Artykuł metodologiczny

Stosowanie tlenu hiperbarycznego w celu poprawy wrażliwości na promieniowanie ludzkich komórek glejaka U251

DOI:

10.3791/62769

⸱

20 października 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Radiotherapy, Second Hospital Affiliated to Lanzhou University, 2Department of Ultrasound, Second Hospital Affiliated to Lanzhou University, 3Department of Cardiology, Hubei Lichuan Dongfang Harmonious Hospital

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten protokół pokazuje, że tlen hiperbaryczny może zwiększyć hamowanie proliferacji i apoptozę komórek glejaka U251 poddanych promieniowaniu rentgenowskiemu poprzez blokowanie komórek w fazie G2/M. Poprawia to radiowrażliwość ludzkich linii komórkowych glejaka.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Celem tego badania było zbadanie możliwości wykorzystania tlenu hiperbarycznego do zwiększenia wrażliwości na promieniowanie komórek ludzkiego glejaka. Hodowane w subkulturze ludzkie komórki glejaka U251 zostały losowo podzielone na cztery grupy: nieleczoną grupę kontrolną, komórki traktowane tylko tlenem hiperbarycznym (HBO), komórki traktowane tylko promieniowaniem rentgenowskim (promieniowanie rentgenowskie) oraz komórki traktowane zarówno HBO, jak i promieniowaniem rentgenowskim. W tych grupach obserwowano morfologię komórek, aktywność proliferacji komórek, dystrybucję cyklu komórkowego i apoptozę, aby ocenić rolę HBO w poprawie wrażliwości komórek glejaka na promieniowanie . Wraz ze wzrostem dawek promieniowania rentgenowskiego (0 Gy, 2 Gy, 4 Gy, 6 Gy, 8 Gy) frakcja przeżycia (SF) komórek glejaka stopniowo się zmniejszała.

Znacznie niższe SF zaobserwowano dla komórek leczonych HBO i promieniowaniem rentgenowskim razem niż w grupie rentgenowskiej dla każdej dawki (wszystkie P < 0,05). Zahamowanie proliferacji było istotnie wyższe w grupie HBO w połączeniu z promieniowaniem rentgenowskim niż w grupie rentgenowskiej dla każdej dawki (wszystkie P < 0,05) dla linii komórkowej U251. Odsetek komórek fazowych G2/M był istotnie wyższy w grupie HBO w połączeniu z promieniowaniem rentgenowskim (2 Gy) (26,70% ± 2,46%) i HBO (22,36% ± 0,91%) niż w grupie kontrolnej (11,56% ± 2,01%) i rentgenowskiej (2 Gy) (10,35% ± 2,69%) (wszystkie P < 0,05). Apoptoza komórek U251 była znacznie wyższa w grupie HBO w połączeniu z promieniowaniem rentgenowskim (2 Gy) niż w grupie HBO, grupie rentgenowskiej (2 Gy) i grupie kontrolnej (wszystkie P < 0,05). Wnioskujemy, że HBO może zwiększyć hamowanie proliferacji, inhibicję i apoptozę komórek glejaka U251 poprzez blokowanie komórek glejaka w fazie G2 / M i poprawę wrażliwości na promieniowanie komórek glejaka U251.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Glejak to pierwotny nowotwór wewnątrzczaszkowy, który wywodzi się z komórek glejowych ośrodkowego układu nerwowego1. Obecną strategią leczenia glejaka jest operacja połączona z radioterapią i chemioterapią. Pooperacyjna radioterapia glejaka może zapewnić korzyści w zakresie przeżycia (dowody I stopnia), a wczesna radioterapia pooperacyjna może skutecznie przedłużyć przeżycie pacjenta (dowody II stopnia)2. W przypadku glejaków wyższego stopnia (stopień III lub IV), zwłaszcza glejaka wysoce złośliwego i inwazyjnego (dowody III stopnia)3, radioterapię pooperacyjną należy przeprowadzić jak najwcześniej (<6 tygodni). Jednak pomimo wczesnej interwencji, glejak nadal ma wysoki wskaźnik nawrotów i złe rokowanie po kompleksowym leczeniu. Wyniki te są głównie związane z niską wrażliwością glejaka na radio. Czynniki związane z wrażliwością guza na promieniowanie obejmują wrodzoną wrażliwość na promieniowanie komórek nowotworowych, niedotlenionych lub nieniedotlenionych komórek nowotworowych, proporcję niedotlenionych komórek nowotworowych oraz zdolność tkanki okołonowotworowej do naprawy uszkodzeń spowodowanych promieniowaniem4.

