Artykuł metodologiczny

Łatwa i elastyczna metoda inokulacji do dokładnej oceny fenotypów infekcji mączniakiem prawdziwym Arabidopsis i innych roślin

DOI:

10.3791/62287

⸱

9 marca 2021

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute for Bioscience and Biotechnology Research, University of Maryland, 2Department of Nutrition and Food Science, University of Maryland College Park, 3Department of Plant Sciences and Landscape Architecture, University of Maryland College Park

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Przedstawiamy protokół budowy prostego systemu dystrybucji zarodników, składającego się z pudełka do zaszczepiania z siatką ~50 μm i przezroczystej komory z tworzywa sztucznego. Można to wykorzystać do równomiernego zaszczepienia roślin zarodnikami mączniaka prawdziwego, umożliwiając w ten sposób dokładną i odtwarzalną ocenę fenotypów chorobowych badanych roślin.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zmniejszenie strat plonów spowodowanych chorobami grzybowymi wymaga lepszego zrozumienia mechanizmów rządzących odpornością roślin i patogenezą grzybów, co z kolei wymaga dokładnego określenia fenotypów chorobowych roślin po zakażeniu określonym patogenem grzybowym. Jednak dokładne fenotypowanie choroby za pomocą niemożliwych do wyhodowania biotroficznych patogenów grzybowych, takich jak mączniak prawdziwy, nie jest łatwe do osiągnięcia i może być krokiem ograniczającym tempo projektu badawczego. W tym miejscu opracowaliśmy bezpieczny, wydajny i łatwy w obsłudze system fenotypowania chorób, wykorzystując jako przykład interakcję rzodkiewnika z mączniakiem prawdziwym. System ten składa się głównie z trzech elementów: (i) drewnianego pudełka do zaszczepiania wyposażonego w zdejmowaną pokrywę zamontowaną za pomocą siatki ze stali nierdzewnej lub nylonu o porach ~50 μm do zaszczepiania mieszkania roślin zarodnikami grzybów, (ii) przezroczystej plastikowej komory z małym przednim otworem w celu zminimalizowania ucieczki zarodników podczas przeprowadzania inokulacji wewnątrz, oraz (iii) metodę usuwania i dystrybucji zarodników w celu równomiernego i skutecznego zaszczepienia. Opisane tutaj protokoły obejmują kroki i parametry wytwarzania pudełka do szczepienia i plastikowej komory przy niskich kosztach oraz demonstrację wideo pokazującą, jak korzystać z systemu, aby umożliwić równomierne zaszczepienie zarodnikami mączniaka prawdziwego, poprawiając w ten sposób dokładność i odtwarzalność fenotypowania choroby.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mączniak prawdziwy jest jedną z najczęstszych i najważniejszych chorób wielu roślin spożywczych i ozdobnych1. Badania nad chorobami mączniaka prawdziwego cieszą się dużą popularnością, o czym świadczy ponad 10 500 publikacji jako wynik wyszukiwania z "mączniakiem prawdziwym" jako słowem kluczowym w Web of Science (stan na listopad 2020 r.). Rzeczywiście, mączniak prawdziwy (reprezentowany przez Blumeria graminis) jest uważany za jeden z 10 największych patogenów grzybowych przez journal of Molecular Plant Pathology2. Kwantyfikacja podatności na choroby jest niezbędnym krokiem w charakterystyce genów roślin przyczyniających się do odporności lub podatności na choroby lub funkcjonalnej identyfikacji kandydujących genów efektorowych w mączniaku prawdziwym. Jednak wiarygodne fenotypowanie choroby jest znacznie trudniejsze w przypadku mączniaka prawdziwego w porównaniu z większością innych patogenów grzybowych, częściowo dlatego, że w przeciwieństwie do zarodników tych ostatnich, zarodniki gatunków mączniaka prawdziwego (takie jak Golovinomyces cichoracearum UCSC1 na podstawie naszego doświadczenia laboratoryjnego) wykazują zmniejszoną żywotność po przejściu przez proces zawiesiny wodnej3,4. Nieodpowiednie i/lub nierównomierne inokulowanie badanych roślin określonym patogenem mączniaka prawdziwego może prowadzić do niedokładnych wyników fenotypowania.

