Lizat osocza bogatopłytkowego w leczeniu chorób powierzchni oczu

Podsumowanie

Lizaty płytkowe stanowią nowe narzędzie do leczenia chorób powierzchni oka. W tym miejscu proponujemy metodę przygotowania, dozowania, przechowywania i charakterystyki lizatu płytkowego pobranego od dawców płytek krwi.

Streszczenie

Różne choroby powierzchni oka leczy się kroplami do oczu pochodzącymi z krwi. Ich stosowanie zostało wprowadzone do praktyki klinicznej ze względu na zawartość metabolitów i czynników wzrostu, które sprzyjają regeneracji powierzchni oka. Krople do oczu na bazie krwi mogą być przygotowywane z różnych źródeł (np. z oddawania krwi pełnej lub aferezy płytek krwi), a także z różnych protokołów (np. różne rozcieńczenia i cykle zamrażania/rozmrażania). Ta zmienność utrudnia standaryzację protokołów klinicznych, a co za tym idzie, ocenę ich skuteczności klinicznej. Uszczegółowienie i udostępnienie procedur metodologicznych może przyczynić się do określenia wspólnych wytycznych. W ciągu ostatnich lat produkty allogeniczne rozpowszechniły się jako alternatywa dla leczenia autologicznego, ponieważ gwarantują wyższe standardy skuteczności; wśród nich krople do oczu z lizatem osocza bogatopłytkowego (PRP-L) są przygotowywane przy użyciu prostych procedur produkcyjnych. Na oddziale medycyny transfuzjologicznej w AUSL-IRCCS di Reggio Emilia we Włoszech PRP-L jest pozyskiwany z dawstwa aferezy płytkowej. Ten produkt jest początkowo rozcieńczany do 0,3 x 10⁹ płytek krwi/ml (zaczynając od średniego stężenia 1 x 10⁹ płytek krwi/ml) w 0,9% NaCl. Rozcieńczone płytki krwi są zamrażane/rozmrażane, a następnie odwirowywane w celu usunięcia zanieczyszczeń. Końcową objętość dzieli się na podwielokrotności o pojemności 1,45 ml i przechowuje w temperaturze -80 °C. Przed wydaniem pacjentom krople do oczu są testowane pod kątem sterylności. Pacjenci mogą przechowywać lizaty płytek krwi w temperaturze -15 °C przez okres do 1 miesiąca. Skład czynnika wzrostu jest również oceniany na podstawie losowo wybranych podwielokrotności, a średnie wartości są tutaj podawane.

Wprowadzenie

Produkty krwiopochodne są szeroko stosowane w leczeniu ran¹, chirurgii szczękowo-twarzowej i ortopedycznej oraz w leczeniu różnych chorób powierzchni oka² takich jak zespół suchego oka (DED)³. W DED homeostaza filmu łzowego jest zaburzona w wyniku nieprawidłowego funkcjonowania różnych czynników biorących udział w wytwarzaniu łez i integralności powierzchni oka^4,5.

DED charakteryzuje się niejednorodnością przyczyn i nasilenia^6,7

Protokół

PRP-L używane do ilościowej oceny czynników wzrostu zostały zebrane w ramach szerszego badania dotyczącego charakterystyki produktów PRP do celów regeneracyjnych, przeprowadzonego w AUSL-IRCCS di Reggio Emilia i zatwierdzonego przez Komitet Etyczny Area Vasta Emilia Nord w dniu 10 stycznia 2019 r. (numer protokołu 2019/0003319). Darczyńcy wyrazili świadomą zgodę zgodnie z Deklaracją Helsińską. Nie była wymagana etyczna zgoda na gromadzenie zagregowanych, anonimowych danych z kwestionariusza Indeksu Chorób Powierzchni Oka (OSDI), który jest rutynowo stosowany przez klinicystów do monitorowania objawów zespołu suchego oka. Rysunek 1A pokazu....

Wyniki

Uzasadnienie zastosowania kropli do oczu pochodnych surowicy (które są produktem opartym na krwi najczęściej stosowanym w leczeniu chorób powierzchni oka) wynika z zawartości czynników wzrostu (GFs), które pochodzą niemal w całości z krążących płytek krwi. PRP zawiera znacznie większą liczbę płytek krwi (a w konsekwencji więcej pochodnych od płytek czynników wzrostu) w porównaniu z surowicą krwi obwodowej, w zakresie od 0,15 x 10⁹ do 0,45 x 10⁹ PLTs/mL. Zgodnie z włoskimi przepisami, liczba płytek k.......

