Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Doustne skojarzone leczenie przeciwretrowirusowe u humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1

2.5K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/63696

⸱

6 października 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Hematology and Oncology, David Geffen School of Medicine, University of California, Los Angeles

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół opisuje nowatorską metodę dostarczania doustnych leków antyretrowirusowych, które skutecznie hamują replikację RNA HIV-1 u humanizowanych myszy.

Streszczenie

Pandemia ludzkiego wirusa niedoboru odporności (HIV-1) nadal rozprzestrzenia się na całym świecie, a obecnie nie ma dostępnej szczepionki przeciwko HIV. Chociaż skojarzona terapia przeciwretrowirusowa (cART) odniosła sukces w hamowaniu replikacji wirusa, nie jest w stanie całkowicie wyeliminować rezerwuaru u osób zakażonych wirusem HIV. Bezpieczna i skuteczna strategia leczenia zakażenia wirusem HIV będzie wymagała wielotorowych metod, dlatego postępy w modelach zwierzęcych do wykrywania zakażenia HIV-1 mają kluczowe znaczenie dla rozwoju badań nad leczeniem HIV. Humanizowane myszy podsumowują kluczowe cechy zakażenia HIV-1. Humanizowany model myszy może być zainfekowany wirusem HIV-1, a replikacja wirusa może być kontrolowana za pomocą schematów cART. Co więcej, przerwanie cART powoduje szybkie odbicie wirusa u humanizowanych myszy. Jednak podawanie cART zwierzęciu może być nieskuteczne, trudne lub toksyczne, a wiele klinicznie istotnych schematów cART nie jest w stanie być optymalnie wykorzystanych. Oprócz tego, że jest potencjalnie niebezpieczne dla badaczy, podawanie cART poprzez powszechnie stosowaną intensywną codzienną procedurę wstrzykiwania wywołuje stres poprzez fizyczne przymus zwierzęcia. Nowatorska doustna metoda cART w leczeniu humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1 opisana w tym artykule spowodowała supresję wiremii poniżej poziomu wykrywalności, zwiększenie szybkości przywracania CD4 + i poprawę ogólnego stanu zdrowia u humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1.

Wprowadzenie

Oczekiwana długość życia osób zakażonych wirusem HIV znacznie się poprawiła dzięki skojarzonemu leczeniu antyretrowirusowemu (cART)1,2. cART skutecznie zmniejsza replikację HIV-1 i zwiększa liczbę limfocytów T CD4+ do normalnego poziomu u większości uczestników przewlekle zakażonych wirusem HIV-13, co skutkuje poprawą ogólnego stanu zdrowia i radykalnym zmniejszeniem postępu choroby4. Jednak utajony rezerwuar HIV-1 powstaje nawet wtedy, gdy ART jest inicjowany podczas ostrej infekcji5,6,7. Rezerwuary utrzymują się przez lata podczas ART i szybkiego odbicia wirusa po przerwaniu ART jest dobrze udokumentowane8,9. Osoby żyjące z wirusem HIV na ART są również predysponowane do większego ryzyka chorób współistniejących, takich jak choroby układu krążenia, nowotwory i zaburzenia neurologiczne10,11,12. Dlatego potrzebne jest funkcjonalne lekarstwo na HIV. Modele zwierzęce do wykrywania zakażenia wirusem HIV-1 oferują oczywiste korzyści w opracowywaniu i walidacji nowych strategii leczenia HIV13,14,15. Humanizowane myszy, jako mały model zwierzęcy, mogą zapewnić wieloliniową rekonstytucję ludzkich komórek odpornościowych w różnych tkankach, co pozwala na dokładne badanie zakażenia wirusem HIV16,17,18,19. Wśród modeli humanizowanych, humanizowany model szpiku kostnego, wątroby i grasicy (BLT) z powodzeniem podsumowuje przewlekłe zakażenie HIV-1, a także funkcjonalne odpowiedzi immunologiczne człowieka na zakażenie HIV-120,21,22,23,24. Dlatego humanizowany model myszy BLT jest szeroko stosowany do badania różnych aspektów w dziedzinie badań nad HIV. Humanizowane myszy BLT są nie tylko dobrze ugruntowanymi modelami rekapitulacji uporczywego zakażenia HIV-1 i patogenezy, ale także narzędziami konsekwentnymi do oceny strategii interwencyjnych opartych na terapii komórkowej. Obecni autorzy i inni wykazali, że humanizowany model myszy BLT podsumowuje uporczywe zakażenie HIV-1 i patogenezę25,26,27 i dostarcza narzędzi do oceny strategii interwencji opartych na terapii komórkowej 28,29,30,31,32,33.

