Artykuł metodologiczny

Wykorzystanie zamkniętych labiryntów Y do oceny zachowań chemosensorycznych u

7.5K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/61858

⸱

7 kwietnia 2021

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biology, James Madison University, 2U.S. Geological Survey, Fort Collins Science Center, 3U.S. Department of Agriculture, National Wildlife Research Center, 4U.S. Geological Survey, Fort Collins Science Center

* These authors contributed equally

W tym artykule

Informacja o sprostowaniu

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Podsumowanie

Y-labirynty umożliwiają badaczom określenie znaczenia konkretnych bodźców, które kierują zachowaniem zwierząt, zwłaszcza izolowanych sygnałów chemicznych z różnych źródeł. Staranne projektowanie i planowanie może przynieść solidne dane (np. dyskryminacja, stopień eksploracji, liczne zachowania). Ta eksperymentalna aparatura może dostarczyć potężnego wglądu w kwestie behawioralne i ekologiczne.

Streszczenie

wykorzystują różne sygnały środowiskowe do informowania i kierowania zachowaniem zwierząt, takie jak chemiczne ślady zapachowe wytwarzane przez żywność lub przedstawicieli tego samego gatunku. Odszyfrowanie śladów zapachowych kręgowców, zwłaszcza gatunków inwazyjnych, umożliwia odkrycie sygnałów, które indukują zachowania eksploracyjne i może pomóc w rozwoju cennych podstawowych i stosowanych narzędzi biologicznych. Jednak wskazanie zachowań napędzanych głównie przez sygnały chemiczne w porównaniu z innymi konkurencyjnymi wskazówkami środowiskowymi może być trudne. Labirynty Y są powszechnymi narzędziami stosowanymi w badaniach nad zachowaniem zwierząt, które umożliwiają ilościowe określenie zachowań chemosensorycznych kręgowców w różnych taksonach. Poprzez redukcję bodźców zewnętrznych, labirynty Y usuwają czynniki zakłócające i stawiają zwierzęta ogniskowe przed binarnym wyborem. W naszych badaniach Y-labirynt zwierzę węchowe jest ograniczone do jednego ramienia labiryntu, aby pozostawić ślad zapachowy i jest usuwane po spełnieniu parametrów układania zapachu. Następnie, w zależności od rodzaju próby, albo zwierzę ogniskowe jest wpuszczane do labiryntu, albo tworzony jest konkurencyjny ślad zapachowy. Rezultatem jest zapis wyboru i zachowania zwierzęcia ogniskowego, przy jednoczesnym rozróżnianiu prezentowanych sygnałów chemicznych. Tutaj opisano dwa aparaty labiryntu Y dostosowane do różnych inwazyjnych gatunków: argentyńskie czarno-białe jaszczurki tegu (Salvator merianae) i pytony birmańskie (Python bivittatus), opisując działanie i czyszczenie tych labiryntów Y. Ponadto podsumowano różnorodność uzyskanych danych, eksperymentalne wady i rozwiązania oraz sugerowane ramy analizy danych.

Wprowadzenie

Y-labirynty są powszechnymi, prostymi narzędziami w badaniach nad zachowaniem zwierząt, które pozwalają na odpowiedzi na różnorodne pytania. Oprócz tego, że są szeroko stosowane w badaniach laboratoryjnych, labirynty Y są również funkcjonalnie kompatybilne z różnymi środowiskami terenowymi do badania dzikich zwierząt w stosunkowo odległych warunkach. Naukowcy zbadali zachowania dzikich kręgowców za pomocą labiryntów Y w wielu różnych taksonach w podobnie zróżnicowanych zastosowaniach terenowych (np. minogi1; ryby pielęgnicowate2; poison frogs3; lacertid lizards4; węże do pończoch5).

Wielu badaczy skupia się na tym, jak i w jakim stopniu sygnały chemiczne wpływają na zachowania zwierząt w ekologii reprodukcyjnej, przestrzennej i żerowania6. W labiryntach Y i w drobnych skalach można testować różne bodźce chemiczne, takie jak dwie ślady chemiczne, które tylko nieznacznie różnią się stężeniem7, lub zdolnością wykrywania na podstawie statusu reprodukcyjnego gatunku docelowego8. Ślady chemiczne – główny bodziec używany w testach labiryntu Y – mogą być naturalnie tworzone przez przedstawicieli tego samego gatunku lub specjalnie umieszczane w środowisku przez badacza przy użyciu zdefiniowanego źródła chemicznego1,5. Bodźce mogą być również testowane w unikalnych kombinacjach w celu określenia multimodalnego wpływu wskazówek, takich jak zmieniające się konteksty prezentacji wskazówek (smugi w powietrzu a podłoże9; wskazówki wizualne i chemiczne10). Chociaż istnieje wiele innych metod oceny reakcji chemosensorycznych u (patrz sekcja dyskusji), labirynty Y pozwalają na ocenę zachowań związanych z wyszukiwaniem w wielu skalach czasowych i przestrzennych, co może prowadzić do wyższych poziomów wnioskowania behawioralnego.

zostały szeroko przetestowane pod kątem ich zależności od sygnałów chemicznych w ekologii reprodukcyjnej i żerowania, a badacze często wykorzystują labirynty Y w tych badaniach11,12. Ekologia chemiczna jest nadal rozszyfrowywana przez badania wykorzystujące labirynty Y do rozwiązywania różnych pytań ewolucyjnych i behawioralnych, które są cenne dla zarządców dzikiej przyrody. Na przykład niedawne testy z inwazyjnymi gatunkami węży i jaszczurek wykazały, że same sygnały chemiczne mogą wpływać na wybór i alokację czasu w nowym środowisku labiryntu Y13,14,15.

Użycie dużych labiryntów Y dla zwierząt o średniej wielkości ogniskowej (np. o dużych ciałach) jest generalnie ograniczone do warunków laboratoryjnych, gdzie zwierzęta ogniskowe mogą być łatwo trzymane przez długi czas, czynniki eksperymentalne (np. klimat, światło, bodźce zewnętrzne) mogą być kontrolowane, a dostęp do infrastruktury (np. prąd, bieżąca woda) jest nieograniczony. Badania na dzikich zwierzętach są jednak często ograniczone do konkretnych lokalizacji z różnych powodów (np. logistyka, pozwolenia). W rezultacie pojawiają się wyzwania, którym należy stawić czoła poprzez kreatywne rozwiązywanie problemów i dostosowania metodologiczne, aby utrzymać spójne i porównywalne wyniki.

Tutaj opisano dwie eksperymentalne konfiguracje wykorzystujące labirynty Y i narzędzia do zdalnego monitorowania do oceny chemicznej ekologii reprodukcyjnej inwazyjnych łuskowatych (tj. węży i jaszczurek) w różnych scenariuszach terenowych: dziko łapane, trzymane w niewoli argentyńskie czarno-białe jaszczurki tegu (Salvator merianae) w Gainesville, FL, oraz dziko łapane pytony birmańskie (Python bivittatus) w Parku Narodowym Everglades na Florydzie. Jak sugeruje jego nazwa, aparat labiryntu Y tworzy środowisko eksperymentalne, w którym zwierzę wchodzi do głównego przejścia (podstawy Y; "podstawy"), które następnie prowadzi do dwóch rozbieżnych przejść (ramiona Y; "ramiona"). W tych eksperymentach do pojedynczej próby wykorzystano dwa rodzaje zwierząt: zwierzęta niosące zapach (dostarczają bodziec zapachowy w ograniczonym obszarze labiryntu) i zwierzęta ogniskowe (dane są zbierane na temat tego zwierzęcia podczas eksploracji śladu zapachowego).

Jako eksperymentalny aparat w badaniach chemoekologicznych, każdy labirynt Y musi być skonstruowany w taki sposób, aby umożliwić łatwe usunięcie zwierzęcia w środku i może być rozebrany w celu dokładnego oczyszczenia i zresetowania. Omówiono również ograniczenia nieodłącznie związane z tymi różnymi środowiskami testowymi (np. zwierzęta prowadzące dzienny i nocny tryb życia, różnice w infrastrukturze), które skłoniły do dostosowań metodologicznych. Chociaż skupiono się na jaszczurkach tegu i pytonach birmańskich, projekty te można zastosować do szerokiej gamy gatunków. W tych badaniach nad inwazyjnymi, labirynty Y korzystnie wpływają na tempo i skalę wnioskowania, ponieważ umożliwiają szybkie gromadzenie danych w celu informowania o celach zarządzania, które zmieniają się wraz z zagrożeniem inwazją stwarzanym przez dany gatunek. W szczególności badanie chemoekologii gatunków inwazyjnych ma kluczowe znaczenie dla opracowania skutecznych narzędzi kontroli chemicznej.

Dyskryminacja to kluczowa obserwacja z testów empirycznych z użyciem labiryntów Y, gdzie zwierzę centralne wybiera między dwoma bodźcami i ten proces decyzyjny jest oceniany. Szereg zachowań może być również oceniany w próbach labiryntu Y podczas samego badania (na żywo) lub po badaniu (wideo), aby rozszerzyć moc wnioskowania. Złożoność celów a priori danego badania decyduje o tym, czy do projektu najlepiej pasuje obserwacja na żywo, czy nagrania archiwalne. W tym miejscu szczegółowo opisano metody Y-labiryntu w celu rozwiązania problemów chemoekologicznych, które będą stanowić podstawę przyszłych badań prowadzonych przez naukowców zainteresowanych podobnymi pytaniami dotyczącymi zachowania, zwłaszcza w ekologii chemicznej.

Protokół

Wszystkie procedury obejmujące wykorzystanie żywych kręgowców zostały zatwierdzone przez Institutional Animal Care and Use Committees Departamentu Rolnictwa USA (U.S. Department of Agriculture) oraz Geologicznej Służby Stanów Zjednoczonych (U.S. Geological Survey).

