Artykuł metodologiczny

Rusztowanie kompozytowe z kolagenem i chitozanem naładowane doksycykliną do przyspieszonego gojenia się ran cukrzycowych

4.3K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/62184

⸱

21 sierpnia 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmaceutics, JSS College of Pharmacy, JSS Academy of Higher Education & Research, 2Department of Pharmaceutical Sciences, School of Pharmacy, North Dakota state university, 3Department of Pharmacology, JSS College of Pharmacy, JSS Academy of Higher Education & Research

W tym artykule

Podsumowanie

Przygotowane rusztowanie DOX-CL spełniało warunki idealnego opatrunku DW pod względem wytrzymałości mechanicznej, porowatości, absorpcji wody, szybkości degradacji, przedłużonego uwalniania, właściwości przeciwbakteryjnych, biokompatybilności i przeciwzapalnych, które są uważane za niezbędne do odzyskania uszkodzonej tkanki w DW.

Streszczenie

Jednym z głównych powikłań cukrzycy są rany cukrzycowe (DW). Przedłużająca się faza stanu zapalnego w cukrzycy utrudnia dalsze etapy urazu, prowadząc do opóźnionego gojenia się ran. Wybraliśmy doksycyklinę (DOX) jako potencjalny lek z wyboru, ze względu na jej właściwości przeciwbakteryjne wraz z opisanymi właściwościami przeciwzapalnymi. Obecne badanie ma na celu sformułowanie nieusieciowanych rusztowań kolagenowo-chitozanowych (NCL) i usieciowanych (CL) obciążonych DOX oraz ocenę ich zdolności gojenia w stanach cukrzycowych. Wyniki charakterystyki rusztowań ujawniają, że rusztowanie DOX-CL ma idealną porowatość, niski współczynnik pęcznienia i degradacji oraz trwałe uwalnianie DOX w porównaniu z rusztowaniem DOX-NCL. Badania in vitro wykazały, że rusztowanie DOX-CL było biokompatybilne i przyspieszało wzrost komórek w porównaniu z grupami leczonymi rusztowaniem CL i grupą kontrolną. Badania przeciwbakteryjne wykazały, że rusztowanie DOX-CL było skuteczniejsze niż rusztowanie CL przeciwko najczęstszym bakteriom występującym w DW. Stosując streptozotocynę i model DW indukowany dietą wysokotłuszczową, zaobserwowano znacznie (p≤0,05) szybsze tempo skurczu rany w grupie leczonej rusztowaniem DOX-CL w porównaniu z grupami leczonymi rusztowaniem CL i kontrolnymi. Zastosowanie rusztowania DOX-CL może okazać się obiecującym podejściem do miejscowego leczenia DW.

Wprowadzenie

Cukrzyca (DM) to stan, w którym niezdolność organizmu do dostarczania insuliny lub reagowania na jej wyniki w postaci nieprawidłowego trawienia cukrów powoduje wzrost poziomu glukozy we krwi 1. Najbardziej kolejnym i najbardziej miażdżącym splątaniem cukrzycy jest rana cukrzycowa (DW). Około 25% pacjentów z cukrzycą ma możliwość zbudowania DW w ciągu swojego życia 1. Utrudnione gojenie DW przypisuje się triopatii DM: immunopatii, waskulopatii i neuropatii. Za każdym razem, gdy DW nie jest leczony, może to spowodować rozwój gangreny, co skłania do usunięcia danego narządu 2.

Wiele zabiegów, takich jak instruowanie pacjentów (codzienne badanie rany, oczyszczanie rany, unikanie działań powodujących nacisk na ranę, okresowe monitorowanie poziomu glukozy, itp.), kontrolowanie poziomu glukozy we krwi, oczyszczanie ran, odciążanie ciśnienia, procedury medyczne, tlenoterapia hiperbaryczna i zaawansowane terapie są w praktyce 3,4. Większość z tych leków nie spełnia wszystkich warunków wstępnych niezbędnych do leczenia DW w świetle wieloczynnikowych stanów patofizjologicznych i nieoczekiwanych wydatków związanych z tymi lekami 5. Mimo że patogeneza DW jest wieloczynnikowa, stwierdzono, że uporczywy stan zapalny z niewłaściwym zarządzaniem tkankami jest rzeczywistą przyczyną opóźnionego gojenia w DW 5,6.

