Artykuł metodologiczny

Model wstawiania żył królika naśladujący operację rewaskularyzacji przy użyciu przeszczepów żył do oceny przerostu błony wewnętrznej pod ciśnieniem tętniczym krwi

DOI:

10.3791/60931

⸱

15 maja 2020

 ,  , 
1Department of Cardiovascular Surgery, Graduate School of Medicine, Kyoto University, 2Clinical Translational Research Program, RIKEN Center for Biosystems Dynamics Research, 3Department of Cardiovascular Surgery, Takamatsu Red Cross Hospital

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obecny protokół ma na celu eksperymentalne stworzenie przerostu żył wewnętrznych poprzez poddanie żył działaniu ciśnienia krwi tętniczej w celu opracowania strategii osłabienia przerostu żył wewnętrznych po operacji rewaskularyzacji za pomocą przeszczepów żyłowych.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chociaż przeszczepy żył były powszechnie używane jako przeszczepy autologiczne w operacjach rewaskularyzacji chorób niedokrwiennych, długoterminowa drożność pozostaje słaba z powodu przyspieszenia przerostu błony wewnętrznej spowodowanego ekspozycją na ciśnienie tętnicze krwi. Niniejszy protokół ma na celu ustalenie eksperymentalnego przerostu żył wewnętrznych poprzez wstawienie żył szyjnych królika do ipsilateralnych tętnic szyjnych. Protokół nie wymaga zabiegów chirurgicznych w głąb tułowia, a rozległość nacięcia jest ograniczona, co jest mniej inwazyjne dla zwierząt, umożliwiając długotrwałą obserwację po implantacji. Ta prosta procedura umożliwia naukowcom zbadanie strategii tłumienia progresji przerostu błony wewnętrznej wszczepionych przeszczepów żylnych. Korzystając z tego protokołu, opisaliśmy efekty transdukcji mikroRNA-145 (miR-145), o którym wiadomo, że kontroluje fenotyp komórek mięśni gładkich naczyń krwionośnych (VSMC) od stanu proliferacyjnego do skurczowego, do pobranych przeszczepów żył. Potwierdziliśmy osłabienie przerostu błony wewnętrznej przeszczepów żył poprzez transdukcję miR-145 przed zabiegiem implantacji poprzez zmianę fenotypu VSMC. Tutaj przedstawiamy mniej inwazyjną platformę eksperymentalną do zbadania strategii, które można zastosować do osłabienia przerostu błony wewnętrznej przeszczepów żył w operacjach rewaskularyzacji.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Liczba pacjentów doświadczających chorób niedokrwiennych spowodowanych miażdżycą rośnie na całym świecie1. Pomimo obecnego postępu w medycznych i chirurgicznych terapiach chorób sercowo-naczyniowych, choroby niedokrwienne serca, takie jak zawał mięśnia sercowego, pozostają główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności2. Ponadto choroby tętnic obwodowych charakteryzujące się zmniejszonym przepływem krwi do kończyn wywołują krytyczne niedokrwienie kończyn, w którym około 40% pacjentów traci nogi w ciągu 6 miesięcy od diagnozy, a śmiertelność wynosi do 20%3.

Operacje re....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

UWAGA: Wszystkie zabiegi chirurgiczne wykonywane na zwierzętach powinny być przeprowadzane zgodnie z Przewodnikiem Opieki i Użytkowania Zwierząt Laboratoryjnych (www.nap.edu/catalog/5140.html) lub innymi odpowiednimi wytycznymi etycznymi. Przed przystąpieniem do dalszych czynności protokoły powinny zostać zatwierdzone przez komitet ds. dobrostanu zwierząt w odpowiedniej instytucji.

1. Przygotowanie zwierząt

  1. Kup samce japońskich białych królików (lub królików o równoważnej wielkości ciała) o wadze 2,7–3,0 kg.
  2. Aklimatyzuj króliki przez 1 tydzień w 12-godzinnym cyklu światło-ciemność i podawaj regularną dietę dla królików....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rysunek 1A pokazuje reprezentatywny obraz udanego przerostu błony wewnętrznej po 2 tygodniach od operacji wstawiania żył (górny panel). Dolny panel pokazuje efekty terapeutyczne nanocząstek poli(kwasu mlekowo-ko-glikolowego) obciążonych mikroRNA-145, które tłumiły przerost błony wewnętrznej (dolny panel). Rysunek 1B pokazuje porównanie przerostu błony wewnętrznej między grupą kontrolną korzystającą z grupy kontrolnej buforowanej solą fizjologiczną (PBS), kontrolną mikroRN.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Niniejszy protokół ma na celu zapewnienie eksperymentalnej platformy do testowania różnych interwencji molekularnych lub genetycznych dla VSMC w celu kontrolowania fenotypu od stanu proliferacyjnego do skurczowego, a następnie tłumienia progresji przerostu żylnego błony wewnętrznej in vivo. Korzystając z tego modelu, z powodzeniem przygotowaliśmy przerost błony wewnętrznej po 2 tygodniach od operacji (ryc. 1A) i wskazaliśmy potencjał terapeutyczny mikroRNA-145 do kontrolowania fenotypu

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca była wspierana przez granty badawcze z Ministerstwa Edukacji, Kultury, Sportu, Nauki i Technologii Japonii (25462136).

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
10% roztwór powidonu i joduNakakita872612Materiały chirurgiczne
2-0 VICRYL PlusJohnson and JohnsonVCP316HMateriały chirurgiczne
4-0 Szew jedwabnyAlfresa pharmaGA04SBMateriały chirurgiczne
8-0 szew polipropylenowyEthicon8741HMateriały chirurgiczne
Cefazorin soduNichi-Iko Pharmaceutical6132401D3196Antybiotyki
Cewnik Fogarty'ego (2Fr)Edwards Lifesciences LLCE-060-2FMateriały chirurgiczne
HeparynaNipro873334Antykoagulant
Cewnik dożylny (20G)TerumoSR-OT2051CMateriały chirurgiczne
IzofluranFujifilm095-06573Znieczulenie
Chlorowodorek lidokainyMP Biomedicals193917Znieczulenie
Pentobarbital soduTokio Przemysł chemicznyP0776Znieczulenie

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Causes of death, 2000-2016, Global Health Estimates (GHE). World Health Organization (WHO). , Available from: https://www.who.int/healthinfo/global_burden_disease/estimates/en/ (2019).
  2. Benjamin, E. J., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2019 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 139....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Venous Interposition ModelIntimal Hyperplasia AssessmentVein Graft SurgeryRabbit Carotid ArteryJugular Vein HarvestEndothelial DenudationVascular Anastomosis TechniqueMicroRNA 145 TransductionVSMC Phenotype ChangeGraft Patency Evaluation

Powiązane artykuły