Artykuł metodologiczny

Ocena analizatora przyłóżkowego do pomiaru leukocytów krwi obwodowej

DOI:

10.3791/63364

22 marca 2022

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokół pomiaru leukocytów krwi obwodowej za pomocą analizatora leukocytów opartego na karcie POCT jest przedstawiony tutaj. Te same próbki krwi zostały przebadane przez dwa automatyczne analizatory hematologiczne w celu oceny spójności i dokładności wyników. Wyniki pokazały, że oceniany analizator miał dobrą korelację z układem referencyjnym.

Streszczenie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Białe krwinki (WBC) są ważnym wskaźnikiem stanu zapalnego w organizmie i mogą pomóc w odróżnieniu infekcji bakteryjnych od wirusowych. Obecnie większość podstawowych instytucji medycznych w Chinach ma słaby odsetek przyjęcia technologii badania krwi, a system wykrywania hematologii o wysokim stosunku ceny do wydajności i łatwej obsłudze jest pilnie potrzebny w ośrodkach podstawowej opieki zdrowotnej. W artykule przedstawiono zasadę działania i procedury działania analizatora leukocytów opartego na karcie do badań przyłóżkowych (POCT) (system oceniany), który służył do wykrywania wskaźników WBC, takich jak neutrofile, limfocyty i komórki grupy pośredniej (w tym eozynofile, bazofile i monocyty) we krwi pełnej. Wyniki ocenianego systemu porównano z wynikami z dwóch komercyjnych automatycznych analizatorów hematologicznych (system referencyjny). Przeanalizowano korelację i spójność pomiędzy ocenianym systemem a komercyjnymi układami odniesienia. Wyniki wykazały, że liczba WBC i liczba granulocytów wykrytych przez oceniany i referencyjny układ wykazywały silną dodatnią korelację (odpowiednio rs = 0,972 i 0,973), podczas gdy liczba limfocytów wykazywała stosunkowo niską korelację (rs = 0,851). Wykres Blanda-Altmana wykazał, że główna różnica między wartościami wykrytymi przez oceniany system a systemami odniesienia mieści się w granicach 95% zgodności (LoA), co wskazuje, że oba systemy są w dobrej zgodności. Podsumowując, oceniany system charakteryzuje się doskonałą korelacją, solidną spójnością i wiarygodnym porównaniem z wynikami powszechnie stosowanych automatycznych analizatorów hematologicznych. Idealnie nadaje się do wykrywania WBC w podstawowych placówkach medycznych, w których w pełni automatyczny analizator hematologiczny pięciu kategorii jest niedostępny, szczególnie w znormalizowanym okresie zapobiegania i kontroli COVID-19.

Wprowadzenie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Liczba białych krwinek (WBC) lub różnica jest ważnym wskaźnikiem odzwierciedlającym stan zapalny organizmu, który może odróżnić infekcję bakteryjną od infekcji wirusowej. Analiza WBC jest również pomocna w kierowaniu dalszą diagnozą i leczeniem1. Obecnie w pełni automatyczny analizator hematologiczny z pięcioma klasyfikacjami jest szeroko stosowany w dużych i średnich jednostkach medycznych, ponieważ jest automatyczny, ma wysoką wydajność, daje dokładne i wiarygodne wyniki oraz skutecznie zmniejsza intensywność pracy techników laboratoryjnych. Odgrywa ważną rolę w badaniu klinicznym2,3. Jednak większość podstawowych instytucji medycznych, takich jak ośrodki opieki zdrowotnej i prywatne kliniki, ma niski wskaźnik przyjęcia analizatora hematologicznego. Według ogólnokrajowego, wieloośrodkowego badania dotyczącego budowy laboratoriów klinicznych w Chinach, budowa laboratoriów w podstawowych placówkach medycznych jest niewystarczająca, o czym świadczą między innymi małe rozmiary laboratoriów, niewystarczająca transmisja talentów oraz rozprzestrzenianie się nauki i technologii na wsi4.

