Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Częściowo ukierunkowana ultrawysokosprawna chromatografia sprzężona ze spektrometrią mas Analiza metabolitów fenolowych w osoczu osób w podeszłym wieku

3.7K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/63164

⸱

22 kwietnia 2022

 ,  ,  ,  , 
1Department of Chemical Biological Sciences, Universidad Autónoma de Ciudad Juárez

W tym artykule

Podsumowanie

Celem tego protokołu jest wykrywanie metabolitów fenolowych w osoczu za pomocą metody częściowo ukierunkowanej chromatografii i spektrometrii mas

.

Streszczenie

Grupa 23 starszych osób otrzymała funkcjonalne posiłki (napój i muffinkę) specjalnie opracowane w celu zapobiegania sarkopenii (utrata masy mięśniowej związana z wiekiem). Próbki osocza pobrano na początku interwencji i po 30 dniach od spożywania posiłków funkcjonalnych. Przeprowadzono częściowo ukierunkowaną ultrawysokosprawną chromatografię sprzężoną z analizą masy tandemowej (UPLC-MS/MS) w celu identyfikacji związków fenolowych i ich metabolitów. Białka osocza wytrącono etanolem, a próbki zagęszczono i ponownie zawieszono w fazie ruchomej (acetonitryl 1:1: woda) przed wstrzyknięciem do instrumentu UPLC-MS/MS. Separację przeprowadzono za pomocą kolumny z odwróconymi fazami C18, a związki zidentyfikowano na podstawie ich masy eksperymentalnej, rozkładu izotopowego i wzoru fragmentów. Interesujące nas związki porównano z tymi pochodzącymi z banków danych i wewnętrznej biblioteki częściowo ukierunkowanej. Wstępne wyniki wykazały, że głównymi metabolitami zidentyfikowanymi po interwencji były kwas fenylooctowy, glicytyna, kwas 3-hydroksyfenylowalerinowy i gomisyna M2.

Wprowadzenie

Sarkopenia to postępująca choroba szkieletowa związana z przyspieszoną utratą mięśni w populacji osób starszych. Stan ten zwiększa ryzyko upadków i prowadzi do ograniczonej aktywności życia codziennego. Sarkopenia występuje u około 5%-10% osób w wieku powyżej 65 lat i około 50% osób w wieku 80 lat lub starszych1. Żadne specyficzne leki nie zostały zatwierdzone do leczenia sarkopenii, dlatego ważna jest profilaktyka poprzez aktywność fizyczną i dobrze zbilansowaną dietę1,2. Interwencje żywieniowe ze specjalnie opracowanymi pokarmami wzbogaconymi białkiem mlecznym i niezbędnymi aminokwasami wykazały pozytywne wyniki w zapobieganiu sarkopenii2. W innych badaniach autorzy włączyli do diety witaminy i przeciwutleniacze, takie jak witamina E i izoflawony, zwiększając korzyści dla przyrostu masy mięśniowej w talii i biodrach3.

Brosimum alicastrum Sw. (Ramón) to drzewo, które rośnie w tropikalnych regionach Meksyku; było spożywane przez kultury Majów ze względu na wysoką wartość odżywczą4. Jest dobrym źródłem białka, błonnika, minerałów i przeciwutleniaczy fenolowych, takich jak kwas chlorogenowy5. Ponieważ można ją zmielić na proszek i stosować w produktach do pieczenia lub spożywać w napojach, ostatnie badania oceniały włączenie mąki z nasion Ramón (RSF) do różnych produktów spożywczych w celu poprawy ich wartości odżywczej. Opracowano napój o smaku cappuccino uzupełniony RSF, który był bogaty w błonnik pokarmowy i zawierał ponad 6 g białka na porcję i był wysoce akceptowany przez konsumentów; W związku z tym uznano go za potencjalną alternatywę dla spełnienia specjalnych wymagań dietetycznych6. W kolejnym badaniu RSF wykorzystano również do sformułowania muffinki i nowego napoju bogatego w białko, błonnik pokarmowy, mikroelementy i przeciwutleniacze fenolowe. Muffinka i napój były używane w interwencji dietetycznej dla osób starszych, które spożywały oba produkty dwa razy dziennie przez 30 dni. Po tym okresie stan odżywienia i sarkopenii uczestników poprawił się, a całkowita zawartość fenoli w osoczu wzrosła7. Jednak oznaczanie całkowitych związków fenolowych w osoczu przeprowadzono metodą spektrofotometryczną, więc identyfikacja rzeczywistych związków fenolowych, które zostały wchłonięte, nie była możliwa; Co więcej, metoda ta nie jest całkowicie specyficzna dla związków fenolowych, więc może wystąpić pewne przeszacowanie8.

