Artykuł metodologiczny

Synteza funkcjonalizowanych nanocząstek magnetycznych, ich koniugacja z sideroforem feroksaminą i jej ocena pod kątem wykrywania bakterii

DOI:

10.3791/60842

⸱

16 czerwca 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Centro de Investigacións Científicas Avanzadas (CICA), Departamento de Química, Facultade de Ciencias, Universidade da Coruña, 2Centro de Investigacións Científicas Avanzadas (CICA), Unidad de Comunicación y Divulgación, Universidade da Coruña, 3Department of Microbiology and Parasitology, Institute of Aquaculture, Universidade de Santiago de Compostela

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca opisuje protokoły przygotowania nanocząstek magnetycznych, ich powlekania SiO2, następnie funkcjonalizacji aminy (3-aminopropylo)trietoksysilanem (APTES) i jej koniugacji z deferoksaminą przy użyciu ugrupowania sukcynylu jako łącznika. Szczegółowo opisano również szczegółowy opis charakterystyki strukturalnej i test wychwytywania bakterii z użyciem Y. enterocolitica dla wszystkich nanocząstek pośrednich i końcowego koniugatu.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W niniejszej pracy opisano syntezę nanocząstek magnetycznych, ich powlekanie SiO2, następnie funkcjonalizację aminy (3-aminopropylo)trietoksysilanem (APTES) i jej koniugację z deferoksaminą, sideroforem rozpoznawanym przez Yersinia enterocolitica, wykorzystującym ugrupowanie sukcynylu jako łącznik.

Magnetyczne nanocząstki (MNP) magnetytu (Fe3O4) zostały przygotowane metodą solwotermiczną i pokryte SiO2 (MNP@SiO2) przy użyciu procesu Stöbera, a następnie funkcjonalizowane APTES (MNP@SiO2@NH2). Następnie feroksaminę sprzężono z MNP@SiO2@NH2 przez sprzężenie karbodiamimidowe, dając MNP@SiO2@NH2@Fa. Morfologię i właściwości koniugatu i produktów pośrednich badano ośmioma różnymi metodami, w tym dyfrakcją proszkową promieniowania rentgenowskiego (XRD), spektroskopią w podczerwieni z transformacją Fouriera (FT-IR), spektroskopią Ramana, rentgenowską spektroskopią fotoelektronów (XPS), transmisyjną mikroskopią elektronową (TEM) i mapowaniem rentgenowskim z dyspersją energii (EDX). Ta wyczerpująca charakterystyka potwierdziła powstanie koniugatu. Wreszcie, aby ocenić pojemność i specyficzność nanocząstek, przetestowano je w teście wychwytywania bakterii przy użyciu Yersinia enterocolitica.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Metody wykrywania bakterii za pomocą MNP opierają się na molekularnym rozpoznawaniu przeciwciał, aptamerów, bioprotein, węglowodanów sprzężonych z MNP przez bakterie chorobotwórcze1. Biorąc pod uwagę, że siderofory są rozpoznawane przez specyficzne receptory na zewnętrznej błonie bakterii, mogą one również łączyć się z MNP, aby zwiększyć ich specyficzność2. Siderofory to małe cząsteczki organiczne biorące udział w wychwytywaniu Fe3+ przez bakterie3,4. Przygotowanie koniugatów między sideroforami a MNP wraz z ich oceną pod kątem wychwytywania i izolacji bakterii nie zostało jeszcze zgłoszone.

Jednym z kluczowych etapów syntezy koniugatów magnetycznych nanocząstek z małymi cząsteczkami jest wybór rodzaju wiązania lub interakcji między nimi, aby zapewnić, że mała cząsteczka jest dołączona do powierzchni MNP. Z tego powodu procedura przygotowania koniugatu między nanocząstkami magnetycznymi a feroksaminą – sideroforem rozpoznawanym przez Yersinia enterocolitica – skupiła się na wytworzeniu modyfikowalnej powierzchni MNP, aby umożliwić kowalencyjne powiązanie jej z sideroforem za pomocą chemii karbodiimidu. W celu uzyskania jednorodnych nanocząstek magnetytu (MNP) oraz poprawy zarodkowania i kontroli wielkości, reakcję solfolizy z alkoholem benzylowym przeprowadzono w bloku termicznym bez wstrząsania5. Następnie metodą Stöbera wygenerowano powłokę krzemionkową w celu zapewnienia ochrony i poprawy stabilności zawiesiny nanocząstek w środowisku wodnym6. Biorąc pod uwagę strukturę feroksaminy, wprowadzenie grup aminowych jest konieczne do wytworzenia odpowiednich nanocząstek (MNP@SiO2@NH 2), które mają być sprzężone z sideroforem. Osiągnięto to poprzez kondensację (3-aminopropylo)trietoksysilanu (APTES) z grupami alkoholowymi obecnymi na powierzchni nanocząstek modyfikowanych krzemionką (MNP@SiO2) przy użyciu metody zol-żel7.