cART schematy składające się z kombinacji leków antyretrowirusowych, które są przyjmowane codziennie, hamują replikację HIV-1 do tego stopnia, że wiremia u osób skutecznie leczonych pozostaje niewykrywalna przez długi czas34. Wyniki leczenia humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV za pomocą klinicznie istotnych schematów cART przypominają te obserwowane u osób zakażonych wirusem HIV-1 leczonych ART22: Poziomy HIV-1 są tłumione poniżej granic wykrywalności, a przerwanie cART powoduje odbicie replikacji HIV z utajonego rezerwuaru35. Podskórne (SC)27,36,37 lub dootrzewnowe (IP)37,38,39 iniekcja jest powszechnie stosowaną drogą leczenia cART u humanizowanych myszy. Jednak intensywne codzienne wstrzykiwanie wywołuje stres u zwierząt poprzez fizyczne ograniczenie40. Jest to również pracochłonne i potencjalnie niebezpieczne dla badaczy ze względu na zwiększone narażenie na wirusa HIV podczas używania ostrych narzędzi. Podawanie doustne jest idealne do naśladowania wchłaniania, dystrybucji i wydalania leków cART, które są przyjmowane przez osoby zakażone wirusem HIV-1. Podawanie doustne zazwyczaj wiąże się z dostosowanymi i często pracochłonnymi procedurami umieszczania leków antyretrowirusowych w wysterylizowanym (koniecznym ze względu na niedobór odporności myszy) jedzeniu24,37,41 lub water42,43,44,45,46, które mogą, ale nie muszą, być chemicznie kompatybilne z wieloma lekami antyretrowirusowymi lub powodować coś, czego myszy nie byłyby skłonne do jedzenia lub picia (co wpłynęłoby na dawkę i poziom leku w organizmie). Zaproponowana tu nowatorska metoda doustnego podawania cART przewyższa wcześniejsze próby podania ze względu na kompatybilność z różnymi rodzajami leków antyretrowirusowych, bezpieczeństwo oraz łatwość przygotowania i podawania oraz zmniejszenie stresu i niepokoju zwierząt wynikających z codziennego wstrzykiwania.

Fumaran dizoproksylu tenofowiru (TDF), Elvitegravir (ELV) i Raltegravir (RAL) są lekami słabo rozpuszczalnymi w wodzie. Co ciekawe, zwiększoną biodostępność TDF obserwuje się w przypadku tłustych pokarmów, co sugeruje, że konkurencyjne hamowanie lipaz przez tłuste pokarmy może zapewnić pewną ochronę dla TDF47. Dlatego kubki DietGel Boost zostały wybrane tak, aby zastąpić zwykłą karmę dla gryzoni jako metodę dostarczania w oparciu o ich niewielką zawartość tłuszczu (20,3 g na 100 g) w porównaniu ze zwykłą karmą dla gryzoni (10 g na 100 g) i typową dietą wysokotłuszczową dla myszy (40-60 g na 100 g)48. Całkowita waga jednej filiżanki to 75 g; W ten sposób każda filiżanka będzie zawierała ilość pokarmu, a tym samym leku, wystarczającą dla pięciu myszy w ciągu 3 dni.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Zanonimizowana ludzka tkanka płodowa została pozyskana komercyjnie. Badania na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z protokołami zatwierdzonymi przez Uniwersytet Kalifornijski w Los Angeles i Komitet Badań nad Zwierzętami (ARC) (UCLA) zgodnie ze wszystkimi wytycznymi federalnymi, stanowymi i lokalnymi. W szczególności wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z zaleceniami i wytycznymi dotyczącymi trzymania i opieki nad zwierzętami laboratoryjnymi National Institutes of Health (NIH) oraz Association for the Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AALAC) International na mocy protokołu UCLA ARC o numerze 2010-038-02B. Wszystkie operacje przeprowadzono w znieczuleniu ketaminą (100 mg/kg)/ksylazyną (5 mg/kg) i izofluranem (2-3% obj.) i dołożono wszelkich starań, aby zminimalizować ból i dyskomfort zwierząt.

