Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Metodyka badania środków kontrolnych i insektycydów przeciwko omacnicy kawowej Hypothenemus hampei

1.8K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/63694

⸱

23 marca 2022

 ,  ,  , 
1Department of Entomology, National Coffee Research Center

W tym artykule

Podsumowanie

Metoda wykorzystująca zielone owoce kawy (GFs) została opracowana w celu zbadania toksyczności insektycydów przeciwko omacnicy kawowej (CBB). Insektycydy lub substancje toksyczne stosowano do zdezynfekowanych GF przed lub po inwazji CBB. Oceniano śmiertelność owadów, odstraszalność i zdolność reprodukcyjną, a także inne parametry.

Streszczenie

Przed zaleceniem środków owadobójczych do leczenia omacnicy kawowej (CBB) Hypothenemus hampei, warto wiedzieć, jaka jest śmiertelność i odstraszanie tych insektycydów wobec dorosłych owadów lub ich wpływ na wydajność reprodukcyjną. Jednak obecnie dostępne metody oceniają tylko śmiertelność osób dorosłych, ograniczając wybór nowych insektycydów o innym sposobie działania. W niniejszej pracy zbadano różne metody eksperymentalne w celu zidentyfikowania różnorodnego wpływu na CBB w warunkach laboratoryjnych. W tym celu zebrano zielone owoce kawy (GF) i zdezynfekowano je przez zanurzenie w roztworze podchlorynu sodu, a następnie naświetlanie światłem UV. Równolegle dorosłe osobniki CBB z kolonii zostały zdezynfekowane przez zanurzenie w roztworze podchlorynu sodu. Aby ocenić ochronę owoców (preinfestację), owoce umieszczono w plastikowych pudełkach i zastosowano środki owadobójcze. Następnie dorośli CBB zostali zwolnieni w tempie dwóch CBB na GF. GF pozostawiono w kontrolowanych warunkach, aby ocenić porażenie CBB i przeżycie po 1, 7, 15 i 21 dniach. Aby ocenić skuteczność insektycydów po inwazji CBB (po inwazji), dorosłe osobniki CBB zostały uwolnione do GF w stosunku 2:1 przez 3 godziny w temperaturze 21 °C. Poinekowane owoce przedstawiające dorosłe osobniki CBB z częściowo odsłoniętymi brzuchami wybrano i umieszczono w 96-dołkowych stojakach, a CBB wwiercające się w owoce poddano bezpośredniej obróbce. Po 20 dniach owoce zostały wypreparowane i zarejestrowano etapy biologiczne CBB wewnątrz każdego owocu. GF służyły jako substraty, które naśladują warunki naturalne do oceny toksycznych, chemicznych i biologicznych środków owadobójczych w stosunku do CBB.

Wprowadzenie

Omacnica kawowa (CBB), Hypothenemus hampei, została po raz pierwszy wykryta w 1988 roku w Kolumbii i od tego czasu stała się najważniejszym gatunkiem szkodnika upraw kawy. Samice CBB opuszczają owoc narodzinowy już zapłodniony, szukając nowych owoców, kierując się lotnymi substancjami chemicznymi, które emitują1,2. Pełny cykl jest realizowany w ciągu 23 dni3 w temperaturze 25 °C. Cykl rozpoczyna się od penetracji nasion przez samicę założycielską i złożenia jaj w bielmie owocu. Zamknięte larwy zjadają nasiona. Jeśli owoce zostaną wycięte w tym momencie, będzie można obserwować zarówno samicę założycielkę, jak i jej potomstwo. Po 14 dniach larwy stają się poczwarkami - na ogół stadium poczwarki trwa 5 dni. W fazie dorosłej samice kopulują ze swoim rodzeństwem, a nowo zapłodnione samice odlatują od uszkodzonych owoców w poszukiwaniu nowych owoców kawy, aby rozpocząć nowy cykl4.

Zarówno proces penetracji, jak i wynik żerowania larw uszkadzają ziarna kawy, obniżając jakość napoju kawowego i znacznie zmniejszając dochody; więcej niż 5% porażenia na plantacjach kawy jest ogólnie uważane za próg ekonomiczny.