Wśród tych czynników, niedotlenione lub nieniedotlenione komórki nowotworowe oraz proporcja niedotlenionych komórek nowotworowych mają istotny wpływ na radiowrażliwość guza. Tlen hiperbaryczny (HBO) może poprawić magazynowanie tlenu w tkankach poprzez zwiększenie napięcia tlenu w tkankach i dyfuzji tlenu we krwi. HBO może również wytwarzać szereg korzystnych efektów biochemicznych, cytologicznych i fizjologicznych5. Na przykład HBO ma wyraźny efekt naprawczy w przypadku uszkodzeń spowodowanych promieniowaniem wywołanym radioterapią. Chociaż doniesiono, że HBO w połączeniu z radioterapią lub chemioterapią poprawia skuteczność kliniczną radioterapii lub chemioterapii w przypadku glejaka6, toczy się poważna debata na temat tego, jak samo HBO wpływa na wzrost glejaka złośliwego. Ding i wsp.7 oraz Wang et al.8 wykazali, że HBO promuje wzrost glejaka in situ u myszy poprzez mechanizmy, które obejmują hamowanie apoptozy i promowanie angiogenezy guza. W warunkach fizjologicznych HBO promuje angiogenezę guza poprzez indukowanie stresu oksydacyjnego9.

Jednak jedno z badań wykazało, że krótkotrwała ekspozycja na HBO sprzyja proliferacji komórek nowotworowych, podczas gdy długotrwała ekspozycja na HBO sprzyja apoptozie i hamuje proliferację10. Dlatego potrzebne są dalsze badania, aby zbadać, czy HBO promuje, czy hamuje wzrost glejaka i w jaki sposób HBO w połączeniu z radioterapią lub chemioterapią może wywołać uczulenie terapeutyczne. W szczególności potrzebne są mechaniczne szczegóły dotyczące tego, w jaki sposób HBO poprawia wrażliwość glejaka na promieniowanie promieniotwórcze. Aby zbadać, w jaki sposób HBO poprawia wrażliwość na promieniowanie ludzkich komórek glejaka U251 w tym badaniu, zastosowaliśmy HBO w połączeniu z promieniowaniem rentgenowskim na proliferację komórek glejaka i zaobserwowaliśmy wpływ na dystrybucję cyklu komórkowego i apoptozę.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie metody badawcze zostały zatwierdzone przez Instytucjonalną Komisję Rewizyjną i Komisję Etyki Drugiego Szpitala Powiązanego z Uniwersytetem w Lanzhou i zostały przeprowadzone zgodnie z odpowiednimi wytycznymi i przepisami.

1. Leczenie komórek glejaka

UWAGA: W tym eksperymencie użyto linii komórkowej glejaka U251.

  1. Hodowla komórkowa U251
    1. Wysiewać komórki U251 w wielu szalkach za pomocą DMEM zawierającego 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS) i hodować je w temperaturze 37 °C z 5% CO2 .
    2. Po osiągnięciu 50%-60% konfluencji zdysocjuj komórki za pomocą roztworu trypsyny-EDTA (0,25%, bez czerwieni fenolowej), a następnie pozwól im wzrosnąć do 80% konfluencji.
  2. Naświetlanie promieniami rentgenowskimi
    1. Przykryć płytki hodowlane lub kolby równoważnym kompensatorem tkankowym o grubości do 1 cm. Następnie wystaw ogniwa na działanie promieniowania rentgenowskiego dostarczanego z akceleratora liniowego 6 MV o odległości źródło - ogniwo 100 cm, regulowanej przez kliknięcie przycisku obracania na tablicy zdalnego sterowania.
    2. Poproś fizyka, aby zmierzył dawkę promieniowania i skorygował tłumienie. Jako kontrolę, przed napromieniowaniem rentgenowskim należy umieścić kolby zawierające pożywki w detektorze.
  3. Tlen hiperbaryczny (HBO)
    1. Zdezynfekuj komorę HBO, włączając światło ultrafioletowe na 15 min, a następnie zalej ją 0,02 MPa czystego tlenu na 5 min.
    2. Po umieszczeniu komórek w płytkach lub kolbach hodowlanych w komorze, należy kliknąć przycisk regulatora ciśnienia na tablicy sterowniczej na zewnątrz komory, aby zwiększyć ciśnienie HBO w komorze do 0,2 MPa (2,0 ATA) w ciągu 30 minut od napromieniowania.
    3. Trzydzieści minut później kliknij przycisk regulatora ciśnienia, aby zmniejszyć ciśnienie HBO do poprzedniego poziomu ciśnienia (0,1 MPpa). Następnie traktuj butelki lub talerze z kulturami HBO 1x dziennie przez 3 kolejne dni.