Od grudnia 2019 roku COVID-19 zaczął rozprzestrzeniać się na całym świecie i przekształcił się w globalną pandemię. W "erze postepidemicznej" zaproponowano szereg krajowych polityk mających na celu wdrożenie znormalizowanych środków zapobiegania i kontroli sytuacji epidemicznych. Laboratorium podstawowych placówek medycznych odgrywa ważną rolę w oddolnej diagnostyce i leczeniu oraz profilaktyce i kontroli chorób. Jest to pierwsza linia obrony i kontroli w sytuacjach epidemicznych i ma kluczowe znaczenie dla zapobiegania i kontroli COVID-195. Niektóre badania wykazały, że wykrycie limfocytów krwi obwodowej i neutrofili przyczyni się do badań przesiewowych, diagnozy i leczenia pacjentów z COVID-19 oraz że stosunek neutrofili do limfocytów może być również stosowany jako kliniczne wskaźniki wczesnego ostrzegania przed ciężkim i krytycznym COVID-196,7. Co więcej, wykrywanie leukocytów ma tę zaletę, że zapewnia szybki raport. Placówki podstawowej opieki zdrowotnej i opieki zdrowotnej mogą szeroko zakrojonie wykrywać leukocyty, aby pomóc w wykrywaniu i badaniu przesiewowym podejrzanych infekcji na czas.

Analizator leukocytów oparty na karcie POCT (system oceniany; patrz Tabela Materiałów) to analizator komórek krwi oparty na złotym standardzie "Zasada Coultera". Oceniany system dostarcza wyniki analizy ilościowej jednego histogramu WBC i siedmiu parametrów krwi, w tym liczby krwinek białych, liczby granulocytów (Gran#), procentu granulocytów (Gran%), liczby limfocytów (Lym#), procentu limfocytów (Lym%), liczby komórek pośrednich (Mid#) i procentu komórek pośrednich (Mid%). Wykorzystuje innowacyjną technologię opartą na kartach i ma zalety, takie jak dostępność jednoosobowego zestawu do wykrywania, brak odpadów płynnych, szybkie wykrywanie w 30 sekund, brak rutynowej konserwacji i przyjazna dla użytkownika obsługa. Dlatego szczególnie dobrze nadaje się do podstawowych placówek medycznych. Badanie to ma na celu ocenę skuteczności wykrywania klinicznego analizatora leukocytów opartego na karcie POCT poprzez porównanie z dwoma w pełni automatycznymi komercyjnymi analizatorami hematologicznymi (system referencyjny 1 i system referencyjny 2; patrz tabela materiałów) z laboratoriów dwóch dużych szpitali publicznych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To badanie i wykorzystanie próbek ludzkiej krwi zostały zatwierdzone przez Komitet Etyki Pierwszego Szpitala Stowarzyszonego Uniwersytetu Medycznego w Kantonie (GYYY-2016-73). Wszyscy uczestnicy wyrazili pisemną zgodę samodzielnie lub za pośrednictwem rodziców (w przypadku dzieci).

1. Podstawowe informacje o grupie badanej

UWAGA: Krew żylna została pobrana od pacjentów, którzy odwiedzili Pierwszy Szpital Stowarzyszony Uniwersytetu Medycznego w Kantonie (Szpital 1) i Piąty Szpital Stowarzyszony (Zhuhai) Uniwersytetu Medycznego Zunyi (Szpital 2). Przyrządem używanym do rutynowego badania krwi w Szpitalu 1 jest System Referencyjny 1, podczas gdy Szpital 2 korzysta z Systemu Referencyjnego 2.

  1. Łącznie pobrano 1066 próbek krwi od pacjentów, którzy odwiedzili Szpital 1 (532) i Szpital 2 (534) oraz przeszli rutynowe badania krwi w styczniu 2021 r.
    UWAGA: Pacjenci zostali wybrani losowo, pochodzili z wielu oddziałów i cierpieli na różne choroby.
  2. Wyklucz pacjentów z niekompletną dokumentacją medyczną oraz tych, którzy nie chcieli współpracować lub odmówili wyrażenia świadomej zgody. Należy wykluczyć tych pacjentów, u których próbki krwi wykazywały hemolizę, krew lub zmętnienie, lub jeśli krew była niewystarczająca pod względem objętości lub przechowywana przez ponad 24 godziny.

2. Przebieg badania i interesujące pomiary

UWAGA: Oceniany system potrzebuje 5 μL próbki krwi do określenia WBC i trzech parametrów klasyfikacji. Po pobraniu krwi, oceniany system i system referencyjny wykorzystano do rutynowego badania krwi.

  1. Wykryj WBC i trzy parametry klasyfikacyjne 532 i 534 próbek krwi, używając odpowiednio systemu referencyjnego i systemu ocenianego.
    1. Pozwól wysoko wykwalifikowanemu technikowi losowo ponumerować wybrane próbki krwi po zakończeniu testu klinicznego z systemem referencyjnym. Następnie przekaż próbki innemu wysoko wykwalifikowanemu technikowi w celu wykrycia parametrów WBC i klasyfikacji za pomocą ocenianego systemu.
  2. Ujawnij wyniki obu systemów.
  3. Poproś trzeciego technika o przeanalizowanie pięciu wskaźników (a mianowicie liczby WBC, Gran#, Gran%, Lym#, Lym%) wspólnych zarówno dla ocenianych, jak i referencyjnych systemów.

