$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Diagnoza alergii zależnej od IgE opiera się na wywiadzie klinicznym, testach skórnych (STs), ilościowym określeniu swoistych IgE (sIgE) w surowicy oraz, jeśli jest to wymagane i wskazane, kontrolowanych testach obciążeniowych (CCTs)1,2,3,4,5,6. Jednak historia kliniczna może być niewiarygodna, ponieważ może brakować dokładnych informacji, a ST i CCT nie są procedurami wolnymi od ryzyka, które mogą być przeciwwskazane u osób doświadczających ciężkich reakcji zagrażających życiu1,2,3,4,5,6. Kwestie te, wraz z faktem, że oznaczanie sIgE za pomocą zwalidowanych i komercyjnych testów immunologicznych fluoroenzymów jest dostępne tylko dla kilku alergenów i leków, podkreśliły ważną rolę innych funkcjonalnych testów in vitro, takich jak test aktywacji bazofili (BAT).
Bazofile są kluczowymi komórkami efektorowymi zaangażowanymi w reakcje alergiczne zależne od IgE, które są aktywowane po usieciowaniu sąsiednich sIgE związanych z receptorami o wysokim powinowactwie (FcεRI) na powierzchni komórki po ekspozycji na alergen/lek. Aktywacja bazofili wyzwala degranulację komórek i uwalnianie wstępnie uformowanych i nowo zsyntetyzowanych mediatorów stanu zapalnego zawartych w granulkach wydzielania docytoplazmatycznego7,8,9. BAT to metoda in vitro, która próbuje naśladować aktywację bazofili w obecności bodźca (alergenu lub leku) i określa zmiany w ekspresji markerów aktywacji bazofili za pomocą cytometrii przepływowej7,10. Istnieją różne strategie identyfikacji bazofili (IgE+, CCR3+, CRTH2+, CD203c+) oraz pomiaru aktywacji komórek (głównie regulacji w górę CD63 i CD203c) przy użyciu kombinacji przeciwciał znakowanych fluorochromem7,10. CD63, najlepiej potwierdzony klinicznie marker aktywacji11,12,13,14, jest białkiem błonowym zakotwiczonym w granulkach wydzielniczych zawierających histaminę, która po aktywacji komórki i fuzji granulek z błoną ulega ekspresji na powierzchni bazofili class15,16,17,18,19,20,21. CD203c jest markerem powierzchniowym, który ulega konstytutywnej ekspresji na bazofilach i jest regulowany w górę po stymulacji FcεRI, co również wykazało wiarygodne wyniki w BAT15,22,23,24,25. Poza tym, wydaje się, że współwyraża się z CD6326.
W ostatnich dziesięcioleciach, BAT okazał się przydatny w diagnozowaniu reakcji alergicznych wywołanych przez różne czynniki wyzwalające, takie jak leki, jedzenie lub środki wziewne, a także w niektórych formach przewlekłej pokrzywki, jak opisano poniżej. Pozycja tej techniki w algorytmach diagnostycznych jest jednak bardzo zmienna i nie jest dobrze określona.
Nadwrażliwość na leki
Wykazano, że BAT jest przydatny jako test uzupełniający dla wybranych leków i pacjentów, szczególnie dla tych, którzy doświadczają ciężkich reakcji ze względu na fakt, że wartość diagnostyczna ST nie jest dobrze ustalona dla większości leków, ponieważ są one walidowane i standaryzowane dla ograniczonej liczby leków27,28,29,30. Ponadto oznaczanie ilościowe sIgE jest dostępne tylko dla ograniczonej liczby leków, o niższej czułości niż ST27,28,29,30,31,32. Dlatego diagnoza nadwrażliwości na lek zwykle opiera się na teście prowokacji narkotykowej, który może być przeciwwskazany u osób doświadczających ciężkich reakcji zagrażających życiu33.
