azocie przez 30 s i liofilizację przez noc w próżni 0,010 mBar i w temperaturze -85 °C.
    4. Oddziel polipęcherzyki od wysuszonego CMC za pomocą kleszczy i przemyj wodą DI, aby usunąć wszelkie pozostałości CMC.
    5. Przeciąć polipęcherzyk na pół i zobrazować połówki za pomocą mikroskopii konfokalnej, aby upewnić się, że ładunek jest wyśrodkowany (patrz krok 6, aby uzyskać informacje na temat stosowanych długości fal wzbudzenia i emisji).

5. Formułowanie ładunku

UWAGA: Preparat polipęcherzykowy może zawierać różne rodzaje ładunków, w tym małe cząsteczki, białka i kwasy nukleinowe.

  1. Na podstawie wcześniejszych badań, w przypadku ładunków białkowych, należy stosować substancje pomocnicze, w tym glikol polietylenowy (PEG)6, poliwinylopirolidon (PVP) i glikopolimery6, aby poprawić stabilność białka podczas formulacji polipęcherzykowej.
  2. Uformuj polipęcherzyki na podstawie protokołu w kroku 2.
  3. Przygotować roztwór antygenu, dodając 17,11 g trehalozy do 625 μl antygenu HIV gp120/41.
  4. Ręcznie wstrzyknąć 1 μl roztworu antygenu w środek polipęcherzyka.
  5. Otwórz polipęcherzyki w dniach 0, 7, 14 i 21 i zarejestruj fluorescencję antygenu o długościach fal wzbudzenia i emisji odpowiednio 497 nm i 520 nm.
  6. Określ funkcjonalność antygenu za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA) i użyj 5% mleka beztłuszczowego jako buforu blokującego.

6. Wydanie ładunku

UWAGA: Mała cząsteczka lub antygen mogą być użyte jako typ ładunku

  1. Mała cząsteczka
    1. Inkubować pęcherzyki wielopęcherzykowe z wyśrodkowaną akryflawiną w 400 μl soli fizjologicznej buforu fosforanowego (PBS) w temperaturze 37 °C, 50 °C w przypadku polipęcherzyków PLGADA i w temperaturze 37 °C, 50 °C, 70 °C w przypadku polipęcherzyków PCL/PCLTA.
      UWAGA: Powodem, dla którego zalecamy testowanie powyżej temperatury ciała, jest: a) symulacja temperatury (50 °C), którą osiąga polipęcherzyk podczas laserowego nanowłoców złota (AuNR) w PCL i PLGA; oraz b) przyspieszyć proces degradacji PCL (50 °C, 70 °C).
    2. W każdym punkcie czasowym zebrać supernatanty i zastąpić 400 μl świeżego PBS.
    3. Za pomocą czytnika płytek określić ilościowo intensywność fluorescencji w zebranych supernatantach.
      UWAGA: Dla akryflawiny należy stosować ex/em 416 nm/514 nm.
  2. antygen
    1. Inkubować polipęcherzyki z wyśrodkowaną surowicą albuminy bydlęcej (BSA)-488 w 400 μl PBS w temperaturze 37 °C, 50 °C dla polipęcherzyków PLGADA i w temperaturze 37 °C, 50 °C dla polipęcherzyków PCL/PCLTA.
    2. W każdym punkcie czasowym zebrać supernatanty i zastąpić je 400 μl świeżego PBS.
    3. Za pomocą czytnika płytek określić ilościowo intensywność fluorescencji w pobranych supernatantach. Użyj ex/em 497 nm/520 nm dla BSA-488.
      UWAGA: Nie należy przeprowadzać badania uwalniania w temperaturze 70 °C dla pęcherzyków poli PCL/PCLTA, aby uniknąć wystawienia antygenu na działanie ekstremalnych temperatur.