UWAGA: Ponieważ badania te koncentrują się na inwazyjnych kręgowcach, należy również spełnić normy dotyczące zabezpieczeń, które nakładają określone ograniczenia na projektowanie i przeprowadzanie eksperymentów. Chociaż wiele metod jest podobnych dla obu lokalizacji badań oraz dla pór prowadzenia badań (dziennych i nocnych), w każdej z dwóch poniższych sekcji opisano odrębne metody.

1. Konfiguracja labiryntu w kształcie litery Y i protokół dobowy dla stacji terenowej we Florydzie Narodowego Centrum Badań nad Dziką Przyrodą w ramach Służby Inspekcji Zdrowia Zwierząt i Roślin (APHIS) Departamentu Rolnictwa USA (USDA): testy na miejscu u schwytanych w naturze, utrzymywanych w niewoli tegus

UWAGA: Plany wszystkich elementów labiryntu w kształcie litery Y oraz konstrukcji zabezpieczającej znajdują się w Pliku uzupełniającym 1.

  1. Wymiary i konstrukcja labiryntu w kształcie litery Y
    1. Do zakotwiczenia labiryntu należy użyć podstawy (panele elewacyjne z włóknocementu 1,22 m x 2,44 m). W górnej warstwie należy wywiercić otwory, aby umożliwić przejście śrub zamkowych w górę w celu przymocowania elementów labiryntu. Szczegółowe instrukcje znajdują się w Pliku uzupełniającym 1.
    2. Ścianki labiryntu należy wykonać z białej deski wykończeniowej PVC; wewnętrzne wymiary podstawy to 120 cm dł. (ścianki boczne) x 42 cm szer. x 14 cm wys.
      UWAGA: Szerokość przejścia została zaprojektowana tak, aby pomieścić 2x szerokość zwierzęcia badanego. Dodatkowa szerokość pozwala na elastyczność w tworzeniu dwóch ścieżek zapachowych pozostawionych przez zwierzęta.
    3. Należy upewnić się, że wewnętrzne wymiary ramion wynoszą 120 cm dł. (ścianki boczne) x 40 cm szer. x 14 cm wys.
    4. Labirynt należy złożyć z oddzielnych komponentów dolnych, bocznych i górnych, mocując je razem przed przeprowadzeniem próby. Górę należy wykonać z przezroczystego akrylu, aby umożliwić wizualizację zwierząt wewnątrz labiryntu. Szczegółowe instrukcje znajdują się w Pliku uzupełniającym 1.
      1. W przypadku tworzenia pojedynczej ścieżki zapachowej należy użyć wewnętrznej przegrody w podstawie, aby ograniczyć dostęp do przestrzeni dla tegu pozostawiającego zapach. Szczegółowe instrukcje znajdują się w Pliku uzupełniającym 1.
      2. W przypadku pozostawienia dwóch ścieżek zapachowych przez różne zwierzęta w sekwencji, należy użyć systemu przegród, aby blokować naprzemienne ramiona labiryntu i odseparować każde zwierzę od naprzemiennych połowy podstawy. Szczegółowe instrukcje znajdują się w Pliku uzupełniającym 1.
    5. Należy użyć pojemników, aby umożliwić transport i zbieranie zwierząt wykorzystywanych w próbach z labiryntem Y. Należy upewnić się, że wszystkie pojemniki są nieprzezroczyste i wyposażone w zdejmowane pokrywy oraz łatwo zabezpieczane drzwi akrylowe.
      1. Należy upewnić się, że pojemnik podstawowy (109 cm dł. x 56 cm szer. x 46 cm wys.) znajduje się przy otworze podstawy labiryntu Y. Należy go używać do przenoszenia zwierząt zapachowych lub badanych do labiryntu oraz do aklimatyzacji przed otwarciem drzwi i umożliwieniem zwierzętom dobrowolnego wejścia do labiryntu.
      2. Należy upewnić się, że pojemniki ramion (83 cm dł. x 50 cm szer. x 44 cm wys.) znajdują się na końcach ramion labiryntu Y, aby ułatwić odłowienie zwierząt zapachowych lub badanych.
      3. Szczegółowe instrukcje dotyczące konstrukcji i montażu znajdują się w Pliku uzupełniającym 1.
  2. Konfiguracja kamery do dziennej akwizycji wideo
    1. Specyfikacja kamery: Należy upewnić się, że kamery projektowe mogą nagrywać ciągły obraz w zmiennych warunkach oświetleniowych i nadają się do użytku na zewnątrz w panujących warunkach temperatury i wilgotności.
      1. Przy zamontowaniu kamery do dolnej części obudowy badawczej należy upewnić się, że cały labirynt Y mieści się w polu widzenia kamery. Aby zwiększyć lub zmniejszyć pole widzenia, należy wyregulować obiektyw lub wysokość kamery. Po ustawieniu pola widzenia należy upewnić się, że możliwe jest zarejestrowanie wystarczających szczegółów behawioralnych, takich jak ruchy języka.
        ​UWAGA: Jeśli wysokość obudowy badawczej jest stała (np. 180 cm wys.), co ogranicza regulację pola widzenia, można użyć wielu kamer, aby uzyskać pełny zasięg wnętrza labiryntu Y. W przypadku zastosowań zewnętrznych należy upewnić się, że kamery mają włączoną funkcję „wide dynamic range” (szeroki zakres dynamiczny).
    2. Specyfikacja zasilania: Należy upewnić się, że każda kamera posiada odpowiednie zasilanie, aby nagrywać ciągły obraz przez cały czas trwania planowanej próby (np. użyć zasilacza UPS z wbudowaną baterią zapasową w celu zapewnienia ciągłości zasilania).
      ​UWAGA: Jeśli nie ma dostępu do zasilania sieciowego AC, kamery POE (power over ethernet) mogą być zasilane za pomocą kabli sieciowych podłączonych do cyfrowego rejestratora wideo (DVR) lub przełącznika POE w przypadku użycia sieciowego rejestratora wideo (NVR).
    3. Specyfikacja nagrywania: Przy wyborze DVR lub NVR należy upewnić się, że spełnia on wymagania projektu, w tym posiada wystarczającą pojemność pamięci i odpowiednią liczbę złączy POE (DVR) lub kanałów kamer (NVR), aby pomieścić liczbę użytych kamer. Należy dobrać parametry nagrywania do pożądanej jakości wideo, biorąc pod uwagę rozmiar plików danych (np. stopień kompresji H264 i częstotliwość obrazu 10 klatek na sekundę [FPS]).
    4. Protokół pozyskiwania i przetwarzania wideo:
      1. Nagrywanie wideo należy rozpocząć od momentu, gdy zwierzę zaczyna wchodzić do labiryntu, do momentu odłowienia lub upływu zaprogramowanego czasu (1.3.3.4).
      2. Używając oprogramowania, które można zainstalować na jednym lub większej liczbie komputerów i które umożliwia oglądanie wideo na żywo lub nagranego, należy wyeksportować pliki w wybranym formacie wideo.
      3. Należy pamiętać o eksporcie tego samego okna czasowego i czasu trwania wideo dla każdej użytej kamery, aby umożliwić jednoczesną analizę wielu strumieni.
      4. Dane należy eksportować regularnie, ponieważ wiele systemów nadpisuje starsze dane nowymi, jeśli pojemność pamięci DVR/NVR jest ograniczona.
  3. Protokół dla zwierząt pozostawiających zapach
    1. Ocena stronniczości (bias)
      1. Przed przeprowadzeniem prób eksperymentalnych należy ocenić stronniczość labiryntu Y, składając go w opisany poniżej sposób, ale bez nanoszenia zapachu na papier. Należy aklimatyzować zwierzę badane i rozpocząć próbę.
        ​UWAGA: W zależności od projektu badania (np. pomiary powtarzane u tych samych zwierząt badanych w porównaniu do testowania nowych zwierząt przy każdej próbie), próby stronniczości mają ustalić, że sam labirynt, ze względu na swoją konstrukcję, nie wpływa na wybór zwierzęcia badanego. Na stronniczość wpływa wiele czynników, takich jak wysokość, światło słoneczne i znaczniki wizualne.
      2. Jeśli zmiana orientacji lub dostosowanie innych fizycznych aspektów labiryntu nie eliminuje stronniczości stronnej, należy randomizować ramię wyznaczone do przyjęcia zapachu eksperymentalnego w danej próbie.
        UWAGA: Przy określonej liczbie prób, w labiryncie bez stronniczości prawdopodobieństwo wyboru każdego z ramion wynosi 0,5, co weryfikuje się za pomocą testu dwumianowego (Rysunek 2).
    2. Przygotowanie próby i montaż labiryntu Y
      1. Podczas kontaktu z wszelkimi powierzchniami, które zwierzę może badać, należy przez cały czas nosić rękawiczki nitrylowe, aby uniknąć zanieczyszczenia zapachowego. Rękawiczki należy zmieniać pomiędzy próbami oraz podczas przygotowania próby, jeśli tworzone są wiele ścieżek zapachowych.
      2. Na czystej powierzchni należy przygotować nowy, czysty papier zapachowy (biały papier masarski, szerokość minimum 61 cm). Należy go dociąć do odpowiedniej długości tak, aby papier dla każdej sekcji mógł nachodzić na siebie w miejscu rozwidlenia litery Y i wystawać poza końce podstawy i ramion, aby zmieścić się pod pojemnikami.
