To badanie opisuje bezpośredni pomiar produkcji glukozy w wątrobie w mysim modelu zespołu policystycznych jajników przy użyciu stabilnego izotopowego znacznika glukozy przez żyłę ogonową zarówno na czczo, jak i w stanie bogatym w glukozę w tandemie.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Ocena produkcji glukozy w wątrobie w mysim modelu zespołu policystycznych jajników
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Zespół policystycznych jajników (PCOS) jest powszechną chorobą, która powoduje zaburzenia metabolizmu glukozy, takie jak insulinooporność i nietolerancja glukozy. Rozregulowany metabolizm glukozy jest ważnym objawem choroby i jest kluczem do jej patogenezy. Dlatego tak ważne są badania oceniające metabolizm glukozy w PCOS. Bardzo niewiele badań określiło ilościowo produkcję glukozy w wątrobie bezpośrednio w modelach PCOS przy użyciu nieradioaktywnych znaczników glukozy. W tym badaniu omawiamy instrukcje krok po kroku dotyczące ilościowego oznaczania szybkości produkcji glukozy w wątrobie w mysim modelu PCOS poprzez pomiar wzbogacenia M + 2 glukozy [6,6-2 H2], stabilnego izotopowego znacznika glukozy, za pomocą chromatografii gazowej - spektrometrii mas (GCMS). Procedura ta polega na stworzeniu stabilnego izotopowego roztworu znacznika glukozy, zastosowaniu cewnika do żyły ogonowej i infuzji znacznika glukozy zarówno na czczo, jak i w stanie bogatym w glukozę u tej samej myszy w tandemie. Wzbogacenie [6,6-2H2]glukozy mierzy się za pomocą pochodnej pentaoctanu w GCMS. Technika ta może być stosowana w wielu różnych badaniach obejmujących bezpośredni pomiar szybkości produkcji glukozy w wątrobie.
Wprowadzenie
Zespół policystycznych jajników (PCOS) jest częstym zaburzeniem występującym u 12%-20% kobiet w wieku rozrodczym1,2. Jest to złożona choroba skutkująca zmiennymi fenotypami obejmującymi policystyczne jajniki, nieregularne miesiączki i kliniczne lub laboratoryjne dowody hiperandrogenemii, i jest zwykle diagnozowana, gdy kobieta spełnia dwa z trzech kryteriów3. Dominującym aspektem PCOS i kluczowym czynnikiem w jego patogenezie są zaburzenia metaboliczne, które występują u kobiet cierpiących na tę chorobę. Kobiety z PCOS częściej występują w insulinooporności, nietolerancji glukozy, otyło....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie procedury na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) Baylor College of Medicine.
1. Przygotowanie [6,6-2 H 2]glukozy
- Na dzień przed zabiegiem należy przygotować znacznik glukozy ze stabilnego izotopu w soli fizjologicznej. W tym eksperymencie [6,6-2 H2] glukoza została użyta jako znacznik do pomiaru wskaźnika pojawiania się glukozy w osoczu.