3. Procedura korzystania z ocenianego systemu

UWAGA: Oceniany system wykorzystuje zasadę impedancji elektrycznej (zasada Coredtera) do zliczania WBC w elemencie detekcji. Protokół testowy jest podzielony na sześć części: uruchomienie analizatora, przygotowanie testu, pobranie krwi, wymieszanie odczynników, analiza próbki i wyłączenie analizatora.

  1. Uruchamianie analizatora
    1. Ustaw przełącznik zasilania [O/I] z tyłu analizatora w pozycji [I]. Sprawdź, czy kontrolka analizatora świeci.
    2. Wprowadź poprawną nazwę użytkownika i hasło w oknie dialogowym logowania i kliknij Zaloguj się. Upewnij się, że system automatycznie przeprowadza samokontrolę i inicjalizację uruchamiania, a następnie wyświetla stronę główną Sample Analysis.
  2. Przygotowanie do testu
    UWAGA: Pełne badanie próbki krwi wymaga czterech materiałów eksploatacyjnych: lancetu do krwi, odczynnika hemolitycznego, pipety ilościowej z rurką kapilarną w środku oraz modułu wykrywania krwinek (Rysunek 1).
    1. Kliknij Następna próbka, poprawnie wprowadź płeć, imię i inne informacje kliniczne (zgodnie z wymaganiami), a następnie wybierz odpowiednią grupę referencyjną. Kliknij OK, aby zapisać informacje.
      UWAGA: Różne grupy wiekowe mają swój własny przedział odniesienia, więc wybór odpowiedniej grupy referencyjnej może spowodować uzyskanie bardziej odpowiedniego komunikatu alarmowego. Noworodek: 1-28 dni; Dzieci: od 29 dni do 14 lat; Dorosły mężczyzna/kobieta/generał: powyżej lub równe 15 lat.
    2. Rozerwij cienką warstwę modułu wykrywania krwinek, naciśnij przycisk Wejście/wyjście z magazynu i umieść moduł wykrywania krwinek w magazynie maszyny prawidłowo, z otworem skierowanym na zewnątrz.
    3. Nakłuć folię uszczelniającą odczynnika hemolitycznego końcówką pipety ilościowej.
  3. Pobieranie krwi
    1. Pobranie krwi kapilarnej: Zdezynfekuj lewy palec serdeczny wacikiem zamoczonym w alkoholu w jedną stronę i raz. Po naturalnym wyschnięciu alkoholu użyj lancetu do krwi, aby przebić skórę lewego palca serdecznego.
      1. Delikatnie wyciśnij pierwszą kroplę krwi i przetrzyj ją bawełnianym wacikiem. Wyciśnij wystarczającą ilość krwi, aby utworzyć pełną "kroplę wody" i zbierz 5 μl próbki krwi za pomocą rurki kapilarnej wewnątrz pipety ilościowej.
    2. Pobranie krwi żylnej: Pobrać 5 μl wstępnie uzyskanej próbki krwi żylnej za pomocą rurki kapilarnej umieszczonej w pipecie ilościowej. We wszystkich testach w tym badaniu wykorzystano krew żylną, którą pobrano od każdego pacjenta (5 ml) za pomocą naczynia próżniowego zawierającego antykoagulant EDTA-K2. Wykonaj wszystkie testy w ciągu 30 minut do 24 godzin.
  4. Mieszanie odczynników
    1. Włóż pipetę ilościową do odczynnika hemolitycznego (2,5 ml) i mocno ją dociśnij, aby uwolnić próbkę krwi z rurki kapilarnej.
    2. Wymieszaj krew w rurce kapilarnej i odczynnik hemolityczny, obracając ją do góry nogami 15-20 razy ze stałą prędkością, aż w kapilarze nie pozostanie żadna widoczna czerwona krew. W tym badaniu próbkę krwi miesza się z odczynnikiem hemolitycznym w stosunku 1:500.
  5. Analiza próbki
    1. Otwórz pokrywkę i wyciśnij roztwór do modułu wykrywania krwinek.
    2. Naciśnij przycisk Wejście/Wyjdź z magazynu. Po wprowadzeniu modułu wykrywania krwinek do magazynu naciśnij przycisk Liczenie.
      UWAGA: zielona lampka kontrolna wskazuje, że analizator zlicza. Moduł wykrywania krwinek automatycznie opuści magazyn po zliczeniu i należy go odpowiednio usunąć i zutylizować. Każdy test trwa tylko 30 sekund.
    3. W interfejsie analizatora kliknij dwukrotnie przycisk OK, aby potwierdzić, że moduł wykrywania krwinek został wyjęty.
    4. W interfejsie analizatora kliknij przycisk Drukuj, aby wydrukować wyniki testu.
  6. Wyłącz analizator
    1. W interfejsie analizatora kliknij przycisk zamykania i wybierz Tak w oknie dialogowym, które pojawi się w interfejsie. Sprawdź, czy system zaczyna wykonywać sekwencję zamykania.
    2. Ustaw przełącznik [O/I] z tyłu komputera mainframe w pozycji [O] po zakończeniu sekwencji wyłączania.