Równolegle, kompleks feroksaminy żelaza(III) został przygotowany przez kompleksowanie dostępnej na rynku deferoksaminy z octanem acetylu żelaza w roztworze wodnym. N-sukcynyloferoksaminę, zawierającą grupy sukcynylowe, które będą działać jako łączniki, otrzymano w reakcji feroksaminy z bezwodnikiem bursztynowym.

Koniugacja między MNP@SiO2@NH 2 a N-sukcynyloferoksaminą w celu uzyskania MNP@SiO2@NH@Fa została przeprowadzona poprzez chemię karbodymidu przy użyciu jako odczynników sprzęgających: heksafluorofosforanu benzotriazolu-1-ylo-oksy-tris-(dimetyloamino)-fosfoniowego (BOP) i 1-hydroksybenzotriazolu (HOBt) w miękkim podłożu zasadowym w celu aktywacji końcowej grupy kwasowej w N-sukcynyloferoksaminie8.

Po scharakteryzowaniu MNP, oceniliśmy możliwości gołych i funkcjonalizowanych nanocząstek magnetycznych do wychwytywania typu dzikiego (WC-A) i mutanta Y. enterocolitica pozbawionego receptora feroksaminy FoxA (FoxA WC-A 12-8). Zwykłe MNP, funkcjonalizowane MNP i koniugatMNP@SiO 2@NH@Fa mogły wchodzić w interakcje z każdym szczepem Y. enterocolitica. Agregaty sprzężone z bakteriami oddzielono od zawiesiny bakteryjnej za pomocą pola magnetycznego. Oddzielone agregaty przepłukano dwukrotnie roztworem soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS), ponownie zawieszono w PBS w celu przygotowania seryjnych rozcieńczeń, a następnie posiano je w celu zliczenia kolonii. Protokół ten demonstruje każdy etap syntezyMNP@SiO 2@NH@Fa, charakterystykę strukturalną wszystkich produktów pośrednich i koniugatu oraz test wychwytywania bakterii jako łatwy sposób oceny swoistości koniugatu w stosunku do produktów pośrednich. 9

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

UWAGA: Dla reakcji przeprowadzanych w warunkach obojętnej atmosfery, wszystkie naczynia szklane zostały wcześniej wysuszone w piecu w temperaturze 65 °C, uszczelnione gumową przegrodą i trzykrotnie przeczyszczone argonem.