Identyfikacja i kwantyfikacja związków fenolowych, które są wchłaniane po spożyciu pokarmów bogatych w te przeciwutleniacze, jest trudnym zadaniem, ale jest niezbędne do wykazania biologicznej aktywności tych fitochemikaliów. Biodostępność większości związków fenolowych jest niska; Mniej niż 5% z nich można znaleźć bez przemian strukturalnych w osoczu. Związki fenolowe ulegają kilku biotransformacjom, takim jak metylacja, sulfonacja lub glukuronidacja, które są przeprowadzane przez enterocyty i hepatocyty9. Związki fenolowe są również biotransformowane przez mikrobiotę w katabolity bakteryjne, które mogą wywierać korzystne działanie w organizmie po wchłonięciu do osocza10. Na przykład kwas fenylooctowy jest produktem bakteryjnej przemiany flawonoidów i oligomerycznych proantocyjanidyn, które mogą hamować do 40% adhezji bakterii (Escherichia coli) w drogach moczowych po spożyciu żurawiny11.

Różnorodność strukturalna naturalnie występujących związków fenolowych, w połączeniu z różnorodnością ich metabolitów i niską biodostępnością, sprawia, że ich identyfikacja w osoczu jest jeszcze trudniejsza. Profilowanie metabolomiczne z wykorzystaniem platform analizy spektroskopowej, takich jak magnetyczny rezonans jądrowy (NMR) i tandemowa spektroskopia mas (MS/MS), jest prawdopodobnie najlepszym podejściem do osiągnięcia tego celu; Niestety, sprzęt nie jest łatwo dostępny, a rozwój protokołów analizy jest nadal ograniczony12. W kilku badaniach wykazano, że MS/MS w połączeniu z systemem separacji (takim jak chromatografia cieczowa) jest strategią zmniejszania złożoności widm masowych w badaniach metabolomicznych. Niedawne wprowadzenie metod separacji ultra-wysokosprawnej chromatografii cieczowej (UPLC) skróciło czas analizy oraz zwiększyło rozdzielczość i czułość w porównaniu z konwencjonalnymi protokołami cieczowymi o wysokiej wydajności, dzięki czemu systemy UPLC-MS/MS szybko zostały szeroko zaakceptowane przez społeczność metabolomiki analitycznej13. W ten sposób niektóre badania dotyczyły metabolitów fenolowych i wykrywały glukuronowe pochodne kwasu kawowego, kwercetyny i kwasu ferulowego, a także sulfonowane pochodne kwasu syrynginowego i wanilinowego w osoczu osób po spożyciu żurawiny14. Poprzednie protokoły miały na celu znalezienie związków fenolowych i metabolitów fenolowych w płynach biologicznych, takich jak osocze. Protokoły te opierały się na identyfikacji i kwantyfikacji za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) sprzężonej z detektorem UV-vis 15. Niemniej jednak takie protokoły wymagają stosowania autentycznych standardów w celu oceny bezwzględnej identyfikacji i dokładnej kwantyfikacji. Szeroki zakres badań zidentyfikował najczęstsze metabolity w płynach biologicznych (formy sulfonowane, glukuronidowane i metylowane) przez UPLC-MS i UPLC-MS/MS; Jednak duża część metabolitów bakteryjnych nie została zgłoszona ze względu na brak baz danych zawierających ich pełne informacje16. Identyfikacja metabolitów jest skomplikowana ze względu na koszt i komercyjną dostępność wzorców metabolitów. Dlatego najlepszą strategią może być nieukierunkowana lub częściowo ukierunkowana analiza metabolitów MS/MS, która opiera się na wykorzystaniu informacji o cechach molekularnych (m/z, dokładna masa monoizotopowa, rozkład izotopowy i wzór fragmentacji) w celu określenia tożsamości chemicznej i porównania jej z ogólnodostępnymi internetowymi bazami danych, które zawierają metabolity polifenoli zidentyfikowane w płynach biologicznych po spożyciu polypolyphenol-richts12. Najważniejszymi bazami danych wykorzystywanymi w badaniach UPLC-MS/MS do identyfikacji związków fenolowych i ich metabolitów są Baza Danych Metabolomu Człowieka (HMDB), Biblioteka LipidBlast i inne uzupełniające bazy danych, takie jak PubChem, ChemSpider i Phenol Explorer17.

