Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Mysi model narażenia płodu na stan zapalny matki w celu zbadania wpływu ostrego zapalenia błony płodowej na rozwój jelit noworodka

3.3K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/61464

⸱

24 czerwca 2020

 ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Neonatology, Stead Family Department of Pediatrics, University of Iowa, 2Division of Maternal Fetal Medicine, Department of Obstetrics & Gynecology, University of Iowa, 3Division of Neonatology, Department of Pediatrics, Vanderbilt University, 4Department of Microbiology & Immunology, University of Iowa

W tym artykule

Podsumowanie

Opracowaliśmy model zapalenia błony płodowej, aby symulować narażenie płodu na stan zapalny matki (FEMI) bez komplikacji związanych z żywymi organizmami, aby zbadać wpływ FEMI na rozwój przewodu pokarmowego potomstwa. Pozwala to na badanie mechanistycznych przyczyn rozwoju uszkodzenia jelit po zapaleniu błony płodowej.

Streszczenie

Zapalenie błony płodowej jest częstym czynnikiem powodującym przedwczesne porody i jest związane z wieloma chorobami wcześniaków, w tym z martwiczym zapaleniem jelit (NEC). Jednak mechanistyczny związek między tymi dwoma warunkami nie został jeszcze odkryty. Przyjęliśmy mysi model zapalenia błony płodowej z narażeniem płodu na stan zapalny matki wywołany lipopolisacharydem (LPS). Ten model FEMI indukuje sterylną kaskadę zapalną matki, łożyska i płodu, która jest również obecna w wielu przypadkach klinicznego zapalenia błon płodowych. Chociaż istnieją modele, które wykorzystują żywe bakterie i dokładniej naśladują patofizjologię wstępującej infekcji skutkującej zapaleniem błon płodowych, metody te mogą mieć pośredni wpływ na rozwój niedojrzałego przewodu pokarmowego i związany z nim rozwijający się mikrobiom. Korzystając z tego protokołu, wykazaliśmy, że FEMI wywołane przez LPS powoduje zależny od dawki wzrost utraty ciąży i przedwczesnego porodu, a także zakłócenie normalnego rozwoju jelit u potomstwa. Ponadto wykazaliśmy, że FEMI znacznie zwiększa uszkodzenie jelit i cytokiny surowicy u potomstwa, jednocześnie zmniejszając liczbę komórek kielichowych i Panetha, które zapewniają pierwszą linię wrodzonej odporności na zapalenie jelit. Chociaż podobny model FEMI wywołany przez LPS został wykorzystany do modelowania związku między zapaleniem błony płodowej a późniejszymi nieprawidłowościami ośrodkowego układu nerwowego, według naszej wiedzy, protokół ten jest pierwszym, który próbuje wyjaśnić mechanistyczny związek między zapaleniem błony płodowej a późniejszymi zaburzeniami w rozwoju jelit jako potencjalny związek między zapaleniem błony płodowej a NEC.

Wprowadzenie

Błony kosmówkowe odgrywają integralną rolę w ciąży ssaków. Należą do nich kosmówka i owodnia, które pełnią wiele funkcji. Otaczają i chronią płód, ułatwiają sygnalizację parakrynną między przedziałami matki i płodu1 i tworzą lokalne pętle sprzężenia zwrotnego w błonach kosmówkowych, które mogą być zaangażowane w inicjowanie porodu1. Obecna wiedza na temat błon wskazuje, że owodnia pełni funkcję bariery strukturalnej, a kosmówka zapewnia bufor immunologiczny przede wszystkim w celu ochrony rozwijającego się płodu przed matczynym układem odpornościowym2. Zapalenie tych błon jest znane jako zapalenie błon płodowych. Historycznie rzecz biorąc, rozpoznanie klinicznego zapalenia błony płodowej było stawiane na podstawie obecności gorączki matki oraz jednego lub więcej wyników klinicznych u płodu lub matki3,4. Jednak, chociaż ta definicja jest klinicznie użyteczna, jej brak precyzji sprawił, że badania nad zapaleniem błony płodowej są trudne. W 2015 roku, próbując wyjaśnić diagnozę, warsztat panelu ekspertów zorganizowany przez Narodowy Instytut Zdrowia Dziecka i Rozwoju Człowieka Eunice Kennedy Shriver zdefiniował zapalenie błony płodowej jako wewnątrzmaciczne zapalenie błony płodowej lub infekcję, lub jedno i drugie (potrójne I)3. To wyjaśnienie jest ważne, ponieważ chociaż infekcja wywołana przez drobnoustroje jest ważną przyczyną zapalenia macicy/owodni, występuje rzadziej niż sterylne zapalenie macicy/owodni5,6,7. Ogólnie rzecz biorąc, zapalenie błony płodowej pozostaje poważnym problemem zdrowia publicznego, co widać w 2\u20124% porodów porodowych i 25\u201230% porodów przedwczesnych8,9.