Zgłoszono wiele metod inokulacji w badaniach nad mączniakiem prawdziwym. Obejmują one (i) szczotkowanie zarodników bezpośrednio z zainfekowanych liści w celu przetestowania roślin5, (ii) rozpylanie zawiesiny zarodników w celu przetestowania roślin6, (iii) wydmuchiwanie zarodników za pomocą próżniowej wieży osadniczej do roślin na dole wieży7, oraz (iv) dostarczanie zarodników przez kombinatoryczne użycie nylonowej membrany siatkowej i wibracji opartej na dźwięku8. Metoda szczotkowania zarodników (lub odkurzania) jest łatwa do wykonania, ale z natury nierówna, dlatego może nie być dokładna do oceny ilościowej. Opryskiwanie zarodników jest wygodne i równomierne, ale jak wspomniano powyżej, może skutkować słabym kiełkowaniem zarodników4. Dwie ostatnie (tj. iii-iv) są znacznie ulepszonymi metodami, zdolnymi do osiągnięcia równomiernego zaszczepienia; Jednak oba nie są elastyczne w dostosowywaniu swojej zdolności inokulacji pod względem liczby roślin, które mają być zaszczepione w jednym zdarzeniu, co sprawia, że każde z tych urządzeń nie jest trywialne, a ich działanie jest ograniczone do obszarów laboratoryjnych, w których występuje próżnia i/lub źródło energii elektrycznej.

Nasze laboratorium od ponad 20 lat zajmuje się interakcją między rośliną a mączniakiem prawdziwym9,10. W ciągu ostatniej dekady przetestowaliśmy wiele metod inokulacji, a ostatnio opracowaliśmy prostą, a jednocześnie skuteczną metodę inokulacji mączniaka prawdziwego. Ta metoda szczotkowania zarodników oparta na siatce może zapewnić równomierne zaszczepienie i jest prosta i skalowalna, dlatego powinna być łatwo przyjęta przez każde laboratorium pracujące z mączniakiem prawdziwym.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Wykonanie standardowego pudełka do szczepień ze zdejmowaną górną pokrywą zamontowaną za pomocą siatki

  1. Kup w sklepach rolkę nylonowej siatki membranowej 50 μm lub siatki ze stali nierdzewnej 48 μm (zalecane). Upewnij się, że zamówiłeś wystarczającą ilość do pocięcia na wiele kawałków o wymiarach 14 cali x 26 cali w celu wymiany zużytej siatki.
  2. Kup jedną płytę pilśniową lub sklejkę o średniej gęstości 1/4 cala x 2 stopy x 4 stopy i wytnij dwie 24-1/2 cala x 10 na kawałki i dwie 12 cali x 10 na kawałki do wykonania pudełka do zaszczepiania. Użyj 8 narożnych zacisków do podparcia czterech stron.
    UWAGA: Jeśli jest zwrócony w stronę szerokiej strony obudowy, lewa strona 12 cali x 10 cali jest przymocowana na stałe, a prawa strona 12 cali x 10 cali to zdejmowane drzwi utrzymywane na miejscu przez cztery zaczepy magnetyczne (Rysunek 1A,B).
  3. Umieść cztery 2-calowe szelki narożne po dwa w każdym wewnętrznym rogu lewej strony, cal od góry i cal od dołu, zaznacz i wywierć otwór. Użyj, aby na stałe przymocować lewy krótki bok do dwóch długich boków (przodu i tyłu). Wewnętrzna odległość między dwoma dłuższymi bokami powinna wynosić 12 cali, a nie 11-1/2 cala.
  4. Gdy zaciski narożne są nadal na miejscu i są prawidłowo ustawione prawe drzwi, zaznacz i wywierć położenie 4 zaczepów magnetycznych, aby utrzymać prawe zdejmowane drzwi na miejscu. Zamontuj gałkę przycisku na drzwiach. Górna część drzwi zaczepia się pod górną pokrywą (Rysunek 1A,B).
  5. Aby wykonać zdejmowaną górną pokrywę z siatką, pokrój długi drewniany kwadratowy kołek na 2 zestawy po 26 cali i 12-3/4 cala. Przyklej i przybij cztery elementy w taki sposób, aby pasowały do pudełka - wewnętrzne wymiary ramy są nieco większe niż wymiary zewnętrzne pudełka, ponieważ siatka ekranu zostanie przymocowana do tej ramy.
  6. Przytnij siatkę ekranu do nieco mniej niż 14 cali x 26 cali. Nie pozwól, aby ekran wystawał poza ramę, aby zapobiec ostrym krawędziom. Poproś o pomoc w rozciągnięciu ekranu na ramce. Przytrzymaj siatkę z ramą za zaciski (Rysunek 1C) i użyj zszywacza z odpowiednimi zszywkami, aby przymocować ekran do ramy.
  7. Wytnij dwa zestawy krótszych drewnianych kwadratowych kołków (21 cali i 9 cali) i użyj, aby ciasno ułożyć siatkę wzdłuż ramy za pomocą 4 krótszych kawałków drewnianego kwadratowego kołka (Rysunek 1C, D).