W niniejszym badaniu, częściowo ukierunkowana metoda UPLC-MS/MS została opracowana do analizy próbek osocza grupy osób starszych biorących udział w badaniu konsumpcji muffinek i napojów zawierających RSF7. Zebrano dane z różnych bezpłatnych internetowych baz danych metabolitów w osoczu i zintegrowano je ze specjalistyczną bazą danych. Dostęp do tej bazy danych można uzyskać automatycznie za pomocą oprogramowania sprzętowego w celu identyfikacji metabolitów polifenolowych w pięciu próbkach osocza przed i po 30-dniowej interwencji żywieniowej. Ma to na celu zidentyfikowanie głównych związków fenolowych lub ich metabolitów, które są wchłaniane ze specjalnie opracowanej żywności funkcjonalnej przeznaczonej do zapobiegania sarkopenii.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Próbki osocza wykorzystane w niniejszym protokole zostały pobrane w poprzednim badaniu zgodnie ze wszystkimi wytycznymi etycznymi i zatwierdzone przez Komisję Etyki i Bioetyki (CIEB-2018-1-37) Universidad Autónoma de Ciudad Juárez. Pełny protokół ekstrakcji i identyfikacji związków fenolowych oraz metabolitów w osoczu metodą UPLC-MS/MS przedstawiono na Rysunku 1.

Schemat wytrącania i ekstrakcji białek, analiza UPLC-QTOF w celu identyfikacji metabolitów w osoczu.
Rysunek 1: Schematyczne przedstawienie ekstrakcji i identyfikacji związków fenolowych oraz metabolitów w osoczu przy użyciu półcelowanej metody UPLC-MS/MS. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

1. Przygotowanie próbek

  1. Próbki osocza przechowywać w temperaturze -80 °C do czasu analizy.
  2. Próbki osocza rozmrozić w temperaturze pokojowej przez 15 min.
    UWAGA: W celu przyspieszenia procesu (5 min) próbki można umieścić w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C.
  3. Do mikroprobówki o pojemności 2 mL przenieść 200 µL próbki osocza i wymieszać z 1 000 µL czystego etanolu. Próbkę osocza mieszać na wortexie przez 30 s.
    UWAGA: Podczas pracy z próbkami osocza zawsze należy używać rękawiczek.
  4. Wirować próbkę przy 6 580 x g przez 5 min. Po wirowaniu zebrać nadosad za pomocą mikropipety lub pipety Pasteura i przenieść go do nowej mikroprobówki. Nadosad przechowywać w temperaturze 4 °C.
  5. Osad z poprzedniego etapu wymieszać z 1 000 µL 100% etanolu, mieszać na wortexie przez 30 s, a następnie wirować przy 6 580 x g przez 5 min.
    UWAGA: Osad jest silnie zbity i wymaga dokładnego resuspensowania, aby zapewnić kontakt próbki z czystym etanolem. Zaleca się użycie mikropipety do wypłukania osadu etanolem.
  6. Po wirowaniu zebrać nadosad i wymieszać go z nadosadem uzyskanym wcześniej w kroku 1.4. w mikroprobówce o pojemności 2 mL.
  7. Usunąć etanol z próbki za pomocą czystego azotu (99,997%) pod ciśnieniem 135 psi. Igłę należy trzymać 1 cm od górnej krawędzi mikroprobówki, aby zapobiec utracie próbki, i przepłukiwać aż do wysuszenia próbki. Odparowanie etanolu nie wymaga podgrzewania.
    UWAGA: Przepływ azotu musi być niski, aby zapobiec utracie próbki. Po odparowaniu etanolu należy kontynuować przepływ azotu przez co najmniej 5 min, aby zapewnić całkowite wysuszenie próbki. Na tym etapie można przerwać protokół; próbki należy przechowywać w temperaturze -20 °C. Należy unikać przechowywania próbek przez więcej niż 12 h.
  8. Wysuszone próbki resuspensować w 100 µL mieszaniny acetonitrylu i wody w proporcji 50:50 (v:v).
  9. Próbkę przefiltrować przez nylonową membranę strzykawkową 0,45 µm bezpośrednio do mikroinsertu w fiolce HPLC.
    UWAGA: Próbki w fiolkach można przechowywać w temperaturze -20 °C przed analizą. Próbki przechowywać nie dłużej niż przez 8 h. Zaleca się wstrzyknięcie próbek do systemu UPLC bezpośrednio po filtracji.