Zapalenie błony płodowej może mieć znaczący wpływ na płód i noworodka. Zostało dobrze udokumentowane w literaturze, że zapalenie błony płodowej wiąże się ze zwiększonym ryzykiem wielu chorób wcześniaków, w tym dysplazji oskrzelowo-płucnej10, uszkodzenie istoty białej mózgu11, krwotok dokomorowy12, retinopatia wcześniaków13, oraz zarówno podejrzenie, jak i potwierdzona wczesna sepsa noworodków14,15. Ponieważ interesują nas mechanizmy urazu i naprawy niedojrzałego przewodu pokarmowego, ważne jest, aby zauważyć, że zapalenie błony płodowej wiąże się również z późniejszym rozwojem martwiczego zapalenia jelit (NEC)15,16. NEC to wyniszczająca choroba żołądkowo-jelitowa wcześniaków, która powoduje rozregulowaną odpowiedź gospodarza na stan zapalny i późniejszą martwicę jelit17. Każdego roku NEC dotyka ponad 4000 niemowląt w Stanach Zjednoczonych, a nawet jedna trzecia z tych niemowląt umiera z powodu choroby18. Patogeneza NEC prawdopodobnie obejmuje kombinację niedojrzałości jelitowej, rozregulowania niedojrzałego układu odpornościowego, zapalenia jelit i translokacji bakteryjnej19, czego kulminacją jest ostateczny wspólny szlak martwicy jelit. Co ważne, początek NEC często występuje kilka tygodni po urodzeniu i potencjalnym narażeniu na zapalenie błon płodowych, co sprawia, że mechanistyczny związek między zapaleniem błony płodowej a późniejszym rozwojem NEC jest niejasny20. Jednym z potencjalnych mechanizmów, dzięki którym zapalenie błony płodowej może przyczyniać się do patofizjologii NEC, jest regulacja w górę układu odpornościowego matki, a następnie wytwarzanie silnej reakcji zapalnej płodu, która może zakłócić normalne wzorce rozwojowe płodu21,22,23.