Zwiększony poziom mediatorów stanu zapalnego i prozapalnego w DW powoduje zmniejszenie czynników wzrostu odpowiedzialnych za opóźnione gojenie się ran 2,6. Nieprawidłowe tworzenie macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM) w DW przypisuje się zwiększonym poziomom metaloproteinaz macierzy (MMP) odpowiedzialnych za szybką degradację powstałego ECM. W MMP MMP-9 jest opisywany jako główny pośrednik odpowiedzialny za przedłużający się stan zapalny i szybką degradację ECM 7. Stwierdza się, że miejscowe leczenie lekiem przeciwzapalnym, który zmniejsza podwyższony poziom MMP-9, przywraca homeostazę skóry, układ ramowy i skłania do lepszego gojenia DW 8,9.

Doksycyklina (DOX), inhibitor MMP-9, została wybrana do tłumienia podwyższonego poziomu MMP-9, głównego mediatora stanu zapalnego odpowiedzialnego za utrzymujący się stan zapalny w DWs 10,11,12. Ponadto DOX posiada przeciwutleniacze (wytwarzają wolne rodniki hydroksylowe i fenoksydowe zdolne do wiązania się z reaktywnymi formami tlenu) 13 i antyapoptotyczne (hamują ekspresję kaspazy i stabilizację mitochondriów) 14 działania, które są niezbędne do leczenia DW. Wybrano układ szkieletów zawierających DOX, kolagen (COL) i chitozan (CS). Wybór COL zależy od sposobu, w jaki pomaga on w zapewnieniu niezbędnej struktury odpowiedzialnej za wytrzymałość mechaniczną i regenerację tkanek 15. Z drugiej strony, CS jest strukturalnie homologiczny do glikozaminoglikanu, związany z kilkoma fazami gojenia się ran. Poinformowano również, że CS ma znaczące właściwości przeciwbakteryjne 15. W związku z tym rusztowanie COL/CS DOX zostało opracowane w celu stłumienia przedłużającego się stanu zapalnego, a następnie wspierania tworzenia macierzy w celu pomyślnego gojenia się ran w stanach DM.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie przeprowadzone procedury na zwierzętach zostały zatwierdzone przez instytucjonalną komisję etyki ds. zwierząt JSS College of Pharmacy w Ooty w Indiach.

1. Przygotowanie porowatych rusztowań obciążonych DOX metodą liofilizacji

  1. Dodać 1,2 g COL do 100 mL wody (np. Millipore) i odstawić do napęcznienia.
  2. Mieszać napęczniałą dyspersję COL przy 2000 rpm przez noc, aby zapewnić całkowite rozpuszczenie COL.
  3. Przygotować roztwór CS, rozpuszczając około 0,8 g CS w 100 mL 1% kwasu octowego.
  4. Mieszać roztwór CS przez noc przy 2000 rpm, aby zapewnić jednorodną dyspersję.
  5. Do roztworu COL dodać DOX (1% w/v), a następnie roztwór CS i mieszać przez 30 min.
  6. Przefiltrować otrzymaną mieszaninę fizyczną przez tkaninę muślinową w celu usunięcia cząstek stałych.
  7. Głęboko zamrozić otrzymany filtrat w temperaturze -85 °C ± 4 °C przez około 24 h.
  8. Liofilizować zamrożoną mieszaninę w temperaturze -85 °C ± 4 °C przez 72 h.
  9. Przechowywać otrzymane rusztowania w eksykatorze do dalszych analiz 16,17.