Obiecujące wyniki zostały zgłoszone dla stosowania BAT u wybranych pacjentów zgłaszających natychmiastowe reakcje nadwrażliwości na różne leki, takie jak betalaktamy (BLs)20,34,35,36,37,38,39, środki blokujące nerwowo-mięśniowe ( NMBAs)19,22,40,41,42,43,44,45, fluorochinolony (FQs)46,47,48,49, pyrazolones50,51,52, radiokontrastowe (RCM)53,54,55,56, oraz związki platyny57,58,59. Zgłoszono, że BAT mają czułość i swoistość odpowiednio między 51,7–66,9 % i 89,2–97,8 %; a dodatnie i ujemne wartości predykcyjne są opisane w zakresie odpowiednio od 93,4% do 66,3%27,31. Co więcej, BAT został zaproponowany jako biomarker predykcyjny dla przełomowych reakcji podczas odczulania związkami platyny, ponieważ ekspresja CD203c jest zwiększona w porównaniu z CD63 u pacjentów z wysokim ryzykiem wystąpienia działań niepożądanych podczas odczulania leku57.
Warto zauważyć, że BAT jest przydatny tylko w przypadku nadwrażliwości na leki, gdy reakcja obejmuje degranulację bazofilów; dlatego nie jest przydatny w reakcjach wynikających z enzymatycznego hamowania cyklooksygenazy 142.
Alergia pokarmowa
BAT stał się potencjalnym narzędziem diagnostycznym w przypadku alergii pokarmowej, ponieważ oznaczanie stężenia sIgE w surowicy dla całego ekstraktu alergenu lub pojedynczych alergenów jest często niejednoznaczne, co wymaga doustnego prowokacji pokarmem w celu potwierdzenia diagnozy, co, podobnie jak nadwrażliwość na lek, jest procedurą kosztowną i niepozbawioną ryzyka60. Kilka badań wykazało odpowiednie wyniki z mlekiem krowim61,62, egg61,63, pszenica64,65,66,67,68, peanut63,69, 70,71,72, orzech laskowy73,74,75,76,77, shellfish78, peach79,80,81, jabłko21, seler i marchew82,83.
Główną wartością dodaną BAT w diagnostyce alergii pokarmowej w porównaniu do STs i sIgE w surowicy jest to, że wykazuje wyższą specyficzność i podobną czułość. W związku z tym BAT jest użytecznym narzędziem do odróżniania pacjentów z klinicznie alergiczną od uczulonych, ale tolerancyjnych osób, które mają zarówno wysoką swoistość (75-100%), jak i wrażliwość (77-98%)63,69,84. Wartości czułości i swoistości zależą od alergenu i innych czynników, takich jak fenotypy (np. zespół alergii jamy ustnej kontra anafilaksja), wiek i wzorce uczuleń związane z geografią63,85.
BAT wykorzystujący pojedyncze składniki alergenowe może potencjalnie poprawić dokładność diagnostyczną niektórych alergenów pokarmowych61,80. Istnieją badania z użyciem białek magazynujących nasiona (np. Ara h 1, Ara h 2, Ara h 3 i Ara h 6 z orzeszków ziemnych)86; białka przenoszące lipidy (np. Pru p 3 z brzoskwini i Ara h 9 z orzeszków ziemnych)80,86; i homologi Bet v 1 (np. Ara h 8 od orzeszka ziemnego)87. Inne potencjalne zastosowania są związane z identyfikacją alergenu winowajcy w przypadkach zespołu alergii pyłkowo-pokarmowej21,87,88, alergia na czerwone mięso89, lub anafilaksja wywołana wysiłkiem fizycznym zależnym od pokarmu66.
Interesujące, BAT może dostarczyć informacji o nasileniu i progu reakcji alergicznych, ponieważ pacjenci z cięższymi reakcjami wykazują większy odsetek aktywowanych bazofili, co zaobserwowano w badaniach pacjentów z alergią na orzeszki ziemne i mleko krowie84,90,91; a pacjenci reagujący na śladowe ilości alergenu wykazują większą wrażliwość bazofilów84,90,92. Dane te sugerują, że BAT może być przydatny do identyfikacji pacjentów alergicznych wysokiego ryzyka, którzy wymagają dokładniejszej obserwacji i bardziej zintensyfikowanej edukacji93. Co więcej, doniesiono, że BAT może przewidywać odpowiedzi na wyzwania związane z jedzeniem70,91,92,94 i progi reaktywności90,95, aby pomóc określić, kiedy żywność może być bezpiecznie (ponownie) wprowadzona84. Jednak te wyniki są kontrowersyjne w niektórych badaniach63,96 i wymagane są dalsze badania.