1. Humanizowane myszy zakażone wirusem HIV-1

UWAGA: Humanizowane myszy zostały skonstruowane zgodnie z wcześniejszym opisem w30,31,49. Protokół jest pokrótce opisany poniżej.

  1. Oczyść hematopoetyczne komórki progenitorowe CD34+ z ludzkiej wątroby płodu za pomocą mikrogranulek anty-CD34 zgodnie z protokołem producenta.
  2. Przed zabiegiem znieczulić 6-8-tygodniowe myszy NOD/SCID/IL2Rγ−/− (NSG) i poddać je subletalnemu napromienianiu (2,7 Gy).
  3. Wszczepić grasicę, pochodzącą od tego samego dawcy co wątroba płodu, pod torebkę nerkową wraz z wątrobą.
  4. Po implantacji wstrzyknij myszom dożylnie od 0,5 miliona do miliona komórek CD34 +.
  5. Po 8-10 tygodniach zbierz 100 μl krwi myszy przez krwawienie zadoczodołowe50 do probówek mikrowirówek zawierających 5 μl EDTA i wiruj przy 350 x g przez 3 min.
  6. Przechowywać osocze w temperaturze -80 °C w celu monitorowania wiremii po zakażeniu myszy wirusem HIV-1. Dodaj 2 ml 83% roztworu NH4C i inkubuj przez 5 minut w temperaturze pokojowej w celu lizy czerwonych krwinek.
  7. Dodaj 10 ml RPMI z 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS), aby zatrzymać lizę. Wirować z prędkością 300 x g przez 5 min.
  8. Aspirowany supernatant. Wybarwić komórki panelem przeciwciał (patrz tabela materiałów) i przeanalizować za pomocą cytometrii przepływowej w celu sprawdzenia wszczepienia ludzkich komórek odpornościowych.
  9. Zakażone myszy wykazujące ponad 50% krążących komórek CD45 + poprzez wstrzyknięcie żyły zaoczodołowej 51,52 z co najmniej 200 ng p24 szczepu HIV-1 (tj. NFNSXSL930,53,54) za pomocą strzykawki insulinowej. Pobieraj krew co dwa tygodnie do analizy cytometrii przepływowej i pomiaru wiremii.