      3. Dno labiryntu należy zamieść, a następnie przykryć papierem bezpośrednio lub warstwą oddzielającą między papierem a dnem (np. folią plastikową), aby ułatwić sprzątanie w przypadku defekacji lub wydzielania muskusu przez zwierzę w labiryncie.
      4. Papier należy przymocować, przebijając go śrubami zamkowymi w dnie, przesuwając się od jednego końca do drugiego, aby powierzchnia pozostała gładka. Papiery w miejscu rozwidlenia powinny na siebie nachodzić tak, aby papier z podstawy znajdował się na górze.
      5. Ścianki boczne labiryntu należy ustawić w pozycji nad śrubami zamkowymi, ale nie mocować ich jeszcze do dna.
      6. Należy włożyć i zabezpieczyć przegrodę lub przegrody wymagane dla testowanego typu próby (por. próby z jednym zapachem 1.3.3 i próby z dwoma zapachami 1.3.4).
      7. Akrylowe elementy górne należy wsunąć w szczeliny i zabezpieczyć gwoździami z płaskim łbem.
      8. Ścianki boczne należy przymocować do dna, dokręcając nakrętki motylkowe do śrub zamkowych.
      9. Należy ustawić czyste pojemniki ramion i zabezpieczyć je śrubami motylkowymi. Pokrywę pojemnika należy zabezpieczyć opaskami zaciskowymi. Należy upewnić się, że drzwi zostały zdjęte.
    3. Próby z pojedynczym zapachem
      ​UWAGA: Celem tych prób jest przedstawienie w labiryncie Y pojedynczej ścieżki zapachowej prowadzącej z podstawy przez jedno ramię.
      1. Przed montażem akrylowej góry należy zamocować przegrodę, aby zablokować ramię niepoddane zabiegowi. Ramię zapachowe należy wybrać losowo (np. rzut monetą, generator liczb losowych).
      2. Zwierzę pozostawiające zapach należy umieścić w czystym, suchym pojemniku podstawowym. Należy zabezpieczyć pokrywę pojemnika podstawowego (np. opaskami zaciskowymi, śrubami) oraz drzwi (np. śrubą motylkową). Pojemnik należy przetransportować do obudowy badawczej i przymocować go do końca podstawy labiryntu Y śrubami motylkowymi.
        UWAGA: Przed włożeniem zwierzęcia należy upewnić się, że drzwi pojemnika podstawowego są na miejscu.
      3. Zwierzę należy aklimatyzować w pojemniku przez określony, stały czas (np. 60 min). Następnie należy zdjąć drzwi pojemnika podstawowego i pozwolić zwierzęciu swobodnie wejść do labiryntu.
      4. Aktywność zwierzęcia należy monitorować zdalnie za pomocą przekazu wideo (patrz poniżej). Gdy zwierzę przemieści się z pojemnika podstawowego do pojemnika ramienia, należy je usunąć z labiryntu, ponieważ proces nanoszenia zapachu został zakończony.
        1. Jeśli zwierzę znajduje się w którymkolwiek pojemniku, należy włożyć i zabezpieczyć zdejmowane drzwi, wyjąć pojemnik i zwrócić zwierzę do jego obudowy.
        2. Jeśli zwierzę wróciło do labiryntu, należy poczekać w pobliżu, aż zwierzę wróci do pojemnika, a następnie wyjąć pojemnik.
          UWAGA: Gady z rzędu łuskonośnych defekują w reakcji obronnej i tworzą sygnały alarmowe, które zanieczyszczają testowany zapach, dlatego należy unikać płoszenia zwierzęcia.
        3. Jeśli zwierzę nie wraca do pojemnika, należy powoli podejść do labiryntu i użyć sygnałów wizualnych (np. powolne machanie ręką), aby zachęcić zwierzę do wejścia do pojemnika, a następnie wyjąć pojemnik.
      5. Pojemnik podstawowy należy wyczyścić i osuszyć (1.5.5).
      6. W przypadku wystąpienia defekacji należy zebrać i wchłonąć jak najwięcej materiału ręcznikiem papierowym, ale nie wycierać powierzchni, aby zapobiec rozprzestrzenianiu się zanieczyszczeń.
      7. Należy częściowo rozłożyć labirynt, aby umożliwić usunięcie wewnętrznej przegrody, a następnie złożyć go ponownie. Przegrodę należy wyczyścić (1.5.5).
      8. Należy przejść do sekcji 1.4 w celu zapoznania się z protokołem dla zwierząt badanych.
    4. Próby z podwójnym zapachem
      ​UWAGA: Celem tych prób jest jednoczesne przedstawienie w labiryncie Y dwóch różnych ścieżek zapachowych, z których obie prowadzą z podstawy przez ich odpowiednie, losowo wybrane ramię.
      1. Przed montażem akrylowej góry należy zamocować przegrody, aby zablokować ramię niewybrane dla pierwszego zapachu oraz połowę podstawy przeciwną do zablokowanego ramienia.
      2. Należy postępować zgodnie z procedurami opisanymi powyżej dla próby z pojedynczym zapachem (1.3.3 do 1.3.3.8) z jednym wyjątkiem. Po zdjęciu akrylowych drzwi (1.3.3.3) należy wsunąć drzwi o połowę mniejszej wielkości w otwór po stronie, która ma pozostać zablokowana, aby upewnić się, że zwierzę zapachowe może poruszać się tylko w otwartej sekcji labiryntu.
      3. Należy częściowo rozłożyć labirynt, usunąć przegrody i wyczyścić je (1.5.5). Osuszyć czystymi ręcznikami.
      4. Należy ponownie zainstalować przegrody, ale odwrócić je tak, aby zablokowały obszar labiryntu, który został już zapachowany. Następnie należy ponownie zainstalować akrylową górę.
      5. Krok 1.3.4.2 należy powtórzyć dla drugiego zwierzęcia pozostawiającego zapach.
      6. Należy częściowo rozłożyć labirynt i usunąć przegrody. Następnie złożyć labirynt ponownie.
      7. Należy przejść do sekcji 1.4 w celu zapoznania się z protokołem dla zwierząt badanych.
  4. Protokół dla zwierząt badanych w godzinach dziennych
    1. Należy wykonać kroki od 1.3.3.2 do 1.3.3.3 z zaplanowanym na daną próbę zwierzęciem badanym.
    2. Aktywność zwierzęcia należy monitorować zdalnie za pomocą wideo. W przypadku obserwacji w określonym oknie czasowym eksploracji, stoper należy uruchomić w momencie, gdy zwierzę całkowicie wyjdzie z pojemnika podstawowego.
    3. Po zakończeniu próby należy usunąć zwierzę (1.3.3.4).
  5. Demontaż i czyszczenie
    1. Pozostałe pojemniki należy odłączyć od labiryntu i rozłożyć wszystkie pojemniki. Przez cały czas demontażu i czyszczenia należy nosić świeże rękawiczki nitrylowe.
    2. Akrylowe elementy górne należy zdjąć i odłożyć w bezpieczne miejsce do czyszczenia, aby uniknąć porysowania lub pęknięcia. Należy uważać, aby nie porysować elementów podczas zdejmowania (należy zachować czyste pole widzenia dla monitorowania behawioralnego wideo). Należy zdemontować ścianki boczne labiryntu i odłożyć je do czyszczenia.
      UWAGA: Aby zminimalizować zarysowania i degradację materiałów labiryntu Y pod wpływem UV, należy go zawsze trzymać w cieniu.
    3. Papier (i plastik) należy usunąć jednym, spójnym ruchem, zwijając go, aby uniknąć zanieczyszczenia dna, a następnie wyrzucić.
    4. Do czyszczenia wszystkich powierzchni elementów labiryntu Y oraz wszystkich pojemników należy użyć bezzapachowego mydła klasy laboratoryjnej i miękkiej szczotki do szorowania lub ściereczek z mikrofibry. Akrylowe elementy górne i zdejmowane drzwi należy myć tym samym mydłem, ale za pomocą miękkiej gąbki lub ściereczek z mikrofibry, aby zapobiec porysowaniu.
      UWAGA: Znane sygnały chemiczne u gadów łuskonośnych to związki rozpuszczalne w tłuszczach, a mycie detergentem jest standardowym protokołem usuwania śladów lipidowych i innych zapachów z aparatury polimerowej w badaniach nad kręgowcami lądowymi11,12,21.
      UWAGA: W zastosowaniach terenowych mogą być wymagane protokoły sanitarne. W takim przypadku wszystkie wewnętrzne powierzchnie labiryntu (podłogę, ściany, przegrody, elementy akrylowe, pojemniki) należy spryskać odpowiednim roztworem dezynfekującym, pozostawić na 10 min, a następnie przetrzeć ściereczką z mikrofibry.
    5. Wymyte komponenty należy opłukać wodą, przecierając powierzchnie czystymi, mokrymi ręcznikami z mikrofibry; nie wolno dopuścić do wyschnięcia resztek mydła przed płukaniem; nie należy wlewać wody do wnętrza labiryntu.
    6. Elementy należy pozostawić do wyschnięcia na powietrzu lub osuszyć świeżymi ściereczkami z mikrofibry.
    7. Po wyschnięciu można ponownie złożyć elementy labiryntu, jeśli natychmiast planowana jest kolejna próba.

2. Konfiguracja labiryntu w kształcie litery Y i protokół czasów zmierzchowych dla prób U.S. Geological Survey (USGS) we współpracy z National Park Service: zdalne testowanie odłowionych z natury pytonów birmańskich

UWAGA: Plany wszystkich komponentów labiryntu w kształcie litery Y oraz struktury ograniczającej znajdują się w Pliku uzupełniającym 2.