2. Sieciowanie rusztowania

  1. Rozpuścić MES (0,488 g) w 50 mL wody.
  2. Namoczyć 50 mg rusztowania obciążonego DOX w 20 mL buforu MES przez 30 min.
  3. W oddzielnym zlewce zmieszać 19,5 mL buforu MES z 0,1264 g EDC i 0,014 g NHS.
  4. Zanurzyć rusztowanie w mieszaninie buforu na 4 h w celu przeprowadzenia sieciowania 16.
  5. Przechowywać sieciowane (CL) oraz niesieciowane (NCL) rusztowania obciążone DOX do dalszej oceny.

3. Charakterystyka rusztowań

  1. Badanie morfologiczne z wykorzystaniem skaningowej mikroskopii elektronowej (SEM)
    1. Przygotować rusztowania do analizy morfologicznej za pomocą SEM (1 cm × 1 cm × 0,5 cm).
    2. Napylić cienką warstwę złota (~150 Å) na przekrój poprzeczny i powierzchnię zewnętrzną rusztowania.
    3. Wykonać zdjęcia przy napięciu przyspieszającym 5 kV i 10 kV.
    4. Umieścić próbki na aluminiowych stolikach i napylić złoto przy napięciu około 9 V.
    5. Zmierzyć rusztowanie za pomocą SEM z zwiększoną rozdzielczością przy 10 kV.
  2. Wyznaczanie porowatości
    1. Zmierzyć porowatość rusztowań metodą wypierania cieczy (etanol) 18.
    2. Obliczyć porowatość rusztowań, korzystając z poniższych wzorów.
      Wzór na obliczanie porowatości, równanie procentowej porowatości, metoda analizy podłoża, schemat.
      Ww = masa mokra rusztowania
      Wd = masa sucha rusztowania
      Wv = objętość rusztowania
  3. Wyznaczanie zdolności absorpcji wody
    1. Zmierzyć masę suchą rusztowania.
    2. Inkubować odważone rusztowanie w temperaturze 37 °C przez 24 h w soli fizjologicznej z fosforanem (PBS) o pH 7,4.
    3. Usunąć nadmiar PBS z powierzchni rusztowania za pomocą papieru filtracyjnego.
    4. Zmierzyć zdolność absorpcji wody, korzystając z poniższych wzorów 17.
      Wzór na stabilność masy WS%=(W1-W0)/W0, metoda analizy równania, zastosowanie edukacyjne.
      WS = procent absorpcji wody
      W1 = masa mokra rusztowania
      W0 = masa sucha rusztowania
  4. Degradacja rusztowania
    1. Inkubować rusztowanie (1 cm x 1 cm) w temperaturze 37 °C przez 7 dni w PBS o pH 7,4 zawierającym lizozymy.
    2. Przemyć rusztowanie, aby usunąć jony przylegające do powierzchni.
    3. Liofilizować przemyte rusztowanie 17.
    4. Obliczyć stopień degradacji za pomocą wzorów.
      Wzór na procent degradacji, równanie: (Ww-Wd)/Ww x 100, istotne dla analizy materiałowej.
      Ww = masa początkowa rusztowania
      Wd = masa rusztowania po liofilizacji
  5. Badania uwalniania in vitro
    1. Wyznaczyć charakterystykę uwalniania DOX z rusztowania metodą worka dializacyjnego.
    2. Zawiesić rusztowanie w kilku mililitrach symulowanego płynu z rany (pH 7,4) i przenieść do worka dializacyjnego.
    3. Szczelnie zamknąć końce worka membranowego i zanurzyć go w 500 mL roztworu symulowanego płynu z rany.
    4. Mieszać roztwór płynu z rany zawierający worek dializacyjny z prędkością 200-250 rpm.
    5. Pobrać nadsącz i zastąpić go równą ilością świeżego roztworu buforowego w określonych odstępach czasu.
    6. Wyznaczyć procent uwalniania DOX z rusztowań w nadsączu za pomocą spektrometru UV-Vis przy 240 nm.