1. Synteza nanocząstek magnetycznych sprzężonych z feroksaminą

  1. Synteza nanocząstek magnetycznych Fe3O4 (MNP)
    1. Dodać 0,5 g Fe(acac)3 do szklanej fiolki o pojemności 20 ml, a następnie wymieszać z 10 ml alkoholu benzylowego.
    2. Sonikować tę mieszaninę przez 2 minuty, a następnie przenieść do bloku grzewczego i podgrzewać w temperaturze 180 °C przez 72 godziny.
    3. Po zakończeniu reakcji odczekać, aż fiolki ostygną, przepłukać nanocząstki 96% etanolem i odwirować przy 4000 x g przez 30 minut. Powtórzyć wirowanie co najmniej dwa razy.
    4. Oddzielić nanocząstki od supernatantu przez przyciąganie magnetyczne za pomocą magnesu neodymowego (NdFeB) i wyrzucić resztki rozpuszczalnika.
    5. Przepłukać 96% etanolem, powtarzając krok 1.1.4. i wyrzucić supernatant na przemian z sonikacją w kąpieli na 1 minutę przy 40 kHz, aż rozpuszczalnik będzie klarowny.
  2. Powłoka nanocząstek magnetycznych SiO2 (MNP@SiO2)
    1. Przygotować zawiesinę 2 g MNP w 80 ml izopropanolu, a następnie dodać 4 ml 21% amoniaku, 7,5 ml wody destylowanej i 0,56 ml ortokrzemianu tetraetylu (TEOS) (w tej kolejności) w kolbie okrągłodennej z mieszadłem magnetycznym.
    2. Podgrzewać mieszaninę w temperaturze 40 °C przez 2 godziny z ciągłym mieszaniem, a następnie poddać sonikacji przez 1 godzinę.
    3. Oddzielić MNP za pomocą magnesu, wyrzucić supernatant i rozproszyć go w 30 ml izopropanolu.
    4. Powtórz kroki 1.2.1 i 1.2.2.
    5. Wyjmij i umyj mieszadło magnetyczne 96% etanolem, aby odzyskać cały materiał.
    6. Oddziel nanocząstki od supernatantu przez przyciąganie magnetyczne za pomocą magnesu.
    7. Wyrzuć supernatant i przepłucz nanocząstki 96% etanolem trzy razy na przemian z sonikacją.
    8. Suszyć nanocząstki w próżni w temperaturze pokojowej przez 12 godzin.
  3. FunkcjonalizacjaMNP@SiO 2 za pomocą (3-aminopropylo)trietoksysilanu (APTES)
    1. Przepłukać 500 mg MNP@SiO2 otrzymanego w poprzednim etapie N,N-dimetyloformamidem (DMF) w atmosferze obojętnej, a następnie poddać sonikacji przez 1 minutę przy 40 kHz. Następnie odrzuć supernatant i powtórz ten proces trzy razy.
    2. Ponownie zawiesić cząstki w kolbie okrągłodennej, mieszając mieszadłem magnetycznym i dodać 9 ml APTES.
    3. Mieszać mieszaninę w temperaturze 60 °C przez 12 godzin.
    4. Wyrzuć supernatant i przepłucz nanocząstki 96% etanolem trzy razy na przemian z sonikacją.
  4. Synteza feroksaminy
    1. Rozpuścić 100 mg (0,15 mmol) soli mezylanu deferoksaminy i 53,0 mg (0,15 mmol) Fe(acac)3 w 5 ml wody destylowanej i mieszać mieszaninę przez noc w temperaturze pokojowej.
    2. Otrzymany produkt przemyć trzykrotnie 20 ml EtOAc w lejku separacyjnym, a następnie usunąć rozpuszczalnik organiczny pod próżnią za pomocą wyparki obrotowej.
    3. Liofilizuj fazę wodną, aby uzyskać feroksaminę w postaci czerwonego ciała stałego.
  5. Synteza N-sukcynyloferoksaminy
    1. Dodać 350 mg (3,50 mmol) bezwodnika bursztynowego do roztworu 100 mg (0,17 mmol) feroksaminy w 5 ml pirydyny w kolbie okrągłodennej o pojemności 50 ml w obojętnej atmosferze.
    2. Mieszaj powstałą mieszaninę w temperaturze pokojowej przez 16 godzin. Po tym czasie usunąć nadmiar pirydyny pod zmniejszonym ciśnieniem w parowniku obrotowym, aby uzyskać ciemnoczerwone ciało stałe.
    3. Rozpuścić surową reakcję w 3 ml metanolu.
    4. Przenieść roztwór metanolowy do kolumny Sephadex (20 cm Sephadexu w kolumnie o średnicy 20 mm) i eluować w stężeniu 0,5 ml/min.
    5. Zebrać czerwoną frakcję i usunąć metanol pod próżnią za pomocą wyparki obrotowej.
  6. Synteza sprzężenia MNP@SiO2@NH@Fa
    1. Przepłukać 30 mg suchej MNP@SiO2@NH 2 dwukrotnie DMF i poddać sonicyjce nanocząstki w 100 ml kolbie Erlenmeyera przez 30 minut w atmosferze obojętnej.
    2. Przygotować roztwór N-sukcynyloferoksaminy (200 mg, 0,30 mmol), benzotriazolu-1-y-ylo-oksy-tris-(dimetyloamino)-fosfoniowego heksafluorofosforanu (BOP, 173 mg, 0,45 mmol), 1-hydroksybenzotriazolu (HOBt, 46 mg, 0,39 mmol) i N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA, 128,8 mg, 1,21 mmol) w 10 ml DMF (mieszanina A) w 50 ml kolby okrągłodennej w atmosferze obojętnej.
    3. Zawiesić wcześniej wypłukane MNP@SiO2@NH2 w 3 ml DMF podczas sonikacji w suchych warunkach beztlenowych przy użyciu atmosfery argonu gazowego (Mix B).
    4. Dodaj mieszankę A, aby mieszać B kroplami.
    5. Wstrząśnij końcową mieszaniną za pomocą wytrząsarki orbitalnej w temperaturze pokojowej przez noc.
    6. Oddzielić otrzymany sprzęgnięty (MNP@SiO2@NH@Fa) od zawiesiny za pomocą magnesu.
    7. Wypłucz powstałą substancję stałą, a następnie poddaj ją pięciokrotnej sonikacji 10 ml etanolu.
    8. Suszyć ciało stałe w próżni przez 24 godziny.