  1. Komponenty labiryntu w kształcie Y i uzasadnienie zmian w konstrukcji USDA
    UWAGA: Opisany labirynt w kształcie Y został istotnie zmodyfikowany, aby rozszerzyć zakres potencjalnych gatunków badawczych oraz umożliwić badania w warunkach izolowanych. Zwiększono głębokość pionową, aby dostosować go do różnych gatunków, oraz zastosowano inne materiały i metody konstrukcyjne w celu poprawy trwałości w warunkach zewnętrznych i łatwości czyszczenia. Wizualizację gotowego labiryntu przedstawiono na Rysunku 1. Szczegółowe instrukcje dotyczące konstrukcji i montażu znajdują się w Pliku uzupełniającym 2.
    1. Wytnij komponenty labiryntu w kształcie Y z białego polipropylenu i zespawaj termicznie wszystkie elementy, które mają być na stałe zamocowane (np. dno i ściany boczne labiryntu).
      1. Zamocuj dno labiryntu w kształcie Y (244 cm L x 122 cm W) wykonane z płyt sklejki skręconych wkrętami do tarasów, łącząc je za pomocą aluminiowego kątownika nitowanego wzdłuż dolnej krawędzi zewnętrznych ścian bocznych labiryntu.
      2. Upewnij się, że podstawa labiryntu w kształcie Y ma wymiary 120 cm L x 42 cm W x 23 cm H, a każda zewnętrzna ściana boczna ramienia ma długość 120 cm L, a wewnętrzna ściana boczna ramienia długość 108 cm L (szczegółowe instrukcje znajdują się w Pliku uzupełniającym 2).
      3. Wsuń akrylową górną pokrywę na miejsce, używając aluminiowego kątownika przymocowanego do ścian bocznych wkrętami co 30 cm (szczegółowe instrukcje znajdują się w Pliku uzupełniającym 2).
        UWAGA: Wkręty rozmieszczone w regularnych odstępach na górnej krawędzi ścian bocznych labiryntu w kształcie Y służą również jako statyczne markery wizualne podczas analizy nagrań wideo z prób i stanowią skalę.
      4. Upewnij się, że każdy otwór labiryntu w kształcie Y (podstawa, ramiona) posiada dodatkową płytkę podstawy (42 cm W x 30 cm H) na końcu ściany bocznej, która łączy się ze skrzynką w taki sposób, że płytka podstawy tworzy ramę centralnego otworu (34 cm W x 16 cm H; szczegółowe instrukcje znajdują się w Pliku uzupełniającym 2).
      5. Użyj elementu przegrody, aby ograniczyć dostęp zwierzęcia zostawiającego zapach (szczegółowe instrukcje znajdują się w Pliku uzupełniającym 2). Przymocuj płytę blokującą (46 cm W x 22 cm H) za pomocą taśmy mocującej. Przymocuj przegrodę i płytę, używając improwizowanych, łatwych do czyszczenia obciążników (np. plastikowy kanister wypełniony wodą; 2.3.6; Rysunek 1).
      6. Upewnij się, że elementy akrylowe tworzą górną część labiryntu (grubość 0,6 cm, przezroczyste). Szczegółowe instrukcje znajdują się w Pliku uzupełniającym 2.
    2. Użyj nieprzezroczystych skrzynek wyposażonych w przesuwne drzwi i pokrywy, które można łatwo zabezpieczyć, aby umożliwić transport i zbieranie zwierząt w próbach z labiryntem w kształcie Y (Rysunek 1).
      1. ​Zmodyfikuj skrzynki (21,6 cm L x 27,9 cm W), wykonując otwory odpływowe w dnie, przymocuj pokrywy za pomocą małych śrub i nakrętek oraz zapewnij pojedynczy otwór wejściowy/wyjściowy (drzwi). Szczegółowe instrukcje znajdują się w Pliku uzupełniającym 2.
      2. Przymocuj skrzynkę do końca labiryntu w kształcie Y, łącząc przednią płytę skrzynki z przednią płytą labiryntu za pomocą śrub i nakrętek motylkowych lub zamków.
        UWAGA: Gdy są na miejscu, skrzynki stabilizują również akrylowe elementy górne.
  2. Konfiguracja kamery do akwizycji wideo w godzinach zmierzchu: Zobacz Rysunek 1 w celu zapoznania się z migawką pola widzenia kamery.
    1. Specyfikacja kamery: Upewnij się, że kamera projektowa może rejestrować ciągły obraz wideo w zmiennych warunkach oświetlenia i temperatury, aby dostosować się do badanych gatunków zmierzchowych i nocnych.
      1. Przy zamontowaniu kamery projektowej na belkach stropowych obudowy, upewnij się, że cały labirynt w kształcie Y mieści się w polu widzenia kamery. Podnieś lub obniż wysokość namiotu, aby zwiększyć lub zmniejszyć pole widzenia (kamera projektowa zamontowana na wysokości ~3 m). Upewnij się, że odbicie światła podczerwonego emitowanego przez kamerę na akrylowej górze nie przysłania krytycznych części klatek w nagraniach nocnych.
    2. Specyfikacja zasilania: Upewnij się, że każda kamera projektowa posiada odpowiednie zasilanie do ciągłego nagrywania wideo podczas filmowania nocnego (około 20 h).
      UWAGA: Jeśli zasilanie AC jest niedostępne, można zastosować szczelne akumulatory kwasowo-ołowiowe głębokiego rozładowania 12 V (np. dwa akumulatory żelowe 12 V 20 Ah połączone równolegle).
    3. Specyfikacja nagrywania: Aby zminimalizować objętość przechowywania plików, nagrywaj wideo w najniższej jakości, która jest wciąż wystarczająca do zliczenia ruchów językiem w labiryncie w kształcie Y.
      ​UWAGA: Nagrania w wysokiej rozdzielczości wymagają dużej przestrzeni dyskowej, a obniżenie rozdzielczości jest bardzo skutecznym sposobem na zapewnienie zarządzalnych rozmiarów plików.
      1. Ogranicz częstotliwość klatek (klatki na sekundę, FPS) nagrania do minimum wymaganego do wykrycia ruchów językiem (np. rozdzielczość nagrywania 800 x 450 przy maksymalnej częstotliwości 25 FPS skutkuje ok. 120 GB materiału na próbę).
    4. Protokół pozyskiwania i przetwarzania wideo
      1. Uruchom kamerę na początku każdego zdarzenia zapachowego (2.3.10) i pozwól jej nagrywać w sposób ciągły aż do końca zdarzenia ogniskowego (około 20 h).
      2. Po zakończeniu każdej próby wyłącz kamerę i wyjmij kartę SD (2.4.4). Przenieś nagrania do wybranej lokalizacji przechowywania.
      3. Ponieważ karty SD często wymuszają zapis nagrań w 5-minutowych klipach, połącz te klipy za pomocą oprogramowania do obróbki wideo w celu ułatwienia analizy.
      4. Przejrzyj nagrania za pomocą programu do przeglądania plików multimedialnych, który umożliwia zmienną prędkość odtwarzania i konfigurowalne interwały przeskakiwania do przodu.
        UWAGA: Skraca to czas przeglądania z około 20 h do maksymalnie 1 h, jeśli podczas przetwarzania wideo nie jest wymagana rozdzielczość o wysokiej precyzji.
  3. Protokół dla zwierząt zostawiających zapach
    UWAGA: Kroki w tej sekcji zajmą około 1,5 dnia ze względu na dłuższy czas aklimatyzacji dzikich gadów.
    1. Zapoznaj się z wstępem dotyczącym błędów systematycznych w sekcji 1.3.1, aby upewnić się, że w labiryncie nie występuje żadna stronniczość.
    2. Przez cały czas podczas kontaktu z powierzchniami lub badanymi zwierzętami noś rękawiczki nitrylowe, aby uniknąć zanieczyszczenia zapachowego.
    3. Umieść zwierzę zostawiające zapach lub zwierzę ogniskowe w jego skrzynce co najmniej 24 h przed próbą w celu aklimatyzacji.
      UWAGA: Aby zminimalizować efekty stresu, skrzynkę pozostawia się w zacienionym obszarze jak najbliżej labiryntu, w miejscu, gdzie nie będzie zakłócana przez sprzątanie lub inne czynności. Upewnij się, że wszystkie testowane zwierzęta (zostawiające zapach, ogniskowe) są aklimatyzowane w ten sposób.
    4. Przygotuj nowy, czysty papier do zapachu na czystej powierzchni, o długości wystarczającej, aby nachodził na siebie w miejscu rozwidlenia Y i pokrywał całą powierzchnię dna (2 papiery do ramion = 121,9 cm; 1 papier do podstawy = 152,4 cm).
    5. Zabezpiecz końce papierów w pobliżu skrzynek i rozwidlenia Y taśmą malarską.
    6. Zainstaluj przegrody, aby zablokować połowę ramienia podstawy (lewa lub prawa strona) długą przegrodą, a wejście do przeciwległego ramienia krótką przegrodą. Podczas instalacji barier nie rozrywaj papieru zapachowego. W przypadku dużych zwierząt zostawiających zapach, przymocuj za barierą ciężki przedmiot, który można łatwo zdjąć i wyczyścić, jako wspornik zapobiegający awarii bariery (2.1.1.5).
      UWAGA: Ścieżka zapachowa musi zawsze zaczynać się po jednej stronie podstawy, a następnie przechodzić do przeciwległego ramienia, tak aby wybór zwierzęcia ogniskowego był jednoznaczny.
    7. Wsuń akrylową górę na miejsce, sekcja po sekcji, i upewnij się, że kątowniki stykają się całkowicie. Użyj przezroczystej taśmy plastikowej do zakrycia wszelkich szczelin.
    8. Przymocuj obie skrzynki ramion do labiryntu, łącząc płyty przednie za pomocą nakrętek motylkowych i/lub kłódek, i upewnij się, że drzwi są zablokowane w pozycji otwartej.
    9. Dwie godziny przed zachodem słońca przymocuj skrzynkę podstawy (zawierającą zwierzę zostawiające zapach), dbając o to, aby wszystkie ruchy były powolne i spokojne, aby zminimalizować stres zwierzęcia.
    10. Uruchom kamerę i otwórz drzwi do skrzynki podstawy, pamiętając o zablokowaniu drzwi za pomocą obu rygli beczkowych. Pozostań poza polem widzenia zwierzęcia i opuść obszar.
    11. Po 3 h (1 h po zachodzie słońca) odnotuj lokalizację zwierzęcia w labiryncie oraz warunki otoczenia. Jeśli zwierzę jest w ruchu, poczekaj, aż wejdzie do skrzynki.
      1. Jeśli zwierzę znajduje się w jakiejkolwiek skrzynce, zamknij i zabezpiecz drzwi skrzynki, wyjmij skrzynkę, a następnie wyjmij zwierzę, dbając o to, aby zapobiec obronnemu wydzielaniu zapachu w skrzynce.
      2. Jeśli zwierzę pozostaje nieruchomo wewnątrz korpusu labiryntu, użyj sygnałów wizualnych (np. długiego pręta lub machania ręką), aby pobudzić je do wejścia do skrzynki. Jeśli zwierzę nie zareaguje, zdejmij skrzynkę(i) ramion, aby można było zdjąć akrylową górę, a następnie zebrać zwierzę ręcznie i przenieść je do torby.
        UWAGA: Podczas obchodzenia się z dużymi zwierzętami zawsze należy nosić odpowiednie środki ochrony osobistej (PPE) (np. rękawice odporne na przebicia, ochronę oczu).
    12. Częściowo rozmontuj labirynt, aby umożliwić usunięcie wewnętrznych przegród (unikając naruszenia papieru zapachowego), a następnie złóż go ponownie. Jeśli nastąpiła defekacja, zbierz i wchłoń jak najwięcej za pomocą czystych ściereczek z mikrofibry, ale nie myj tego obszaru.
    13. Przejdź do sekcji 2.4 w celu zapoznania się z protokołem dla zwierząt ogniskowych.
  4. Protokół dla zmierzchowych zwierząt ogniskowych
    UWAGA: Kroki w tej sekcji zajmą około 2 dni i muszą rozpocząć się mniej więcej w tym samym czasie, co start sekcji 2.3.
    1. Aklimatyzuj zaplanowane zwierzę ogniskowe w skrzynce przez co najmniej 24 h przed wprowadzeniem do labiryntu.
      1. W ostatnich godzinach aklimatyzacji zwierzęcia ogniskowego, przeprowadź próbę ze zwierzęciem zostawiającym zapach przed przejściem do następnego kroku (2.3.9).
        UWAGA: Zaplanuj krok zostawiania zapachu tak blisko czasu wprowadzenia zwierzęcia ogniskowego do labiryntu, jak to możliwe, aby ograniczyć degradację zapachu.
    2. Przymocuj skrzynkę podstawy (zawierającą zwierzę ogniskowe) za pomocą nakrętek motylkowych i/lub kłódek do podstawy labiryntu w kształcie Y. Używaj powolnych, spokojnych ruchów podczas trzymania/transportu skrzynki, aby zminimalizować stres zwierzęcia ogniskowego.
      1. Upewnij się, że drzwi obu skrzynek ramion są zablokowane w pozycji otwartej. Rozpocznij próbę ogniskową, otwierając i blokując drzwi skrzynki podstawy za pomocą rygli beczkowych. Pozostań poza polem widzenia zwierzęcia i opuść obszar.
        UWAGA: W przypadku prób z dzikimi nocnymi gadami, zwierzęta ogniskowe otrzymują całą noc na eksplorację labiryntu.
    3. Cztery godziny po wschodzie słońca wróć do labiryntu i postępuj zgodnie z sekcją 2.3.11.1, aby usunąć zwierzę ogniskowe.
    4. Wyjmij kartę SD z kamery i w razie potrzeby naładuj akumulatory. Wyrzuć zużyty papier z labiryntu i przejdź do czyszczenia (sekcja 1.5).