2. Analiza UPLC-MS/MS

  1. Wstrzyknij 3 µL próbki do układu UPLC wyposażonego w kolumnę odwrotnej fazy C18 (50 mm x 2.1 mm; 1.8 µm). Ustaw temperaturę autosamplera na 20 °C oraz termostatu kolumny na 25 °C. Każdą próbkę wstrzyknij w trzech powtórzeniach.
  2. Jako rozpuszczalnik A zastosuj 0,1% (v:v) kwasu mrówkowego w wodzie, a jako rozpuszczalnik B 100% acetonitrylu. Ustaw przepływ na 0,4 mL/min oraz program gradientowy w następujący sposób: 0-1 min 10% B, 1-4 min 30% B, 4-6 min 38% B, 6-8 min 60% B, 8-8,5 min 60% B, 8,5-9 min 10% B (Tabela 1).
  3. Ustaw spektrometr mas na tryb jonizacji ujemnej. Jako gaz osuszający zastosuj azot w temperaturze 340 °C i przy przepływie 13 L/min. Ustaw ciśnienie nebulizatora na 60 psi. Napięcie kapilary ustaw na 4,000 V, napięcie fragmentora na 175 V, a napięcie skimmera na 65 V. Zastosuj energię kolizyjną 20 V (Tabela 2).
  4. Skanuj masy w zakresie stosunku masy do ładunku (m/z) od 100 do 1100, a dla MS/MS skanuj masy w zakresie 50-1000 m/z (Tabela 2). Ustaw akwizycję danych w trybie Auto MS/MS. Jako masy referencyjne zastosuj: 119,036 oraz 966,0007.
Czas (min)Rozpuszczalnik A (0,1% kwasu mrówkowego w wodzie do HPLC)Rozpuszczalnik B (100% acetonitrylu)
0 do 19010
1 do 47030
od 4 do 66238
od 6 do 84060
8 do 8,54060
8,5 do 99010

Tabela 1: Gradient fazy ruchomej zastosowany do rozdziału związków fenolowych metodą UPLC.

Tryb jonizacjiUjemny
Gaz osuszającyAzot w 340 °C, przepływ 13 L/min
Ciśnienie nebulizatora60 psi
Napięcie kapilary175 V
Zakres mas skanowania MS100-1100 m/z
Zakres mas skanowania MS/MS50-1000 m/z

Tabela 2: Parametry jonizacji dla analizy MS/MS.