7. Toksyczność

  1. Kwantyfikacja zawartości chloru w polipęcherzykach za pomocą analizy aktywacji neutronów (NAA)
    1. Do tego badania użyj polipęcherzyków, które były liofilizowane przez 2, 4, 6, 20 i 24 godziny w próżni 0,010 mBar i w temperaturze -85 °C.
    2. Odmierz 5-9 mg pęcherzyków i umieść je na fiolkach do napromieniania LDPE.
    3. Przygotuj 1000 g/ml roztworu kalibracyjnego chloru z roztworu kalibracyjnego Narodowego Instytutu Standaryzacji i Technologii (NIST).
    4. Użyj reaktora Triga o mocy 1 megawata, aby przeprowadzić napromieniowanie neutronami na każdej próbce z szybkością fluencji neutronów 9,1 × 1012 /cm2·s przez 600 s.
    5. Przenieść polipęcherzyki do nienapromieniowanych fiolek.
    6. Za pomocą detektora HPGe uzyskano widma promieniowania gamma przez 500 s po 360 sekundach zaniku.
    7. Użyj oprogramowania NAA firmy canberra Industries do analizy danych.
  2. Kwantyfikacja zawartości chloru uwalnianego z polipęcherzyków przy użyciu NAA
    1. Inkubować polipęcherzyki, które były liofilizowane przez noc (w próżni 0,010 mBar i w temperaturze -85 °C) w 400 μL PBS w temperaturze 37 °C.
    2. Zebrać supernatanty w 1., 2. i 3. tygodniu po inkubacji.
    3. Analizować supernatanty pod kątem zawartości chloru za pomocą NAA, stosując tę samą metodę, która została opisana powyżej w kroku 7.1.

8. Synteza AuNR autorstwa Kittlera, S., et al.8

  1. Przygotować roztwór do wysiewu AuNR, mieszając 250 μl 10 mM kwasu chloroaurowego (HAuCl4), 7,5 ml 100 mM bromku cetrimonium (CTAB) i 600 μl 10 mM lodowatego borowodorku sodu (NaBH4).
  2. Przygotuj roztwór wzrostowy, mieszając 40 ml 100 mM CTAB, 1,7 ml 10 mM HAuCl4, 250 μl azotanu srebra (AgNO3) i 270 μl 17,6 mg/ml kwasu askorbinowego z probówką.
  3. Energicznie mieszać 420 μl roztworu nasion z roztworem wzrostowym z prędkością 1200 obr./min przez 1 min. Następnie pozostaw mieszaninę w spokoju do reakcji na 16 godzin.
  4. Usunąć nadmiar odczynników z mieszaniny przez odwirowanie w temperaturze 8000 × g przez 10 minut i odrzucić supernatant.

9. Hydrofobicyzacja AuNRs przez Soliman, M.G., et al.9

  1. Dostosuj pH 1,5 ml zsyntetyzowanych AuNR stabilizowanych CTAB do 10 za pomocą 1 mM wodorotlenku sodu (NaOH).
  2. Wymieszać roztwór z 0,1 ml 0,3 mM metylowanego tiolu PEG (mPEG) przy 400 obr./min przez noc.
  3. Mieszać pegylowane AuNR z 0,4 M dodecyloaminą (DDA) w chloroformie przy 500 obr./min przez 4 dni.
  4. Odpipetować górną warstwę organiczną zawierającą hydrofobowe AuNR i przechowywać w temperaturze 4 °C do przyszłego użycia.

10. Aktywacja polipęcherzyków NIR

  1. Zmieszać roztwór polimeru (PLGADA lub PCL/PCLTA) z hydrofobowymi AuNR w stosunku 1:9 (obj./obj.).
  2. Dodać fotoinicjator do mieszaniny polimer-AuNR w stosunku 0,005:1 (vol/vol).
  3. Utworzyć polipęcherzyki, wstrzykując mieszaninę polimeru-AuNR do szklanej fiolki o pojemności 0,92 ml z 10% CMC (wag./obj.) (patrz krok 2).
  4. Utwardzać polipęcherzyki przy długości fali 254 nm przez 60 s przy 2 W/cm2.
  5. Błyskawiczne zamrażanie w ciekłym azocie przez 30 s i liofilizacja przez noc w próżni 0,010 mBar i w temperaturze -85 °C.
  6. Oddziel wysuszone polipęcherzyki za pomocą kleszczy i umyj wodą DI, aby usunąć wszelkie pozostałości CMC.
  7. Inkubować polipęcherzyki w 400 μl PBS w temperaturze 37 °C.
  8. Aktywuj polipęcherzyki za pomocą lasera NIR 801 nm o natężeniu 8A przez 5 minut w każdy poniedziałek, środę i piątek.
  9. Wykonaj zdjęcia polipęcherzyków w podczerwieni (FLIR) przed i po aktywacji lasera, aby uzyskać wartości temperatury.
  10. Obliczanie różnic temperatur między przed i po aktywacji lasera na podstawie wartości temperatury z obrazów FLIR.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Polibąbelki zostały szczegółowo scharakteryzowane przy użyciu SEM i NAA. Ładunek został z sukcesem wycentrowany, co doprowadziło do opóźnionego gwałtownego uwalniania. Polibąbelki zostały również pomyślnie aktywowane laserowo dzięki obecności AuNRs wewnątrz polibąbelków.