2. Tworzenie komory do szczepienia

  1. Kupuj przezroczyste arkusze akrylowe i elementy sprzętowe w odpowiednich sklepach. Wytnij otwierane okno o wymiarach 7 cali x 20 cali na przedniej stronie akrylowego arkusza pudełka, jak pokazano na Rysunek 2C.
  2. Zmontuj lewą i prawą stronę, przednie (z oknem) i tylne arkusze akrylowe w pudełku za pomocą 8 narożnych zacisków, jak pokazano na Rysunek 2A. Upewnij się, że wymiary wewnętrzne komory są równe wymiarom górnego arkusza.
    UWAGA: Prawa strona służy do podparcia i nie będzie przymocowana do przednich ani tylnych arkuszy. Jest celowo o 1/2 cala krótszy niż inne arkusze. Ta prawa strona stanie się drzwiami "klapowymi w dół" utrzymywanymi w miejscu przez zawias pod kątem prostym na dole i dwa zaczepy magnetyczne na górze, jak pokazano na Rysunek 2C,D.
  3. Użyj stężeń narożnych, aby zabezpieczyć panele razem (Rysunek 2B,C). Przytrzymaj szelki na miejscu, zaznacz markerem sharpie, wyśrodkuj dziurkacz, a następnie wywierć otwór.
    UWAGA: Wiercenie w akrylu różni się od wiercenia czegokolwiek innego, nie należy używać siły, ponieważ bok otworu naprzeciwko wiertła może pęknąć. Użyj nitów lub. Nie dokręcaj zbyt mocno, ponieważ akryl może z czasem pęknąć.
  4. Obróć obudowę na tylną stronę i zdejmij 4 narożniki clamps i umieść górny arkusz na miejscu. Zaznacz i wywierć.
  5. Zamontuj zawias kątowy, wykonany z kątownika 3/4 cala. Użyj nylonowej nakrętki zabezpieczającej jako pręta zawiasu. Nie dokjaj, pozostaw szczelinę, aby drzwi obracały się na tym zawiasie.
  6. Oznacz, wyśrodkuj dziurkacz, wywierć i przymocuj dwa magnetyczne magnesy drzwiowe za pomocą z stożkowym stożkowym stożkowym #6-32x3/4". Następnie przymocuj płytki zaczepowe za pomocą z płaskim #6-32x3/8", patrz Rysunek 2C,D.

