Artykuł metodologiczny

Metodyka badania środków kontrolnych i insektycydów przeciwko omacnicy kawowej Hypothenemus hampei

DOI:

10.3791/63694

⸱

23 marca 2022

 ,  ,  , 
1Department of Entomology, National Coffee Research Center

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Metoda wykorzystująca zielone owoce kawy (GFs) została opracowana w celu zbadania toksyczności insektycydów przeciwko omacnicy kawowej (CBB). Insektycydy lub substancje toksyczne stosowano do zdezynfekowanych GF przed lub po inwazji CBB. Oceniano śmiertelność owadów, odstraszalność i zdolność reprodukcyjną, a także inne parametry.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Przed zaleceniem środków owadobójczych do leczenia omacnicy kawowej (CBB) Hypothenemus hampei, warto wiedzieć, jaka jest śmiertelność i odstraszanie tych insektycydów wobec dorosłych owadów lub ich wpływ na wydajność reprodukcyjną. Jednak obecnie dostępne metody oceniają tylko śmiertelność osób dorosłych, ograniczając wybór nowych insektycydów o innym sposobie działania. W niniejszej pracy zbadano różne metody eksperymentalne w celu zidentyfikowania różnorodnego wpływu na CBB w warunkach laboratoryjnych. W tym celu zebrano zielone owoce kawy (GF) i zdezynfekowano je przez zanurzenie w roztworze podchlorynu sodu, a następnie naświetlanie światłem UV. Równolegle dorosłe osobniki CBB z kolonii zostały zdezynfekowane przez zanurzenie w roztworze podchlorynu sodu. Aby ocenić ochronę owoców (preinfestację), owoce umieszczono w plastikowych pudełkach i zastosowano środki owadobójcze. Następnie dorośli CBB zostali zwolnieni w tempie dwóch CBB na GF. GF pozostawiono w kontrolowanych warunkach, aby ocenić porażenie CBB i przeżycie po 1, 7, 15 i 21 dniach. Aby ocenić skuteczność insektycydów po inwazji CBB (po inwazji), dorosłe osobniki CBB zostały uwolnione do GF w stosunku 2:1 przez 3 godziny w temperaturze 21 °C. Poinekowane owoce przedstawiające dorosłe osobniki CBB z częściowo odsłoniętymi brzuchami wybrano i umieszczono w 96-dołkowych stojakach, a CBB wwiercające się w owoce poddano bezpośredniej obróbce. Po 20 dniach owoce zostały wypreparowane i zarejestrowano etapy biologiczne CBB wewnątrz każdego owocu. GF służyły jako substraty, które naśladują warunki naturalne do oceny toksycznych, chemicznych i biologicznych środków owadobójczych w stosunku do CBB.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Omacnica kawowa (CBB), Hypothenemus hampei, została po raz pierwszy wykryta w 1988 roku w Kolumbii i od tego czasu stała się najważniejszym gatunkiem szkodnika upraw kawy. Samice CBB opuszczają owoc narodzinowy już zapłodniony, szukając nowych owoców, kierując się lotnymi substancjami chemicznymi, które emitują1,2. Pełny cykl jest realizowany w ciągu 23 dni3 w temperaturze 25 °C. Cykl rozpoczyna się od penetracji nasion przez samicę założycielską i złożenia jaj w bielmie owocu. Zamknięte larwy zjadają nasiona. Jeśli owoce zostaną wycięte w tym momencie, będzie można obserwować zarówno samicę założycielkę, jak i jej potomstwo. Po 14 dniach larwy stają się poczwarkami - na ogół stadium poczwarki trwa 5 dni. W fazie dorosłej samice kopulują ze swoim rodzeństwem, a nowo zapłodnione samice odlatują od uszkodzonych owoców w poszukiwaniu nowych owoców kawy, aby rozpocząć nowy cykl4.

Zarówno proces penetracji, jak i wynik żerowania larw uszkadzają ziarna kawy, obniżając jakość napoju kawowego i znacznie zmniejszając dochody; więcej niż 5% porażenia na plantacjach kawy jest ogólnie uważane za próg ekonomiczny.