2. Przygotowanie leków ART

  1. Zważ poszczególne leki; na przykład, aby przygotować 10 kubków na żywność z cART, użyj sterylnych skrobaków do komórek, aby odważyć 250 mg FTC (emtrycytabiny), 375 mg TDF i 500 mg RAL lub ELV do pojedynczych sterylnych probówek wirówkowych o pojemności 15 ml w komorze bezpieczeństwa biologicznego.
  2. Dodaj 1 ml DMSO do probówki FTC 250 mg (końcowe stężenie 250 mg / ml), dodaj 1,5 ml DMSO do probówki 375 mg TDF (końcowe stężenie 250 mg / ml) i dodaj 1 ml DMSO do 500 mg RAL lub probówki ELV (końcowe stężenie 500 mg / ml). Mieszać lub pipetować mieszaninę leku aż do całkowitego rozpuszczenia i uzyskania klarownego roztworu.
  3. Użyj hydrofilowego filtra membranowego PVDF o wielkości porów 0,22 μM, aby sterylizować roztwory za pomocą sterylnej strzykawki. Poszczególne roztwory leków można przechowywać w temperaturze -20 °C przez 12 tygodni.
  4. Gotowy do użycia roztwór świeżo rozmrozić po jednej porcji każdego roztworu leku w temperaturze 37 °C, aż roztwór stanie się klarowny. Dobrze wymieszać za pomocą pipety.
  5. Połącz leki i dobrze wymieszaj, aby utworzyć mieszankę główną: 1 ml FTC w DMSO, 1,5 ml TDF w DMSO i 1 ml ELV lub RAL w DMSO.
    UWAGA: Z tej ilości wyjdzie 10 kubków na żywność.
  6. Dodaj 350 μl roztworu cART master mix do jednej filiżanki, aby przygotować jedną filiżankę DietGel Boost cART.
  7. Dodać 0,75 ml trimetoprimu-sulfametoksazolu (0,48 mg/ml stężenia końcowego) do filiżanki.
  8. Dokładnie wymieszać za pomocą sterylnych końcówek do pipet o pojemności 1 ml.
  9. W razie potrzeby przechylić pojemnik na żywność zawierającą cART z oryginalnego kubka za pomocą mikroszpatułki na szalkę Petriego o średnicy 60 mm. Zważ karmę na wadze, aby obliczyć ilość kubka z jedzeniem zawierającego cART dla każdej klatki w zależności od liczby myszy.

3. Podawanie leków ART myszom zakażonym wirusem HIV-1

  1. Wyjmij zwykłą karmę z klatki i zastąp ją kubkiem na żywność zawierającym cART.
    UWAGA: Średnio mysz zjada do 5 g jedzenia dziennie. Około jednego kubka z jedzeniem można podawać pięciu myszom przez 2 dni.
  2. Odświeżaj jedzenie cART trzy razy w tygodniu.
  3. Zważ zużyte kubki, aby monitorować spożycie. Waż myszy co tydzień, aby potwierdzić spożycie.

4. Monitorowanie wiremii za pomocą PCR w czasie rzeczywistym

  1. Oceń ludzkie komórki odpornościowe (poziomy limfocytów T CD4 i CD8) i replikację HIV-1 u myszy BLT co 2 tygodnie przez krwawienie zaoczodołowe. Zbierz osocze, postępując zgodnie z instrukcjami w krokach 1.5-1.8.
  2. Monitoruj miano wirusa w osoczu myszy zakażonych wirusem HIV-1 przed i podczas doustnego podawania cART przez 8 tygodni. Wyodrębnij wirusowe RNA osocza z osocza za pomocą zestawu do ekstrakcji wirusowego RNA i określ go ilościowo za pomocą PCR w czasie rzeczywistym przy użyciu starterów i sond (patrz Tabela materiałów), jak opisano wcześniej27,30,31. Stosuj następujący protokół cykliczny: 48 °C (15 min), 95 °C (10 min), a następnie cyklicznie 95 °C (15 s), 60 °C (1 min) przez 45 cykli.

5. Oceń proporcje CD4/CD8 za pomocą cytometrii przepływowej

  1. Przygotować zawiesiny jednokomórkowe z krwi obwodowej z krwawień dwutygodniowych, wykonując czynności 1.5-1.8.
  2. Wybarwić komórki markerami powierzchniowymi i przeanalizować za pomocą cytometrii przepływowej. Użyj następujących przeciwciał markera powierzchniowego27,30,43,49 w cytometrii przepływowej: CD45 (klon HI30), CD8 (klon SK1), CD3 (klon OKT3), CD4 (klon RPA-T4)27,30,42,49.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Zakładając, że przeciętna mysz o masie 25 g spożywa 4 g pokarmu dziennie, dzienna dawka leku podawana doustnie odpowiada 2,88 mg/kg TFV, 83 mg/kg FTC i 768 mg/kg RAL. Aby sprawdzić, czy zoptymalizowany schemat żywieniowy jest toksyczny i wpływa na ogólny stan zdrowia w porównaniu z codziennymi zastrzykami cART, monitorowano masę ciała myszy co tydzień przed i w trakcie podawania cART doustnie lub podskórnie. Przed podaniem cART nie stwierdzono istotnych różnic w masie ciała w poszczególnych grupach (...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Opracowano tutaj doustną metodę podawania cART dla humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1 poprzez połączenie trzech leków antyretrowirusowych w pokarmie o wysokiej zawartości składników odżywczych. W porównaniu z podawaniem w codziennych zastrzykach, podawanie doustne jest łatwiejsze w użyciu, ogranicza częstotliwość podawania, ogranicza obchodzenie się ze zwierzętami, minimalizuje stres i poprawia bezpieczeństwo55. Do tej pory tylko kilka badań na humanizowanych myszach 24,37,41 wykorzysty...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