3. Inokulacja roślin w mieszkaniach

  1. Przygotuj świeże zarodniki mączniaka prawdziwego jako inokulant (np. rzodkiewnik pospolity, mączniak prawdziwy, Golovinomyces cichoracearum, UCSC1). Wyhoduj czyste, zmutowane rośliny z obniżoną odpornością pardonu Arabidopsis 11 w komorze wzrostowej (22 °C, 65% wilgotności względnej przez 6-8 tygodni) i zaszczep jedną lub pół płaską roślinę pad4-1, aby wytworzyć wystarczającą ilość świeżych zarodników mączniaka prawdziwego (Rysunek 3A).
  2. Uprawiaj rośliny w celu określenia fenotypów infekcji w standardzie: 11 cali x 21 cali x 2,5 w mieszkaniach.
    UWAGA: Rośliny rzodkiewnika uprawiane w ciągu dnia krótkiego (8 godzin światła, 16 godzin ciemności; 22 °C) przez sześć do ośmiu tygodni są dobre do testów na infekcję mączniakiem prawdziwym.
  3. Gdy świeże zarodniki mączniaka prawdziwego z zakażonych roślin po 8-10 dniach od zaszczepienia (dpi) są dostępne, przenieś mieszkanie roślin do testu infekcji do pudełka do zaszczepiania wewnątrz komory zaszczepiania (Rysunek 1B,2C).
  4. Odetnij 15-20 silnie porażonych liści Arabidopsis (lub 4-6 zainfekowanych rozet, w zależności od wielkości liścia/rozety i poziomu zaszczepienia), pozwól liściom wyschnąć, jeśli jest skondensowana woda.
  5. Chwyć jedną ręką 1-2 liście lub rozetę za pomocą długich kleszczy i skieruj liście do góry nogami. Następnie przełóż obie ręce przez otwór komory i delikatnie uderz nożyczkami w ramię kleszczy, powoli przesuwając liście/rozetę nad siatką zamontowaną na pudełku do zaszczepiania (Ryc. 3B). Powtarzaj to, aż wszystkie liście lub rozety zostaną zużyte.
    UWAGA: Dojrzałe zarodniki łatwo usuwają się z konidioforów zainfekowanych liści. Staraj się usunąć zarodniki z siatki tak równomiernie, jak to możliwe.
  6. Użyj jednej lub dwóch cienkich szczotek do blendera wachlarzowego, aby delikatnie przeczesać zarodniki przez siatkę (Rysunek 3C). Upewnij się, że szczotkujesz całą powierzchnię siatki w różnych kierunkach cztery lub więcej razy, aby zmaksymalizować równomierne rozprowadzenie zarodników na roślinach na dnie pudełka do zaszczepiania (Rysunek 3D). Delikatnie poklep siatkę kilka razy szczotkami, aby strząsnąć zarodniki, które utknęły w siatce.
  7. Pozwól zarodnikom osiąść na pół minuty. Następnie wynieś mieszkanie zawierające zaszczepione rośliny z pudełka do zaszczepiania. Przykryj mieszkanie plastikową kopułą i umieść je w komorze wzrostowej (22 °C, 65% wilgotności względnej). Fenotypowanie choroby można przeprowadzić w rozdzielczości od 5 lub 8 do 12 dpi 12.

4. Zaszczepij rośliny mniejszymi skrzynkami do zaszczepiania

UWAGA: W przypadkach, gdy ma być zaszczepionych mniej roślin, nadal można użyć standardowego pola do szczepienia. Upewnij się, że umieściłeś rośliny na środku pudełka. Usuń i wyszczotkuj zarodniki w obszarze siatki, która pokrywa rośliny, aby upewnić się, że wszystkie rośliny są zaszczepione, oszczędzając inokulę. Alternatywnie, a najlepiej, można użyć mniejszych pojemników do zaszczepiania (jak opisano poniżej).

  1. Zamień kartony na pudełko do zaszczepiania. Po prostu zdejmij górną i dolną stronę pudełka, przyklej róg, aby go umocnić, jeśli to konieczne, i zamontuj na górze siatkę o odpowiedniej wielkości 50 μm, przyklejając lub zszywając (Rysunek 4A,B).
  2. Przenieś mieszkanie zawierające rośliny do komory do zaszczepiania, umieść mniejsze pudełko do zaszczepiania na wierzchu mieszkania, aby przykryć rośliny.
  3. Usuń i wyszczotkuj zarodniki, jak opisano powyżej.

5. Zaszczepij oderwane liście na szalkach Petriego

UWAGA: W przypadkach, gdy (i) świeże zarodniki mączniaka prawdziwego są bardzo ograniczone i/lub (ii) rośliny muszą być utrzymywane w czystości, podczas gdy fenotypy choroby i/lub lokalizacja subkomórkowa białek w zakażonych komórkach muszą być oceniane, oderwane liście mogą być używane do infekcji na płytkach MS-agar