Kontrola CBB opiera się na strategii zintegrowanej ochrony przed szkodnikami (IPM), obejmującej kontrolę kulturową i praktyki agronomiczne, naturalne czynniki biologiczne oraz stosowanie chemicznych środków owadobójczych, co wymaga warunków bezpieczeństwa i terminowego stosowania4.

Aby ocenić nowe insektycydy do kontroli CBB, potrzebne są tanie metodologie, które pozwalają na uzyskanie szybkich wyników. Obecnie stosowane są zarówno procedury laboratoryjne, jak i terenowe, w tym sztuczne diety zawierające kawę, w których zawarte są insektycydy5,6, lub rozpylanie insektycydów na suchy pergamin coffee7,8,9. Ponadto opisano eksperymenty przeprowadzone w terenie z użyciem gałęzi kawowca pokrytych rękawami entomologicznymi10,11; Metody te wymagają jednak intensywnego nakładu pracy i długich okresów oceny.

Warunek przypominający naturalne warunki polowe, który jest również szybki i tani, to użycie zielonych lub dojrzałych owoców kawy. Jednak owoce te muszą być przechowywane w warunkach odpowiednich do rozwoju CBB, unikając zmian i zanieczyszczeń mikroorganizmami, aby zachować ich jakość i właściwości. W tym celu zastosowano różne środki dezynfekujące, a także procedury związane z ciepłem i promieniowaniem7,9,12,13,14,15,16.

Dodatkowo, metody oceny insektycydów w stosunku do CBB wymagają symulacji dorosłych samic latających w poszukiwaniu owoców lub penetrujących te owoce17,18. W tym celu na polu przeprowadzono sztuczne inwazje owoców8,11,19, chociaż proces ten jest pracochłonny i zależy od warunków środowiskowych.

Tutaj opisujemy ustandaryzowaną metodologię oceny produktów, które mogą mieć różny wpływ na CBB w kontrolowanych warunkach środowiskowych, które przypominają warunki terenowe.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

UWAGA: Ten protokół dotyczy różnych metod identyfikacji różnych efektów na CBB w warunkach laboratoryjnych.

1. Zbiór owoców

  1. Zbierz GF w wieku rozwojowym ~120-150 dni po kwitnieniu z drzew na plantacji kawy wcześnie rano.

2. Dezynfekcja owoców20

  1. Przynieś około 300 GF do laboratorium. Wybierz GF o jednolitej wielkości i zdrowych i wycofaj szypułki.
  2. Zanurz GF w roztworze mydła (2 ml płynnego mydła do mycia naczyń w 998 ml wody z kranu), a następnie przetrzyj, aby umyć GF. Następnie opłucz owoce wodą, trzykrotnie zmieniając wodę.
  3. Zanurz GFs w 0,5% roztworze podchlorynu sodu (100 ml w 900 ml wody z kranu) i mieszaj w wytrząsarce z prędkością 110 obr./min przez 15 minut. Następnie spłucz GF wodą, mieszając w shakerze i zmieniając wodę trzy razy, co 10 minut.
  4. Osusz GF sterylnymi ręcznikami papierowymi.
  5. Umieść GF na tacach (33 cm x 25 cm x 2 cm) i naświetlaj je przez 15 minut, umieszczając GF w odległości 55 cm od źródła UV wewnątrz poziomej stacji przepływu laminarnego z obsługą promieniowania UV.
  6. W ciągu 15 minut, co 5 minut, przesuwaj GFs, aby zapewnić napromieniowanie całego owocu.

3. Dezynfekcja owadów21

  1. Użyj nowo powstałych (tego samego dnia) owadów CBB do skonfigurowania testów biologicznych.
  2. Zanurz CBB w 0,5% roztworze podchlorynu sodu, powoli mieszając je szczotką przez 10 minut.
  3. Przefiltruj CBB przez muślinową szmatkę i umyj je trzykrotnie sterylną wodą destylowaną.
  4. Usuń nadmiar wody sterylnymi ręcznikami papierowymi.

