Artykuł metodologiczny

Testowanie terapii celowanych w nowotworach z wykorzystaniem analizy zmian strukturalnych DNA i ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów

DOI:

10.3791/60646

⸱

25 lipca 2020

 , 
1Center for Individualized Medicine, Mayo Clinic, 2Department of Molecular Pharmacology and Experimental Therapeutics, Mayo Clinic

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutaj prezentujemy protokół do testowania skuteczności terapii celowanych, wybranych na podstawie składu genomowego guza. Protokół opisuje identyfikację i walidację strukturalnych rearanżacji DNA, wszczepianie guzów pacjentów myszom oraz testowanie odpowiedzi na odpowiednie leki.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Prezentujemy tutaj zintegrowane podejście do testowania skuteczności terapii celowanych, które łączy technologie sekwencjonowania nowej generacji, analizy celów terapeutycznych i monitorowanie odpowiedzi na leki za pomocą ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów (PDX). Strategia ta została zweryfikowana na przykładzie guzów jajnika. Protokół sekwencjonowania nowej generacji (MPseq) wykorzystano do identyfikacji zmian strukturalnych, a następnie przeprowadzono analizę potencjalnie możliwych do ukierunkowania zmian. Ludzkie nowotwory wyhodowane u myszy z obniżoną odpornością leczono lekami dobranymi na podstawie analiz genomicznych. Wyniki wykazały dobrą korelację między przewidywanymi i obserwowanymi odpowiedziami w modelu PDX. Przedstawione podejście może być wykorzystane do przetestowania skuteczności leczenia skojarzonego i wspomóc spersonalizowane leczenie pacjentów z nawrotami raka, szczególnie w przypadkach, gdy standardowa terapia zawodzi i istnieje potrzeba stosowania leków poza wskazaniami rejestracyjnymi.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ksenoprzeszczepy pochodzące od pacjentów (PDX), które są generowane z implantacji fragmentów guza pacjenta myszom z niedoborem odporności, stały się potężnym modelem przedklinicznym, który pomaga w spersonalizowanej opiece przeciwnowotworowej. Modele PDX zostały z powodzeniem opracowane dla różnych nowotworów złośliwych u ludzi. Należą do nich rak piersi i jajnika, czerniak złośliwy, rak jelita grubego, gruczolakorak trzustki i niedrobnokomórkowy rak płuc1,2,3,4,5. Tkanka nowotworowa może być wszczepiana or....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Świeże tkanki od pacjentek z rakiem jajnika, które wyraziły na to zgodę, zostały pobrane podczas operacji zmniejszenia masy ciała zgodnie z protokołem zatwierdzonym przez Mayo Clinic Institutional Review Board (IRB). Wszystkie procedury i zabiegi na zwierzętach stosowane w tym protokole zostały zatwierdzone przez Mayo Clinic Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) i były zgodne z wytycznymi dotyczącymi opieki nad zwierzętami.

1. Sekwencjonowanie i analiza par wiązań

UWAGA: Do sekwencjonowania par mate (MPseq) musi być używana zarówno świeża, jak i błyskawicznie zamrożona tkanka. Materiał zatopiony w par....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tkanka z wyciętych guzów jajnika w czasie operacji odciążających została pobrana zgodnie z wytycznymi IRB i wykorzystana do 1) charakterystyki genomu i 2) wszczepienia u myszy z obniżoną odpornością (Rysunek 1). Protokół sekwencjonowania par partnerów36,37 został użyty do identyfikacji zmian strukturalnych w DNA, w tym strat, zysków i amplifikacji. Reprezentatywny wykres genomu ilustrujący krajobraz zmian genomowych w jednym guzie (oznaczonym .......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Opisujemy podejście i protokoły, które zastosowaliśmy do przeprowadzenia "badania klinicznego" w modelach PDX, które wykorzystuje charakterystykę molekularną guza uzyskaną przez profilowanie genomowe w celu określenia najlepszego wyboru leków do testów. Wiele platform sekwencjonowania jest obecnie wykorzystywanych do charakterystyki genomowej nowotworów pierwotnych, w tym sekwencjonowania całego genomu, RNAseq i niestandardowych paneli genowych. W przypadku surowiczego raka jajnika o wysokim stopniu złośliwości, MPseq do.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy oświadczają, że nie ma dla nich konfliktu interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dziękujemy członkom Mayo Clinic Center for Individualized Medicine (CIM) dr Lin Yangowi i Faye R. Harris, MS, za pomoc w przeprowadzaniu eksperymentów. Praca ta została wsparta przez Prezent Pana i Pani Neil E. Eckles dla Mayo Clinic Center for Individualized Medicine (CIM).

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
3M Vetbond3M, Spółka1469SB
przeciwciało anty-AKTTechnologie sygnalizacji komórkowej, Inc.9272
Przeciwciało anty-GAPDH (G-9)Santa Cruz Biotech. Inc.sc-365062
Technologie sygnalizacji komórkowejprzeciwciała anty-MAPK9926
Przeciwciało anty-fosfo-AKTTechnologie sygnalizacji komórkowej, Inc.9271
Przeciwciało anty-mTORTechnologie sygnalizacji komórkowej, Inc.2972
Przeciwciało anty-fosfo-mTORTechnologie sygnalizacji komórkowej, Inc.2971
Przeciwciało anty-Phospho-S6Technologie sygnalizacji komórkowej, Inc.4858
Przeciwciało anty-RictorTechnologie sygnalizacji komórkowej, Inc.2114
Przeciwciało anty-S6Technologie sygnalizacji komórkowej, Inc.2217
CaptisolChemScene, Inc.cs-0731
KarboplatynaNOVAPLUS, Inc.61703-360-18
DMEMMediatech, Inc.10-013-CV
Easy-A Enzym klonujący Hi-Fi PCRAgilent, Inc.600404-51
SmarCardinal Healthcare82-280
MatrigelCorning, Inc.
McCoy's mediaMediatech, Inc.10-050-CV
MK-2206ApexBio, Inc.A3010
MK-8669ARIAD Pharmaceuticals, Inc.
Nair Kościół Skóry Wrażliwej& Dwight Co.Nair Depilator Shower Power Sensitive
myszy NOD / SCIDCharles River, Inc.skinienie. CB17-Prkdcscid/NCrCrl
PaklitakselNOVAPLUS, Inc.55390-304-05
PEG400Millipore Sigma, Inc.88440-250ML-F
PerjetaGenetech, Co.Pertuzumab
RituximabGenetech, Co.Rituxan
RPMI1640Mediatech, Inc.10-040-CV
Myszy SCIDHarlan Laboratories, Inc.C.B.-17/IcrHsd-PrkdcscidLystbg
Przetwornik liniowy SLAx 13-6MHzFUJIFILM SonoSite, IncHFL38xp
SonoSite Ultrasonograf serii SFUJIFILM SonoSite, IncSonoSite SII
Tween 80Millipore Sigma, Inc.Zobacz materiał P4780-100ML
, Inc.356234AP23573

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tentler, J. J., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews Clinical Oncology. 9, 338-350 (2012).
  2. Marangoni, E., et al. A new model of patient tumor-derived ....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Sekwencjonowanie nowej generacjianaliza zmian genomicznychmonitorowanie odpowiedzi na lekimyszy z niedoborem odporno ciprzeszczepianie tkanki nowotworowejanaliza immunoblottingowaanaliza wzbogacenia szlak w sygna owych

Powiązane artykuły