Artykuł metodologiczny

Szybkie genotypowanie tkanek mysich z wykorzystaniem zestawu Sigma Extract-N-Amp Tissue PCR Kit

DOI:

10.3791/636

⸱

22 stycznia 2008

 , 
1Department of Developmental and Cell Biology, University of California, Irvine (UCI)

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pełne genotypowanie próbki ogona myszy, obejmujące trawienie tkanki i odczyt PCR, wykonuje się w półtorej godziny przy użyciu zestawu Sigma SYBR Green Extract-N-Amp Tissue PCR.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Genomowa detekcja DNA poprzez amplifikację PCR i analizę na żelu elektroforetycznym jest standardową metodą określania genotypu próbki tkanki. Konwencjonalne przygotowanie tkanek do izolacji DNA do PCR często trwa od kilku godzin do kilku dni, w zależności od rodzaju próbki tkankowej. W konsekwencji ustalenie genotypu próbki może zostać opóźnione o kilka dni, co w wielu rodzajach eksperymentów jest niedopuszczalne. W niniejszym materiale demonstrujemy kompletne genotypowanie próbki ogona myszy, obejmujące trawienie tkanki i odczyt wyników PCR, w czasie półtorej godziny przy użyciu zestawu Sigma SYBR Green Extract-N-Amp Tissue PCR Kit. Najpierw przedstawiamy piętnastominutową ekstrakcję DNA z próbki tkanki. Następnie demonstrujemy odczyt amplifikacji PCR próbki w czasie rzeczywistym, co umożliwia identyfikację próbki pozytywnej w trakcie procesu amplifikacji. Połączenie szybkiej ekstrakcji i odczytu w czasie rzeczywistym pozwala na bezzwłoczną identyfikację genotypu wielu różnych rodzajów tkanek za pomocą niezawodnej metody PCR.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić protokół.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zestaw SYBR Green Extract-N-Amp Tissue PCR KitZestaw odczynnikówSigma-AldrichXNATGZawiera: roztwór do ekstrakcji, roztwór neutralizujący B, roztwór do przygotowania tkanki, Extract-N-Amp SYBR Green PCR ReadyMix

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Genotypowanie tkanek myszyzestaw Extract N Ampekstrakcja DNAPCR w czasie rzeczywistymanaliza qPCRtrawienie tkanekzestaw Sigmaamplifikacja PCRanaliza krzywej topnieniaprotok genotypowania

Powiązane artykuły