4. Ocena produktu o działaniu ochronnym na owoce (preinfestacja) (Rysunek 1)

  1. Użyj grupy GF na jednostkę eksperymentalną. Ogólnie rzecz biorąc, na jednostkę eksperymentalną stosuje się grupę 30 GF.
  2. Umieść GF w plastikowych pudełkach (jednostka eksperymentalna).
  3. Zastosować badany produkt w różnych stężeniach do oceny. Aplikację należy przeprowadzić za pomocą przenośnego opryskiwacza. Tutaj przetestowano emulsję alkaloidową o stężeniu 5% i 6%.
  4. Jako kontrolę, spryskaj grupę GF wodą.
  5. Stosuj co najmniej trzy powtórzenia (jednostka eksperymentalna) na zabieg, rozpylając jedno po drugim.
  6. W sterylnym kapturze wypuść dwie dorosłe osoby CBB na GF (w sumie do plastikowych pudełek wprowadza się 60 CBB). Po 30 minutach przykryj pudełka.
  7. Pozostaw plastikowe pudełka z zarażonymi GF w pomieszczeniu lub inkubatorze w kontrolowanych warunkach (ciemno, 25 ± 2 °C, wilgotność względna 71% ± 5%).
  8. Po 1, 7, 15 i 21 dniach policz liczbę owoców omacnicy oraz żywych i martwych owadów poza owocami w każdym pudełku.
  9. Po 20 dniach od inwazji należy wypreparować każdą GF pod mikroskopem stereoskopowym w powiększeniu 10x.
  10. Policz liczbę zdrowych nasion lub nasion uszkodzonych przez owady w każdym owocu.
  11. Policz różne zaobserwowane etapy biologiczne CBB22 i policz liczbę martwych owadów w każdym nasionie, aby określić śmiertelność owadów na jednostkę doświadczalną.

5. Ocena wpływu produktu po inwazji CBB (po inwazji) (Rysunek 3)

  1. Stosować grupy po 200 owoców na zabieg.
  2. W sterylnym kapturze uwolnić dorosłe osobniki CBB (stosunek 2:1 dorosłych CBB do GF) do wcześniej zdezynfekowanych GF, pozwalając na postęp inwazji przez 3 godziny w temperaturze 21 °C.
  3. Zbadaj GFs. Po 3 godzinach większość z nich powinna być zainfekowana, z odwłokiem CBB nadal odsłoniętym (pozycja A20), jak pokazano na Rysunek 2.
  4. Wybierz 46 zainfekowanych GF (pozycja A) i umieść je w 96-dołkowych plastikowych stojakach (jednostka eksperymentalna). Owoce powinny pozostać w tej pozycji, aby zabieg mógł być bezpośrednio rozpylony na CBB perforujący owoc.
  5. Spryskaj co najmniej trzy razy (trzy stojaki) na zabieg, jeden po drugim, przykrywając stojaki po 30 minutach.
  6. Pozostaw stojaki z zarażonymi GF w pomieszczeniu lub inkubatorze w kontrolowanych warunkach (ciemność, 25 ± 2 °C, wilgotność względna 71% ± 5%).
  7. Po 20 dniach przeprowadź sekcję GF pod mikroskopem stereoskopowym przy 10-krotnym powiększeniu.
  8. Policz liczbę zdrowych nasion lub nasion uszkodzonych przez owady w każdym owocu.
  9. Policz różne etapy biologiczne CBB22 i liczbę martwych owadów w każdym nasionie, aby określić śmiertelność owadów na jednostkę doświadczalną.