SK jest założycielem CDR3 Inc. Pozostali autorzy deklarują, że badanie zostało przeprowadzone przy braku jakichkolwiek powiązań handlowych lub finansowych, które mogłyby być interpretowane jako potencjalny konflikt interesów.

Podziękowania

Chcielibyśmy podziękować doktorom Romas Geleziunas i Jeffowi Murry'emu oraz ludziom z Gilead za dostarczenie leków antyretrowirusowych użytych w tym badaniu. Ta praca została sfinansowana przez NCI 1R01CA239261-01 (dla Kitchen), NIH Grants P30AI28697 (UCLA CFAR Virology Core, Gene and Cell Therapy Core oraz Humanized Mouse Core), U19AI149504 (PIs: Kitchen & Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (do Zhen), NIAID R2120200174 (PIs: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). Praca ta była również wspierana przez UCLA AIDS Institute, James B. Pendleton Charitable Trust i McCarthy Family Foundation.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Szalka Petriego 60 mmThermo Scientific Nunc150288Do porcjowania ART food
APC anty-ludzkie przeciwciało CD8Biolegend344722Do cytometrii przepływowej
BD LSRFortessaBD biosciencesDo zbierania danych o przepływie
Mikrokulki CD34Miltenyi Biotec130-046-702Do generacji myszy NSG-BLT
Probówki wirówkoweFalcon14-432-22Do rozpuszczania ART
DietGel BoostClearH2O72-04-5022Do wytwarzania żywności ART
ElvitegravirGileadPodarowany przez Gilead
EmtrycytabinaGileadPodarowany przez Gilead
FITC anty-ludzkie przeciwciało CD3Biolegend317306Do cytometrii przepływowej
OprogramowanieFlowjo FlowJoDo analizy danych cytometrii przepływowej
starter do przodu HIV-1: 5′-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3′;IDTDostosowanedo wiremii Sonda RT-PCR
HIV-1: 5′-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT
TAACTG [Tamra-Q]-3′;		IDTDostosowanydo wiremii RT-PCR
HIV-1 odwrócony starter: 5′-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3′;IDTDostosowanydo wiremii RT-PCR
Ludzka tkanka płodowaAdvanced Bioscience Resources, Inc
Myszy, szczep NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJThe Jackson Laboratory5557Do konstruowania humanizowanych myszy
Pacific Blue anty-human CD45Biolegend304022Do cytometrii
przepływowej PerCP anty-ludzkie przeciwciało CD4Biolegend300528Do cytometrii
przepływowej QIAamp Zestawy wirusowego RNAQiagen  52904Do pomiaru wiremii
RaltegravirMerckGifted from Merck
Sterylne skrobakikomórkowe Thermo Scientific179693Do porcjowania żywności ART
TaqMan RNA-To-Ct 1-Step KitApplied Biosystems4392653Do wykrywania wiremii w osoczu
Fumaran dizoproksylu TenofowiruGileadPodarowany przez Gilead
Trimethoprim-SulfamethoxazolePharmaceutical AssociatesNDC 0121-0854-16Do utrzymywania sterylności żywności ART. Każda łyżeczka o pojemności 5 ml zawiera
200 mg sulfametoksazolu, USP
40 mg trimetoprimu, USP
NMT 0,5% alkoholu