3. Konstrukcja bazy danych

  1. Wyszukaj związki fenolowe, metabolity fenolowe lub inne interesujące związki w literaturze naukowej.
  2. Otwórz oprogramowanie do zarządzania bazami danych dołączone do systemu UPLC. Wybierz File | New Personal Database Compound Library (PCDL) | Create New PCDL. Wybierz typ PCDL: LC/MS Metabolomics. Nadaj nazwę bibliotece PCDL. Następnie wybierz Create.
  3. Na pasku narzędzi wybierz PCDL , a następnie opcję Allow editing. Następnie kliknij przycisk Find compounds.
    UWAGA: Ponieważ jest to nowa biblioteka PCDL, tabela wyników będzie pusta. Zmieni się to po dodaniu nowych związków do PCDL.
    1. Dodaj związki do specjalistycznej osobistej biblioteki związków w bazie danych, kopiując je z ogólnej biblioteki instrumentu. Otwórz istniejącą bazę danych instrumentu zawartą w oprogramowaniu do zarządzania bazami danych. Kliknij przycisk Find compounds. W opcji Single search wprowadź kryteria wyszukiwania, aby znaleźć interesujący związek.
      UWAGA: Związki można wyszukiwać według nazwy, wzoru cząsteczkowego, masy dokładnej oraz czasu retencji.
    2. W tabeli wyników wyszukiwania związków wybierz interesujący związek. Aby wybrać więcej niż jeden związek, kliknij pierwszy związek, przytrzymaj klawisz CTRL , a następnie klikaj kolejne interesujące związki. Następnie kliknij prawym przyciskiem myszy na wszystkie zaznaczone związki i wybierz Append to PCDL.
    3. W nowym oknie wyszukaj i wybierz plik specjalistycznej osobistej bazy danych. Zaznacz pola Include spectra for compounds if present oraz Include ion mobility info for compounds if present. Kliknij przycisk Append . W nowym oknie dialogowym wybierz Yes , aby sprawdzić nowo dodane związki. Wybierz No , aby kontynuować wyszukiwanie kolejnych interesujących związków.
  4. Jeśli interesujące związki nie są dostępne w ogólnej bibliotece instrumentu, dodaj nowe związki ręcznie.
    1. Otwórz specjalistyczną osobistą bazę danych. Po otwarciu postępuj zgodnie z krokiem 3.3. Wybierz opcję Edit compounds. Kliknij przycisk Add new.
    2. W górnej sekcji okna uzupełnij informacje dotyczące nowego związku. Wprowadź wzór, nazwę, nazwę IUPAC, numer CAS, identyfikator Chemspider oraz inne identyfikatory.
    3. Skorzystaj z informacji dostępnych w bezpłatnych bibliotekach internetowych (Chemspider, PubChem i Phenol Explorer), aby uzupełnić dane dla nowego, interesującego związku. Po zakończeniu kliknij przycisk Save as new, aby zapisać informacje o nowym związku w specjalistycznej osobistej bazie danych.
      UWAGA: Podczas dodawania informacji z bezpłatnych bibliotek upewnij się, że wprowadzasz dane o związku bez uwzględnienia obecności jonów chlorkowych lub jodkowych. Może to zmienić masę dokładną i wzór cząsteczkowy interesującego związku.
  5. Powtórz proces dla wszystkich interesujących związków, aby uzupełnić specjalistyczną osobistą bazę danych.

4. Analiza danych

  1. Użyj oprogramowania do analizy jakościowej instrumentu, aby zidentyfikować związki fenolowe i metabolity fenolowe obecne w próbkach.
  2. Otwórz plik próbki. W panelu Chromatogram wybierz Define Chromatograms i wyodrębnij całkowity chromatogram jonowy (TIC), wyodrębniony chromatogram jonowy MS (EIC) oraz EIC MS/MS. Wybierz opcję całkowania chromatogramu.
  3. W panelu Find Compounds wybierz Find by Formula-Options. W nowym oknie wybierz Formula Source, a następnie opcję Database/Library. Znajdź wcześniej utworzoną osobistą bazę danych i kliknij Open.
  4. Wybierz opcję Formula Matching i ustaw tolerancję dopasowania masy na 5 ppm.
    UWAGA: Można ustawić inną tolerancję dopasowania mas, np. 10 ppm; różnica ta zależy od zastosowanego spektrometru mas.
  5. Wybierz opcję Negative Ions i zaznacz tylko pole dialogowe -H. W opcji Results zaznacz pola Extract EIC, Extract Cleaned Spectrum, Extract Raw Spectrum oraz include Structure.
  6. Wybierz opcję Result Filters. Zaznacz Warn if score is i ustaw wartość dopasowania wyniku na 80,00%. Zaznacz Do not match if the score is i ustaw wynik na 75,00%.
    UWAGA: W razie potrzeby wartości dopasowania/braku dopasowania można zmienić na niższe. Zmniejszy to jednak dokładność identyfikacji.
  7. Kliknij Find Compounds by Formula , aby zidentyfikować interesujące związki w próbce.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Proces krok po kroku służący do identyfikacji metabolitów fenolowych za pomocą półcelowej analizy UPLC-MS/MS próbek osocza w trybie ujemnym przedstawiono na Rycini 2. Najpierw za pomocą oprogramowania jakościowego instrumentu uzyskano całkowity chromatogram jonowy (TIC) z ekstraktu związków fenolowych osocza (otrzymanego po wytrąceniu białek z całkowitej próbki osocza). Następnie wykorzystano chromatogram wyekstrahowanych jonów, a dokładną masę i wzór fragmentacji (anal...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Identyfikacja i kwantyfikacja bioaktywnych fitochemikaliów, które są wchłaniane po spożyciu żywności lub suplementu diety, mają kluczowe znaczenie dla wykazania i zrozumienia korzyści zdrowotnych tych związków i żywności, która je zawiera. W niniejszej pracy opracowano metodę UPLC-MS/MS, mającą na celu wyłącznie identyfikację głównych związków fenolowych i ich metabolitów, których stężenie w osoczu wzrosło po 30-dniowej interwencji żywieniowej dwoma produktami spożywczymi opracowanymi specjalnie dla osób starszych. Założ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Wszyscy autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Podziękowania

