Celem tego manuskryptu jest przedstawienie metody opartej na ultrasonografii, która pozwala na obrazowanie in vivo przepływu krwi w tętnicach mózgowych u myszy. Pokazujemy jego zastosowanie do określania zmian prędkości przepływu krwi związanych ze skurczem naczyń krwionośnych w mysich modelach krwotoku podpajęczynówkowego (SAH).
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Analiza skurczu naczyń krwionośnych mózgu w mysim modelu krwotoku podpajęczynówkowego z przezczaszkowym ultrasonografem dupleksowym o wysokiej częstotliwości
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Skurcz naczyń mózgowych, który występuje w ciągu kilku tygodni po krwotoku podpajęczynówkowym, rodzaj udaru krwotocznego, przyczynia się do opóźnionego niedokrwienia mózgu. Problemem napotkanym w badaniach eksperymentalnych z wykorzystaniem mysich modeli SAH jest brak metod monitorowania in vivo skurczu naczyń mózgowych u myszy. Tutaj demonstrujemy zastosowanie ultradźwięków o wysokiej częstotliwości do wykonywania przezczaszkowych badań ultrasonograficznych Duplex na myszach. Za pomocą tej metody można było zidentyfikować tętnice szyjne wewnętrzne (ICA). Prędkości przepływu krwi w wewnątrzczaszkowych ICA uległy znacznemu przyspieszeniu po indukcji SAH, podczas gdy prędkości przepływu krwi w zewnątrzczaszkowych ICA pozostały niskie, co wskazuje na skurcz naczyń mózgowych. Podsumowując, zaprezentowana tutaj metoda pozwala na funkcjonalne, nieinwazyjne monitorowanie in vivo skurczu naczyń mózgowych w mysim modelu SAH.
Wprowadzenie
Spontaniczny krwotok podpajęczynówkowy (SAH) jest formą udaru krwotocznego spowodowaną głównie pęknięciem tętniaka wewnątrzczaszkowego1. Na wynik neurologiczny wpływają głównie dwa czynniki: wczesne uszkodzenie mózgu (EBI), które jest spowodowane skutkami krwawienia i związanym z nim przejściowym globalnym niedokrwieniem mózgu, oraz opóźnione niedokrwienie mózgu (DCI), które występuje w ciągu kilku tygodni po krwawieniu2,3. Doniesiono, że DCI dotyka do 30% pacjentów z SAH2. Patofizjologia DCI obejmuje angiograficzny skurcz naczyń mózgowych, zaburzone mikrokrążeni....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Doświadczenia na zwierzętach zostały zatwierdzone przez odpowiedzialny komitet ds. opieki nad zwierzętami (Landesuntersuchungsamt Rheinland-Pfalz) i przeprowadzone zgodnie z niemiecką ustawą o ochronie zwierząt (TierSchG). Przestrzegano wszystkich obowiązujących międzynarodowych, krajowych i instytucjonalnych wytycznych dotyczących opieki nad zwierzętami i ich wykorzystywania. W tym badaniu przeprowadziliśmy pomiary prędkości przepływu krwi w tętnicach wewnątrzczaszkowych i zewnątrzczaszkowych u samic myszy C57BL / 6N w wieku 11-12 tygodni o masie ciała w zakresie 19-21 g. Myszy poddano indukcji SAH lub pozorowanej operacji, która została szczegółowo opisana w innym m....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
U 6 myszy, z których u 3 indukowano krwotok podpadowy (SAH) z wykorzystaniem modelu endowaskularnej perforacji filamentem, a 3 pozostałe poddano operacji pozorowanej, określono prędkości przepływu krwi w dokraniowej tętnicy szyjnej wewnętrznej (ICA) oraz pozaczaszkowej tętnicy ICA jeden dzień przed operacją oraz 1, 3 i 7 dni po operacji. Pomiary wykonano w ramach badań echokardiograficznych w innym badaniu, pod narkozą izofluranem, utrzymując temperaturę ciała na poziomie 37 °C19.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Zgodnie z naszą najlepszą wiedzą, badanie to jest pierwszym, w którym przedstawiono protokół monitorowania skurczu naczyń mózgowych w mysim modelu SAH z przezczaszkowym ultrasonografem Duplex o wysokiej częstotliwości. Pokazujemy, że ta metoda może mierzyć wzrost prędkości przepływu krwi śródczaszkowej po indukcji SAH u myszy. W medycynie ludzkiej zjawisko to jest dobrze znane 3,15. Kilka badań klinicznych wykazało, że podwyższone prędkości przepływu krwi w dużyc.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów.
Podziękowania
Autorzy chcieliby podziękować Stefanowi Kindelowi za przygotowanie ilustracji do filmu. PW, MM i SHK były wspierane przez niemieckie Federalne Ministerstwo Edukacji i Badań Naukowych (BMBF 01EO1503). Prace zostały wsparte przez Large Instrumentation Grant Niemieckiej Fundacji Badawczej (DFG INST 371/47-1 FUGG). Projekt MM otrzymał stypendium z Else Kröner-Fresenius-Stiftung (2020_EKEA.144).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Krem do depilacji Balea | Balea; Niemcy | ASIN B0759XM39V | krem do depilacji |
| C57BL/6N myszy | Janvier; Saint-Berthevin Cedex, Francja | n.a.mice | |
| Corneregel | Bausch& Lomb; Rochester, Nowy Jork, USA | ref maść | |
| waciki bawełniane | Hecht Assistent; Sondenheim vor der Rö hn, Niemcy | REF 44302010 | waciki bawełniane |
| Ecco-XS maszynka do golenia | Tondeo; Soligen, Niemcy | DE 28693396 | maszynka do golenia |
| Krem z elektrodą | GE; Boston, MA, USA | REF 21708318 | pasta przewodząca |
| Płyta grzewcza | Medax; Kilonia, Niemcy | 2005-205-01 | |
| Isoflurane | Abvie; Wiesbaden, Niemcy | n.d. | lotny środek znieczulający |
| Leukofix | BSN medyczny; Hamburg, Niemcy | REF 02137-00 | taśma |
| Ramię mechaniczne + mikromanipulator | VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CA | P/N 11277 | |
| Tkanki mikrobakiczne | Paul Hartmann AG; Hamburg, Niemcy | REF 981387 | tkanki przeciwdrobnoustrojowe |
| MZ400, 38 MHz przetwornik liniowy | VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CA | REF 51068-30 | przetwornik ultradźwiękowy |
| Sonosid | ASID Bonz GmbH; Herrenberg, Niemcy | REF 782010 | żel ultrasonograficzny Platforma ultrasonograficzna |
| z płytką grzewczą i zapisem EKG | VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CA | P/N 11179 | |
| UniVet-Porta | Groppler; Oberperasberg, Niemcy | S/N BKGM0437 | waporyzator izofluranowy |
| Vevo3100 | VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CA | REF 51073-45 | urządzenie ultrasonograficzne |
| Oprogramowanie VevoLab | VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CA | n.a. | oprogramowanie ewaluacyjne |
Bibliografia
- Macdonald, R. L., Schweizer, T. A. Spontaneous subarachnoid haemorrhage. Lancet. 389 (10069), 655-666 (2017).
- Macdonald, R. L. Delayed neurological deterioration after subarachnoid haemorrhage. Nature Reviews Neurology. 10 (1), 44-58 (2014).
- Francoeur, C. L., Mayer, S. A....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