2. Komórki glejaka U251 w różnych grupach

  1. Ustaw grupę kontrolną, grupę rentgenowską (2 Gy) i grupę HBO w połączeniu z grupą rentgenowską (2 Gy) w celu obliczenia krzywych wzrostu komórek.
  2. Przygotować zawiesiny jednokomórkowe z komórek glejaka U251 wykazujące maksymalne tempo wzrostu (patrz krok 1.1.2). Dostosuj gęstość komórek do 1 × 106/ml, licząc komórki za pomocą szkiełka hemocytometrycznego. Następnie dodać 1 ml zawiesiny komórkowej do butelki hodowlanej (gęstość komórek: 1 ×10 6 na butelkę) z trzema oddzielnymi butelkami dla każdej grupy.
  3. Oceń morfologię komórek przy 100-krotnym powiększeniu za pomocą mikroskopu jasnego pola, aby policzyć przylegające komórki po 24 godzinach, 48 godzinach i 72 godzinach hodowli.

3. Radiowrażliwość komórek glejaka U251 (test tworzenia klonów) w ciągu 30 minut po HBO

  1. Wysiewaj zawiesinę jednokomórkową U251 w studzienkach w ilości 5 × 102 komórek/ml na płytkach 6-dołkowych, a następnie poddaj je wskazanej dawce promieniowania rentgenowskiego (0 Gy, 2 Gy, 4 Gy, 6 Gy i 8 Gy), z trzema równoległymi próbkami badanymi dla każdej dawki promieniowania rentgenowskiego.
  2. W przypadku grupy HBO w połączeniu z promieniowaniem rentgenowskim (2 Gy) należy wystawić komórki na promieniowanie rentgenowskie w ciągu 30 minut od leczenia HBO. Po poddaniu działaniu substancji hodować komórki w temperaturze 37 °C z 5% CO2 przez 14 dni.
  3. Po tym, jak klony są widoczne, usuń pożywkę i umyj klony 2x PBS.
  4. Utrwal komórki w 1 ml 10% metanolu przez 15 minut, a następnie zabarwiaj 1 ml 0,1% fioletu krystalicznego przez 20 minut.
  5. Po zabarwieniu przemyj komórki 6 ml wody destylowanej za pomocą pipety, a następnie odessaj roztwór fioletu krystalicznego. Pozostaw komórki do wyschnięcia na powietrzu.
  6. Policz klony o średnicy od 0,3 mm do 1,0 mm pod mikroskopem, aby upewnić się, że na klon przypada >50 komórek.
  7. Obliczyć ułamek przeżycia (SF) za pomocą równania (1):
    SF = figure-protocol-1 × 100% (1)
  8. Korzystając z oprogramowania statystycznego, wygeneruj krzywą dawka-przeżycie promieniowania na podstawie modelu pojedynczego trafienia wielocelowego (SHMT) za pomocą równania (2):
    S = 1 - (1 - figure-protocol-2)N (2)
    Gdzie S = prawdopodobieństwo przeżycia; k = średnia dawka śmiertelna (dawka powodująca średnio jedno trafienie na komórkę); x = liczba trafień na komórkę; N = liczba celów (liczba trafień w przypadku śmierci komórki).
  9. Obliczyć parametry radiobiologiczne, w tym średnią dawkę śmiertelną (D0), dawkę quasi-progową (Dq), liczbę ekstrapolacji (N), frakcję przeżycia przy dawce napromieniowania 2 Gy (SF2), współczynnik wzmocnienia uczulenia (D0) (SER = D0 w grupie kontrolnej/D0 w grupie eksperymentalnej) i SER (Dq) (SER = Dq w grupie kontrolnej/Dq w grupie eksperymentalnej) w celu oceny wpływu HBO na radiowrażliwość glejaka U251 komórki.
    Gdzie D0 = odwrotność nachylenia liniowej części krzywej przeżycia (dawka zmniejszająca współczynnik przeżycia o 63%)
    N = wartość punktu przecięcia utworzonego przez ekstrapolację części liniowej tak, aby spełniała rzędną (odzwierciedlającą zdolność komórki do naprawy uszkodzeń spowodowanych promieniowaniem)
    Dq = wartość punktu przecięcia-rzutu na odciętej i przecięcia utworzonego przez narysowanie linii przechodzącej przez 1,0 na rzędnej i równoległej do odciętej, aby spotkać się z linią ekstrapolacji.

