Method Article

Generowanie modelu niedokrwienia haka i reperfuzji przy użyciu trzydniowego rozwijającego się zarodka pisklęcia

DOI:

10.3791/63288

⸱

February 19th, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Stem Cell and Restorative Neurology, Department of Biotechnology, Era’s Lucknow Medical College Hospital, Era University, 2Era University, 3Department of Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Era University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten artykuł opisuje modelowanie niedokrwienno-reperfuzyjne (I/R) w 3-dniowym zarodku pisklęcia za pomocą dostosowanego haka do igły rdzeniowej, aby lepiej zrozumieć rozwój i leczenie I/R. Ten model jest prosty, szybki i niedrogi.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zaburzenia niedokrwienia i reperfuzji (I/R), takie jak zawał mięśnia sercowego, udar mózgu i choroby naczyń obwodowych, to tylko niektóre z głównych przyczyn chorób i śmierci. Obecnie dostępnych jest wiele modeli in vitro i in vivo do badania mechanizmu I/R w chorobach lub uszkodzonych tkankach. Jednak do tej pory nie zgłoszono żadnego modelu I/R in ovo, który pozwoliłby na lepsze zrozumienie mechanizmów I/R i szybsze badania przesiewowe leków. W tym artykule opisano modelowanie I/R przy użyciu dostosowanego haka do igieł rdzeniowych w 3-dniowym zarodku pisklęcia, aby zrozumieć mechanizmy rozwoju I/R i leczenia. Nasz model może być wykorzystany do badania anomalii na poziomie DNA, RNA i białek. Ta metoda jest prosta, szybka i niedroga. Obecny model może być stosowany niezależnie lub w połączeniu z istniejącymi modelami I/R in vitro i in vivo.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Uszkodzenie tkanki niedokrwienno-reperfuzyjnej zostało powiązane z wieloma patologiami, w tym zawałami serca, udarem niedokrwiennym, urazami i chorobami naczyń obwodowych1,2,3,4,5. Wynika to przede wszystkim z braku kompleksowego zrozumienia przebiegu choroby oraz braku skutecznego modelu badawczego. Uraz niedokrwienny występuje, gdy dopływ krwi do określonego obszaru tkanki zostaje odcięty. W rezultacie tkanka niedokrwienna ostatecznie ulega nekrotyzji, chociaż tempo różni się w zależności od tkanki. W zwi....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Instytucjonalna Komisja Etyki Zwierząt w Erze w Lucknow Medical College and Hospital wydała pisemne zrzeczenie się stwierdzające, że nie jest wymagane żadne formalne zatwierdzenie do przeprowadzenia tych eksperymentów zgodnie z Komitetem ds. Celów Kontroli i Nadzoru nad Eksperymentami na Zwierzętach (CPCSEA). Przestrzegano jednak standardowych procedur operacyjnych, aby zminimalizować ryzyko wystąpienia zaburzeń embrionalnych.