U gryzoni i owiec istnieje wiele modeli ssaków zapalenia błon płodowych u gryzoni i owiec24,25,26,27,28,29,30,31,32. Istnieje jednak niewiele danych dotyczących rozwoju przewodu pokarmowego po początkowym okresie noworodkowym po narażeniu płodu na zapalenie błon płodowych wywołane zapaleniem błon płodowych (FEMI). W celu zbadania związku między FEMI a późniejszym rozwojem uszkodzenia niedojrzałego przewodu pokarmowego, dostosowaliśmy model FEMI indukowany lipopolisacharydem (LPS). Lipopolisacharydy są głównym składnikiem powierzchni zewnątrzkomórkowej bakterii Gram-ujemnych i są silnym stymulantem wrodzonego układu odpornościowego wielu gatunków eukariotycznych, w tym ludzi33. Wstrzyknięcie LPS u matki powoduje jałową kaskadę zapalną bez zakłócających skutków żywych bakterii i jest to dobrze znany model indukcji przedwczesnego porodu34, a także model ostrego zapalenia błony płodowej i zespołu odpowiedzi zapalnej płodu (FIRS), który jest najcięższą postacią zapalenia błony płodowej24,35. Wykazano również, że wywołuje zarówno uszkodzenie istoty białej, jak i szarej mózgu w modelu owcy36 i modelu mysim37,38,39,40. Jednak, zgodnie z naszą wiedzą, jesteśmy pierwszymi, którzy używają tego modelu zapalenia błony płodowej i FEMI do zbadania jego wpływu na rozwój przewodu pokarmowego po urodzeniu, a także do zbadania możliwego mechanistycznego związku między zapaleniem błony płodowej a późniejszym rozwojem NEC41,42.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Iowa (Protokół #8041401). Wszystkie zwierzęta były trzymane w wiwarium zatwierdzonym przez Stowarzyszenie Oceny i Akredytacji Opieki nad Zwierzętami Laboratoryjnymi (AALAC) na Uniwersytecie Iowa. Wszystkie myszy były dzikim szczepem C57Bl/6J.

1. Ustanowienie FEMI u ciężarnych myszy

  1. Przygotowanie LPS
    1. Stosować LPS pochodzący z Escherichia coli O55:B5 (stężenie podstawowe 2 mg/ml).
    2. Rozcieńczyć stężenie podstawowe LPS 1:100 sterylnym roztworem soli fizjologicznej do stężenia roboczego 20 μg/ml.
  2. Wstrzyknięcie matczynego LPS
    1. Wstrzyknąć ciężarne matki w dniu ciąży e15. Ten punkt czasowy wynosi około 75% przez ciążę mysią, co czyni ten model rozwojowo podobnym do wczesnego trzeciego trymestru ciąży u ludzi, kiedy to występuje większość przedwczesnych porodów z powodu zapalenia błony płodowej.
    2. Zważyć ciężarne myszy bezpośrednio przed wstrzyknięciem, aby określić odpowiednie dawkowanie LPS.
    3. Obliczyć dawkę stężenia roboczego, korzystając z następującego wzoru: 5 μl x gram masy ciała (gbw), dla całkowitej dawki LPS wynoszącej 100 μg/kg. W przypadku zwierząt kontrolnych należy użyć równoważnej objętości soli fizjologicznej do wstrzykiwań.
    4. Wirować roztwór LPS trzy razy przez 15 sekund na haju przed każdym wstrzyknięciem.
    5. Pobrać objętość LPS do strzykawki o pojemności 1 ml.
    6. Powstrzymaj ciężarną mysz za pomocą techniki scruffingu. Utrzymać w pozycji leżącej grzbietowej i wykonać wstrzyknięcie.
      1. Włóż igłę o rozmiarze 30 x 8 mm do góry nad prawym dolnym kwadrantem brzucha (aby uniknąć pęcherza i naczyń brzusznych) pod kątem 30\u201240°. Włożyć około 1/4 do 1/2 długości igły.
      2. Przed wstrzyknięciem należy odciągnąć tłok strzykawki, aby zapewnić podciśnienie. Kontynuować wstrzykiwanie, jeśli występuje podciśnienie.
      3. Po wstrzyknięciu należy monitorować myszy przez około 30 minut, a następnie wrócić do klatek na pozostałą część ciąży.