Schemat i zdjęcie układu labiryntu w kształcie litery Y do badania zachowania zwierząt, z wykorzystaniem sklejki i wyjmowanych ścianek działowych.
Rycina 1. Układ labiryntu Y opracowanego przez USGS. Po lewej stronie schemat przedstawia elementy labiryntu Y z paskiem skali dla zachowania perspektywy. Po prawej stronie klatka z kamery wideo obrazuje pole widzenia dla rejestracji behawioralnej. Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.

Wyniki

W próbach w labiryncie w kształcie litery Y można zarejestrować i/lub ocenić wiele zmiennych. Projekt badania powinien być przede wszystkim podyktowany pożądanymi wynikami lub efektami. Ponadto, jeśli badanie opiera się na pomiarach powtarzanych (np. wielokrotnym wykorzystaniu tych samych zwierząt badanych), wymagane są odpowiednie struktury testowe i analityczne. Przykładowo, ponieważ próby USDA opierały się na wielokrotnym testowaniu tych samych osobników tegus, planowanie prób eksperymentalnych było w pełni zrandomizowane.

Dane dotyczące wyboru: Większość badań z wykorzystaniem labiryntów w kształcie litery Y raportuje proste binarne dane dotyczące wyboru i analizuje wyniki za pomocą statystyk parametrycznych, takich jak test dwumianowy. Głównym ograniczeniem jest tutaj wielkość próby, która bezpośrednio wpływa na moc każdej analizy statystycznej. Na Rysunku 2 przedstawiono szereg progów statystycznych dla danej wielkości próby badania, które pokazują, ile „sukcesów” musiałoby wystąpić, aby dany test dwumianowy dał statystycznie istotne wyniki. Są one wyprowadzone matematycznie, a zatem można je uogólnić na każdy test w labiryncie w kształcie litery Y. Statystyki dwumianowe są łatwe do wygenerowania przy użyciu darmowego oprogramowania online. Do obliczania prawdopodobieństwa stosuje się rozkłady jednostronne, jeśli podano uzasadnienie a priori; w przeciwnym razie należy stosować rozkład dwustronny.

Wybór ramienia jest często określany przez dystans, jaki zwierzę ogniskowe pokonuje w danym ramieniu. Najprostszym sposobem na ustalenie tego progu jest wyznaczenie punktu orientacyjnego wewnątrz labiryntu. W większości badań z wykorzystaniem labiryntu w kształcie litery Y punktem orientacyjnym jest wejście do skrzynki ramienia. Ponieważ gady przeprowadzają całą ocenę chemosensoryczną za pomocą organów czucia chemicznego znajdujących się w przedniej części głowy, głowa stanowi punkt odniesienia podczas próby. Na przykład, ponieważ pytony birmańskie są często dłuższe niż cały labirynt, wybór jest najlepiej i najefektywniej określany przez ruch głowy poza punkt orientacyjny. Innymi opcjami określania wyboru są czas spędzony w ramieniu oraz całkowite przemieszczenie się zwierzęcia ogniskowego do skrzynki. Niepowodzenie stwierdza się w przypadku, gdy zwierzę ogniskowe nie dokona wyboru w określonym czasie.

Na podstawie danych dotyczących wyboru w labiryncie Y można przeprowadzić analizy o większej rozdzielczości. Na przykład badacze mogą wyznaczyć wskaźnik kary za wybór (choice penalty score)16. W tym przypadku badacze muszą monitorować stopień, w jakim badane zwierzę eksplorowało ramię labiryntu niebędące celem. Ramieniem niebędącym celem może być ramię, co do którego badacze określą a priori, że badane zwierzę go nie wybierze na podstawie testowanej hipotezy alternatywnej. Najprostszym przykładem ramienia niebędącego celem jest ramię bezzapachowe, gdy tylko jedno ramię zawiera zapach docelowy. Bardziej złożone przykłady to wybór między dwoma zapachami z tego samego źródła, ale prezentowanymi w różnych stężeniach7. Gdy projekt eksperymentalny jest wielopoziomowy i/lub dane zmieniają się z binarnych na przyrostowe, tak jak w przypadku kary za wybór, należy zastosować odpowiednie podejście statystyczne, takie jak analiza wariancji z powtarzanymi pomiarami (ANOVA) lub inne metody stosowane w przypadku zbiorów danych ciągłych lub proporcjonalnych.

Zachowania: W trakcie trwania eksperymentu, w którym obserwowane są zwierzęta ogniskowe, można ilościowo określić szereg indywidualnych zachowań. Liczbę tych zmiennych można ustalić albo a priori, w zależności od posiadanej wiedzy16, albo post hoc, na podstawie wstępnych obserwacji podzbioru danych14,15. Cele badania oraz wymagany stopień rozdzielczości determinują, jakie oceny behawioralne powinny zostać przeprowadzone w labiryncie, o ile w ogóle są one konieczne (np. w wielu badaniach kwantyfikuje się wyłącznie dane dotyczące wyboru17). Zachowania mogą być oceniane w całym labiryncie, w jego poszczególnych sekcjach lub w określonych przedziałach czasowych; na przykład priorytetowo można traktować zachowania obserwowane wyłącznie w podstawie lub w miejscu rozgałęzienia ramion8. Nagrania wideo ułatwiają ocenę behawioralną, choć przed rozpoczęciem eksperymentu należy rozważyć rozdzielczość oraz długość nagrań — czynniki te narzucają ograniczenia w zakresie przechowywania danych.