4. Analiza statystyczna

  1. Wykryj wartości odstające za pomocą metody uogólnionej skrajnej studentyzacji odchylenia (ESD) i wyeliminuj te wartości odstające w celu przeprowadzenia dalszej analizy statystycznej zgodnie z wymaganiami dokumentu EP9-A3 Amerykańskiego Stowarzyszenia Standaryzacji Laboratoriów Klinicznych (CLSI)8.
  2. Oblicz parametry opisowe, takie jak średnie i odchylenia standardowe (SD) dla danych ciągłych o rozkładzie normalnym, mediany i przedziały międzykwartylowe 25%-75% dla danych o rozkładzie nienormalnie oraz częstości i wartości procentowe dla danych kategorycznych.
  3. Użyj testu Pearsona χ2 lub dokładnego testu Fishera, aby określić stopień związku między zmiennymi kategorialnymi. Użyj testu t dla sparowanej próby lub testu U Manna-Whitneya, aby porównać dane liczbowe między grupami.
  4. Przedstawić rozkład i liniowe powiązanie wykrytych wyników obu systemów za pomocą wykresów punktowych. Zastosuj test korelacji nieparametrycznej Spearmana, aby uzyskać dostęp do stopnia związku między zmiennymi ilościowymi. Użyj wykresów Blanda-Altmana i współczynnika korelacji wewnątrzklasowej (ICC), aby zweryfikować zgodność między wartościami ilościowymi wykrytymi przez te dwa systemy.
  5. Analizuj dane za pomocą wybranego oprogramowania statystycznego. Wartość P < 0,05 jest uważana za statystycznie istotną.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Przykładowe dane
Łącznie 1066 pacjentów zostało włączonych do dwóch ośrodków badawczych, w tym Szpitala 1 (n = 532) i Szpitala 2 (n = 534). Charakterystykę pacjenta przedstawiono w Tabeli 1. Odsetek mężczyzn wynosi 49,9%, a mediana wieku to 52 (32, 66) lat. Pacjenci włączeni do badania składali się z pacjentów hospitalizowanych (51,1%), pacjentów ambulatoryjnych (39,0%) i pacjentów objętych badaniem fizykalnym (8,4%). Badane próbki pochodziły od pacjentów, którzy odwiedzili oddziały ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wraz z postępem nowoczesnej medycyny laboratoryjnej obecnie typowe jest stosowanie kilku technologii wykrywania w tych samych lub różnych laboratoriach w celu identyfikacji tego samego markera klinicznego. W związku z tym należy położyć większy nacisk na spójność wyników testów, aby pomóc klinikom w dokonywaniu dokładnych interpretacji i ocen wyników badań. Z badania wynika, że całkowita wartość sprzętu laboratoryjnego w szpitalach trzeciego stopnia i niezależnych laboratoriach jest znacznie wyższa niż w szpitalach podst...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To badanie było wspierane przez Fundację Badań Medycznych z prowincji Guangdong w Chinach (A2019224). Grupy finansujące zgodziły się z projektem badania, analizą danych, przygotowaniem manuskryptu i decyzją o publikacji. Nie otrzymano żadnego innego finansowania na to badanie.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Moduł wykrywania komórek krwiChuanghuai Medical Technology Co., Ltd. (Shenzhen, Chiny)eksploatacyjne do ocenianego systemu
Nakłuwacz do krwiChuanghuai Medical Technology Co., Ltd. (Shenzhen, Chiny)materiały eksploatacyjne do ocenianego systemu
Odczynnik hemolitycznyChuanghuai Medical Technology Co., Ltd. (Shenzhen, Chiny)eksploatacyjne do ocenianego systemu
IBM SPSS Statistics 25International Business Machines Corp., Armonk, NYOprogramowanie do analizy danych
MedCalc 11.4.2.02021 MedCalc Software LtdOprogramowanie do analizy danych
Microsoft Excel 2019Microsoftdo analizy danych
Analizator leukocytów oparty na karcie do testowania w miejscu opieki nad pacjentem (POCT)Chuanghuai Medical Technology Co., Ltd. (Shenzhen, Chiny)CX-2000Oceniany system
Pipeta ilościowa z rurką kapilarną wewnątrzChuanghuai Medical Technology Co., Ltd. (Shenzhen, Chiny)materiały eksploatacyjne do ocenianego systemu
W pełni automatyczny analizator hematologiczny Siemens i powiązane z nim odczynniki i materiały eksploatacyjneSiemens Healthcare Diagnostics Inc.ADVIA 2120iSystem referencyjny 2
System analizy komórkowej UniCel DxH 800 Coulter oraz powiązane z nim odczynniki i materiały eksploatacyjneBeckman Coulter, Inc.DxH 800System referencyjny 1
materiały materiały Oprogramowanie