Autorzy są wdzięczni za wsparcie finansowe od CONACYT, Meksyk (CB- 2016-01-286449) i UACJ-PIVA (Projekty 313-17-16 i 335-18-13). OAMB pragnie podziękować CONACYT za stypendium doktoranckie. Dziękujemy za wsparcie techniczne ze strony Biura Produkcji Multimedialnej UACJ.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
AcetonitrylTediaAl1129-001LC Spektrometria mas
AutosamplerAgilent TechnologiesG4226A1290 Infinity series
C18 kolumna z odwróconymi fazamiAgilent Technologies959757-902Zorbax Eclipse plus C18 2,1x50 mm, 1,8 μ m; Wirówka HD o szybkiej rozdzielczości
Eppendorf5452000018Mini Spin; Rotor F-45-12-11
Komora kolumny z termostatemAgilent TechnologiesG1316C1290 Detektor
diodowy serii Infinity (UV-Vis)Agilent TechnologiesG4212BSeria 1260 Infinity
Źródło jonizacji elektrorozpylaniaAgilent TechnologiesG3251BPodwójny opryskiwacz Źródło ESI
Kwas mrówkowyJ.T. Baker0128-02Odczynnik Baker, ACS
Mass Hunter Data AcquisitionAgilent TechnologiesG3338AA
Mass Hunter Personal Compound Datbase and Library ManagerAgilent TechnologiesG3338AA
Mass Hunter Analiza jakościowaAgilent TechnologiesG3338AA
Probówka do mikrowirówekmarkiBR780546Probówka do mikrowirówek, 2 ml z pokrywką
Pure etanolSigma-AldrichE7023-1L200 proof, do biologii molekularnej
Q-TOF LC/MSAgilent TechnologiesG6530B6530
Pompa czwartorzędowaAgilent TechnologiesG4204A1290 Seria Infinity
Filtr strzykawkowyThermo Scientific44514-NN17 mm, 0,45 μ m, nylonowa membrana
TermostatAgilent TechnologiesG1330B1290 Seria Infinity
FiolkaAgilent Technologies8010-0199Bursztyn, PFTE czerwony silikon 2 ml z zakrętką i niebieskimi nakrętkami
Wkładka do fiolkiAgilent Technologies5183-2089Wkładka do fiolki 200 μ L do standardowego otwarcia 2 ml, stożkowy
WaterTediaWL2212-001LC Spektrometria mas
o dokładnej masie