6. Ocena produktu o działaniu odstraszającym na CBB

  1. Postępuj zgodnie z krokami 4.1-4.6 opisanymi w celu oceny produktu o działaniu ochronnym na owoce.
  2. Po wypuszczeniu dorosłych CBB do plastikowych pudełek, policz liczbę CBB, które odlatują od pudełek i liczbę, które atakują GF. Następnie wykonaj kroki 4.7-4.11.
  3. Postępuj zgodnie z krokami opisanymi w punktach 5.1-5.5, aby ocenić produkt po inwazji CBB.
  4. Po spryskaniu każdego zabiegu na owady w pozycji A, policz liczbę CBB, które przemieściły się z GF i/lub odleciały z GF. Następnie wykonaj kroki 5.6-5.9.

7. Analiza statystyczna

UWAGA: Zmiennymi odpowiedzi są procenty śmiertelności w czasie oraz procent zdrowych, niezainfekowanych nasion kawy.

  1. Oszacuj średnią i odchylenie standardowe każdej zmiennej odpowiedzi dla każdego leczenia.
  2. Wykonaj analizę wariancji dla każdej zmiennej odpowiedzi za pomocą modelu dla całkowicie randomizowanego projektu.
    UWAGA: 5% test porównawczy Dunnetta jest wykonywany w celu porównania zabiegów z absolutną kontrolą (kontrolą wody).
  3. Gdy leczenie znacznie różni się od absolutnej kontroli, użyj 5% testu najmniejszej istotnej różnicy (LSD), aby porównać leczenie.
  4. Oceń moc testu; jeśli jest większa niż 85%, spełnione są założenia normalności i jednorodności wariancji.

figure-protocol-1
Rysunek 1: Procedura oceny wpływu insektycydów na CBB przed inwazją. Etapy oceny wpływu insektycydów na Hypothenemus hampei (CBB) przed inwazją przy użyciu zielonych owoców (GFs). (A) Wybór owoców. (B) Rozpylanie środków owadobójczych na owoce kawy. (C) Porażenie CBB owoców kawy w stosunku 2:1 CBB na GF. (D) Porażone owoce. (E) Inkubacja owoców w kontrolowanych warunkach. (F) Rozbiór owoców. (G) Liczenie populacji CBB wewnątrz nasion. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

figure-protocol-2
Rysunek 2: Przetwarzanie inwazji CBB owoców kawy. Porażone owoce zawierają dorosłe osobniki CBB z częściowo odsłoniętymi odwłokami (pozycja A). Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

figure-protocol-3
Rysunek 3: Procedura oceny wpływu insektycydów na CBB. Etapy oceny wpływu insektycydów na CBB po porażeniu przy użyciu GFs. (A) Wybór owoców. (B) Porażenie owoców CBB w stosunku 2:1 CBB na GF. (C) Selekcja porażonych owoców. (D) Rozpylanie środka owadobójczego na owoce. (E) Inkubacja owoców. (F) Rozbiór owoców. (G) Liczenie populacji CBB. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wyniki pokazały, że samice CBB rozpoznały owoce, a w zależności od cech powierzchni owocu i emitowanych zapachów, samice CBB zaczęły penetrować lub rodzić owoce w ciągu 3 godzin w temperaturze 21 °C.

Wpływ środka owadobójczego na CBB po nałożeniu na owoce kawy (procedura preinfestacji) po 24 godzinach i po upływie czasu jest pokazany w Rysunek 4. Dwa insektycydy (emulsja alkaloidowa w stężeniu 5% i 6%) spowodowały wysoką śmiertelność owadów w dniu 20 (Tabela 1