4. Test zliczania komórek w celu oceny proliferacji komórek glejaka U251

  1. Ustaw grupę kontrolną, grupę HBO i grupy leczone promieniowaniem rentgenowskim (0 Gy, 2 Gy, 4 Gy, 6 Gy, 8 Gy) samodzielnie lub w połączeniu z HBO.
  2. Dostosuj gęstość komórek do 1 × 104 komórek/ml za pomocą komórek U251 w zawiesinach jednokomórkowych.
  3. Wysiewać zawiesiny komórkowe (100 μl, gęstość: 1 × 103 dołki/dołek) na płytkach 96-dołkowych (pięć dołków na grupę). Przeprowadzić test zliczania komórek (patrz tabela materiałów), a następnie oznaczyć gęstość optyczną (OD) przy długości fali 450 nm za pomocą czytnika mikropłytek po 48 godzinach hodowli z odczynnikiem.
  4. Obliczyć szybkość hamowania proliferacji komórek (IR) zgodnie z równaniem (3):
    IR = figure-protocol-3 × 100% (3)

5. Wykrywanie apoptozy komórek glejaka U251

  1. Kontrola zestawu, HBO, X-ray (2 Gy) i HBO w połączeniu z grupami X-ray (2 Gy).
  2. Usuń pożywkę po hodowli i umyj komórki 1x PBS.
  3. Odłącz komórki trypsyną, a następnie dezaktywuj trypsynę, dodając DMEM, gdy pod mikroskopem obserwuje się zaokrągloną morfologię komórek.
  4. Przenieść komórki do probówki wirówkowej i wirować przez 5 minut przy stężeniu 200 × g.
  5. Odrzuć supernatant, dodaj 3 ml 1x PBS do osadu i delikatnie odpipetuj w celu ponownego zawieszenia komórek.
  6. Ponownie odwirować komórki w temperaturze 200 × g przez 5 minut. Następnie odessać supernatant PBS i umyć komórki 2x przed ponownym ich zawieszeniem delikatnym pipetowaniem w 50 μl buforu wiążącego.
  7. Dodać 5 μl aneksyny V-FITC do komórek w temperaturze 4 °C i inkubować komórki w ciemności w temperaturze 4 °C przez 15 minut przed dodaniem 400 μl buforu wiążącego. Przenieść mieszaninę do probówki do cytometrii przepływowej zawierającej 5 μl roztworu barwnika jodku propidyny (PI) (10 mg/ml). Wykryj komórki apoptotyczne 5 minut później za pomocą cytometrii przepływowej11.
  8. Nagraj czerwoną fluorescencję przy fali wzbudzenia 488 nm, wprowadź je do komputera, aby przeanalizować procent każdego cyklu komórkowego w 5,000 komórkach, a następnie wydrukuj piki komórek apoptotycznych.
  9. Zbierz czerwoną i zieloną fluorescencję przez podwójne znakowanie aneksyny V i PI, wprowadź je do komputera w celu analizy, a następnie wydrukuj wykres punktowy.

6. Wykrywanie rozkładu cyklu komórkowego glejaka U251

  1. Umyj wyżej wymienione komórki 2x 1 ml PBS przed potraktowaniem ich trypsyną.
  2. Gdy zaokrąglona morfologia komórek zostanie wykryta za pomocą mikroskopii świetlnej, dodaj DMEM zawierający 10% FBS.
  3. Odwirować komórki przez 5 minut w temperaturze 200 × g w temperaturze pokojowej.
  4. Usunąć supernatant i ponownie zawiesić te komórki w 1 ml PBS przed dodaniem wstępnie schłodzonego 75% roztworu etanolu.
  5. Inkubować mieszaninę przez co najmniej 4 godziny lub przez noc w temperaturze -20 °C.
  6. Przemyj komórki 2x lodowatym PBS i 180 μL EDTA (0,1 mM, 3,7 mg EDTA + 100 ml PBS), 20 μl RNazy A (10 mg / ml), 35 μl Triton X-100 (2%, 2 ml Triton + 98 ml FBS) i 96,5 μl PBS. Następnie dodać 17,5 μl roztworu PI (1 mg/ml).
  7. Inkubować mieszaninę w temperaturze 4 °C w ciemności przez 10 minut.
  8. Umyj komórki w 200 μl PBS, a następnie umieść je w cytometrze przepływowym, aby ocenić rozkład cyklu komórkowego, jak opisano wcześniej12.
  9. Cytometr przepływowy działa w trybie wzbudzenia dwulaserowej, trójwymiarowej przestrzeni z rozmiarem plamki 22 μm x 66 μm i 13 μm x 66 μm. Użyj pomieszczenia przepływowego o wymiarach 430 μm x 180 μm, widmie 300-1 100 nm, wykrywalności ≤100 MESF i rozdzielczości CV <2%. Następnie wystaw komórki na działanie światła wzbudzającego o długości fali 488 nm oraz wykryj i zmierz sygnały fluorescencji za pomocą oprogramowania przyrządu, aby określić rozkład cyklu komórkowego13.
  10. Określ zawartość DNA, a następnie zgodnie z zawartością DNA przeanalizuj cykl komórkowy.