2. Dostarczanie i opieka nad potomstwem oraz pobieranie jelit

  1. Młode należy urodzić normalnie drogą pochwową w temperaturze e20,
    UWAGA: Ten model ma oczekiwany wskaźnik utraty płodu zależny od dawki, który można zobaczyć w Rysunek 1 i jest omówiony w poniższych wynikach.
  2. Pozwól szczeniętom pozostać z matkami i otrzymywać karmienie ad libitum.
  3. W dniu zbiorów, zazwyczaj w 14. dniu po urodzeniu (P14), należy poddać szczenięta eutanazji przez zwichnięcie szyjki macicy zgodnie z protokołami Instytucjonalnego Komitetu ds. Opieki nad Zwierzętami i Ich Wykorzystania.
  4. Za pomocą nożyczek i kleszczy wykonaj pionowe nacięcie wzdłuż linii środkowej brzucha, przez skórę i otrzewną, na całej długości brzucha. Wytnij jelito cienkie od żołądka do jelita ślepego nożyczkami i usuń krezkę kleszczami.
  5. Wyizoluj i zachowaj dystalną 1/3 jelita cienkiego (sekcja reprezentatywna dla ludzkiego jelita krętego), odrzucając proksymalne jelito cienkie, jelito ślepe i okrężnicę.
  6. Podziel część jelita krętego na pół za pomocą nożyczek.
  7. Umieść proksymalną połowę w roztworze stabilizującym RNA w celu późniejszej kwantyfikacji RNA.
  8. Umieść dystalną połowę w 10% neutralnej buforowanej formalinie w celu przygotowania szkiełka.

3. Punktacja urazów jelitowych

  1. Tkankę zatopioną w parafinie podzielić na plastry o grubości 5 μm i zamontować na szkiełkach podstawowych.

    UWAGA: Wysyłamy próbki do rdzenia histologicznego w celu zatopienia, przekrojenia i zamontowania parafiny na szkiełkach.
  2. Odparafinować szkiełka zgodnie ze standardowymi procedurami.
  3. Wybarwić skrawki hematoksyliną i eozyną zgodnie ze standardowymi procedurami.
  4. Oceniaj sekcje w 3-punktowej skali dla urazów jelit, jak opisano wcześniej42,43.
    1. Korzystając z mikroskopii świetlnej, oceń uogólnione uszkodzenie jelit przez dwóch oddzielnych zaślepionych badaczy na 3-punktowej skali oceniającej integralność kosmków i oddzielenie od błony podstawnej43 (Rysunek uzupełniający 1). Uraz jelit najlepiej oceniać przy 20-krotnym powiększeniu i aperturze numerycznej 0,50.
    2. Przypisz wynik 0, aby opisać normalną błonę śluzową.
    3. Przypisz wynik 1 opisujący łagodne urazy, które obejmują rozwój podnabłonkowej przestrzeni Gruenhagena, wakuolizację lub podnabłonkowe uniesienie ograniczone do blaszki właściwej lub końcówek kosmków.
    4. Przypisz wynik 2, aby opisać ciężkie uszkodzenie, na które wskazuje uniesienie nabłonka i wakuolizację większą niż połowa kosmków, zniekształcenie kosmków lub owrzodzenie błony śluzowej i rozpad blaszki właściwej.