.
  1. Zrób mini pudełko do zaszczepiania, które jest tylko nieznacznie większe niż szalka Petriego.
  2. Przygotuj płytki z średnim agarem (1,5%) Murashige i Skoog (MS) o grubości 1/2%. W razie potrzeby dodać tiabendazol (40 mg/l) w celu zmniejszenia zanieczyszczenia pleśnią. Przechowuj talerze w temperaturze 4 °C w lodówce do czasu użycia.
  3. Wytnij jeden lub dwa w pełni rozwinięte liście od podstawy ogonka liściowego dla każdej badanej rośliny. Włóż ogonki oderwanych liści do podłoża agarowego pod kątem ~30°.
    UWAGA: Każda płytka może zawierać 20-40 liści, w zależności od wielkości liści i użytej płytki (Rysunek 4C).
  4. Zaszczepić liście w komorze do zaszczepiania, jak opisano powyżej. Przenieś płytkę z pokrywką do komory wzrostowej.
  5. Wytnij mały fragment liścia i sprawdź subkomórkową lokalizację białek w określonych punktach czasowych.
  6. W celu oceny fenotypów infekcji należy przenieść liście na świeżą, aseptyczną płytkę z agarem MS w temperaturze 4 lub 5 dpi. Odetnij podstawę ogonka liściowego przed włożeniem liści do świeżego podłoża agarowego. Oceń fenotypy choroby przy 8 lub 9 dpi.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutaj prezentujemy nową metodę inokulacji zarodników mączniaka prawdziwego, która jest łatwa do przygotowania, obsługi i dostosowania. Rysunek 1 pokazuje montaż standardowego pudełka do zaszczepiania z naciskiem na wykonanie zdejmowanej pokrywy zamontowanej z siatką membranową 50 μm. Rysunek 2 pokazuje montaż komory do zaszczepiania. Rysunek 3 ilustruje kluczowe etapy procesu inokulacji przy użyciu tego systemu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nasza metoda inokulacji oparta na siatkowych pudełkach ma kilka zalet w porównaniu z innymi metodami inokulacji. Po pierwsze, może osiągnąć równomierne rozmieszczenie zarodników, jeśli jest prawidłowo obsługiwany, jak pokazano na rysunku 5. Po drugie, użycie siatki ~50 μm oraz usuwanie zarodników poprzez delikatne potrząsanie zainfekowanymi liśćmi może zmniejszyć infekcję roślin przez wciornastki lub inne owady infekujące rośliny, które są obecne w roślinach źródłowych. Po trzecie, użycie ró...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Praca została wsparta przez National Science Foundation (IOS-1901566) dla S. Xiao. Autorzy pragną podziękować F. Cokerowi i C. Hooksowi za utrzymanie zakładu wzrostu roślin oraz Jorge Zamorze za pomoc techniczną związaną z produkcją pudełka i komory do szczepienia.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
  48 &mikro; m siatka siatkowa ze stali nierdzewnej; Rozmiar: 24 "X 48" AmazonNADo wykonania pokrywy pudełka do zaszczepiania
# 6-32 x ¾ " maszynowe, podkładki płaskie i nakrętki Home DepotNADo wykonania komory do zaszczepiania
#6-32 ocynkowana nylonowa nakrętka blokująca (4-pak)Home DepotNADo wykonania komory do zaszczepiania
#6-32x3/8" maszynowe Phillips z płaskim, podkładki płaskie i nakrętki Home DepotNADo zabezpieczania  magnetycznych płyt zaczepowych drzwi#
8-32x1/2" maszynowe, podkładki płaskie i nakrętkiHome DepotNADo zabezpieczania stężeń narożnych i zawiasów drzwiowych
Przezroczysty wytłaczany arkusz maskowany folią akrylową o grubości 0,250;   Rozmiar: 17 i frac12; " X 20"Professional PlasticsSACR.250CEFDo wykonania komory inokulacyjnej
grubości 0,250 przezroczystego wytłaczanego arkusza maskowanego folią akrylową; Rozmiar: 18 "X 20"   Profesjonalne tworzywa sztuczne  SACR.250CEFDo wykonania komory inokulacyjnej
przezroczystego wytłaczanego arkusza maskowanego folią akrylową o grubości 0,250; Rozmiar: 18 "X 30" Profesjonalne tworzywa sztuczneSACR.250CEFDo wykonania komory inokulacyjnej
grubości 0,250 przezroczystego wytłaczanego arkusza maskowanego folią akrylową; Rozmiar: 20 "X 29 i frac12; "Professional PlasticsSACR.250CEFDo wykonania komory do zaszczepiania
1-5/8" drzwi szafy zaczep magnetyczny białyHome DepotModel #P110-WDo wykonania komory inokulacyjnej
2" stalowa ocynkowana klamra narożna (8-Pack) Magazyn domowy  Modelka #13611 Do wykonania pudełka i komory do zaszczepiania
3-calowy zacisk narożnyNarzędzia do frachtu portowegoSKU 63653, 1852, 60589Do wykonania komory do zaszczepiania
3/4"  stalowa ocynkowana klamra narożna (4-pak)Home DepotModel #13542Do wykonania pudełka i komory do zaszczepiania
4-7/8" ocynkowane lekkie uchwyty do drzwiHome DepotModel #15184Do wykonania pudełka do zaszczepiania
Drobny blender wentylatorowy szczotkiMichaels StoreM10472846 Do zaszczepienia
Drewniany kołek kwadratowy Kelleher 3/4" x 3/4" x 36" Home DepotNADo wykonania pokrywy pudełka na zaszczepiaczki
Płyta pilśniowa o średniej gęstości (1/4" x 2' x 4');  Home DepotModel# 1508104Do wykonania pudełka do zaszczepiania
Okrągłe szklane szkiełka nakrywkowe z 500 &mikro; m gridibidi USA Inc.10816Do określania  gęstości zarodników
o z o