4. Badania antybakteryjne in vitro

  1. Wyznaczyć minimalne stężenie hamujące (MIC) dla rusztowań CL i DOX-CL przeciwko S. aureus, S. epidermis, E. coli oraz P. aeruginosa przy użyciu metody mikrorozcieńczeń w pożywce płynnej.
  2. Przygotować kultury bakteryjne w bulionie Mueller-Hinton w stosunku 1:1000, aby uzyskać mętność odpowiadającą standardowi 0,5 McFarland.
  3. Do kultur bakteryjnych dodać D-glukozę (800 mg/dL) w celu wywołania hiperglikacji 19,20.
  4. Rozdrobić i rozpuścić CL oraz DOX-CL w DMSO (kontrola negatywna).
  5. Przygotować rozcieńczenia seryjne hiperglikowanej zawiesiny bakteryjnej (100 µL) oraz próbek testowych (100 µL roztworu rusztowań) na płytce 96-dołkowej.
  6. Inkubować płytkę w temperaturze 37 °C przez 20-24 h.
  7. Zmierzyć absorbancję przy długości fali 600 nm 21.

5. Badania biokompatybilności in vitro

  1. Ocenić biokompatybilność przygotowanych rusztowań za pomocą testu MTT [(3-(4, 5 dimetylotiazol-2-yl)-2, 5-difenylotetrazolium bromek)].
  2. Zsterylizować rusztowania o standardowych wymiarach i umieścić je w płytkach 24-dołkowych.
  3. Dodać komórki 3T3-L1 do płytki 24-dołkowej i inkubować przez 72 h.

6. Badania na zwierzętach in vivo

  1. Indukcja cukrzycy (DM) i wykonanie rany wycinanej
    1. W celu indukcji cukrzycy typu 2, szczury albinosy Wistar (180-200 g) należy karmić dietą wysokotłuszczową przez dwa tygodnie i podać jednorazowo streptozotocynę (STZ) (50 mg/kg masy ciała) w roztworze buforu cytrynianowego drogą doszpikową.
    2. Do badania należy wybrać zwierzęta z utrwalonym poziomem glukozy we krwi wynoszącym 250 mg/dL.
    3. Wybrane zwierzęta należy przydzielić losowo do grup w celu wykonania ran wycinanych.
    4. Szczury z cukrzycą należy znieczulić eterem dietylowym (do uprzednio nasyconej komory anestezjologicznej dodano 5 mL) i potwierdzić zniesienie odruchów metodą ucisku palca oraz oceną koloru błon śluzowych.
    5. Obszar grzbietu (odcinek piersiowy i lędźwiowy grzbietu) należy ogolić za pomocą aseptycznego trymera i żyletek (A40).
    6. Ogolony obszar należy wysterylizować gazikiem nasączonym alkoholem.
    7. Za pomocą aseptycznej żyletki chirurgicznej A40 należy wyciąć fragment skóry (2 x 2 cm2, głębokość 1 mm) w ogolonym obszarze, aby utworzyć otwartą ranę.
    8. Zwierzęta należy podzielić na trzy grupy (Grupa 1 – kontrola choroby (Control), Grupa 2 – rusztowanie CL (Placebo), Grupa 3 – rusztowanie DOX CL), po 6 szczurów w każdej grupie.
    9. Rusztowania CL oraz DOX CL należy przymocować za pomocą taśmy chirurgicznej, natomiast grupę kontrolną przykryć sterylną gazą na 21 dni.
    10. Obrys rany należy przenieść na sterylną folię OHP i zmierzyć procentową redukcję rany metodą siatki w dniach 0, 7, 14 i 21 dla wszystkich grup.
    11. Procentową redukcję rany należy obliczyć za pomocą poniższego wzoru.
      Równanie kurczenia się rany, wzór na % kurczenia, model matematyczny, obliczanie procesu gojenia.

7. Badania histopatologiczne

  1. Wyizolować obszar wygojonej rany w 7., 14. i 21. dniu, a następnie przechowywać w roztworze formaliny (10%).
  2. Wyciąć przekroje tkanek za pomocą mikrotomu, aby uzyskać grubość 6 µm.
  3. Zamontować przekroje na szkiełku przedmiotowym i zabarwić metodą hematoksylino-eozynową 17.
  4. Wykonać zdjęcia przy 40-krotnym powiększeniu przy użyciu mikroskopu cyfrowego.