Z drugiej strony, BAT był używany do monitorowania ustąpienia alergii pokarmowej, zarówno naturalnie, jak i pod wpływem leczenia immunomodulującego, w czasie, które do tej pory było oceniane tylko na podstawie doustnego prowokacji pokarmowej, wraz z powiązanym ryzykiem i kosztami84,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106,107,108. Co więcej, był on również stosowany do monitorowania wpływu omalizumabu na alergię pokarmową, ponieważ aktywacja bazofili zmniejsza się podczas leczenia omalizumabem, ale zwiększa się po zaprzestaniu leczenia109.
Alergia wziewna
BAT rzadko jest korzystny w przypadku alergii wziewnej, ponieważ diagnozę można rutynowo ustalić na podstawie kwantyfikacji sIgE i ST. Jednak w przypadkach miejscowego alergicznego nieżytu nosa (niewykrywalne poziomy sIgE i ujemne ST z dodatnimi testami prowokacji nosa), BAT pozwolił na diagnozę w 50% przypadków110. Ponadto stwierdzono korelację między wrażliwością bazofili a odpowiedzią na testy prowokacji nosa/oskrzeli, a także między ciężkością astmy a skutecznością leczenia omalizumabem111,112.
BAT był również używany do monitorowania immunoterapii alergenowej roztoczy kurzu domowego i pyłków, ponieważ czułość bazofili zmniejsza się podczas immunoterapii, prawdopodobnie z powodu interferencji blokujących przeciwciał IgG113,114,115,116,117.
alergia na jad błonkoskrzydłych
Rozpoznanie alergii na jad błonkoskrzydłych rutynowo opiera się na ST i sIgE w surowicy. BAT wykazał wysoką czułość (85-100%) i swoistość (83-100%) i stwierdzono, że jest przydatny w przypadkach, które dają niejednoznaczne wyniki lub u pacjentów z sugestywną historią kliniczną alergii na jad, ale niewykrywalną sIgE i ujemnym ST118,119. Wydaje się jednak, że BAT nie jest w stanie przewidzieć nasilenia tych reakcji120,121.
Do 60% pacjentów wykazuje sIgE zarówno na jad osy jak i pszczoły, a identyfikacja dominującego alergenu jest kluczowa dla odpowiedniego leczenia immunoterapią. W takich przypadkach stwierdzono, że BAT jest przydatny w identyfikacji dominującego alergenu119,122,123,124. Chociaż sIgE do głównych alergenów jadów pszczół i os może zmniejszać użyteczność BAT u pacjentów z podwójnie dodatnim wynikiem obu jadów, dostarcza użytecznych informacji głównie u osób z ujemnymi wynikami w oznaczaniu sIgE123.
Niektóre badania sugerują, że BAT może być użyteczny jako biomarker predykcyjny dla skutków ubocznych podczas fazy narastania immunoterapii jadem, ponieważ doniesiono, że ta opcja leczenia zmniejsza wrażliwość bazofilów. Jednak reaktywność nie maleje, a to narzędzie BAT jest obecnie kontrowersyjne13,120,125,126,127,128,129,130.
Pokrzywka i obrzęk naczynioruchowy
Podgrupa pacjentów z przewlekłą pokrzywką ma autoinmuzyjną patofizjologię, spowodowaną autoprzeciwciałami IgE przeciwko autoalergenom i autoprzeciwciałom IgG, które są skierowane przeciwko kompleksom FcεRI lub IgE-FcεRI obecnym na powierzchni komórek tucznych131,132. W praktyce klinicznej rozpoznanie tego typu przewlekłej pokrzywki opiera się na dodatnim autologicznym odcinku ST surowicy, co wiąże się z ryzykiem przypadkowego zakażenia. BAT zaproponowano jako test in vitro do diagnozowania i monitorowania pacjentów z podejrzeniem przewlekłej pokrzywki. Doniesiono, że ekspresja zarówno CD63, jak i CD203c na powierzchni bazofili została zwiększona po stymulacji surowicami od pacjentów z przewlekłą pokrzywką, co wskazuje na wykrycie aktywnych autoprzeciwciał133,134,135,136,137. Ostatnio doniesiono, że pacjenci z dodatnim BAT często doświadczają najbardziej aktywnego stanu chorobowego, ocenianego na podstawie oceny aktywności pokrzywki, i wymagają wyższych dawek leków przeciwhistaminowych wraz z leczeniem trzeciego rzutu (cyklosporyna A lub omalizumab), w porównaniu z osobami z ujemnym BAT138.