Zmienne czasowe: Podobnie jak w przypadku zmiennych behawioralnych, wiele aspektów czasowych wydajności zwierząt można określić ilościowo podczas prób w labiryncie w kształcie litery Y. Na przykład badacze mogą mierzyć okresy latencji (np. latencję wyjścia z pudełka8). Większość zmiennych czasowych wiąże się z eksploracją labiryntu, takich jak całkowity czas śledzenia lub czas spędzony w każdym ramieniu. Zmienne te są zazwyczaj analizowane w ramach analizy wieloczynnikowej, takiej jak wielodrożna ANOVA.

Błąd obserwatora: W przypadku wszelkich badań dotyczących zachowania zwierząt błąd obserwatora znacząco wpływa na gromadzenie danych18. Dlatego obserwatorzy powinni być zaślepieni na testowaną metodę traktowania. Najprostszym sposobem na osiągnięcie tego jest numeryczne zakodowanie plików wideo, a następnie ich losowe posortowanie (np. za pomocą generatora liczb losowych) przed przypisaniem ich do obserwatorów. Kontrola błędu obserwatora jest trudna lub wręcz niemożliwa, gdy jedyną opcją jest gromadzenie danych w czasie rzeczywistym. W warunkach terenowych wymagałoby to udziału dwóch współpracowników: obserwatora zaślepionego na metodę traktowania oraz koordynatora, który przygotowuje próbę. Obszerne przeglądy podsumowują wpływ błędu eksperymentatora na gromadzenie i interpretację danych w badaniach behawioralnych i ekologicznych18,19.

Wykres słupkowy przedstawiający częstotliwość wyboru celu w stosunku do braku celu, n=7 do n=15, porównanie danych.
Rycina 2. Wielkości prób i wartości P dla testów dwumianowych na podstawie wyników z labiryntu Y. Każda podana wielkość próby reprezentuje określoną liczbę prób, w których zapach jest testowany w jednym ramieniu labiryntu Y (ramię docelowe), podczas gdy drugie może być kontrolne (ramię niedocelowe). Górna liczba nad każdym słupkiem to jednostronna wartość P dla tej liczby wyborów ramienia docelowego, dolna to wartość dwustronna. Liczby w górnym słupku reprezentują maksymalną liczbę wyborów niedocelowych, które wciąż są tradycyjnie istotne statystycznie (P < 0.05). Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Plik uzupełniający 1. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.

Plik uzupełniający 2. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.

Dyskusja

Podczas gdy labirynty Y są bardzo potężnymi narzędziami do badania ekologii chemicznej, ich ograniczony projekt może wykluczać inne ścieżki badań. Dostępnych jest jednak wiele innych opcji 11,12,20,21,22. Na przykład testy z użyciem języka są prostsze do wykonania i umożliwiają jednoczesną ocenę zachowań wykazywanych w odpowiedzi na szereg bodźców chemicznych w stosunku do zapachów kontrolnych 23,24,25,26. Inną opcją są testy w otwartym terenie, w których zwierzę ogniskowe swobodnie eksploruje wybieg, dopóki nie napotka źródła sygnałów chemicznych, a następnie jego reakcje behawioralne są ocenianena poziomie 27,28. Kombinacje tych podejść mogą oceniać zdolności dyskryminacyjne w różnych kontekstach, takich jak prezentowanie mieszanki sztucznych i naturalnych zapachów wraz z refugiami29. Labirynty Y mogą być również modyfikowane w taki sposób, aby wystawiały zwierzęta na sygnały chemiczne unoszące się w powietrzu samodzielnie lub w połączeniu ze wskazówkami przenoszonymi przez podłoże16,30, a wnioskowanie post hoc może być wykorzystane do przeprojektowania zbierania danych, jeśli dostępne są zarchiwizowane dane wideo31. Testy biologiczne powinny być zaprojektowane tak, aby uprościć gromadzenie danych i zminimalizować sprzeczne bodźce, zwłaszcza gdy oceniane jest określone źródło sygnałów (np. sygnały chemiczne21).

Badacze zajmujący się zachowaniem zwierząt często obserwują i określają ilościowo ogniskowe reakcje zwierząt w nowych, sztucznych środowiskach (np. zamknięty labirynt z pozbawionym cech krajobrazem) i należy zadbać o to, aby ocenić, czy dane zwierzę wykazuje naturalne, eksploracyjne zachowanie, czy unikanie, pobudzenie lub podobne zachowania związane z dystresem. Niepokojące zachowanie zwierząt w aparaturach doświadczalnych przypisuje się przede wszystkim neofobii: strachowi przed nowością32. Przykładem jest zachowanie ucieczki, w którym zwierzę ogniskowe napiera na stawy lub krawędzie aparatu, aby osiągnąć wyjście. Innym przykładem jest nieśmiałość, w której zwierzę ogniskowe wykazuje niechęć do wejścia do labiryntu, którego stopień można określić ilościowo za pomocą opóźnienia wejścia do labiryntu. (Prze)projektowanie aparatury może ułatwić zaangażowanie zwierzęcia ogniskowego, aby uniknąć tych zakłócających skutków dystresu. Najczęstszym podejściem jest wielokrotne wprowadzanie zwierzęcia ogniskowego do aparatury w celu usunięcia nowości środowiska przed rozpoczęciem badań, a współczesne modele statystyczne (np. uogólnione liniowe modele mieszane) pozwalają na wykorzystanie zwierząt doświadczalnych w wielu próbach. Ważną kwestią związaną z rozważaniami ekologicznymi w testach behawioralnych jest to, że zmniejszona neofobia wiąże się z sukcesem gatunków inwazyjnych33. Tak więc, w zależności od wiedzy a priori o danym gatunku, neofobia może mieć zmienne znaczenie jako rozważania dotyczące projektu eksperymentalnego.

Pozyskiwanie danych behawioralnych z filmów nakłada wiele ograniczeń, które stają się głównymi wąskimi gardłami w eksperymentalnych osiach czasu. Na przykład długość danego badania może wykładniczo wydłużyć czas ekstrakcji danych. Jednym z obejść tego problemu jest analizowanie zachowania tylko do momentu osiągnięcia progu (np. całkowitego czasu aktywności). Próg może być oparty na najdłuższym filmie dostępnym dla danej próby. Alternatywnie można opracować obserwację maszynową (np. sztuczną inteligencję), chociaż jest to czasochłonne i zasobożerne, a kontrola jakości wymaga znacznego wysiłku. Kolejną kwestią jest zarządzanie danymi: filmy muszą być wystarczająco wysokiej jakości, aby umożliwić ocenę behawioralną, co skutkuje ograniczeniami w przechowywaniu danych. Chociaż pamięć masowa w chmurze jest teraz dostępna, stawki za wysyłanie/pobieranie są często problematyczne, zwłaszcza gdy pozyskiwanie danych odbywa się w odległych lokalizacjach terenowych. Dodatkowe wyzwania przejawiają się w ograniczeniach narzędzi do rejestrowania, które wpływają na integralność obserwacji behawioralnej. Wyraźne obserwowanie głównego zachowania zwierząt jest zawsze konieczne, ale widoczność jest często utrudniona przez niekontrolowane czynniki (np. wilgoć, owady, ruch wiatru). Ponadto, gdy nagrania pochodzą z jednej perspektywy (np. z lotu ptaka), zachowania zachodzące w płaszczyźnie pionowej (np. uniesienie głowy14) są trudne do oceny. Rozwiązaniem jest zapewnienie wielu kątów kamery na próbę. Wreszcie, pora dnia znacząco wpływa na rejestrację zachowań. Nocna analiza behawioralna wymaga kamery z trybem nocnym i minimalną projekcją światła, aby uniknąć przeszkadzającego oślepiania powierzchni labiryntu Y lub przyciągania owadów, które mogą zakłócać obraz z kamery. Biorąc pod uwagę powyższe, przewidywana wiedza na temat biologii badanego miejsca lub gatunku może informować o tym, jakie ograniczenia mogą występować z jaką częstotliwością, a tym samym informować o pożądanej wielkości próby.

Zachowanie jest ściśle powiązane z fizjologią, a użyteczność labiryntów Y do oceny endokrynologii behawioralnej u różnych gatunków została wykazana. Jednak w niniejszym artykule podkreślono pewne różnice w realizacji tych eksperymentów w zależności od gatunku docelowego, pytania badawczego i dostępnych zasobów. W związku z tym wybór materiałów i wymiarów każdego zestawu testowego powinien być dokładnie przemyślany pod kątem potencjalnego późniejszego rozszerzenia badań. Sekcja 2 opisuje modyfikacje dokonane w materiałach opisanych w sekcji 1, które zostały włączone w celu dostosowania do przyszłych, bardziej złożonych prób behawioralnych z tegusem. Zwiększona pionowa głębokość labiryntów w Everglades pozwoli na znalezienie odpowiedzi na nowe pytania dotyczące ekologii chemicznej w dziko żyjących tegus bez nadmiernego przedłużania projektowania i konfiguracji projektu, co jeszcze bardziej zademonstruje przekładalność tego eksperymentalnego aparatu.

W przypadku stosowania wyżej opisanych technik w stosunkowo odległym otoczeniu (patrz sekcja 2) należy wziąć pod uwagę kilka czynników ograniczających, a planowanie projektu ma zasadnicze znaczenie. W zależności od mocy statystycznej potrzebnej do przepisanego eksperymentu leczniczego i biologicznego czasu dla gatunku docelowego (np. sezonowość), wpłynie to na wymagane zasoby i pracę. Ponadto, jeśli pożądane jest jednorazowe lub wielokrotne użycie zwierząt ogniskowych, konieczne jest zwrócenie szczególnej uwagi na zmniejszenie potencjalnych czynników stresogennych. Każdy z tych czynników albo wydłuży czas realizacji projektu, albo będzie wymagał zwiększonej siły roboczej, przestrzeni i materiałów. Na przykład sekcja 2 przedstawia wykorzystanie dziko żyjących samców pytonów jako zwierząt ogniskowych podążających za inną grupą dziko schwytanych i zmanipulowanych hormonalnie samców, z których wszystkie wymagają około 24 godzin spokojnej aklimatyzacji w boksach, aby zminimalizować skutki stresu. Chociaż te okresy aklimatyzacji wydłużyły czas próby do ponad dwóch dni, stres związany z niewolą i obchodzeniem się z dzikimi zwierzętami wpływa na zachowanie dzikich zwierząt i musi być zminimalizowany, aby wygenerować czyste zestawy danych34,35.