8. Oznaczanie poziomu hydroksyproliny

  1. Wyizoluj obszar wygojonej rany w dniach 0, 7, 14 i 21 w celu przeprowadzenia oceny.
  2. Oszacuj zawartość hydroksyproliny, stosując procedurę opisaną przez Reddy G et al., 1996 22.

9. Test ELISA

  1. Oszacuj poziomy MMP-9 za pomocą zestawu Elisa zgodnie z instrukcjami producenta.
  2. Wyizoluj próbki tkanek z obszaru zagojonej rany w 21. dniu i rozdrobnij je za pomocą homogenizatora do tkanek.
  3. Odwiruj otrzymany homogenat i zbierz nadsącz.
  4. Rozcieńcz nadsącz 100-krotnie w buforze do analizy.
  5. Odczytaj płytkę za pomocą czytnika wielkostronicowego.

10. Analiza statystyczna

  1. Przedstaw otrzymane wyniki jako średnia ± SD.
  2. Przeprowadź analizę statystyczną przy użyciu programu Graph pad prism v5.01.
  3. Wyznacz istotność statystyczną, stosując jednoczynnikową analizę wariancji (ANOVA) oraz test post hoc Dunnetta.
  4. Wartości p≤0.05 uznaj za istotne statystycznie.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Charakterystyka rusztowań NCL i CL obciążonych DOX
W badaniu wizualnym stwierdzono, że rusztowania NCL i CL mają kremowy kolor. Ponadto oba rusztowania w badaniu fizycznym wykazują strukturę przypominającą gąbkę, są sztywne i nieelastyczne. Obrazy SEM rusztowań NCL i CL przedstawiono na Rysunku 1. Z rysunku jasno wynika, że po sieciowaniu, w wyniku tworzenia wiązań międzycząsteczkowych, nastąpił spadek wielkości porów. Porowatość rusztowań NCL i CL wyniosła odpowiednio 9...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Głównym celem tego badania było określenie wpływu rusztowania COL-CS obciążonego DOX na gojenie się dawki DW u szczurów. CL i NCL przygotowano i oceniono pod kątem morfologii, wskaźnika pęcznienia, kinetyki uwalniania in vitro i biokompatybilności.

Charakterystyka rusztowania NCL i CL obciążonego DOX
Stwierdzono, że przygotowane rusztowania są porowate z połączonymi ze sobą porami. Te połączone ze sobą pory zapewniają porowatą, gąbczastą naturę, która pomaga w prawidłowej...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Podziękowania

Autorzy dziękują Dr. Ashish D Wadhwani. (Adiunkt i kierownik, Wydział Biotechnologii Farmaceutycznej, JSS College of Pharmacy, Ooty, Indie) za pomoc w badaniach nad żywotnością komórek in vitro.

Autorzy chcieliby podziękować Departamentowi Nauki i Technologii - Funduszowi na rzecz Poprawy Infrastruktury Naukowej i Technologicznej na Uniwersytetach i Wyższych Instytucjach Edukacyjnych (DST-FIST), New Delhi, za wsparcie naszego wydziału.

Autorzy również dziękują Panu Sanju. S i pan Sriram. Studenci Narukulla M. Pharm za wsparcie w sesji zdjęciowej.