4. Kwantyfikacja komórek Paneth i kubków

  1. Po deparafinowaniu zabarwić szkiełka skrawków tkanek z kroku 2.8 barwieniem Schiffa Alcian Blue/Periodic Acid, aby oznaczyć zarówno komórki kielichowe, jak i Panetha, jak opisano wcześniej44,45 zgodnie z następującymi krokami.
    UWAGA: Chociaż barwienie Schiffa Alcian Blue/Periodic Acid nie jest specyficzne ani dla komórek Paneth, ani dla komórek kubkowych, z naszego doświadczenia wynika, że zaślepieni doświadczeni badacze mają równoważną kwantyfikację komórkową przy użyciu tego barwnika w porównaniu z przeciwciałami ukierunkowanymi na komórki, ze znacznie mniejszym barwieniem tła46.
  2. Odparafinować, plamić i odwadniać szkiełka w następujący sposób.
    1. Zanurz szkiełka w ksylenie na 10 minut dwa razy.
      UWAGA: Ksylen powinien być używany w dygestorium.
    2. Spłukać 100% EtOH.
    3. Zanurz szkiełka w 100% EtOH na 3 min, następnie w 90% EtOH na 3 min, następnie 70% EtOH na 3 min, a na koniec zanurz szkiełka w 50% EtOH na 3 min.
    4. Myć pod bieżącą wodą pod bieżącą wodą przez 5 min.
      UWAGA: Skieruj sekcję z dala od bieżącej wody, aby zapobiec utracie próbki tkanki.
    5. Przefiltruj roztwór niebieskiej plamy Alcian za pomocą standardowego filtra do kawy.
    6. Bejca ślizga się w bejcy Alcian blue przez 15 minut, a następnie myje pod bieżącą wodą z kranu przez 2 minuty.
    7. Rozcieńczyć 1 mg kwasu okresowego w 200 ml podwójnie destylowanej wody. Zanurz slajdy w tym roztworze na 5 minut. Następnie myj pod bieżącą wodą pod bieżącą wodą przez 1 min.
    8. Barwieć odczynnikiem Schiffa przez 10 min. Myć pod bieżącą wodą pod bieżącą wodą przez 5 min.
    9. Szkiełka należy barwić hematoksyliną przez 1 min, a następnie myć pod bieżącą wodą z kranu przez 2 min.
    10. Zanurz je w kwaśnym alkoholu (1 ml kwasu solnego zmieszanego z 99 ml 70% EtOH) na 1 minutę.
    11. Zanurz się w wodzie z kranu Scotta (stężenie 0,1% NaHCO3 w wodzie z kranu) na 1 minutę, a następnie umyj pod bieżącą wodą z kranu przez 1 minutę.
    12. Odwodnić szkiełka.
      1. Zanurz każde szkiełko 10 razy w 70% EtOH, następnie zanurz 10 razy w 90% EtOH i 10 razy w 100% EtOH.
      2. Zanurz szkiełka w 100% EtOH na 10 minut, a następnie zanurz dwukrotnie w świeżym ksylenie na 3 minuty każde.
    13. Umieść kroplę podłoża montażowego na próbce i umieść na niej szkiełko nakrywkowe.
  3. Liczenie komórek w kielichu
    1. Za pomocą mikroskopii świetlnej policz komórki kubkowe (rysunek uzupełniający 2). Dla każdego fragmentu tkanki jelitowej policz liczbę komórek kubkowych i 500 komórek nabłonkowych i wyraź stosunek komórek kubkowych jako stosunek na 100 komórek nabłonka. Komórki kielichowe najlepiej liczyć przy 20-krotnym powiększeniu i aperturze numerycznej 0,5.
  4. Zliczanie komórek Panetha
    1. Za pomocą mikroskopii świetlnej policz komórki Panetha (rysunek uzupełniający 2). Dla każdego fragmentu tkanki jelitowej wyraź jako stosunek komórek Panetha na kryptę jelitową. Policz 100 krypt jelitowych na każdy fragment tkanki jelitowej. Komórki Panetha najlepiej liczyć przy powiększeniu 20x-60x i aperturze numerycznej 0,50-1,30.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Ekspozycja na FEMI w 15. dniu embrionalnym prowadzi do zależnej od dawki utraty ciąży oraz zależnej od dawki częstości występowania przedwczesnego porodu (Rysunek 1)42. Do eksperymentów zdecydowano się użyć dawki LPS wynoszącej 10 µg/kg, aby zminimalizować utratę ciąży i przedwczesność (50% strat obejmujących zarówno przedwczesność, jak i obumarcie płodu wewnątrzmacicznie), zapewniając jednocześnie płodom ekspozycję na znaczną stymulację stanu zapalnego.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Zapalenie błony płodowej dotyka 2–4% porodów porodowych i 25–30% porodów przedwczesnych 8,9. Jednak wpływ zapalenia błony płodowej może trwać długo po urodzeniu, ponieważ wykazano, że ma on znaczący wpływ na płód i noworodka 10,11,12,13,14,15,16.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ta praca była częściowo wspierana przez National Institutes of Health (DK097335 & T32AI007260) oraz University of Iowa Stead Family Department of Pediatrics.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
10% neutralna buforowana formalinaSigmaHT501128
Alcian niebieska plamaNowożeńcy dostarczają1003A
myszy C57Bl6/JJackson Laboratories664
EtanolDecon labs2701
HClSigmaH1758
Barwnik hematoksylinowyLeica381562
LPSSigmaL2880
NaHCO3SigmaS6014
Nikon Eclipse Mikroskop Ni-UNikon2CE-MQVJ-1
Kwas okresowyACROSH5106CAS# 10450-59-9
RNAlaterThermofisherAm7021
Odczynnik SchiffaSigmaS5133
Secor Imager 2400Wykrywanie w skali mezo (MSD)
V-PlexOdkrywanie w skali mezo (MSD)
KsylenSigma534056
Test