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W tym protokole dezynfekcja owoców i owadów jest krytycznym krokiem. Kiedy owoce z pola są używane w laboratorium, często wykazują wysokie zanieczyszczenie i odwodnienie, ponieważ mikroorganizmy i roztocza są obecne w naskórku 7,15,16. Dlatego używanie owoców lub owadów, które nie są dezynfekowane, spowoduje śmierć owadów z powodu zanieczyszczenia wywołanego przez mikroorganizmy, takie jak bakterie lub grzyby, zakłócając w ten s...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Żaden z autorów nie ma do zadeklarowania konfliktu interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy wyrażają swoje podziękowania dla Narodowej Federacji Plantatorów Kawy Kolumbii, asystentów Departamentu Entomologii (Diana Marcela Giraldo, Gloria Patricia Naranjo), Stacji Doświadczalnej Naranjal i Jhona Félixa Trejosa.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zlewka z dziobkiem, niska forma 500 mLBRAND PP
Shaker stołowyNew Brunswick Scientific Innova 4000 Inkubator Shaker
Mydło w płynie do mycia naczyń-AXIONColgate-PalmoliveAXION
Hood; Pozioma stacja przepływu laminarnegoTerra Universal  Stal malowana proszkowo, 1930 mm szer. x 1118 mm gł. x 1619 mm wys., 120 V (https://www.terrauniversal.com/hood-horizontal-laminar-flow-station-9620-64a.html)
Owady CBBBIOCAFE(http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html).
Ręczniki papierowe Multi Fold WhiteFamilia73551
Preval Agregat natryskowy  Preval MerckZ365556-1KThttps://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sigma/z365556?gclid=Cj0KCQiAweaNBhDEARIsAJ
5hwbfZOy1TWGj6huatFtRQt
AzOyHe5-oBiKnOUK2T1exuuk
WwJLdvxkvsaAjoYEALw_wcB
Regały odwracalne 96-wellheathrow HEA2345Ahttps://www.heathrowscientific.com/reversible-racks-96-well-i-hea2345a
Ostrza skalpela N 11MerckS2771-100EA
Uchwyty skalpela N3MerckS2896-1EA
Podchlorek soduFirmaClorox
Mikroskop stereoskopowyZeissStemi 508https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/stereo-zoom-microscopes/stemi-508.html
BR87826