Bibliografia

  1. Antiretroviral Therapy Cohort Collaboration. Life expectancy of individuals on combination antiretroviral therapy in high-income countries: a collaborative analysis of 14 cohort studies. Lancet. 372 (9635), 293-299 (2008).
  2. May, M. T., et al. Impact on life expectancy of HIV-1 positive individuals of CD4+ cell count and viral load response to antiretroviral therapy. AIDS. 28 (8), 1193-1202 (2014).
  3. Autran, B., et al. Positive effects of combined antiretroviral therapy on CD4+ T cell homeostasis and function in advanced HIV disease. Science. 277 (5322), 112-116 (1997).
  4. Palella, F. J., et al. Declining morbidity and mortality among patients with advanced human immunodeficiency virus infection. HIV outpatient study investigators. The New England Journal of Medicine. 338 (13), 853-860 (1998).
  5. Finzi, D., et al. Identification of a reservoir for HIV-1 in patients on highly active antiretroviral therapy. Science. 278 (5341), 1295-1300 (1997).
  6. Ananworanich, J., Dube, K., Chomont, N. How does the timing of antiretroviral therapy initiation in acute infection affect HIV reservoirs. Current Opinion in HIV and AIDS. 10 (1), 18-28 (2015).
  7. Whitney, J. B., et al. Rapid seeding of the viral reservoir prior to SIV viraemia in rhesus monkeys. Nature. 512 (7512), 74-77 (2014).
  8. Siliciano, J. D., et al. Long-term follow-up studies confirm the stability of the latent reservoir for HIV-1 in resting CD4 T cells. Nature Medicine. 9 (6), 727-728 (2003).
  9. Chun, T. W., Moir, S., Fauci, A. S. HIV reservoirs as obstacles and opportunities for an HIV cure. Nature Immunology. 16 (6), 584-589 (2015).
  10. Brothers, T. D., et al. Frailty in people aging with human immunodeficiency virus (HIV) infection. Journal of Infectious Disease. 210 (8), 1170-1179 (2014).
  11. D. A. D. Study Group. Use of nucleoside reverse transcriptase inhibitors and risk of myocardial infarction in HIV-infected patients enrolled in the D:A:D study: a multi-cohort collaboration. Lancet. 371 (9622), 1417-1426 (2008).
  12. Schouten, J., et al. Cross-sectional comparison of the prevalence of age-associated comorbidities and their risk factors between HIV-infected and uninfected individuals: the AGEhIV cohort study. Clinical Infectious Diseases. 59 (12), 1787-1797 (2014).
  13. Policicchio, B. B., Pandrea, I., Apetrei, C. Animal models for HIV cure research. Frontiers in Immunology. 7, 12(2016).
  14. Hessell, A. J., Haigwood, N. L. Animal models in HIV-1 protection and therapy. Current Opinion in HIV and AIDS. 10 (3), 170-176 (2015).
  15. Ambrose, Z., KewalRamani, V. N., Bieniasz, P. D., Hatziioannou, T. HIV/AIDS: in search of an animal model. Trends in Biotechnology. 25 (8), 333-337 (2007).
  16. Melkus, M. W., et al. Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1. Nature Medicine. 12 (11), 1316(2006).
  17. Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S., Yang, Y. G. Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34+ cell transplantation. Blood. 108 (2), 487-492 (2006).
  18. Wege, A. K., Melkus, M. W., Denton, P. W., Estes, J. D., Garcia, J. V. Functional and phenotypic characterization of the humanized BLT mouse model. Current Topics in Microbiology and Immunology. 324, 149-165 (2008).
  19. Garcia, J. V. In vivo platforms for analysis of HIV persistence and eradication. The Journal of Clinical Investigation. 126 (2), 424-431 (2016).
  20. Carrillo, M. A., Zhen, A., Kitchen, S. G. The use of the humanized mouse model in gene therapy and immunotherapy for HIV and cancer. Frontiers in Immunology. 9, 746(2018).
  21. Abeynaike, S., Paust, S. Humanized mice for the evaluation of novel HIV-1 therapies. Frontiers in Immunology. 12, 636775(2021).