7. Analiza statystyczna

  1. Wykonywanie analiz statystycznych.
  2. Przedstaw dane jako średnią ± odchylenie standardowe.
  3. Użyj testu t-Studenta, aby porównać grupy, z istotnością statystyczną ustawioną jako P < 0,05.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hodowla komórek glejaka U251
Komórki glejaka U251 miały wrzecionowaty kształt od 24 godzin do 48 godzin po hodowli w DMEM i były przylegające. Komórki te wykorzystano do dalszych badań (Rysunek 1).

Morfologia i liczba komórek glejaka
Liczba komórek glejaka U251 w HBO w połączeniu z grupą rentgenowską (2 Gy) była znacznie niższa niż w grupie rentgenowskiej (2 Gy) po 24 godzinach, 48 godzinach i 72 godzinach hodowli komórkowej...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Linia komórkowa glejaka U251 jest jedną z najbardziej klasycznych linii komórkowych glejaka ludzkiego i jest szeroko stosowana jako model glejaka w wielu badaniach.

Wpływ HBO na proliferację komórek glejaka U251
HBO zazwyczaj odnosi się do oddychania czystym tlenem (100% stężenie tlenu) w szczelnej komorze pod ciśnieniem 1,5-3 razy wyższym niż normalne ciśnienie atmosferyczne, co może zwiększyć zawartość tlenu w osoczu mikronaczyniowym14. U pacjent...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Bufor wiązania   Dickinson and CompanyRH10 9RR
CCK-8 DOJINDO zliczania komórekNJ
CELL FIT analiza cyklu komórkowego (zawartość DNA)
Analiza komórek apoptotycznychCELLQUEST
DMEM i aneksyna V-FITCGibco BRL
Dickinson
Glioma U251 i U87Instytut Biologii
Hiperbaryczna komora tlenowaInstytutHongyuan
medyczny akcelerator liniowyElekta Limited Company
czytnik
MOD FITLT formac v1.01 analiza komórkowa - trypsyna w fazie cyklu komórkowego
Laboratoria Hyclone  Inc
Zestaw testowy Test Cytometr przepływowy Linia komórkowa Komórki w Szanghajumikropłytek