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mendesil, E., et al. Semiochemicals used in host location by the coffee berry borer, Hypothenemus hampei. Journal of Chemical Ecology. 35 (8), 944-950 (2009).
  2. Jaramillo, J., et al. Coffee berry borer joins bark beetles in coffee klatch. PLoS ONE. 8 (9), 74277(2013).
  3. Giraldo-Jaramillo, M., Garcia, A. G., Parra, J. R. Biology, thermal requirements, and estimation of the number of generations of Hypothenemus hampei (Ferrari, 1867) (Coleoptera: Curculionidae) in the state of São Paulo, Brazil. Journal of Economic Entomology. 111 (5), 2192-2200 (2018).
  4. Benavides, P., Góngora, C., Bustillo, A. IPM Program to Control Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei, with Emphasis on Highly Pathogenic Mixed Strains of Beauveria bassiana, to Overcome Insecticide Resistance in Colombia. IntechOpen. , (2012).
  5. Martínez, C. P., Echeverri, C., Florez, J. C., Gaitan, A. L., Góngora, C. E. In vitro production of two chitinolytic proteins with an inhibiting effect on the insect coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera: Curculionidae) and the fungus Hemileia vastatrix the most limiting pests of coffee crops. AMB Express. 2, 1-11 (2012).
  6. Padilla, B. E., Acuña, Z., Velásquez, C. S., Rubio, G. J. D. Inhibitors of [alpha]-amylases from the coffee berry borer Hypothenemus hampei in different plant species. Revista Colombiana de Entomología. 32 (2), 125-130 (2006).
  7. Alvarez, J. H., Cortina, H. A., Villegas, J. F. Methods to evaluate antibiosis to Hypothenemus hampei Ferrari in coffee under controlled conditions. Cenicafé. 52 (3), 205-214 (2001).
  8. Arcila, A., Duarte, A. F., Villalba, D. A., Benavides, P. New Product in the Integrated Management of the Coffee Berry Borer in Colombia. National Coffee Research Center (Cenicafé). , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/477 (2014).
  9. Jaramillo, J., Montoya, E., Benavides, P., Góngora, C. Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae for the control of coffee brocade in fruits on the ground. Revista Colombiana de Entomología. 41, 95-104 (2015).
  10. Bastidas, A., Velásquez, E., Benavides, P., Bustillo, A., Orozco, C. Evaluation of preformulated Beauveria bassiana (Bálsam) Vuillemin, for the control of the coffee berry borer. Agronomia. 17, 44-61 (2009).
  11. Villalba-Gault, D., Bustillo, A., Chaves Cordoba, B. Evaluation of insecticides for the control of the coffee berry borer in Colombia. Cenicafe. 46, 152-163 (1995).
  12. Bustillo, A. E., Orozco, J., Benavides, P., Portilla, M. Mass production and use of parasitoids for the control of the coffee berry borer in Colombia. Cenicafe. 47 (4), 215-230 (1996).
  13. Celestino, F. N., Pratissoli, D., Machado, L. C., Santos Junior, H. J. G. D., Mardgan, L., Ribeiro, L. V. Adaptation of breeding techniques of the coffee berry borer [Hypothenemus hampei (Ferrari). Coffee Science. 11 (2), 161-168 (2016).
  14. Domínguez, L., Parzanese, M. Ultraviolet light in food preservation. Argentine Foods. 52 (2), 70-76 (2012).
  15. Jaramillo, J., Chabi-Olaye, A., Poehling, H. M., Kamonjo, C., Borgemeister, C. Development of an improved laboratory production technique for the coffee berry borer Hypothenemus hampei, using fresh coffee berries. Entomologia Experimentalis et Applicata. 130 (3), 275-281 (2009).
  16. Pérez, J., Infante, F., Vega, F. E. Does the coffee berry borer (Coleoptera: Scolytidae) have mutualistic fungi. Annals of the Entomological Society of America. 98 (4), 483-490 (2005).
  17. Benavides, P., Gil, P., Góngora, C., Arcila, A. Integrated pest management. Cenicafe. Manual of the Colombian coffee grower: Research and technology for the sustainability of coffee growing. Manizales: FNC: Cenicafé. 3, 179-214 (2013).
  18. Bustillo, P. A review of the coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae), in Colombia. Revista Colombiana de Entomología. 32 (2), 101-116 (2006).
  19. Arcila, A., Benavides, P., Mejia, J. New Chemical Control Alternative for the Integrated Management of the Coffee Berry Borer. National Coffee Research Center (Cenicafé). , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/handle/10778/557 (2015).
  20. Tapias, L., Martinez, C., Benavides, P., Gongora, C. Laboratory method to evaluate the effect of insecticides on the coffee berry borer. Cenicafé. 68 (2), 76-89 (2017).
  21. Bustillo, A. E., Marín, P. How to reactivate the virulence of Beauveria bassiana to control the coffee berry borer. Manejo Integrado de Plagas. 63, (2002).
  22. Constantino, L. M., et al. morphological and genetic aspects of Hypothenemus obscurus and Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae). Revista Colombiana de Entomología. 37 (2), 173-182 (2011).
  23. Estrela, C., et al. Mechanism of action of sodium hypochlorite. Brazilian Dental Journal. 13 (2), 113-117 (2002).
  24. Diffey, B. L. Solar ultraviolet radiation effects on biological systems. Physics in Medicine and Biology. 36 (3), 299-328 (1991).
  25. BIOCAFE. , Available from: http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html (2022).
  26. Bustillo, A. E., et al. Integrated Management of the Coffee Berry Borer: Hypothenemus hampei Ferrari in Colombia. , Available from: https://biblioteca.cenicafe.org/hangle/10778/848 (1998).
  27. Portilla, R. Development and evaluation of an artificial diet for the rearing of Hypothenemus hampei. Cenicafé. 50, 24-38 (1999).
  28. Portilla, R. M., Streett, D. A. New techniques for automated mass production of Hypothenemus hampei on the modified Cenibroca artificial diet. Cenicafé. 57, 37-50 (2006).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

skuteczno insektycyd wzielone owoce kawymiertelno owad wmetoda bioanalizydezynfekcja owoc wtraktowanie po infestacjiocena entomopatogen wocena uszkodze nasionodporno owad w

Powiązane artykuły