Bibliografia

  1. Morley, J. E., Anker, S. D., von Haehling, S. Prevalence, incidence, and clinical impact of sarcopenia: facts, numbers, and epidemiology-update 2014. Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. 5 (4), 253-259 (2014).
  2. Cruz-Jentoft, A. J., Sayer, A. A. Sarcopenia. The Lancet. 393 (10191), 2636-2646 (2019).
  3. Beaudart, C., et al. Nutrition and physical activity in the prevention and treatment of sarcopenia: systematic review. Osteoporosis International. 28 (6), 1817-1833 (2017).
  4. Ozer, H. K. Phenolic compositions and antioxidant activities of Maya nut (Brosimum alicastrum): Comparison with commercial nuts. International Journal of Food Properties. 20 (11), 2772-2781 (2017).
  5. Subiria-Cueto, R., et al. Brosimum alicastrum Sw. (Ramón): An alternative to improve the nutritional properties and functional potential of the wheat flour tortilla. Foods. 8 (12), 1-18 (2019).
  6. Martínez-Ruiz, N., Torres, L. E. J., del Hierro-Ochoa, J. C., Larqué-Saavedra, A. Bebida adicionada con Brosimum alicastrum sw.: Una alternativa para requerimientos dietarios especiales. Revista Salud Pública y Nutrición. 18 (3), 1-10 (2019).
  7. Rodríguez-Tadeo, A., et al. Functionality of bread and beverage added with brosimum alicastrum sw. Seed flour on the nutritional and health status of the elderly. Foods. 10 (8), 1-21 (2021).
  8. Muñoz-Bernal, ÓA., et al. Nuevo acercamiento a la interacción del reactivo de Folin-Ciocalteu con azúcares durante la cuantificación de polifenoles totales. TIP Revista Especializada en Ciencias Químico-Biológicas. 20 (2), 28-33 (2017).
  9. Luca, S. V., et al. Bioactivity of dietary polyphenols: The role of metabolites. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 60 (4), 626-659 (2020).
  10. Kawabata, K., Yoshioka, Y., Terao, J. Role of intestinal microbiota in the bioavailability and physiological functions of dietary polyphenols. Molecules. 24 (2), (2019).
  11. de Llano, D. G., Moreno-Arribas, M. V., Bartolomé, B. Cranberry polyphenols and prevention against urinary tract Infections: Relevant considerations. Molecules. 25 (15), (2020).
  12. Alsaleh, M., et al. Mass spectrometry: A guide for the clinician. Journal of Clinical and Experimental Hepatology. 9 (5), 597-606 (2019).
  13. Wang, X., Sun, H., Zhang, A., Wang, P., Han, Y. Ultra-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry as a sensitive and powerful technology for metabolomic studies. Journal of Separation Science. 34 (24), 3451-3459 (2011).
  14. Feliciano, R. P., Mills, C. E., Istas, G., Heiss, C., Rodriguez-Mateos, A. Absorption, metabolism and excretion of cranberry (poly)phenols in humans: A dose response study and assessment of inter-individual variability. Nutrients. 9 (3), (2017).
  15. Mateos, R., Goya, L., Bravo, L. Uptake and metabolism of hydroxycinnamic acids (chlorogenic, caffeic, and ferulic acids) by HepG2 cells as a model of the human liver. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 54 (23), 8724-8732 (2006).
  16. Rodriguez Lanzi,, Perdicaro, C., Antoniolli, D. J., Piccoli, A., Vazquez Prieto, M. A., Fontana, A. Phenolic metabolites in plasma and tissues of rats fed with a grape pomace extract as assessed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Archives of Biochemistry and Biophysics. , 28-33 (2018).
  17. Hou, Y., He, D., Ye, L., Wang, G., Zheng, Q., Hao, H. An improved detection and identification strategy for untargeted metabolomics based on UPLC-MS. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 191, 113531(2020).
  18. Nagy, K., et al. First identification of dimethoxycinnamic acids in human plasma after coffee intake by liquid chromatography-mass spectrometry. Journal of Chromatography A. 1218 (3), 491-497 (2011).
  19. Marmet, C., Actis-Goretta, L., Renouf, M., Giuffrida, F. Quantification of phenolic acids and their methylates, glucuronides, sulfates and lactones metabolites in human plasma by LC-MS/MS after oral ingestion of soluble coffee. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 88, 617-625 (2014).
  20. McCord, J., Strynar, M. Identifying per-and polyfluorinated chemical species with a combined targeted and non-targeted-screening high-resolution mass spectrometry workflow. Journal of Visualized Experiments. 2019 (146), 1-15 (2019).
  21. Muñoz-Bernal, ÓA., et al. Phytochemical characterization and antiplatelet activity of Mexican red wines and their by-products. South African Journal of Enology and Viticulture. 42 (1), 77-90 (2021).
  22. Muñoz-Bernal, ÓA. Enriquecimiento de un vino tinto con un extracto de compuestos fenólicos provenientes de orujo de uva: bioaccesibilidad, análisis sensorial y respuesta biológica. Universidad Autónoma de Ciudad Juárez. , (2021).
  23. Low, D. Y., et al. Data sharing in PredRet for accurate prediction of retention time: Application to plant food bioactive compounds. Food Chemistry. , 357(2021).
  24. Sánchez-Patán, F., et al. Gut microbial catabolism of grape seed flavan-3-ols by human faecal microbiota. Targeted analysis of precursor compounds, intermediate metabolites and end-products. Food Chemistry. 131 (1), 337-347 (2012).
  25. Zhang, X., Sandhu, A., Edirisinghe, I., Burton-Freeman, B. M. Plasma and urinary (poly)phenolic profiles after 4-week red raspberry (Rubus idaeus L.) intake with or without fructo-oligosaccharide supplementation. Molecules. 25 (20), (2020).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Analiza UPLC MS MSpr bki osoczachromatografia p celowanazwi zki fenoloweinterwencja ywieniowaodwr cona faza C18metabolomika p yn w biologicznych
Częściowo ukierunkowana ultrawysokosprawna chromatografia sprzężona ze spektrometrią mas Analiza metabolitów fenolowych w osoczu osób w podeszłym wieku
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.