  22. Marsden, M. D., Zack, J. A. Humanized mouse models for human immunodeficiency virus infection. Annual Review of Virology. 4 (1), 393-412 (2017).
  23. Brainard, D. M., et al. Induction of robust cellular and humoral virus-specific adaptive immune responses in human immunodeficiency virus-infected humanized BLT mice. Journal of Virology. 83 (14), 7305-7321 (2009).
  24. Nischang, M., et al. Humanized mice recapitulate key features of HIV-1 infection: a novel concept using long-acting anti-retroviral drugs for treating HIV-1. PLoS One. 7 (6), 38853(2012).
  25. Garcia-Beltran, W. F., et al. Innate immune reconstitution in humanized bone marrow-liver-thymus (HuBLT) mice governs adaptive cellular immune function and responses to HIV-1 infection. Frontiers in Immunology. 12, 667393(2021).
  26. Cheng, L., et al. Blocking type I interferon signaling enhances T cell recovery and reduces HIV-1 reservoirs. The Journal of Clinical Investigation. 127 (1), 269-279 (2017).
  27. Zhen, A., et al. Targeting type I interferon-mediated activation restores immune function in chronic HIV infection. The Journal of Clinical Investigation. 127 (1), 260-268 (2017).
  28. Khamaikawin, W., et al. Modeling anti-HIV-1 HSPC-based gene therapy in humanized mice previously infected with HIV-1. Molecular Therapy Methods & Clinical Development. 9, 23-32 (2018).
  29. Kitchen, S. G., et al. Engineering antigen-specific T cells from genetically modified human hematopoietic stem cells in immunodeficient mice. PLoS One. 4 (12), 8208(2009).
  30. Zhen, A., et al. Robust CAR-T memory formation and function via hematopoietic stem cell delivery. PLoS Pathogens. 17 (4), 1009404(2021).
  31. Zhen, A., et al. HIV-specific immunity derived from chimeric antigen receptor-engineered stem cells. Molecular Therapy. 23 (8), 1358-1367 (2015).
  32. Zhen, A., Kitchen, S. Stem-cell-based gene therapy for HIV infection. Viruses. 6 (1), 1-12 (2013).
  33. Mu, W., Carrillo, M. A., Kitchen, S. G. Engineering CAR T cells to target the hiv reservoir. Frontiers in Celluar and Infection Microbiology. 10, 410(2020).
  34. Arts, E. J., Hazuda, D. J. HIV-1 antiretroviral drug therapy. Cold Spring Harbour Perspectives in Medicine. 2 (4), 007161(2012).
  35. Denton, P. W., et al. Generation of HIV latency in humanized BLT mice. Journal of Virology. 86 (1), 630-634 (2012).
  36. Kovarova, M., et al. A long-acting formulation of the integrase inhibitor raltegravir protects humanized BLT mice from repeated high-dose vaginal HIV challenges. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 71 (6), 1586-1596 (2016).
  37. Lavender, K. J., et al. An advanced BLT-humanized mouse model for extended HIV-1 cure studies. AIDS. 32 (1), 1-10 (2018).
  38. Denton, P. W., et al. Targeted cytotoxic therapy kills persisting HIV infected cells during ART. PLoS Pathogens. 10 (1), 1003872(2014).
  39. Marsden, M. D., et al. In vivo activation of latent HIV with a synthetic bryostatin analog effects both latent cell "kick" and "kill" in strategy for virus eradication. PLoS Pathogens. 13 (9), 1006575(2017).
  40. Stuart, S. A., Robinson, E. S. Reducing the stress of drug administration: implications for the 3Rs. Science Report. 5, 14288(2015).
  41. Halper-Stromberg, A., et al. Broadly neutralizing antibodies and viral inducers decrease rebound from HIV-1 latent reservoirs in humanized mice. Cell. 158 (5), 989-999 (2014).
  42. Daskou, M., et al. ApoA-I mimetics reduce systemic and gut inflammation in chronic treated HIV. PLoS Pathogens. 18 (1), 1010160(2022).
  43. Mu, W., et al. Apolipoprotein A-I mimetics attenuate macrophage activation in chronic treated HIV. AIDS. 35 (4), 543-553 (2021).