Kontrola CBB opiera się na strategii zintegrowanej ochrony przed szkodnikami (IPM), obejmującej kontrolę kulturową i praktyki agronomiczne, naturalne czynniki biologiczne oraz stosowanie chemicznych środków owadobójczych, co wymaga warunków bezpieczeństwa i terminowego stosowania4.

Aby ocenić nowe insektycydy do kontroli CBB, potrzebne są tanie metodologie, które pozwalają na uzyskanie szybkich wyników. Obecnie stosowane są zarówno procedury laboratoryjne, jak i terenowe, w tym sztuczne diety zawierające kawę, w których zawarte są insektycydy5,6, lub rozpylanie insektycydów na suchy pergamin coffee7,8,9. Ponadto opisano eksperymenty przeprowadzone w terenie z użyciem gałęzi kawowca pokrytych rękawami entomologicznymi10,11; Metody te wymagają jednak intensywnego nakładu pracy i długich okresów oceny.

Warunek przypominający naturalne warunki polowe, który jest również szybki i tani, to użycie zielonych lub dojrzałych owoców kawy. Jednak owoce te muszą być przechowywane w warunkach odpowiednich do rozwoju CBB, unikając zmian i zanieczyszczeń mikroorganizmami, aby zachować ich jakość i właściwości. W tym celu zastosowano różne środki dezynfekujące, a także procedury związane z ciepłem i promieniowaniem7,9,12,13,14,15,16.

Dodatkowo, metody oceny insektycydów w stosunku do CBB wymagają symulacji dorosłych samic latających w poszukiwaniu owoców lub penetrujących te owoce17,18. W tym celu na polu przeprowadzono sztuczne inwazje owoców8,11,19, chociaż proces ten jest pracochłonny i zależy od warunków środowiskowych.

Tutaj opisujemy ustandaryzowaną metodologię oceny produktów, które mogą mieć różny wpływ na CBB w kontrolowanych warunkach środowiskowych, które przypominają warunki terenowe.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

UWAGA: Niniejszy protokół przedstawia różne metody identyfikacji odmiennych efektów w obrębie CBB w warunkach laboratoryjnych.

1. Zbiór owoców

  1. Wcześnie rano zbierz owoce kawowca (GFs) o wieku rozwojowym około 120-150 dni po kwitnieniu z drzew na plantacji kawy.

2. Dezynfekcja owoców20

  1. Przenieś do laboratorium około 300 owoców grejpfruta (GF). Wybierz zdrowe owoce o jednolitym rozmiarze i usuń szypułki.
  2. Zanurz owoce GF w roztworze mydła (2 mL płynnego detergentu do naczyń w 998 mL wody z kranu), a następnie pocieraj je, aby je umyć. Następnie opłucz owoce wodą, wymieniając wodę trzy razy.
  3. Zanurz owoce GF w 0,5% roztworze podchlorynu sodu (100 mL w 900 mL wody z kranu) i mieszaj w inkubatorze wytrząsowym przy 110 rpm przez 15 min. Następnie opłucz owoce GF wodą, mieszając w inkubatorze wytrząsowym i wymieniając wodę trzy razy, co 10 min.
  4. Osusz owoce GF sterylnymi ręcznikami papierowymi.
  5. Umieść owoce GF w tackach (33 cm x 25 cm x 2 cm) i naświetlaj je przez 15 min, rozmieszczając owoce GF w odległości 55 cm od źródła UV w poziomej komorze z laminarnym przepływem powietrza wyposażonej w lampę UV.
  6. W ciągu tych 15 min, co 5 min, przesuwaj owoce GF, aby zapewnić naświetlenie całego owocu.

3. Dezynfekcja owadów21

  1. Do przeprowadzenia bioassayów należy użyć nowo wyklutych (tego samego dnia) owadów CBB.
  2. Owady CBB zanurzyć w 0,5% roztworze podchlorynu sodu, powoli mieszając je pędzlem przez 10 min.
  3. Owady CBB przefiltrować przez muślinową tkaninę i trzykrotnie przemyć sterylną wodą destylowaną.
  4. Nadmiar wody usunąć za pomocą sterylnych ręczników papierowych.