Charakterystyka polibąbelków
Polibąbelki wstrzyknięte do roztworu wodnego bez CMC uległy spłaszczeniu w wyniku kontaktu z dnem szklanej fio...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Aktualne technologie i wyzwania
Mikro- i nanocząstki na bazie emulsji są powszechnie stosowane jako nośniki leków. Chociaż kinetyka uwalniania ładunku z tych urządzeń została szeroko zbadana, kontrolowanie kinetyki uwalniania impulsów było poważnym wyzwaniem11. Wszechstronność i funkcjonalność ładunku jest również ograniczona w systemach opartych na emulsji ze względu na narażenie ładunku na nadmiar rozpuszczalników wodnych i organicznych. Ładunki oparte na białkach często ni...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Chcielibyśmy podziękować dr Bryanowi E. Tomlinowi, pracującemu w laboratorium analizy pierwiastkowej na wydziale chemii TAMU, który pomógł w analizie aktywacji neutronów (NAA).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
1-etapowy ultra tetrametylobezydyna (TMB)-enzymatyczny test immunoenzymatyczny (ELISA) Roztwór substratowyThermo scientific34028
2-hydroksy-2-metylopropiofenonTCI AMERICAH0991
450 nm Roztwór zatrzymujący do podłoża TMBAbcamab17152
Chlorek akryloyluSigma AldrichA24109-100G
AcriflavineChem-Impex International22916
Bezwodny eter etylowyFisher ChemicalE138-500
Przeciwciało anty-HIV1 gp120 sprzężone z peroksydazą chrzanową (HRP)
Albumina surowicy bydlęcej (BSA)Fisher BioReagentsBP9700100
koniugaty barwnika BSA-CF488InvitrogenA13100
Kwas bromosalicylowyAcros OrganicsAC162142500
Karboksymetyloceluloza (CMC)Millipore Sigma80502-040
Bromek centrimonium (CTAB)MP BiomedicalsICN19400480
ChloroformFisher ChemicalC2984
Bufor powlekającyAbcamab210899
Dichlorometan (DCM)Sigma Aldrich270997-1L
Eter dietylowyFisher ChemicalE1384
Dodeacyl AmineAcros OrganicsAC117665000
Chlorowodorek doksorubicynyFisher BioReagentsBP251610
Kwas L-askorbinowyAcros OrganicsA61 100
Legato 100 Pompa strzykawkowaKD Scientific14 831 212
mPEG tiolLaysan Bio NC0702454
Beztłuszczowe mleko w proszkuAndwin ScientificNC9022655
Węglan potasuAcros OrganicsAC424081000
Bufor solany fosforanowyFisher BioReagentsBP3991
(poli(kaprolakton)Sigma Aldrich440744-250G
(poli(kaprolakton) triolAcros OrganicsAC190730250
Diakrylan poli(kwasu mlekowo-ko-glikolowego)CMTec280050
Węglan potasuAcros OrganicsAC424081000
Rekombinowany HIV1 gp120 + gp41białko Abcamab49054
Azotan srebraAcros OrganicsS181 25
Sód borowodorekFisher ChemicalS678 10
Kwas tetrachloroaurowyFisher ChemicalG54 1
TrehalozaAcros OrganicsNC9022655
TrietyloaminaAcros OrganicsAC157910010