Bibliografia

  1. Myatt, L., Sun, K. Role of fetal membranes in signaling of fetal maturation and parturition. International Journal of Developmental Biology. 54 (2-3), 545-553 (2010).
  2. Verbruggen, S. W., Oyen, M. L., Phillips, A. T., Nowlan, N. C. Function and failure of the fetal membrane: Modelling the mechanics of the chorion and amnion. PLoS One. 12 (3), 0171588(2017).
  3. Higgins, R. D., et al. Evaluation and Management of Women and Newborns With a Maternal Diagnosis of Chorioamnionitis: Summary of a Workshop. Obstetrics & Gynecology. 127 (3), 426-436 (2016).
  4. Peng, C. C., Chang, J. H., Lin, H. Y., Cheng, P. J., Su, B. H. Intrauterine inflammation, infection, or both (Triple I): A new concept for chorioamnionitis. Pediatrics and Neonatology. 59 (3), 231-237 (2018).
  5. Romero, R., et al. Prevalence and clinical significance of sterile intra-amniotic inflammation in patients with preterm labor and intact membranes. American Journal of Reproductive Immunology. 72 (5), 458-474 (2014).
  6. Romero, R., et al. Sterile intra-amniotic inflammation in asymptomatic patients with a sonographic short cervix: prevalence and clinical significance. Journal of Maternal-Fetal and Neonatal. , 1-17 (2014).
  7. Romero, R., et al. Sterile and microbial-associated intra-amniotic inflammation in preterm prelabor rupture of membranes. Journal of Maternal-Fetal and Neonatal Medicine. 28 (12), 1394-1409 (2015).
  8. Goldenberg, R. L., Culhane, J. F., Iams, J. D., Romero, R. Epidemiology and causes of preterm birth. Lancet. 371 (9606), 75-84 (2008).
  9. Erdemir, G., et al. Histological chorioamnionitis: effects on premature delivery and neonatal prognosis. Pediatrics and Neonatology. 54 (4), 267-274 (2013).
  10. Metcalfe, A., Lisonkova, S., Sabr, Y., Stritzke, A., Joseph, K. S. Neonatal respiratory morbidity following exposure to chorioamnionitis. BMC Pediatrics. 17 (1), 128(2017).
  11. Anblagan, D., et al. Association between preterm brain injury and exposure to chorioamnionitis during fetal life. Scientific Reports. 6, 37932(2016).
  12. Villamor-Martinez, E., et al. Corrigendum: Chorioamnionitis Is a Risk Factor for Intraventricular Hemorrhage in Preterm Infants: A Systematic Review and Meta-Analysis. Frontiers in Physiology. 10, 102(2019).
  13. Villamor-Martinez, E., et al. Chorioamnionitis as a risk factor for retinopathy of prematurity: An updated systematic review and meta-analysis. PLoS One. 13 (10), 0205838(2018).
  14. Randis, T. M., et al. Incidence of early-onset sepsis in infants born to women with clinical chorioamnionitis. Journal of Perinatal Medicine. 46 (8), 926-933 (2018).
  15. Rodrigo, F. G. M., Henriquez F, G. G., Aloy, F. J., Perez, G. A. A. Outcomes of very-low-birth-weight infants exposed to maternal clinical chorioamnionitis: a multicentre study. Neonatology. 106 (3), 229-234 (2014).
  16. Been, J. V., Lievense, S., Zimmermann, L. J., Kramer, B. W., Wolfs, T. G. Chorioamnionitis as a risk factor for necrotizing enterocolitis: a systematic review and meta-analysis. Journal of Pediatrics. 162 (2), 236-242 (2013).
  17. Tanner, S. M., et al. Pathogenesis of necrotizing enterocolitis: modeling the innate immune response. American Journal of Pathology. 185 (1), 4-16 (2015).
  18. Fitzgibbons, S. C., et al. Mortality of necrotizing enterocolitis expressed by birth weight categories. Journal of Pediatric Surgery. 44 (6), 1075-1076 (2009).