4. Ocena produktu o działaniu ochronnym na owoce (preinfestacja) (Rycina 1)

  1. Użyj grupy owoców guawy (GF) na jedną jednostkę eksperymentalną. Zazwyczaj na jednostkę eksperymentalną wykorzystuje się grupę 30 GF.
  2. Umieść GF w plastikowych pudełkach (jednostka eksperymentalna).
  3. Zastosuj produkt testowy w różnych stężeniach do oceny. Aplikację przeprowadź za pomocą przenośnego opryskiwacza. W tym przypadku testowano emulsję alkaloidową w stężeniu 5% i 6%.
  4. W ramach grupy kontrolnej opryskaj grupę GF wodą.
  5. Wykorzystaj co najmniej trzy powtórzenia (jednostka eksperymentalna) na jedną próbę, opryskując je jedna po drugiej.
  6. W komorze sterylnej wprowadź dwa dorosłe osobniki CBB na każde GF (łącznie do plastikowych pudełek wprowadzono 60 osobników CBB). Po 30 min przykryj pudełka.
  7. Pozostaw plastikowe pudełka z zainfekowanymi GF w pomieszczeniu lub inkubatorze w kontrolowanych warunkach (ciemność, 25 ± 2 °C oraz wilgotność względna 71% ± 5%).
  8. Po 1, 7, 15 i 21 dniach policz liczbę owoców zaatakowanych przez szkodnika oraz liczbę żywych i martwych owadów poza owocami w każdym pudełku.
  9. W 20. dniu po infekcji dokonaj sekcji każdego GF pod stereomikroskopem przy powiększeniu 10x.
  10. Policz liczbę zdrowych nasion lub nasion uszkodzonych przez owady w każdym owocu.
  11. Policz zaobserwowane różne stadia biologiczne CBB22 oraz policz liczbę martwych owadów w każdym nasionie, aby określić śmiertelność owadów na jednostkę eksperymentalną.

5. Ocena efektu działania produktu po infestacji CBB (poinfestacyjna) (Rysunek 3)

  1. Stosować grupy po 200 owoców na jedną próbę.
  2. W komorze z laminarnym przepływem powietrza wypuścić dorosłe osobniki CBB (w stosunku 2:1 dorosłych CBB do GFs) na uprzednio zdezynfekowane GFs, pozwalając na przebieg infestacji przez 3 h w temperaturze 21 °C.
  3. Zbadać GFs. Po 3 h większość powinna być zainfestowana, z odwłokami CBB wciąż wystawionymi na zewnątrz (pozycja A20), jak pokazano na Rysunku 2.
  4. Wybrać 46 zainfestowanych GFs (pozycja A) i umieścić je w plastikowych statywach z 96 studzienkami (jednostka eksperymentalna). Owoce powinny pozostać w tej pozycji, aby preparat można było rozpylić bezpośrednio na CBB perforujące owoc.
  5. Rozpylić preparat co najmniej trzy razy (trzy statywy) na próbę, jeden po drugim, przykrywając statywy po 30 min.
  6. Pozostawić statywy z zainfestowanymi GFs w pomieszczeniu lub inkubatorze w kontrolowanych warunkach (ciemność, 25 ± 2 °C oraz wilgotność względna 71% ± 5%).
  7. Po 20 dniach przeprowadzić sekcję GFs pod stereomikroskopem przy powiększeniu 10x.
  8. Policzyć liczbę zdrowych nasion lub nasion uszkodzonych przez owady w każdym owocu.
  9. Policzyć poszczególne stadia biologiczne CBB22 oraz liczbę martwych owadów w każdym nasionie, aby określić śmiertelność owadów na jednostkę eksperymentalną.

6. Ocena produktu o działaniu odstraszającym na CBB

  1. Należy wykonać kroki 4.1-4.6 opisane dla oceny produktu o działaniu ochronnym na owoce.
  2. Po wypuszczeniu dorosłych osobników CBB do plastikowych pojemników, należy policzyć liczbę osobników CBB, które odleciały z pojemników oraz liczbę osobników, które zaatakowały GFs. Następnie należy wykonać kroki 4.7-4.11.
  3. Należy wykonać kroki 5.1-5.5 opisane dla oceny produktu po infestacji CBB.
  4. Po opryskaniu owadów w pozycji A każdym z preparatów, należy policzyć liczbę osobników CBB, które opuściły GF i/lub odleciały z GF. Następnie należy wykonać kroki 5.6-5.9.