To badanie było wspierane przez JSS Academy of Higher Education & Research (JSSAHER).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Chlorowodorek 1-etylo-(3-3-dimetyloaminopropylo)karbodimidu (EDC)Merck Millipore, Bombaj, IndieE7750
Kwas 2-(N-morfolino)etanosulfonowy (MES)Merck Millipore, Bombaj, Indie137074
bromek 3-(4,5 dimetylotiolio-2 ylo)-2,5-difenylotetrazolium (MTT)Thermo Fisher, Bombaj, IndieM6494
PionowazamrażarkaLabline Instruments, Kochi, Indie
Worek dializacyjnyMerck Millipore, Bombaj, IndieD6191-Średnia płaska szerokość 25 mm (1,0 cala), MWCO 12,000 Da
DoxycyclineSigma chemicals Co. Ltd, Bombaj, IndieD9891
Zestaw ElisaR& D SystemsRMP900
Escherichia coli (E. coli)Krajowa kolekcja mikroorganizmów przemysłowych, Pune, IndieNCIM 2567
EtanolMerck Millipore, Bombaj, Indie100983
Liofilizator-SZ042Przyrządy laboratoryjne Sub-Zero, Chennai, Indie
Mieszadło mechaniczne-RQ-122/DPrzyrządy laboratoryjne Remi, Bombaj, Indie
ChitozanSisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Bombaj, Indie18824
Microtome-RM2135Leica, Wielka Brytania
Mysie embrionalne komórki fibroblastów (3T3-L1)National Centre for Cell Sciences, Pune, Indie
Czytnik wielu płytek -Inifinte M200 ProTecan Instruments, Szwajcaria
N-hydroksysukcynimid (NHS)Sigma chemicals Co. Ltd, Bombaj, Indie130672
Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndieNCIM 2036
Skaningowa mikroskopia elektronowa (SEM)-S-4800Hitachi, Indie
Granulki wodorotlenku sodu (NaOH)Qualigen fine chemicals, Bombaj, IndieQ27815
Staphylococcus aureus (S. aureus)Krajowa kolekcja mikroorganizmów przemysłowych, Pune, IndieNCIM 5022
Staphylococcus epidermis (S. epidermis)Krajowa kolekcja mikroorganizmów przemysłowych, Pune, IndieNCIM 5270
Streptozotocyna (STZ)Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Bombaj, Indie14653
Szczur typu 1 CollagenSigma chemicals Co. Ltd, Bombaj, IndieC7661
Ultraviolet– spektroskopia widzialna-1700Shimadzu

