$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Przed rozpoczęciem eksperymentu:
- Uzyskać zgodę IACUC
- Zsterylizować narzędzia chirurgiczne i patyczki higieniczne
I. Pobieranie tkanki dawcy
- Uśmierć mysz dawcę (zgodnie z SOP instytucji)
- Zwilżyć alkohollem sierść z tyłu u podstawy ucha
- Pobrać skórę dawcy, odcinając ucho u nasady
- Umieścić tkankę na płytce w lodzie
- Rozdzielić ucho: ująć pęsetą z ząbkami strony brzuszną i grzbietną tkanki u podstawy ucha; delikatnie rozdzielić tkankę; umieścić tkankę grzbietową powierzchnią wewnętrzną do dołu w PBS w lodzie; odrzucić kolagenową płat brzuszny
II. Przygotowanie biorcy do transplantacji
- Zanestezjować mysz zgodnie z zatwierdzoną procedurą
- Podać lek przeciwbólowy w celu uśmierzenia bólu pooperacyjnego (np. 0,05-0,1 mg/g Bupernex ip)
- Ułożyć mysz w pozycji bocznej
- Wykonać ucisk palca stopy, aby upewnić się, że zwierzę jest odpowiednio uspokojone
- Zmoczyć sierść alkoholem i ogolić klatkę piersiową
- Oczyścić obszar za pomocą gazika nasączonego alkoholem
III. Przeszczep skóry
- Wykonaj nacięcie o długości ~ 1 cm: unieś skórę za pomocą pęsety ząbkowej i przetnij tkankę ~ 0,25-0,5 cm poniżej pęsety
- Wyjmij skórę dawcy z PBS, umieść ją na łożu przeszczepu (wewnętrzną stroną skóry ucha skierowaną w stronę łoża) i usuń nadmiar PBS za pomocą sterylnego patyczka do uszu
- Ostrożnie odetnij nadmiar skóry dawcy, aby przeszczep przylegał płasko do łoża (upewniając się, że brzegi przeszczepu nie są podwinięte i że przeszczep nie wystaje poza obszar łoża na skórę tułowia biorcy)
- Owiń biorcę sterylnym bandażem (umieszczając nieprzylepny fragment gazy nad przeszczepem skórnym)
- Upewnij się, że bandaż nie jest zbyt ciasny (oceń oddychanie zwierzęcia) oraz że kończyny górne mogą się swobodnie poruszać
- Zabezpiecz bandaż pojedynczym szwem z jedwabnej nici 2-0
- Umieść zwierzę w czystej klatce (pod lampą grzewczą, aż zwierzę w pełni wybudzi się z narkozy)
- Monitoruj biorcę 1-2 razy dziennie pod kątem objawów stresu i podawaj leki przeciwbólowe w razie potrzeby
IV. Zdjęcie opatrunku (6–7 dni po przeszczepieniu)
- Zanurzyć mysz w znieczuleniu zgodnie z zatwierdzoną procedurą
- Przeciąć i usunąć szew jedwabny
- Za pomocą nożyczek z tępym końcem ostrożnie przeciąć opatrunek (dbając o to, aby nie uszkodzić przeszczepu) i delikatnie go usunąć
- Przenieść mysz do czystej klatki
- Około 8 h po usunięciu opatrunku sprawdzić przeszczep pod kątem oznak strupienia lub kurczenia się. Jeśli wystąpią, można uznać, że unaczynienie przeszczepu nie powiodło się, co należy traktować jako błąd techniczny
- Monitorować codziennie pod kątem oznak odrzucenia (zazwyczaj definiowanego jako ok. 80% martwicy tkanki dawcy)
- Allogeniczne przeszczepy skóry są zazwyczaj odrzucane między 8. a 12. dniem po operacji
V. Przydatne wskazówki
- Pobranie tkanki donora blisko podstawy ucha pozwoli na: 1) maksymalizację wielkości przeszczepu oraz 2) uzyskanie nierównego brzegu brzusznego, który ułatwi rozdzielanie
- Do golenia biorcy zawsze należy używać nowej żyletki
- Jeśli lek przeciwbólowy ma być podany d.o.p., należy go podać przed procedurą transplantacji, aby zminimalizować manipulacje pooperacyjne (zmniejszyć ryzyko uszkodzenia przeszczepu)
- Jeśli to możliwe, należy zdjąć rękawiczki przed nałożeniem bandaża. Rękawiczki mają tendencję do przyklejania się do bandaża, co utrudnia jego aplikację
- Umieszczenie pojedynczego szwu na końcu bandaża zminimalizuje ryzyko jego przedwczesnego usunięcia
- Bandaż należy owinąć tak ciasno, jak to możliwe, a następnie ocenić oddychanie PRZED nałożeniem szwu. Jeśli bandaż będzie zbyt ciasny, zwierzę przestanie oddychać. Jeśli bandaż będzie zbyt luźny, zwierzę go usunie.