Dyskusja

W ostatnich latach wzrosło kliniczne stosowanie produktów na bazie płytek krwi w patologiach powierzchni oka, ale ich dyfuzja jest utrudniona przez brak solidności naukowej. Jest to spowodowane głównie dużą różnorodnością źródeł dawców i protokołów przygotowania, które często nie są w pełni ujawnione lub nie są specjalnie zaprojektowane do celu, dla którego są wydawane. W szczególności wciąż brakuje informacji na temat produktów na bazie płytek krwi zbieranych metodą aferezy. W związku z tym celem niniejszej pracy było o.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Equipments
CompoSeal Mobilea II	Fresenius Kabi, Niemcy		zgrzewarka do worków
Kaptur HeraSafe	Heraeus Instruments, Niemcy		Kaptur klasy II zagrożenia biologicznego
MCS+ 9000 Mobilny system pobierania płytek	Haemonetics, Włochy		zautomatyzowany sprzęt do pobierania osocza i wieloskładnikowego do oddawania płytek krwi, krwinek czerwonych, osocza lub złożonych składników krwi
Wytrząsarka płytek krwi, PF396i	Helmer, USA		Wytrząsarka płytek krwi
Raycell X-ray Napromiennik krwi	MDS Nordion, Kanada		Promiennik rentgenowski krwi
ROTIXA 50RS	Hettich Zentrifugen, Niemcy		Szybka intrifuga
Sysmex XS-1000i	Sysmex Europe GMBH, Niemcy		Hemocytometr do oznaczania liczby płytek
krwi Ciepła kąpiel, WB-M15	Falc Instruments, Włochy		Ciepła kąpiel
Materiały
Roztwór antykoagulantu ACD-A A Fenwal	Inc., Stany Zjednoczone	DIN 00788139	roztwór przeciwzakrzepowy do aferezy płytek krwi (1000 ml)
BD BACTEC Peds Plus/F Fiolki do hodowli	bydła BD Biosciences, USA	BD 442020	Test sterylności
BD BACTEC Fiolki do hodowli peds Plus/F	BD Biosciences, USA	442020	Co najmniej 2 fiolki do testu sterylności
Strzykawka BD Luer Lok	BD Plastipack, USA	300865	Co najmniej 4 sterylne strzykawki (50 ml)
Bio-Plex Human Cancer Panel 1	BioRad Laboratories, USA	171AC500M	Standardowy panel do oceny
izoform PDGFBio-Plex Human Cancer Panel 2	BioRad Laboratories, USA	171AC600M	Standardowy panel do oceny EGF
Bio-Plex MAGPIX Multiplex Multiplex Reader	BioRad Laboratories, USA	Magpix	Ten instrument umożliwia wiele testów immunologicznych przy użyciu funkcjonalizowanych kulek magnetycznych.
Test Bio-Plex Pro TGF-b	BioRad Laboratories, USA	10024984	Zestaw i standardy do oceny izoform TGFb
BioRet	ARIES s.r.l., Włochy	A2DH0020	Co najmniej 4 kolce do przekłuwania worków na krew
Probówka do pobierania krwi	BD Vacutainer, USA	367835	1 probówka, niezbędna do wykonywania liczby
płytek krwiZestaw kropli do oczu. Wyrób medyczny COL do aplikacji i konserwacji kropli do oczu z hemokomponentów	Biomed Device s.r.l., Włochy	do oczu COLC50	. Co najmniej 2 zestawy dla każdej pobranej jednostki PRP
Rak u człowieka Zestaw PDGF-AB/BB 1x96well	BioRad Laboratories, USA	171BC511	Zestaw do oceny izoform PDGF
Rak u człowieka2 Zestaw EGF 1x96well	BioRad Laboratories, USA	171BC603M	Zestaw do oceny EGF
NaCl 0,9% sterylny roztwór	Baxter S.p.A., Włochy	B05BB01	1000 ml
Kwestionariusz OSDI	Allergan Inc., Stany Zjednoczone	Kwestionariusz indeksu chorób powierzchni oka	OSDI
Kolec do przekłuwania	BioRet ARIES s.r.l., Włochy	BS051004
Spike Dodatek do płytek krwi A+ T-PAS+	TERUMO BCT Inc., Włochy	40842	roztwór konserwujący do koncentratów płytek krwi (1000 ml)
Oprogramowanie Excel	Microsoft, USA	Excel Oprogramowanie do	analizy danych
Teruflex Worek transferowy 1000 ml	TERUMO BCT Inc., Włochy	BB*T100BM	1 do rozcieńczania PRP
Teruflex Worek transferowy 300 ml	TERUMO BCT Inc., Włochy	BB*030CM	Co najmniej 6 na każdą zebraną jednostkę PRP

krwi Zestaw kropli