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Huckelhoven, R., Panstruga, R. Cell bi ology of the plant-powdery mildew interaction. Current Opinion in Plant Biology. 14 (6), 738-746 (2011).
  2. Dean, R., et al. The top 10 fungal pathogens in molecular plant pathology. Molecular Plant Pathology. 13 (4), 414-430 (2012).
  3. Sakurai, H., Hirata, K. Some observations on the relation between the penetration hypha and haustorium of barley powdery mildew and host cell. V. Influence of water spray on the pathogen and host tissue. Annual Phytopathology Society of Japan. 24, 239-245 (1959).
  4. Shomari, S. H., Kennedy, R. Survival of Oidium anacardii on cashew (Anacardium occidentale) in southern Tanzania. Plant Pathology. 48 (4), 505-513 (1999).
  5. Sitterly, W. R. Powdery Mildews. Spencer, D. M. , Academic Press. 369(1978).
  6. Reuveni, M., Agapov, V., Reuveni, R. Induction of systemic resistance to powdery mildew and growth increase in cucumber by phosphates. Biological Agriculture & Horticulture. 9 (4), 305-315 (1993).
  7. Reifschneider, F. J. B., Boiteux, L. S. A vacuum-operated settling tower for inoculation of powdery mildew fungi. Phytopathology. 78 (11), 1463-1465 (1988).
  8. Chowdhury, A., Bremer, G. B., Salt, D. W., Miller, P., Ford, M. G. A novel method of delivering Blumeria graminis f. sp hordei spores for laboratory experiments. Crop Protection. 22 (7), 917-922 (2003).
  9. Xiao, S., et al. Broad-spectrum mildew resistance in Arabidopsis thaliana mediated by RPW8. Science. 291 (5501), 118-120 (2001).
  10. Xiao, S., Ellwood, S., Findlay, K., Oliver, R. P., Turner, J. G. Characterization of three loci controlling resistance of Arabidopsis thaliana accession Ms-0 to two powdery mildew diseases. The Plant Journal. 12 (4), 757-768 (1997).
  11. Reuber, T. L., et al. Correlation of defense gene induction defects with powdery mildew susceptibility in Arabidopsis enhanced disease susceptibility mutants. The Plant Journal. 16 (4), 473-485 (1998).
  12. Xiao, S., et al. The atypical resistance gene, RPW8, recruits components of basal defence for powdery mildew resistance in Arabidopsis. The Plant Journal. 42 (1), 95-110 (2005).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Fenotypowanie chor binokulacja zarodnikamiinfekcja Arabidopsispude ko do inokulacjiinokulacja przez siatkodporno ro linpatogeneza grzybowaizolacja kom rek epidermy

Powiązane artykuły