1. Przygotowanie buforu (Tabela 1)

  1. Przygotuj roztwór Ringera
    1. Aby przygotować roztwór Ringera, rozpuścić 0,72 g NaCl (123 mM), 0,017 g CaCl2 (1,53 mM), 0,037 g KCl (4....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Technika obrazowania przepływu krwi metodą Dopplera została wykorzystana do oceny skuteczności naszego modelu. Krótko mówiąc, porównaliśmy dane z grupy kontrolnej z danymi z grupy RVA, aby określić sukces naszego dzieła. Rysunek 4A przedstawia typowy strumień związany ze zwierzęciem kontrolnym, podczas gdy Rysunek 4B przedstawia wyniki uzyskane z RVA. Cyfry od 1 do 8 reprezentują różne zdarzenia związane z fazami I/R. Krótko mówiąc, liczby 1-3 odpowiadają fazie .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Celem badań nad niedokrwieniem i reperfuzją jest stworzenie strategii terapeutycznych, które zapobiegają śmierci komórek i sprzyjają rekonwalescencji29,30. Aby przezwyciężyć obecne ograniczenia w badaniach I/R, zaprojektowaliśmy model zarodka pisklęcia Hook I/R, aby uzyskać wiarygodny i powtarzalny model I/R. O ile nam wiadomo, jest to pierwszy model I/R, jaki kiedykolwiek stworzono na 3-dniowym zarodku pisklęcia do rutynowych eksperymentów I/R, oprócz badania sy.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chcemy wyrazić naszą wdzięczność Hari Shankarowi za jego krytyczny wkład podczas filmowania i montażu, Panu Baqer Hussainowi za podkładanie głosu, Panu Asgharowi Rizvi za montaż wideo, Panu Mohammadowi Haiderowi za sesje wideo, Panu Mohammadowi Danish Siddiqui za pomoc podczas eksperymentów.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
(-80° C) zamrażarkaHaier, Chiny-1,5
ml probówka wirówkowaTARSONS, Indie500010X 100mm
szalka Petriego (sterylna)Tarsons, Indie460050
18G Igła (18G&razy; 1.5 (1.25 razy; 38mm)Ramsons, Indie13990
1mL StrzykawkaIgła DISPO VAN-26G
(26G& razy; 1/2 (10.45x13mm)DISPO VAN, indie30722D
37° Inkubator do jaj C z regulowaną wilgotnością procentowąGentek, IndieGL-100
37° Inkubator laboratoryjny CSCIENCE TECH, IndieCB 101-14
3-metyladenina (3-MA)Sigma Aldrich, USAM9281
3mL pipeta pastwiskowaTARSONS, Indie940050
50mL zlewkaTARSONS,Indie-5mL
strzykawkaDISPO VAN, IndieIP53
70% etanolMerck Millipore, Stany Zjednoczone64-17-5
Taśma klejąca/taśma wiolonczelowaSunrise,Indie-Podkłady
Ambra1Applied Biosystems, Foster city, USAHs00387943_m1
Technologia sygnalizacji komórkowejIgG przeciw myszym7076S
Anti-Rabbit IgGJackson Immuno Research Laboratories, USA711-035-152
Atg7R& D Systems, Stany ZjednoczoneMAB6608
Startery Atg7Applied Biosystems, Foster city, USAHs00893766_m1
Torba do autoklawuTarsons, Indie550022
Autoklaw Maszynawyprodukowana lokalnie, Lucknow,Indie-Beclin-1
Proteintech, USA66665-1-Ig
Beta ActinImmunoTag, USAITT07018
Albumina surowicy bydlęcejHimedia, Bombaj, IndieTC194
Chlorek wapniaHimedia, Bombaj, IndieGRM534
KatalazaImmunoTag, USAITT5155
Chusteczki czyszcząceKimberly-Clark, Indie370080
Rozszczepiona kaspaza3ImmunoTag, USAITT07022
di-sodowy wodorofosforan siedmiowodnyHimedia, Bombaj, IndieGRM39611
Dopplerowski przepływomierz krwiPrzyrząd Moors, Wielka BrytaniamoorVMS-LDF1
Stojak na jajka-
Stojak na jajka
GAPDHImmunoTag, USAM1000110
Startery GAPDHApplied Biosystems, Foster city, USA
GlycineHimedia, Bombaj, IndieMB013
Tacka nerkowaHOSPITO-LC3A
/BCell Signaling Technology, USA4108S
Laboratoria metanoluRankem, Bombaj, IndieM0252
MikromanipulatorNarishige, JaponiaM-152
N-acetylo-L-cysteina (NAC)Sigma Aldrich, Stany ZjednoczoneA7250
NaringeninaSigma Aldrich, StanyZjednoczone 67604-48-2
NF-kβThermo Fisher Scientific, StanyZjednoczone 51-0500
NLRP3ImmunoTag, Stany ZjednoczoneITT07438
Szczypce do nosaLokalnie wyprodukowane, Lucknow,Indie-Kleszcze
do oczuStoelting, Niemcy52106-40
z tęczówką oka, Jaipur, IndieMikronożyczki Hard Age Vannas kątowe 8 CM / 3 1/8 "
OHP marker Camlin,
ImmunoTag, StanyZjednoczone ITT08329
Spiczaste nożyczki z ostrymi krawędziamiStoelting, Niemcy52132-11
Chlorek potasuHimedia, Bombaj, IndieMB043
Fosforan potasu jednozasadowy bezwodnyHimedia, Bombaj, IndieMB050
Inhibitor proteazyAbcam, Stany ZjednoczoneAb65621
SOD-1ImmunoTag, Stany ZjednoczoneITT4364
Chlorek soduFisher Scientific, Bombaj, Indie27605
Dodecylosiarczan soduHimedia, Bombaj, IndieGRM886
Igła do rdzenia kręgowego 25GA; 3,50 cala (90,51 x 90 mm)Ramson, IndieGS-2029
Mikroskop chirurgiczny z zoomem stereoskopowymOlympus, JaponiaOdrzutnik strzykawek SZ2-STU3
BIOHAZARD882210
Kleszcze zębateStoelting, Niemcy52102-30
Tris BaseG Biosciences, Stany ZjednoczoneRC1217
Tris Kwas solnyHimedia, Bombaj, IndieMB030
Tween 20G Biosciences, Stany ZjednoczoneRC1227
Jaja 0-dniowe z kurczaka White Leghorn--
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMKMP Biomedicals, LLC, USAFK009
, USA ---Hs02758991_g1Instrumenty chirurgiczne Tufft Indie-ORP-150

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauzia, E., et al. Chick Embryo: A Preclinical Model for Understanding Ischemia-Reperfusion Mechanism. Frontiers in Pharmacology. 21 (9), 1034(2018).
  2. Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nature Med....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Ischemia ReperfusionChick Embryo ModelIn Ovo ModelHook Ischemia ModelDoppler Blood FlowRight Vitelline ArteryWestern BlottingAutophagy MarkersInflammatory CytokinesApoptosis Pathways

Related Articles