2. Test bakteryjny ze szczepami Y. enterocolitica w celu ilościowego wychwytywania bakterii chorobotwórczych za pomocą nanocząstek

  1. Przygotować zawiesinę wszystkich nanocząstek pośrednich i końcowego koniugatu w PBS w stężeniu 1 mg/ml w sterylnych probówkach o pojemności 2 ml.
  2. Przygotować kulturę Y. enterocolitica w 5 ml bulionu Luria Bertani (LB) przez noc inkubując w temperaturze 37 °C.
  3. Przygotuj 5 ml bulionu sojowego tryptycznego (TSB) z niedoborem żelaza, dodając 50 μl 10 mM 2,2′-bipirydylu.
  4. Zaszczepić 5 ml TSB z niedoborem żelaza za pomocą 50 μl nocnej kultury Y. enterocolitica, a następnie inkubować w temperaturze 37 °C z mieszaniem, aż do osiągnięcia OD600 = 0,5\u20120,8.
  5. Pobrać 100 μl kultury otrzymanej w kroku 2.4 i rozcieńczyć w probówce o pojemności 2,0 ml zawierającej 900 μl PBS, aby uzyskać pierwsze rozcieńczenie 1:10. Następnie przygotuj rozcieńczenie 1/100 z pierwszego rozcieńczenia, stosując tę samą procedurę, aby uzyskać stężenie komórek bakteryjnych na poziomie 1 x 106 jednostek tworzących kolonie (CFU)/ml w przybliżeniu.
  6. Dodać 100 μl zawiesiny nanocząstek o stężeniu 1 mg/ml do 1 ml zawiesiny bakteryjnej rozcieńczonej w stosunku 1:100 w probówce o pojemności 2,0 ml i homogenizować za pomocą wiru.
  7. Inkubować kulturę w temperaturze 20 °C przez 1 godzinę.
  8. Oddziel agregaty MNP/bakterii za pomocą magnesu i ostrożnie wyrzuć supernatant.
  9. Przepłukać oddzielone nanocząstki dwukrotnie 1 ml PBS za pomocą wiru.
  10. Zawieś nanocząstki w 1 ml PBS, aby policzyć ilość wychwytu bakterii w CFU/ml.
  11. Przygotować cztery kolejne rozcieńczenia 1:10 z poprzedniej zawiesiny, aż do uzyskania rozcieńczenia 1 x 10-4.
  12. Umieścić 10 μl każdego rozcieńczenia na płytkach agarowych TS i inkubować je w temperaturze 37 °C przez noc.
  13. Sfotografuj płytkę za pomocą digitalizatora żelu w trybie epi white. Przetwarzaj obraz za pomocą odpowiedniego oprogramowania, aby wzmocnić plamkę, aby policzyć liczbę poszczególnych kolonii.
    UWAGA: Każdy półprodukt MNP został scharakteryzowany w celu śledzenia postępu syntezy. Po pierwsze, gołe MNP zostały zbadane za pomocą XRD w celu sprawdzenia struktury krystalicznej. Następnie przeprowadzono badanie widma FT-IR każdego produktu pośredniego, aby sprawdzić zmiany, które zaszły w odpowiedniej reakcji. Przeprowadzono również analizę spektroskopii Ramana każdego z produktów pośrednich w celu potwierdzenia wniosków wydedukowanych z widm FT-IR. Analiza TGA pozwoliła na oszacowanie masy ubytkowej półproduktów zawierających w swojej strukturze materiał organiczny. Morfologia i rozmiar każdego produktu pośredniego były badane za pomocą TEM. Wreszcie, analiza XPS miała kluczowe znaczenie dla określenia stopni utlenienia atomów na każdej powierzchni pośredniej MNP i potwierdzenia tworzenia wiązania kowalencyjnego w sprzężonym MNP@SiO2@NH@Fa.