7. Analiza statystyczna

UWAGA: Zmiennymi odpowiedzią są procentowe wskaźniki śmiertelności w czasie oraz procent zdrowych, niezainfekowanych nasion kawy.

  1. Oblicz średnią oraz odchylenie standardowe dla każdej zmiennej odpowiedzi dla każdej grupy badawczej.
  2. Przeprowadź analizę wariancji dla każdej zmiennej odpowiedzi, stosując model dla całkowicie losowego planu doświadczalnego.
    UWAGA: Aby porównać grupy badawcze z kontrolą absolutną (kontrolą wodną), wykonuje się test porównawczy Dunnetta na poziomie istotności 5%.
  3. W przypadku stwierdzenia istotnych różnic między grupami badawczymi a kontrolą absolutną, zastosuj test najmniejszej istotnej różnicy (LSD) na poziomie 5% w celu porównania grup badawczych między sobą.
  4. Oceń moc testu; jeśli przekracza ona 85%, założenia o normalności rozkładu i jednorodności wariancji są spełnione.

Oprysk insektycydami, infestacja CBB, inkubacja w 25°C, sekcja owoców, schemat liczenia populacji.
Rycina 1: Procedura oceny wpływu insektycydów stosowanych przed infestacją na CBB. Etapy oceny wpływu insektycydów stosowanych przed infestacją na Hypothenemus hampei (CBB) z wykorzystaniem zielonych owoców (GFs). (A) Wybór owoców. (B) Oprysk owoców kawowca insektycydami. (C) Infestacja owoców kawowca przez CBB w stosunku 2:1 CBB na GF. (D) Zainfekowane owoce. (E) Inkubacja owoców w kontrolowanych warunkach. (F) Sekcja owoców. (G) Liczenie populacji CBB wewnątrz nasion. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Zielony układ doświadczalny z rzędami małych owoców oliwki na uchwycie polimerowym do potencjalnej analizy.
Rycina 2: Proces infekcji owoców kawowca przez CBB. Zainfekowane owoce zawierają dorosłe osobniki CBB z częściowo odsłoniętymi odwłokami (pozycja A). Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Schemat procesu infestacji przez skórka kawowca, ilustrujący etapy od wyboru owoców do zliczenia populacji CBB.
Rycina 3: Procedura oceny efektów zastosowania insektycydów po infestacji CBB. Kroki oceny efektów zastosowania insektycydów po infestacji CBB z wykorzystaniem GF. (A) Wybór owoców. (B) Infestacja owoców przez CBB w stosunku 2:1 CBB na GF. (C) Wybór owoców zainfektowanych. (D) Oprysk owoców insektycydem. (E) Inkubacja owoców. (F) Sekcja owoców. (G) Zliczanie populacji CBB. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Wyniki wykazały, że samice CBB rozpoznały owoce i, w zależności od charakterystyki powierzchni owocu oraz emitowanych zapachów, samice CBB zaczęły penetrować lub wgryzać się w owoce w ciągu 3 h w temperaturze 21 °C.

Wpływ insektycydu na CBB po aplikacji na owoce kawowca (procedura preinfestacji) po 24 h oraz w czasie przedstawiono na Rysunku 4. Dwa insektycydy (emulsja alkaloidowa w stężeniu 5% i 6%) spowodowały wysoką śmiertelność owadów w 20. dniu (Tabel...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W tym protokole dezynfekcja owoców i owadów jest krytycznym krokiem. Kiedy owoce z pola są używane w laboratorium, często wykazują wysokie zanieczyszczenie i odwodnienie, ponieważ mikroorganizmy i roztocza są obecne w naskórku 7,15,16. Dlatego używanie owoców lub owadów, które nie są dezynfekowane, spowoduje śmierć owadów z powodu zanieczyszczenia wywołanego przez mikroorganizmy, takie jak bakterie lub grzyby, zakłócając w ten s...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Żaden z autorów nie ma do zadeklarowania konfliktu interesów.