Podsumowując, labirynty Y są potężnymi, elastycznymi narzędziami, które można wykorzystać do badania ekologii chemicznej różnorodnej dzikiej przyrody w bardzo zmiennych warunkach, pod warunkiem, że istnieje czujne planowanie a priori. Należy starannie rozważyć wybór odpowiednich pytań i właściwe zaprojektowanie układu doświadczalnego dla danych taksonów i warunków. Naukowcy i menedżerowie mogą odnieść znaczne korzyści z wykorzystania labiryntów Y do lepszego zrozumienia biologii chemosensorycznej zwierząt, ponieważ narzędzia te umożliwiają elastyczne projekty eksperymentalne, które dostarczają dużych ilości danych behawioralnych na dużą skalę, zwłaszcza w połączeniu z narzędziami do zdalnego monitorowania.

Podziękowania

Rozwój pierwszego labiryntu Y był wspierany przez umowy o współpracy (15-7412-1155-CA, 16-7412-1269-CA i 17-7412-1318-CA) pomiędzy Uniwersytetem Jamesa Madisona (JMU) a Służbą Inspekcji Zdrowia Zwierząt i Roślin USDA. Rozwój labiryntu Y-maze w Parku Narodowym Everglades został sfinansowany na mocy umowy o współpracy (P18AC00760) między ŻZW a Służbą Parków Narodowych. Dziękujemy T. Deanowi i B. Falkowi za ułatwienie realizacji tego projektu w Everglades NP oraz pomoc w uzyskaniu pozwoleń i finansowania. Dziękujemy firmie W. Kellom za pomoc w budowie labiryntu Y USGS. C. Romagosa, L. Bonewell i R. Reed zapewnili wsparcie administracyjne i logistyczne. Dziękujemy dwóm anonimowym recenzentom, którzy przekazali pomocne opinie. Finansowanie prac w Everglades i wsparcie rzeczowe zostały zapewnione przez U.S. Geological Survey (USGS), Greater Everglades Priority Ecosystem Science Program, National Park Service (P18PG00352) oraz USGS Invasive Species Program. Jakiekolwiek użycie nazw handlowych, firm lub produktów służy wyłącznie celom opisowym i nie oznacza poparcia ze strony rządu Stanów Zjednoczonych. Ustalenia i wnioski zawarte w tej publikacji nie zostały formalnie rozpowszechnione przez Departament Rolnictwa Stanów Zjednoczonych i nie powinny być interpretowane jako reprezentujące determinację lub politykę USDA.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Stalowa ocynkowana klamra narożna 1"Everbilt, The Home Depot13619Zobacz plik uzupełniający 1, krok 2.1 "Stalowa klamra narożna 90 stopni 2,5 cm"
121,92 cm szer. x 304,8 cm  dł. x 1,27 cm wys. biały polipropylen o rozszerzonym zasięgu Wysokotemperaturowy arkusz UHMWTIVARUHMNV SHPatrz "2.1. Elementy labiryntu Y i uzasadnienie zmian w projekcie USDA " (krok 2.1.1. "biały polpropylen")
182,88 cm dł. x 81,28 cm szer. x 0,64 cm Gruby przezroczysty arkusz akrylowyz pleksi32032550912090Patrz "2.1. Komponenty labiryntu Y i uzasadnienie zmian w projekcie USDA " (krok 2.1.1.6. "Elementy akrylowe")
2,54 cm szer. x 2,54 cm wys. x 243,84 cm dł. Aluminiowa stalownia kątowa z wykończeniem frezowanym11354Patrz "2.1. Komponenty labiryntu Y i uzasadnienie zmian w projekcie USDA " (krok 2.1.1.1. "aluminiowy kątownik")
4,5 kg szpula okrągłych polipropylenowych prętów spawalniczych 5 mmHotAirToolsAS-PP5N10Patrz "2.1. Komponenty labiryntu Y i uzasadnienie zmian w projekcie USDA " (krok 2.1.1. "zgrzew")
5 mm Zwykłe aluminiowe nityArrowRLA3/16IPPatrz "2.1. Komponenty labiryntu Y i uzasadnienie zmian w projekcie USDA " (krok 2.1.1.1. "nit")
Kątownik aluminiowy, 1,9 cmEverbilt, The Home Depot802527Zobacz plik uzupełniający 1, Krok 1.2 "kątownik aluminiowy (1,9 cm x 1,9 cm x 0,16 cm grubości)"
Kątownik aluminiowy, 2,5 cmEverbilt, The Home Depot800057Zobacz plik uzupełniający 1, Stopnie 1.2 i 2.2.2 "kątownik aluminiowy (2,5 cm x 2,5 cm x 0,16 cm grubości)"
Kątownik aluminiowy, 3,2 cmEverbilt, The Home Depot800037Zobacz plik uzupełniający 1, Krok 1.2 "kątownik aluminiowy (3,2 cm x 3,2 cm x 0,16 cm grubości)"
Aluminiowy płaskownik o grubości 1" x 1/8"Everbilt, The Home Depot801927Zobacz plik uzupełniający 1, Krok 3.2.1 "aluminiowy pasek"
Kamera Avigilon 2.0 MPAvigilon, firma Motorola Solutions2.0C-H4SL-BO1-IRZobacz "1.5 Konfiguracja kamery i akwizycja wideo" (krok 1.5.1 "Avigilon 2.0 MP")
Avigilon NVRAvigilon, firma Motorola SolutionsHD-NVR3-VAL-6TB-NAZobacz "1.5 Konfiguracja kamery i akwizycja wideo" (krok 1.5.3 "NVR")
Przezroczysty arkusz akrylowy (grubość 5,6 mm)United States Plastic Corp.44363Patrz plik uzupełniający 1, krok 1.3 "przezroczysty arkusz akrylowy" i krok 3.2.1 "przezroczyste drzwi akrylowe"
Dysza do spawania pachwinowego 3/16" x 15/32" / 4,5 x 12 mmTRIAC107.139Patrz "2.1. Komponenty labiryntu Y i uzasadnienie zmian w projekcie USDA " (krok 2.1.1. "zgrzew")
Wiszące pudełko na folder plikówSterilite18689004Patrz "2.1. Komponenty labiryntu Y i uzasadnienie zmian w projekcie USDA " (krok 2.1.2.1. "Pudełka")
HardiePanel HZ10James Hardie Building Products9000525Zobacz plik uzupełniający 1, krok 1.1 "bocznica z cementu włóknistego"
Pistolet do zgrzewaniaTRIAC141.227Patrz "2.1. Komponenty labiryntu Y i uzasadnienie zmian w projekcie USDA " (krok 2.1.1. "zgrzew")Rolka
papieru rzeźniczego Kraft, 24"Bryco Goods24 cale x 175 FTZobacz "1.2 Protokół uruchamiania tegus do układania zapachów" (krok 1.2.1.2 "papier rzeźniczy")
Rolka papieru rzeźniczego Kraft, szerokość 46 cmBryco GoodsBGKW2100Patrz "2.3. Protokół prowadzenia pytonów niosących zapachy" (krok 2.3.4. "bibuła zapachowa")
Skoncentrowany roztwór czyszczący Micro-90 International Products CorporationM-9050-12Zobacz "1.4 Awaria i czyszczenie" (krok 1.4.4 "mydło klasy laboratoryjnej")
MKV ToolNix - Narzędzia Matroska dla linux/Unix i WindowsMoritz Bunkusv.48.0.0Patrz "2.2. Konfiguracja kamery i akwizycja wideo" (krok 2.2.4.2. "oprogramowanie do przetwarzania filmów")
Kamera sieciowaAxis CommunicationsM3104-LVEPatrz "2.2. Konfiguracja kamery i akwizycja wideo" (krok 2.2.1. "Kamera projektowa")
Obraz obrazuPVC 1/4"Palram159841Patrz "2.1. Komponenty labiryntu Y i uzasadnienie zmian w projekcie USDA " (krok 2.1.2.3. "płyta czołowa")
Projekt PalightPVC 1/8"Palram156249Patrz "2.1. Komponenty labiryntu Y i uzasadnienie zmian w projekcie USDA " (krok 2.1.2.1. "drzwi")
Prywatna przednia szyba (zielona)MacGregorRozmiar pasującyZobacz plik uzupełniający 1, krok 4.2 "zielona ściereczka zacieniająca o dużej wytrzymałości
Rękawica ochronna, ramię z pełnym palcemLUBdłońHS1010-RGXLZobacz "2.3. Protokół do prowadzenia pytonów węchowych" (krok 2.3.11.2. UWAGA: "rękawica odporna na przebicie")
REScue Środek dezynfekującyVirox Animal Health44176Patrz "1.5. Podział i sprzątanie." (krok 1.5.4. UWAGA "rozwiązanie sanitarne")
Odwracalne wykończenie PVC, 1/2" x 24"UFP Industries, Produkty VerandaH120XWS17Zobacz plik uzupełniający 1, krok 2.1 "Przegroda z płyty PCV" i krok 3.2.1 "cieńsze listwy wykończeniowe z PVC"
S4S / Veranda HP TRIMUFP Industries, Produkty VerandaH190OWS4Zobacz plik uzupełniający 1, kroki 1.2, 2.2.2 i 2.2.3 "Płyta PCV"
S4S / Veranda HP TRIM (1" x 8" nominalnie)UFP Industries, Produkty Veranda827000005Patrz plik uzupełniający 1, kroki 3.2.1 "Listwa wykończeniowa PCV"
ScotchBlue 24 cale. Wstępnie nagrany malarz" s Plastikowy3MPTD2093EL-24-SZobacz "1.2 Protokół uruchamiania tegusa do układania zapachów" (krok 1.2.1.3 "folia z tworzywa sztucznego")
Pudełko na zakupy Sterilite 114 LSterilite Company1919, stalZobacz plik uzupełniający 1, krok 3.2 "pudełko na ramię"
Pudełko na ramię Sterilite 189 LSterilite Company1849, tytanZobacz plik uzupełniający 1, krok 3.2 "Pudełko podstawowe"
Super Max CanopyShelterLogic25773Zobacz plik uzupełniający 1, krok 4.3 "biały baldachim"
VLC Media Player VideoLANv.3.0.11Patrz "2.2. Konfiguracja kamery i akwizycja wideo" (krok 2.2.4.3. "program do przeglądania plików multimedialnych")
Namiot Białego Pawilonubaldachim z łóżkiem typu king-sizeBJ2PCPatrz plik uzupełniający 2 "3. Materiały obudowy i uwagi" (krok 3. "namiot pawilonowy")
",