  19. Vongbhavit, K., Underwood, M. A. Prevention of Necrotizing Enterocolitis Through Manipulation of the Intestinal Microbiota of the Premature Infant. Clinical Therapeutics. 38 (4), 716-732 (2016).
  20. Yee, W. H., et al. Incidence and timing of presentation of necrotizing enterocolitis in preterm infants. Pediatrics. 129 (2), 298-304 (2012).
  21. Gantert, M., et al. Chorioamnionitis: a multiorgan disease of the fetus. Journal of Perinatology. 30, 21-30 (2010).
  22. Hudalla, H., et al. LPS-induced maternal inflammation promotes fetal leukocyte recruitment and prenatal organ infiltration in mice. Pediatric Research. 84 (5), 757-764 (2018).
  23. Yamada, N., et al. Histological severity of fetal inflammation is useful in predicting neonatal outcome. Placenta. 36 (12), 1490-1493 (2015).
  24. Wolfe, K. B., et al. Modulation of lipopolysaccharide-induced chorioamnionitis in fetal sheep by maternal betamethasone. Reproductive Sciences. 20 (12), 1447-1454 (2013).
  25. Normann, E., et al. A novel mouse model of Ureaplasma-induced perinatal inflammation: effects on lung and brain injury. Pediatric Research. 65 (4), 430-436 (2009).
  26. Burd, I., Brown, A., Gonzalez, J. M., Chai, J., Elovitz, M. A. A mouse model of term chorioamnionitis: unraveling causes of adverse neurological outcomes. Reproductive Sciences. 18 (9), 900-907 (2011).
  27. Dell'Ovo, V., et al. An animal model for chorioamnionitis at term. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 213 (3), 387(2015).
  28. Randis, T. M., et al. Group B Streptococcus beta-hemolysin/cytolysin breaches maternal-fetal barriers to cause preterm birth and intrauterine fetal demise in vivo. Journal of Infectious Diseases. 210 (2), 265-273 (2014).
  29. Breen, K., et al. TLR-4-dependent and -independent mechanisms of fetal brain injury in the setting of preterm birth. Reproductive Sciences. 19 (8), 839-850 (2012).
  30. Burd, I., Balakrishnan, B., Kannan, S. Models of fetal brain injury, intrauterine inflammation, and preterm birth. American Journal of Reproductive Immunology. 67 (4), 287-294 (2012).
  31. Agrawal, V., et al. Role of Notch signaling during lipopolysaccharide-induced preterm labor. Journal of Leukocyte Biology. 100 (2), 261-274 (2016).
  32. Filipovich, Y., Klein, J., Zhou, Y., Hirsch, E. Maternal and fetal roles in bacterially induced preterm labor in the mouse. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 214 (3), 381-389 (2016).
  33. Alexander, C., Rietschel, E. T. Bacterial lipopolysaccharides and innate immunity. Journal of Endotoxin Research. 7 (3), 167-202 (2001).
  34. McCarthy, R., et al. Mouse models of preterm birth: suggested assessment and reporting guidelines. Biology of Reproduction. 99 (5), 922-937 (2018).
  35. Rueda, C. M., et al. Lipopolysaccharide-Induced Chorioamnionitis Promotes IL-1-Dependent Inflammatory FOXP3+ CD4+ T Cells in the Fetal Rhesus Macaque. Journal of Immunology. 196 (9), 3706-3715 (2016).
  36. Gavilanes, A. W., et al. Chorioamnionitis induced by intraamniotic lipopolysaccharide resulted in an interval-dependent increase in central nervous system injury in the fetal sheep. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 200 (4), 431-438 (2009).
  37. Boksa, P. Effects of prenatal infection on brain development and behavior: a review of findings from animal models. Brain, Behavior, and Immunity. 24 (6), 881-897 (2010).