Bibliografia

  1. International Diabetes Federation. IDF Diabetes Atlas, 9th edn. , Brussels, Belgium. Available from: https://www.diabetesatlas.org (2019).
  2. Falanga, V. Wound healing and its impairment in the diabetic foot. The Lancet. 366 (9498), 1736-1743 (2005).
  3. Frykberg, R. G., Banks, J. Challenges in the treatment of chronic wounds. Advances in Wound Care. 4 (9), 560-582 (2015).
  4. Alexiadou, K., Doupis, J. Management of diabetic foot ulcers. Diabetes Therapy. 3 (1), 1-15 (2012).
  5. Karri, V. V. S. R., et al. Current and emerging therapies in the management of diabetic foot ulcers. Current Medical Research and Opinion. 32 (3), 519-542 (2016).
  6. Sanapalli, B. K., et al. Human beta defensins may be a multifactorial modulator in the management of diabetic wound. Wound Repair and Regeneration. 28 (3), 416-421 (2020).
  7. Caley, M. P., Martins, V. L., O'Toole, E. A. Metalloproteinases and wound healing. Advances in Wound Care. 4 (4), 225-234 (2015).
  8. Reiss, M. J., et al. Matrix metalloproteinase-9 delays wound healing in a murine wound model. Surgery. 147 (2), 295-302 (2010).
  9. Gill, S. E., Parks, W. C. Metalloproteinases and their inhibitors: regulators of wound healing. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 40 (6-7), 1334-1347 (2008).
  10. Stechmiller, J., Cowan, L., Schultz, G. The role of doxycycline as a matrix metalloproteinase inhibitor for the treatment of chronic wounds. Biological Research for Nursing. 11 (4), 336-344 (2010).
  11. Griffin, M. O., Fricovsky, E., Ceballos, G., Villarreal, F. Tetracyclines: a pleitropic family of compounds with promising therapeutic properties. Review of the literature. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (3), 539-548 (2010).
  12. Burns, F., Stack, M., Gray, R., Paterson, C. Inhibition of purified collagenase from alkali-burned rabbit corneas. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 30 (7), 1569-1575 (1989).
  13. Kraus, R. L., et al. Antioxidant properties of minocycline: neuroprotection in an oxidative stress assay and direct radical-scavenging activity. Journal of Neurochemistry. 94 (3), 819-827 (2005).
  14. Yrjänheikki, J., Keinänen, R., Pellikka, M., Hökfelt, T., Koistinaho, J. Tetracyclines inhibit microglial activation and are neuroprotective in global brain ischemia. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95 (26), 15769-15774 (1998).
  15. Moura, L. I., Dias, A. M., Carvalho, E., de Sousa, H. C. Recent advances on the development of wound dressings for diabetic foot ulcer treatment-a review. Acta Biomaterialia. 9 (7), 7093-7114 (2013).
  16. Natarajan, J., et al. Nanostructured Lipid Carriers of Pioglitazone Loaded Collagen/Chitosan Composite Scaffold for Diabetic Wound Healing. Advances in Wound Care. 8 (10), 499-513 (2019).
  17. Karri, V. V. S. R., et al. Curcumin loaded chitosan nanoparticles impregnated into collagen-alginate scaffolds for diabetic wound healing. International Journal Of Biological Macromolecules. 93, Part B 1519-1529 (2016).
  18. Hsieh, W. -C., Chang, C. -P., Lin, S. -M. Morphology and characterization of 3D micro-porous structured chitosan scaffolds for tissue engineering. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 57 (2), 250-255 (2007).
  19. Xie, Y., Chen, J., Xiao, A., Liu, L. Antibacterial activity of polyphenols: structure-activity relationship and influence of hyperglycemic condition. Molecules. 22 (1913), 1-11 (2017).
  20. Geerlings, S. E., Brouwer, E. C., Gaastra, W., Verhoef, J., Hoepelman, A. I. Effect of glucose and pH on uropathogenic and non-uropathogenic Escherichia coli: studies with urine from diabetic and non-diabetic individuals. Journal of Medical Microbiology. 48 (6), 535-539 (1999).
  21. Eloff, J. N. A sensitive and quick microplate method to determine the minimal inhibitory concentration of plant extracts for bacteria. Planta Medica. 64 (8), 711-713 (1998).
  22. Reddy, G. K., Enwemeka, C. S. A simplified method for the analysis of hydroxyproline in biological tissues. Clinical Biochemistry. 29 (3), 225-229 (1996).
  23. Charulatha, V., Rajaram, A. Influence of different crosslinking treatments on the physical properties of collagen membranes. Biomaterials. 24 (5), 759-767 (2003).
  24. Rehakova, M., Bakoš, D., Vizarova, K., Soldán, M., Jurícková, M. Properties of collagen and hyaluronic acid composite materials and their modification by chemical crosslinking. Journal of Biomedical Materials Research: An Official Journal of The Society for Biomaterials and The Japanese Society for Biomaterials. 30 (3), 369-372 (1996).
  25. Chang, M. -Y., et al. Doxycycline enhances survival and self-renewal of human pluripotent stem cells. Stem Cell Reports. 3 (2), 353-364 (2014).
  26. Dovi, J. V., He, L. K., DiPietro, L. A. Accelerated wound closure in neutrophil-depleted mice. Journal of Leukocyte Biology. 73 (4), 448-455 (2003).
  27. Lindeman, J. H., Abdul-Hussien, H., van Bockel, J. H., Wolterbeek, R., Kleemann, R. Clinical Perspective. Circulation. 119 (16), 2209-2216 (2009).
  28. Zhang, C., Gong, W., Liu, H., Guo, Z., Ge, S. Inhibition of matrix metalloproteinase-9 with low-dose doxycycline reduces acute lung injury induced by cardiopulmonary bypass. International Journal Of Clinical And Experimental Medicine. 7 (12), 4975-4982 (2014).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Gojenie ran cukrzycowychrusztowanie kolagenowo chitosanowedostarczanie doksycyklinysieciowane rusztowanieprzygotowanie rusztowaniaprzed u one uwalnianie lekuw a ciwo ci przeciwzapalneaktywno przeciwbakteryjnaobkurczanie rany

Powiązane artykuły