Podziękowania

Autorzy wyrażają swoje podziękowania dla Narodowej Federacji Plantatorów Kawy Kolumbii, asystentów Departamentu Entomologii (Diana Marcela Giraldo, Gloria Patricia Naranjo), Stacji Doświadczalnej Naranjal i Jhona Félixa Trejosa.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zlewka z dziobkiem, niska forma 500 mLBRAND PP
Shaker stołowyNew Brunswick Scientific Innova 4000 Inkubator Shaker
Mydło w płynie do mycia naczyń-AXIONColgate-PalmoliveAXION
Hood; Pozioma stacja przepływu laminarnegoTerra Universal  Stal malowana proszkowo, 1930 mm szer. x 1118 mm gł. x 1619 mm wys., 120 V (https://www.terrauniversal.com/hood-horizontal-laminar-flow-station-9620-64a.html)
Owady CBBBIOCAFE(http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html).
Ręczniki papierowe Multi Fold WhiteFamilia73551
Preval Agregat natryskowy  Preval MerckZ365556-1KThttps://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sigma/z365556?gclid=Cj0KCQiAweaNBhDEARIsAJ
5hwbfZOy1TWGj6huatFtRQt
AzOyHe5-oBiKnOUK2T1exuuk
WwJLdvxkvsaAjoYEALw_wcB
Regały odwracalne 96-wellheathrow HEA2345Ahttps://www.heathrowscientific.com/reversible-racks-96-well-i-hea2345a
Ostrza skalpela N 11MerckS2771-100EA
Uchwyty skalpela N3MerckS2896-1EA
Podchlorek soduFirmaClorox
Mikroskop stereoskopowyZeissStemi 508https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/stereo-zoom-microscopes/stemi-508.html
BR87826