  38. Knuesel, I., et al. Maternal immune activation and abnormal brain development across CNS disorders. Nature Reviews Neurology. 10 (11), 643-660 (2014).
  39. Garay, P. A., Hsiao, E. Y., Patterson, P. H., McAllister, A. K. Maternal immune activation causes age- and region-specific changes in brain cytokines in offspring throughout development. Brain, Behavior, and Immunity. 31, 54-68 (2013).
  40. Smith, S. E., Li, J., Garbett, K., Mirnics, K., Patterson, P. H. Maternal immune activation alters fetal brain development through interleukin-6. Journal of Neuroscience. 27 (40), 10695-10702 (2007).
  41. Elgin, T. G., et al. Fetal exposure to maternal inflammation interrupts murine intestinal development and increases susceptibility to neonatal intestinal injury. Disease Models & Mechanisms. 12 (10), (2019).
  42. Fricke, E. M., et al. Lipopolysaccharide-induced maternal inflammation induces direct placental injury without alteration in placental blood flow and induces a secondary fetal intestinal injury that persists into adulthood. American Journal of Reproductive Immunology. 79 (5), 12816(2018).
  43. Wynn, J. L., et al. Targeting IL-17A attenuates neonatal sepsis mortality induced by IL-18. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 2627-2635 (2016).
  44. Brown, K. S., et al. Tumor necrosis factor induces developmental stage-dependent structural changes in the immature small intestine. Mediators of Inflammation. 2014, 852378(2014).
  45. McElroy, S. J., et al. The ErbB4 ligand neuregulin-4 protects against experimental necrotizing enterocolitis. American Journal of Pathology. 184 (10), 2768-2778 (2014).
  46. McElroy, S. J., et al. Tumor necrosis factor receptor 1-dependent depletion of mucus in immature small intestine: a potential role in neonatal necrotizing enterocolitis. American Journal of Physiology - Gastrointestinal and Liver Physiology. 301 (4), 656(2011).
  47. Stanford, A. H., et al. A direct comparison of mouse and human intestinal development using epithelial gene expression patterns. Pediatric Research. , (2019).
  48. McElroy, S. J., Weitkamp, J. H. Innate Immunity in the Small Intestine of the Preterm Infant. NeoReviews. 12 (9), 517-526 (2011).
  49. McElroy, S. J., Underwood, M. A., Sherman, M. P. Paneth cells and necrotizing enterocolitis: a novel hypothesis for disease pathogenesis. Neonatology. 103 (1), 10-20 (2013).
  50. Park, B. S., Lee, J. O. Recognition of lipopolysaccharide pattern by TLR4 complexes. Experimental & Molecular Medicine. 45, 66(2013).
  51. Lester, S. N., Li, K. Toll-like receptors in antiviral innate immunity. Journal of Molecular Biology. 426 (6), 1246-1264 (2014).
  52. Pott, J., et al. Age-dependent TLR3 expression of the intestinal epithelium contributes to rotavirus susceptibility. PLOS Pathogens. 8 (5), 1002670(2012).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Ekspozycja p odu na stan zapalny u matkimodel chorioamnionitisprotok wstrzykiwania LPSocena uszkodze jelitilo ciowe oznaczanie kom rek kubkowychanaliza kom rek Panethapomiar cytokin w surowicybadania nad martwiczym zapaleniem jelitutrata ci y u myszymodel przedwczesnego porodu
Mysi model narażenia płodu na stan zapalny matki w celu zbadania wpływu ostrego zapalenia błony płodowej na rozwój jelit noworodka
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.