Bibliografia

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Agbaria, A. H., et al. Diagnosis of inaccessible infections using infrared microscopy of white blood cells and machine learning algorithms. The Analyst. 145 (21), 6955-6967 (2020).
  2. Mlinaric, A., et al. Autovalidation and automation of the postanalytical phase of routine hematology and coagulation analyses in a university hospital laboratory. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 56 (3), 454-462 (2018).
  3. Genzen, J. R., et al. Challenges and opportunities in implementing total laboratory automation. Clinical Chemistry. 64 (2), 259-264 (2018).
  4. Kang, F., Li, W., Wang, W., Chen, B., Wang, Z. A nationwide multicenter study on clinical laboratory construction in China. Chinese Journal of Hospital Administration. 35 (10), 867-871 (2019).
  5. Rawaf, S., et al. Lessons on the COVID-19 pandemic, for and by primary care professionals worldwide. The European Journal of General Practice. 26 (1), 129-133 (2020).
  6. Balla, M., et al. COVID-19, Modern pandemic: a systematic review from front-line health care providers' perspective. Journal of Clinical Medicine Research. 12 (4), 215-229 (2020).
  7. Cheng, B., et al. Predictors of progression from moderate to severe coronavirus disease 2019: a retrospective cohort. Clinical Microbiology and Infection. 26 (10), 1400-1405 (2020).
  8. Budd, J. Measurement procedure comparison and bias estimation using patient samples; approved guideline-third edition. Clinical and Laboratory Standards Institute. 33 (11), (2013).
  9. Wang, Y. Development trend of testing instruments in grass-roots hospitals. Medical Equipment. 24 (03), 26-27 (2011).
  10. Miesler, T., Wimschneider, C., Brem, A., Meinel, L. Frugal innovation for point-of-care diagnostics controlling outbreaks and epidemics. ACS Biomaterials Science & Engineering. 6 (5), 2709-2725 (2020).
  11. Vesper, H. W., Myers, G. L., Miller, W. G. Current practices and challenges in the standardization and harmonization of clinical laboratory tests. The American Journal of Clinical Nutrition. 104, Suppl 3 907-912 (2016).
  12. Vaz Fragoso, C. A. Epidemiology of lung disease in older persons. Linics in Geriatric Medicine. 33 (4), 491-501 (2017).
  13. Qian, C., Xie, T. Regional differences and demographic reasons of population aging in Guangdong Province. Scientific Research on Aging. 5 (01), 46-56 (2017).
  14. de Graaf, A. J., Hiemstra, S. W., Kemna, E. W. M., Krabbe, J. G. Evaluation of a POCT device for C-reactive protein, hematocrit and leukocyte differential. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 55 (11), 251-253 (2017).
  15. Chabot-Richards, D. S., George, T. I. White blood cell counts: reference methodology. Clinics in Laboratory Medicine. 35 (1), 11-24 (2015).
  16. Green, R., Wachsmann-Hogiu, S. Development, history, and future of automated cell counters. Clinics in Laboratory Medicine. 35 (1), 1-10 (2015).
  17. Henry, B. M., de Oliveira, M. H. S., Benoit, S., Plebani, M., Lippi, G. Hematologic, biochemical and immune biomarker abnormalities associated with severe illness and mortality in coronavirus disease 2019 (COVID-19): a meta-analysis. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 58 (7), 1021-1028 (2020).
  18. Flanagan, B., Keber, B., Mumford, J., Lam, L. Hematologic conditions: leukocytosis and leukemia. FP Essentials. 485, 17-23 (2019).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Point Of Care TestingLeukocyte AnalyzerWhite Blood CellBlood Cell DetectionHematology AnalyzerPeripheral Blood LeukocytesCapillary Blood CollectionGranulocyte CountLymphocyte CountBland Altman Analysis

Powiązane artykuły