Bibliografia

  1. Mendesil, E., et al. Semiochemicals used in host location by the coffee berry borer, Hypothenemus hampei. Journal of Chemical Ecology. 35 (8), 944-950 (2009).
  2. Jaramillo, J., et al. Coffee berry borer joins bark beetles in coffee klatch. PLoS ONE. 8 (9), 74277(2013).
  3. Giraldo-Jaramillo, M., Garcia, A. G., Parra, J. R. Biology, thermal requirements, and estimation of the number of generations of Hypothenemus hampei (Ferrari, 1867) (Coleoptera: Curculionidae) in the state of São Paulo, Brazil. Journal of Economic Entomology. 111 (5), 2192-2200 (2018).
  4. Benavides, P., Góngora, C., Bustillo, A. IPM Program to Control Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei, with Emphasis on Highly Pathogenic Mixed Strains of Beauveria bassiana, to Overcome Insecticide Resistance in Colombia. IntechOpen. , (2012).
  5. Martínez, C. P., Echeverri, C., Florez, J. C., Gaitan, A. L., Góngora, C. E. In vitro production of two chitinolytic proteins with an inhibiting effect on the insect coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera: Curculionidae) and the fungus Hemileia vastatrix the most limiting pests of coffee crops. AMB Express. 2, 1-11 (2012).
  6. Padilla, B. E., Acuña, Z., Velásquez, C. S., Rubio, G. J. D. Inhibitors of [alpha]-amylases from the coffee berry borer Hypothenemus hampei in different plant species. Revista Colombiana de Entomología. 32 (2), 125-130 (2006).
  7. Alvarez, J. H., Cortina, H. A., Villegas, J. F. Methods to evaluate antibiosis to Hypothenemus hampei Ferrari in coffee under controlled conditions. Cenicafé. 52 (3), 205-214 (2001).
  8. Arcila, A., Duarte, A. F., Villalba, D. A., Benavides, P. New Product in the Integrated Management of the Coffee Berry Borer in Colombia. National Coffee Research Center (Cenicafé). , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/477 (2014).
  9. Jaramillo, J., Montoya, E., Benavides, P., Góngora, C. Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae for the control of coffee brocade in fruits on the ground. Revista Colombiana de Entomología. 41, 95-104 (2015).
  10. Bastidas, A., Velásquez, E., Benavides, P., Bustillo, A., Orozco, C. Evaluation of preformulated Beauveria bassiana (Bálsam) Vuillemin, for the control of the coffee berry borer. Agronomia. 17, 44-61 (2009).
  11. Villalba-Gault, D., Bustillo, A., Chaves Cordoba, B. Evaluation of insecticides for the control of the coffee berry borer in Colombia. Cenicafe. 46, 152-163 (1995).
  12. Bustillo, A. E., Orozco, J., Benavides, P., Portilla, M. Mass production and use of parasitoids for the control of the coffee berry borer in Colombia. Cenicafe. 47 (4), 215-230 (1996).
  13. Celestino, F. N., Pratissoli, D., Machado, L. C., Santos Junior, H. J. G. D., Mardgan, L., Ribeiro, L. V. Adaptation of breeding techniques of the coffee berry borer [Hypothenemus hampei (Ferrari). Coffee Science. 11 (2), 161-168 (2016).
  14. Domínguez, L., Parzanese, M. Ultraviolet light in food preservation. Argentine Foods. 52 (2), 70-76 (2012).
  15. Jaramillo, J., Chabi-Olaye, A., Poehling, H. M., Kamonjo, C., Borgemeister, C. Development of an improved laboratory production technique for the coffee berry borer Hypothenemus hampei, using fresh coffee berries. Entomologia Experimentalis et Applicata. 130 (3), 275-281 (2009).
  16. Pérez, J., Infante, F., Vega, F. E. Does the coffee berry borer (Coleoptera: Scolytidae) have mutualistic fungi. Annals of the Entomological Society of America. 98 (4), 483-490 (2005).
  17. Benavides, P., Gil, P., Góngora, C., Arcila, A. Integrated pest management. Cenicafe. Manual of the Colombian coffee grower: Research and technology for the sustainability of coffee growing. Manizales: FNC: Cenicafé. 3, 179-214 (2013).
  18. Bustillo, P. A review of the coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae), in Colombia. Revista Colombiana de Entomología. 32 (2), 101-116 (2006).
  19. Arcila, A., Benavides, P., Mejia, J. New Chemical Control Alternative for the Integrated Management of the Coffee Berry Borer. National Coffee Research Center (Cenicafé). , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/557 (2015).
  20. Tapias, L., Martinez, C., Benavides, P., Gongora, C. Laboratory method to evaluate the effect of insecticides on the coffee berry borer. Cenicafé. 68 (2), 76-89 (2017).
  21. Bustillo, A. E., Marín, P. How to reactivate the virulence of Beauveria bassiana to control the coffee berry borer. Manejo Integrado de Plagas. 63, (2002).
  22. Constantino, L. M., et al. morphological and genetic aspects of Hypothenemus obscurus and Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae). Revista Colombiana de Entomología. 37 (2), 173-182 (2011).
  23. Estrela, C., et al. Mechanism of action of sodium hypochlorite. Brazilian Dental Journal. 13 (2), 113-117 (2002).
  24. Diffey, B. L. Solar ultraviolet radiation effects on biological systems. Physics in Medicine and Biology. 36 (3), 299-328 (1991).
  25. BIOCAFE. , Available from: http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html (2022).
  26. Bustillo, A. E., et al. Integrated Management of the Coffee Berry Borer: Hypothenemus hampei Ferrari in Colombia. , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/hangle/10778/848 (1998).
  27. Portilla, R. Development and evaluation of an artificial diet for the rearing of Hypothenemus hampei. Cenicafé. 50, 24-38 (1999).
  28. Portilla, R. M., Streett, D. A. New techniques for automated mass production of Hypothenemus hampei on the modified Cenibroca artificial diet. Cenicafé. 57, 37-50 (2006).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

skuteczność insektycydówzielone owoce kawyśmiertelność owadówmetoda bioanalizydezynfekcja owocówtraktowanie po infestacjiocena entomopatogenówocena uszkodzeń nasionodporność owadów
Metodyka badania środków kontrolnych i insektycydów przeciwko omacnicy kawowej Hypothenemus hampei
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.