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Przeprowadzana jest wyczerpująca charakterystyka strukturalna w celu określenia morfologii i właściwości każdego pośredniego i końcowego koniugatu. W tym celu stosuje się techniki XRD, FT-IR, spektroskopię Ramana, TGA, TEM, EDX mapowanie i XPS w celu zademonstrowania powstawania koniugatu. Stany utlenienia atomów na powierzchni nanocząstek uzyskane za pomocą rentgenowskiej spektroskopii fotoelektronów (XPS) są najważniejszymi danymi potwierdzającymi powstawanie wiązań kowalencyjnych między nanocząstką a sideroforem. Zgod...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokół ten opisuje syntezę koniugatu między nanocząstkami magnetycznymi a sideroforem feroksaminą poprzez wiązanie kowalencyjne. Syntezę magnetytu przeprowadzono przy użyciu protokołu opisanego przez Pinna i wsp.5, a następnie pokryto go powłoką krzemionkową w celu ochrony jądra magnetycznego przed korozją w układach wodnych, zminimalizowania agregacji i zapewnienia odpowiedniej powierzchni do funkcjonalizacji6. Proces powlekania krzemionką został zmodyfikowany. Zamiast p...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nie mamy nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy dziękują profesorowi Klausowi Hantke (Uniwersytet w Tybindze, Niemcy) za uprzejme dostarczenie szczepów Yersinia enterocolitica użytych w tej pracy. Prace te były wspierane przez granty AGL2015-63740-C2-1/2-R i RTI2018-093634-B-C21/C22 (AEI/FEDER, UE) z Państwowej Agencji Badawczej (AEI) z Hiszpanii, współfinansowane z programu FEDER ze środków Unii Europejskiej. Prace na Uniwersytecie w Santiago de Compostela i Uniwersytecie A Coruña były również wspierane przez granty GRC2018/018, GRC2018/039 i ED431E 2018/03 (grupa strategiczna CICA-INIBIC) z Xunta de Galicia. Na koniec chcemy podziękować Nurii Calvo za jej wspaniałą współpracę przy podkładaniu głosu pod ten protokół wideo.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
1-Hydroksybenzotriazol hydrat
HOBT		Acros300561000
2,2′-BipyridylSigma AldrichD216305
3-Aminopropylotrietrazysilan 99%Acros151081000
Roztwór wodorotlenku amonu 28% NH3Sigma Aldrich338818
Heksafluorofosforan heksafluorofosforanu benzotriazolu-1-yloksytris(dimetyloamino)-fosfonii Odczynnik BOPAcros209800050
Alkohol benzylowySigma Aldrich822259
Sól mezylanowa deferoksaminy >92,5% (TLC)Sigma AldrichD9533
Etanol, bezwodny, 96%Panreac131085
octan etylu, ekstra czysty, SLR, Fisher Chemical
Octoacetonian żelaza(III) 97%Sigma AldrichF300
LB Rosół (Lennox)Sigma AldrichL3022
N,N-diizopropyloetyloamina, 99,5+%, AcroSealAcros459591000
N,N-dimetyloformamid, 99,8%, Extra Dry, AcroSealAcros326871000
Pirydyna, 99,5%, Ekstra wytrawny, AcroSealAcros
Sephadex LH-20Sigma AldrichLH20100
Bezwodnik bursztynowy >99%Sigma Aldrich239690
Ortozolikan tetraetylu >99,0%Sigma Aldrich86578
339421000