UWAGA: W tym eksperymencie mierzono produkcję glukozy na czczo i w warunkach bogatych w glukozę, więc izotop glukozy przygotowano w dwóch różnych pre....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Korzystając z wcześniej opisanych równań rozcieńczania izotopowego, całkowity wskaźnik glukozy w osoczu (glucoseRa) obliczono na podstawie wzbogacenia M+2 [6,6-2H2glukozy w warunkach na czczo oraz w warunkach wysokiego stężenia glukozy z wykorzystaniem pochodnej pentaoctanu21W warunkach stanu stacjonarnego przyjmuje się, że szybkość pojawiania się glukozy jest równa szybkości jej zanikania. W grupie kontrolnej całkowita glukozaRa wynosiło 19,98 ± 2,53 mg.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Hiperglikemia i nieprawidłowy metabolizm/homeostaza glukozy to cechy PCOS. Poziom glukozy we krwi jest utrzymywany przez połączenie glukozy z diety i produkcji glukozy poprzez glikogenolizę i glukoneogenezę oraz glikogenezę, pod kontrolą hormonów i enzymów. Produkcja glukozy w wątrobie jest hamowana przez obecność zwiększonego poziomu glukozy we krwi. W zaburzeniach nieprawidłowego metabolizmu glukozy regulacja zahamowania produkcji glukozy jest zaburzona, co prowadzi do hiperglikemii. Podczas gdy wiele badań wy.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez granty szkoleniowe z Departamentu Położnictwa i Ginekologii, Baylor College of Medicine (ALG) oraz grant badawczy R-01 (Grant # DK114689) dla CSB, SC i JM z National Institutes of Health.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 0,9% roztwór chlorku sodu | McKesson | 275595 | |
| 10 ml strzykawka z końcówką BD Luer-Lok | VWR | 75846-756 | Dwie strzykawki na zwierzę (jedna na izotopowy roztwór glukozy, jedna na izotopowy roztwór |
| 1-calowa przezroczysta taśma transporowa | 3M 70200400169 | ||
| 1-calowa taśma do etykietowania | Fisher | GS07F161BA | Brand to przykład |
| Strzykawka 5 ml zawierająca płukanie solą fizjologiczną | McKesson | 191-MIH-2235 | Można również przygotować roztwór do płukania heparyny (10 jednostek/ml heparyny w 0,9% chlorku sodu) |
| 5 mm Medipoint Goldenrod lancety dla zwierząt | Fisher Scientific | NC9891620 | 5 mm, jeśli zwierzę jest w wieku od 2 do 6 miesięcy |
| Aceton | Sigma-Aldrich | 650501 | |
| Zaawansowane mieszadło z płytą grzejną | VWR | 97042-602 | Marka jest przykładem |
| Igły BD 27 o średnicy 0,5 cala | Magazyn zdrowia | A283952 | |
| Igły BD 30 o średnicy 0,5 cala | Medvet | 305106 | |
| Rurka z polietylenu (PE) BD Intramedic 0,28 mm ID x 0,61 mm | VWR | 63019-004 | |
| BD Intramedic Rurka polietylenowa (PE) 0,28 mm ID x 0,61 mm | VWR | 63019-004 | |
| Zlewka, 1000 ml | Dowolna marka | ||
| Granulki | |||
| Przezroczyste szklane fiolki VOA z zamkniętą nakrętką | Fisher Scientific | 05-719-120 | Do przechowywania acetonu i próbek krwi Miedziany |
| bezzębny zacisk aligatora do opaski uciskowej | Amazon | Any Brand; gładkie bezzębne zaciski aligatora wykonane z litej miedzi | |
| D-(+)-glukoza >99,5% | Sigma-Aldrich | G8270 | |
| D-glukoza (6,6-D2, 99%) | Cambridge Isotope Laboratories, Inc. | DLM-349-PK | |
| Rurka silastyczna Dow Corning 0,3 mm ID x 0,64 mm OD | VWR | 62999-042 | |
| Szkło powiększające | Amazon | Dowolna marka; podobny do LANCOSC Szkło powiększające z lekkim i podstawką | |
| Microbalance | Ohaus Adventurer Pro | AV264C | Można użyć dowolnego podobnego modelu z dokładnością 0,0001 g |
| Butelka Nalgene, 500 ml | Sigma-Aldrich | B0158-12EA | Lub dowolna podobna marka; Przeciąć na pół (w tym pokrywę) i wyciąć wcięcie wielkości ogona w dolnej części |
| Pompa wielostrzykawkowa PHD Ultra | Aparat Harvarda | 70-3024A | |
| Arkusz | Dowolna marka; do stabilizacji myszy podczas wprowadzania cewnika | ||
| Arkusze i przekładki | Dowolna marka; Służy do trzymania myszy w klatkach podczas infuzji |
Bibliografia
- March, W. A., et al. The prevalence of polycystic ovary syndrome in a community sample assessed under contrasting diagnostic criteria. Human Reproduction. 25 (2), 544-551 (2009).
- Yildiz, B. O., et al.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