  44. Daskou, M., et al. ApoA-I mimetics favorably impact cyclooxygenase 2 and bioactive lipids that may contribute to cardiometabolic syndrome in chronic treated HIV. Metabolism. 124, 154888(2021).
  45. Satheesan, S., et al. HIV replication and latency in a humanized NSG mouse model during suppressive oral combinational antiretroviral therapy. Journal of Virology. 92 (7), 02118(2018).
  46. Llewellyn, G. N., et al. Humanized mouse model of HIV-1 latency with enrichment of latent virus in PD-1(+) and TIGIT(+) CD4 T cells. Journal of Virology. 93 (10), 02086(2019).
  47. Kearney, B. P., Flaherty, J. F., Shah, J. Tenofovir disoproxil fumarate: clinical pharmacology and pharmacokinetics. Clinical Pharmacokinetics. 43 (9), 595-612 (2004).
  48. Speakman, J. R. Use of high-fat diets to study rodent obesity as a model of human obesity. International Journal of Obesity (Lond). 43 (8), 1491-1492 (2019).
  49. Zhen, A., et al. Stem-cell based engineered immunity against HIV infection in the humanized mouse model. Journal of Visualized Experiments. (113), e54048(2016).
  50. Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model. Journal of Visualized Experiments. (116), e54270(2016).
  51. Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Animal (NY). 37 (1), 26-32 (2008).
  52. Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. Retro-orbital injections in mice. Lab Animal (NY). 40 (5), 155-160 (2011).
  53. Shimizu, S., et al. A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model. Blood. 115 (8), 1534-1544 (2010).
  54. Ladinsky, M. S., et al. Mechanisms of virus dissemination in bone marrow of HIV-1-infected humanized BLT mice. Elife. 8, 46916(2019).
  55. Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (5), 600-613 (2011).
  56. Lamorde, M., et al. Effect of food on the steady-state pharmacokinetics of tenofovir and emtricitabine plus efavirenz in Ugandan adults. AIDS Research and Treatment. 2012, 105980(2012).
  57. Watkins, M. E., et al. Development of a novel formulation that improves preclinical bioavailability of tenofovir disoproxil fumarate. Journal of Pharmaceutical Sciences. 106 (3), 906-919 (2017).
  58. Moccia, K. D., Olsen, C. H., Mitchell, J. M., Landauer, M. R. Evaluation of hydration and nutritional gels as supportive care after total-body irradiation in mice (Mus musculus). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 49 (3), 323-328 (2010).
  59. Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human. Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).
  60. Santos, N. C., Figueira-Coelho, J., Martins-Silva, J., Saldanha, C. Multidisciplinary utilization of dimethyl sulfoxide: pharmacological, cellular, and molecular aspects. Biochemical Pharmacology. 65 (7), 1035-1041 (2003).
  61. Kolb, K. H., Jaenicke, G., Kramer, M., Schulze, P. E. Absorption, distribution and elimination of labeled dimethyl sulfoxide in man and animals. Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 85-95 (1967).
  62. Yellowlees, P., Greenfield, C., McIntyre, N. Dimethylsulphoxide-incuded toxicity. Lancet. 2 (8202), 1004-1006 (1980).
  63. Swanson, B. N. Medical use of dimethyl sulfoxide (DMSO). Reviews in Clinical & Basic Pharmacology. 5 (1-2), 1-33 (1985).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Kombinowana terapia antyretrowirusowahumanizowane myszy HIV-1doustne podawanie cARTsupresja replikacji wirusaprzywrócenie poziomu CD4model zwierzęcy HIVdostarczanie za pomocą żelu dietetycznegowstrzyknięcie podskórneprotokół przygotowania lekuCD4 we krwi obwodowej
Doustne skojarzone leczenie przeciwretrowirusowe u humanizowanych myszy zakażonych wirusem HIV-1
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.