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pan, Y., Du, X., Zhao, F., Xu, B. Magnetic nanoparticles for the manipulation of proteins and cells. Chemical Society Reviews. 41 (7), 2912-2942 (2012).
  2. Zheng, T., Nolan, E. M. Siderophore-based detection of Fe(III) and microbial pathogens. Metallomics. 4, 866-880 (2012).
  3. Hider, R. C., Kong, X. Chemistry and biology of siderophores. Natural Product Reports. 27 (5), 637-657 (2010).
  4. Sandy, M., Butler, A. Microbial Iron Acquisition: Marine and Terrestrial Siderophores. Chemical Reviews. 109 (10), 4580-4595 (2010).
  5. Pinna, N., Grancharov, S., Beato, P., Bonville, P., Antonietti, M., Niederberger, M. Magnetite Nanocrystals : Nonaqueous Synthesis, Characterization. Chemistry of Materials. 17 (15), 3044-3049 (2005).
  6. Li, Y. S., Church, J. S., Woodhead, A. L., Moussa, F. Preparation and characterization of silica coated iron oxide magnetic nano-particles. Spectrochimica Acta - Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. 76 (5), 484-489 (2010).
  7. Chen, J. P., Yang, P. C., Ma, Y. H., Tu, S. J., Lu, Y. J. Targeted delivery of tissue plasminogen activator by binding to silica-coated magnetic nanoparticle. International Journal of Nanomedicine. 7, 5137-5149 (2012).
  8. El-Boubbou, K., Gruden, C., Huang, X. Magnetic glyco-nanoparticles: a unique tool for rapid pathogen detection, decontamination, and strain differentiation. Journal of the American Chemical Society. 129 (44), 13392-13393 (2007).
  9. Martínez-Matamoros, D., et al. Preparation of functionalized magnetic nanoparticles conjugated with feroxamine and their evaluation for pathogen detection. RSC Advances. 9 (24), 13533-13542 (2019).
  10. Cozar, O., et al. Raman and surface-enhanced Raman study of desferrioxamine B and its Fe(III) complex, ferrioxamine B. Journal of Molecular Structure. 788 (1-3), 1-6 (2006).
  11. Shebanova, O. N., Lazor, P. Characterisation of a-C:H and oxygen-containing Si:C:H films by Raman spectroscopy and XPS. Journal of Solid State Chemistry. 174 (4), 424-430 (2003).
  12. González, P., Serra, J., Liste, S., Chiussi, S., León, B., Pérez-Amor, M. Raman spectroscopic study of bioactive silica based glasses. Journal of Non-Crystalline Solids. 320 (12), 92-99 (2003).
  13. Veres, M., et al. Characterisation of a-C:H and oxygen-containing Si:C:H films by Raman spectroscopy and XPS. Diamond and Related Materials. 14 (3-7), 1051-1056 (2005).
  14. You, Y., et al. Visualization and investigation of Si-C covalent bonding of single carbon nanotube grown on silicon substrate. Applied Physics Letters. 93 (10), 103111-103113 (2008).
  15. Graf, N., et al. XPS and NEXAFS studies of aliphatic and aromatic amine species on functionalized surfaces. Surface Science. 603 (18), 2849-2860 (2009).
  16. Michaeli, W., Blomfield, C. J., Short, R. D., Jones, F. R., Alexander, M. R. A study of HMDSO/O2 plasma deposits using a high-sensitivity and -energy resolution XPS instrument: curve fitting of the Si 2p core level. Applied Surface Science. 137 (1-4), 179-183 (2002).
  17. Liana, A. E., Marquis, C. P., Gunawan, C., Gooding, J. J., Amal, R. T4 bacteriophage conjugated magnetic particles for E. coli capturing: Influence of bacteriophage loading, temperature and tryptone. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 151, 47-57 (2017).
  18. Fang, W., Han, C., Zhang, H., Wei, W., Liu, R., Shen, Y. Preparation of amino-functionalized magnetic nanoparticles for enhancement of bacterial capture efficiency. RSC Advances. 6, 67875-67882 (2016).
  19. Zhan, S., et al. Efficient removal of pathogenic bacteria and viruses by multifunctional amine-modified magnetic nanoparticles. Journal of Hazardous Materials. 274, 115-123 (2014).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Powlekanie krzemionkfunkcjonalizacja aminowasprz ganie siderofor wspektroskopia FTIRanaliza TEMcharakterystyka XPSsprz ganie karbodiimidoweYersinia enterocolitica

Powiązane artykuły