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Louis, D. N., et al. The 2016 World Health Organization Classification the Central Nervous System: A summary. Acta Neuropathologica. 131 (6), 803-820 (2016).
  2. Sun, M. Z., et al. Survival impact of time to initiation of chemoradiotherapy after resection of newly diagnosed glioblastoma. Journal of Neurosurgery. 122 (5), 1144-1150 (2015).
  3. Hegi, M. E., et al. MGMT gene silencing and benefit from temoozolomide in glioblastoma. New England Journal of Medicine. 352 (10), 997-1003 (2005).
  4. Zhu, Y., et al. Involvement of decreased hypoxia-inducible factor 1 activity and resultant G1-S cell cycle transition in radioresistance of perinecrotic tumor cells. Oncogene. 32 (16), 2058-2068 (2013).
  5. Kohshi, K., et al. Potential roles of hyperbaric oxygenation in the treatments of brain tumors. Undersea and Hyperbaric Medicine. 40 (4), 351-362 (2013).
  6. Aghajan, Y., Grover, I., Gorsi, H., Tumblin, M., Crawford, J. R. Use of hyperbaric oxygen therapy in pediatric neuro-oncology: a single institutional experience. Journal Neurooncology. 141 (1), 151-158 (2019).
  7. Ding, J. B., Chen, J. R., Xu, H. Z., Qin, Z. Y. Effect of hyperbaric oxygen on the growth of intracranial glioma in rats. Chinese Medical Journal. 128 (23), 3197-3203 (2015).
  8. Wang, Y. G., et al. Hyperbaric oxygen promotes malignant glioma cell growth and inhibits cell apoptosis. Oncology Letters. 10 (1), 189-195 (2015).
  9. Milovanova, T. N., et al. Hyperbaric oxygen stimulates vasculogenic stem cell growth and differentiation in vivo. Journal of Applied Physiology. 106 (2), 711-728 (2009).
  10. Conconi, M. T., et al. Effects of hyperbaric oxygen on proliferative and apoptotic activities and reactive oxygen species generation in mouse fibroblast 3T3/J2 cell line. Journal of Investigative Medicine. 51 (4), 227-232 (2003).
  11. Vermes, I., Haanen, C., Steffiens-Nakken, H., Reutellingsperger, C. A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V. Journal of Immunological Methods. 184 (1), 39-51 (1995).
  12. Cui, W., Niu, F. -L., He, L. -Y., W, S. -R. Comparison of two softwares for analysing apoptosis with flow cytometry. Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine. 24 (6), 45-47 (2001).
  13. Cecchini, M. J., Amiri, M., Dick, F. A. Analysis of cell cycle position in mammalian cells. Journal of Visualized Experiments. (59), e3491(2012).
  14. Resanovic, I., et al. Effects of hyperbaric oxygen on inducible nitric oxide synthase activity/expression in lymphocytes of type 1 diabetes patients: A prospective pilot study. International Journal of Endocrinology. 2019, 2328505(2019).
  15. Stuhr, L. E., et al. Hyperoxia retards growth and induces apoptosis, changes in vascular density and gene expression in transplanted gliomas in nude rats. Journal of Neuro-Oncology. 85 (2), 191-202 (2007).
  16. Biollaz, G., et al. Site-specific anti-tumor immunity: differences in DC function, TGF-beta production and numbers of intratumoral Foxp3+ Treg. European Journal of Immunology. 39 (5), 1323-1333 (2009).
  17. McKenna, F. W., Ahmad, S. Fitting techniques of cell survival curves in high-dose region for use in stereotactic body radiation therapy. Physics in Medicine and Biology. 54 (6), 1593-1608 (2009).
  18. Malaise, E. P., Lambin, P., Joiner, M. C. Radiosensitivity of human cell lines to small doses. Are there some clinical implications. Radiation Research. 138, S25-S27 (1994).
  19. Björk-Eriksson, T., West, C., Karlsson, E., Mercke, C. Tumor radiosensitivity (SF2) is a prognostic factor for local control in head and neck cancers. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 46 (1), 13-19 (2000).
  20. Bromfield, G. P., Meng, A., Warde, P., Bristow, R. G. Cell death in irradiated prostate epithelial cells: Role of apoptotic and clonogenic cell kill. Prostate Cancer and Prostatic Diseases. 6 (1), 73-85 (2003).
  21. Kalns, J. E., Piepmeier, E. H. Exposure to hyperbaric oxygen induces cell cycle perturbation in prostate cancer cells. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal. 35 (2), 98-101 (1999).
  22. Lakka, S. S., et al. Inhibition of cathepsin B and MMP-9 gene expression in glioblastoma cell line via RNA interference reduces tumor cell invasion, tumor growth and angiogenesis. Oncogene. 23 (27), 4681-4689 (2004).
  23. Li, S., Shi, D., Zhang, L., Yang, F., Cheng, G. Oridonin enhances the radiosensitivity of lung cancer cells by upregulating Bax and downregulating Bcl-2. Experimental and Therapeutic Medicine. 16 (6), 4859-4864 (2018).
  24. Campbell, K. J., Tait, S. W. G. Targeting BCL-2 regulated apoptosis in cancer. Open Biology. 8 (5), 180002(2018).
  25. Rengarajan, T., et al. D-pinitol promotes apoptosis in MCF-7 cells via induction of p53 and Bax and inhibition of Bcl-2 and NF-κB. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention. 15 (4), 1757-1762 (2014).
  26. Shinagawa, A., et al. The potent peptide antagonist to angiogenesis, C16Y and cisplatin act synergistically in the down-regulation of the Bcl-2/Bax ratio and the induction of apoptosis in human ovarian cancer cells. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 39 (6), 135-164 (2011).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

na wietlanie promieniami rentgenowskimiproliferacja kom rekrozk ad cyklu kom rkowegoapoptoza kom rekfaza G2 Mu amek prze ywalno cihamowanie proliferacji
Film wkrótce dostępny

Powiązane artykuły