Bibliografia

  1. World Health Organization. Global Immunization: Worldwide Disease Incidence. , Children's Hospital of Philadelphia. https://www.chop.edu/centers-programs/vaccine-education-center/global-immunization/diseases-and-vaccines-world-view (2018).
  2. Paul, A., Bera, M., Gupta, P., Singh, N. D. P. o-Hydroxycinnamate for sequential photouncaging of two different functional groups and its application in releasing cosmeceuticals. Organic and Biomolecular Chemistry. 17 (33), 7689-7693 (2019).
  3. Kumari, A., Yadav, S. K., Yadav, S. C. Biodegradable polymeric nanoparticles based drug delivery systems. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 75 (1), 1-18 (2010).
  4. Dai, C., Wang, B., Zhao, H. Microencapsulation peptide and protein drugs delivery system. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 41 (2-3), 117-120 (2005).
  5. Souery, W. N., et al. Controlling and quantifying the stability of amino acid-based cargo within polymeric delivery systems. Journal of Control Release. 300, 102-113 (2019).
  6. Wang, W. Advanced protein formulations. Protein Science. 24 (7), 1031-1039 (2015).
  7. Lee, J., et al. An ultraviolet-curable, core-shell vaccine formed via phase separation. Journal of Biomedical Materials Research Part A. , (2019).
  8. Kittler, S., Hickey, S. G., Wolff, T., Eychmüller, A. Easy and Fast Phase Transfer of CTAB Stabilised Gold Nanoparticles from Water to Organic Phase. Zeitschrift für Physikalische Chemie. 229, 235(2015).
  9. Soliman, M. G., Pelaz, B., Parak, W. J., del Pino, P. Phase Transfer and Polymer Coating Methods toward Improving the Stability of Metallic Nanoparticles for Biological Applications. Chemistry of Materials. 27 (3), 990-997 (2015).
  10. Arun Kumar, S., Good, J., Hendrix, D., Yoo, E., Kim, D., Deo, K. A., Jhan, Y. Y., Gaharwar, A. K., Bishop, C. J. Nanoengineered Light-Activatable Polybubbles for On?Demand Therapeutic Delivery. Adv. Funct. Mater. , 2003579(2020).
  11. Wuthrich, P., Ng, S. Y., Fritzinger, B. K., Roskos, K. V., Heller, J. Pulsatile and delayed release of lysozyme from ointment-like poly(ortho esters). Journal of Controlled Release. 21 (1), 191-200 (1992).
  12. Wang, W. Instability, stabilization, and formulation of liquid protein pharmaceuticals. International Journal of Pharmaceutics. 185 (2), 129-188 (1999).
  13. Wong, D. Y., Hollister, S. J., Krebsbach, P. H., Nosrat, C. Poly(epsilon-caprolactone) and poly (L-lactic-co-glycolic acid) degradable polymer sponges attenuate astrocyte response and lesion growth in acute traumatic brain injury. Tissue Engineering. 13 (10), 2515-2523 (2007).
  14. Davoodi, P., et al. Drug delivery systems for programmed and on-demand release. Advanced Drug Delivery Reviews. 132, 104-138 (2018).
  15. Huang, Y. C., Lei, K. F., Liaw, J. W., Tsai, S. W. The influence of laser intensity activated plasmonic gold nanoparticle-generated photothermal effects on cellular morphology and viability: a real-time, long-term tracking and monitoring system. Photochemical and Photobiological Sciences. 18 (6), 1419-1429 (2019).
  16. Link, S., Burda, C., Nikoobakht, B., El-Sayed, M. A. Laser-Induced Shape Changes of Colloidal Gold Nanorods Using Femtosecond and Nanosecond Laser Pulses. The Journal of Physical Chemistry B. 104 (26), 6152-6163 (2000).
  17. U.S. Environmental Protection Agency. Chlorine. , https://www.epa.gov/sites/production/files/2016-09/documents/chlorine.pdf (2000).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Dostarczanie szczepionki za pomoc polybubbleaktywacja w bliskiej podczerwieniutwardzanie promieniami ultrafioletowymiop nione uwalnianie gwa townenanopr ty z otamikroskopia konfokalnaintensywno fluorescencjipodczerwie dalekiego zasi guzamra anie w ciek ym azocieproces liofilizacji
Produkcja czułej na bliską podczerwień platformy do dostarczania szczepionek typu core-shell
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.