Bibliografia

  1. Fine, J. M., Vrieze, L. A., Sorensen, P. W. Evidence that petromyzontid lampreys employ a common migratory pheromone that is partially comprised of bile acids. Journal of Chemical Ecology. 30 (11), 2091-2110 (2004).
  2. Hesse, S., Bakker, T. C., Baldauf, S. A., Thünken, T. Kin recognition by phenotype matching is family-rather than self-referential in juvenile cichlid fish. Animal Behaviour. 84 (2), 451-457 (2012).
  3. Forester, D. C., Wisnieski, A. The significance of airborne olfactory cues to the recognition of home area by the dart-poison frog pumilio. Journal of Herpetology. 25 (4), 502-504 (1991).
  4. Khannoon, E. R., El-Gendy, A., Hardege, J. D. Scent marking pheromones in lizards: cholesterol and long chain alcohols elicit avoidance and aggression in male Acanthodactylus boskianus (Squamata: Lacertidae). Chemoecology. 21 (3), 143-149 (2011).
  5. Parker, M. R., Mason, R. T. How to make a sexy snake: estrogen activation of female sex pheromone in male red-sided garter snakes. Journal of Experimental Biology. 215 (5), 723-730 (2012).
  6. Wyatt, T. D. Pheromones and animal behavior: chemical signals and signatures. , Cambridge University Press. (2014).
  7. Smith, T. L., Bevelander, G. S., Kardong, K. V. Influence of prey odor concentration on the poststrike trailing behavior of the Northern Pacific Rattlesnake. Herpetologica. 61 (2), 111-115 (2005).
  8. Yosuke, K., Akira, M. Active foraging for toxic prey during gestation in a snake with maternal provisioning of sequestered chemical defences. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 282, 20142137(2015).
  9. Parker, M. R., Kardong, K. V. The role of airborne and substrate cues from non-envenomated mice during rattlesnake (Crotalus oreganus) post-strike trailing. Herpetologica. 61 (4), 349-356 (2006).
  10. Bezzina, C. N., Amiel, J. J., Shine, R. Does invasion success reflect superior cognitive ability? A case study of two congeneric lizard species (Lampropholis, Scincidae). PLoS ONE. 9 (1), 86271(2014).
  11. Mason, R. T., Parker, M. R. Social behavior and pheromonal communication in reptiles. Journal of Comparative Physiology A. 196 (10), 729-749 (2010).
  12. Parker, M. R., Mason, R. T. Pheromones in snakes: history, patterns and future research directions. Reproductive Biology and Phylogeny of Snakes. Aldridge, R. D., Sever, D. M. , CRC Press. 563-584 (2011).
  13. Greene, M. J., Stark, S. L., Mason, R. T. Pheromone trailing behavior of the brown tree snake, irregularis. Journal of Chemical Ecology. 27 (11), 2193-2201 (2001).
  14. Richard, S. A., Tillman, E. A., Humphrey, J. S., Avery, M. L., Parker, M. R. Male Burmese pythons follow female scent trails and show sex-specific behaviors. Integrative Zoology. 14 (5), 460-469 (2019).
  15. Richard, S. A., et al. Conspecific chemical cues facilitate mate trailing by invasive Argentine black and white tegus. PLoS ONE. 15 (8), 0236660(2020).
  16. Parker, M. R., Kardong, K. V. Airborne chemical information and context-dependent post-strike foraging behavior in Pacific Rattlesnakes (Crotalus oreganus). Copeia. 105 (4), 649-656 (2017).
  17. Lutterschmidt, D. I., Maine, A. R. Sex or candy? Neuroendocrine regulation of the seasonal transition from courtship to feeding behavior in male red-sided garter snakes (Thamnophis sirtalis parietalis). Hormones and Behavior. 66 (1), 120-134 (2014).
  18. Burghardt, G. M., et al. Perspectives-minimizing observer bias in behavioral studies: a review and recommendations. Ethology. 118 (6), 511-517 (2012).
  19. Holman, L., Head, M. L., Lanfear, R., Jennions, M. D. Evidence of experimental bias in the life sciences: why we need blind data recording. PLoS Biology. 13 (7), 1002190(2015).
  20. Mason, R. T. Reptilian pheromones. Biology of the Reptilia: Hormones, brain, and behavior. Gans, C., Crews, D. 18, University of Chicago Press. 114(1992).
  21. Mason, R. T., Chivers, D. P., Mathis, A., Blaustein, A. R. Bioassay methods for amphibians and reptiles. Methods in Chemical Ecology. Haynes, K. F., Millar, J. G. 2, Springer Science & Business Media. 271-325 (1998).
  22. Martín, J., López, P. Pheromones and chemical communication in lizards. Reproductive biology and phylogeny of lizards and tuatara. Rheubert, J. L., Siegel, D. S., Trauth, S. E. , CRC Press. 43-77 (2014).
  23. Smith, K. P., Parker, M. R., Bien, W. F. Behavioral variation in prey odor responses in northern pine snake neonates and adults. Chemoecology. 25 (5), 233-242 (2015).
  24. Parker, M. R., Patel, S. M., Zachry, J. E., Kimball, B. A. Feminization of male Brown Treesnake methyl ketone expression via steroid hormone manipulation. Journal of Chemical Ecology. 44 (2), 189-197 (2018).
  25. Cooper, W. E. Evaluation of swab and related tests as a bioassay for assessing responses by squamate reptiles to chemical stimuli. Journal of Chemical Ecology. 24 (5), 841-866 (1998).
  26. Goetz, S. M., Godwin, J. C., Hoffman, M., Antonio, F., Steen, D. A. Eastern indigo snakes exhibit an innate response to pit viper scent and an ontogenetic shift in their response to mouse scent. Herpetologica. 74 (2), 152-158 (2018).
  27. Clark, R. W. Timber rattlesnakes (Crotalus horridus) use chemical cues to select ambush sites. Journal of Chemical Ecology. 30 (3), 607-617 (2004).
  28. Martín, J., López, P. Supplementation of male pheromone on rock substrates attracts female rock lizards to the territories of males: a field experiment. PLoS ONE. 7 (1), 30108(2012).
  29. Downes, S., Shine, R. Sedentary snakes and gullible geckos: predator-prey coevolution in nocturnal rock-dwelling reptiles. Animal Behaviour. 55 (5), 1373-1385 (1998).
  30. Parker, M. R., Kardong, K. V. Rattlesnakes can use airborne cues during post-strike prey relocation. Chemical Signals in Vertebrates 10. LeMaster, M. P., Mason, R. T., Muller-Schwarze, D. , Springer. 397-402 (2005).
  31. Parker, M. R., Young, B. A., Kardong, K. V. The forked tongue and edge detection in snakes (Crotalus oreganus): an experimental test. Journal of Comparative Psychology. 122 (1), 35-40 (2008).
  32. Greggor, A. L., Thornton, A., Clayton, N. S. Neophobia is not only avoidance: improving neophobia tests by combining cognition and ecology. Current Opinion in Behavioral Sciences. 6, 82-89 (2015).
  33. Candler, S., Bernal, X. E. Differences in neophobia between cane toads from introduced and native populations. Behavioral Ecology. 26 (1), 97-104 (2015).
  34. Currylow, A. F., Louis, E. E., Crocker, D. E. Stress response to handling is short lived but may reflect personalities in a wild, Critically Endangered tortoise species. Conservation Physiology. 5 (1), (2017).
  35. Currylow, A. F., et al. Comparative ecophysiology of a critically endangered (CR) ectotherm: Implications for conservation management. PLoS ONE. 12 (8), 0182004(2017).

Przedruki i uprawnienia

Sprostowanie


Formal Correction: Erratum: Using Enclosed Y-Mazes to Assess Chemosensory Behavior in Reptiles
Posted by JoVE Editors on 7/27/2021. Citeable Link.

An erratum was issued for: Using Enclosed Y-Mazes to Assess Chemosensory Behavior in Reptiles. An author name was updated.

The name of the tenth author was updated from:

Amy Y. Yackel Adams

to

Amy A. Yackel Adams

Tagi

Labirynt Yzachowanie gadówślad zapachowywybór binarnyanaliza behawioralnarejestracja wideoślepa próba obserwatoraaparat eksperymentalnyanaliza danych
Wykorzystanie zamkniętych labiryntów Y do oceny zachowań chemosensorycznych u
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.