Izolacja preadipocytów z zarodków piskląt brojlerów

Minjeong Kim; Usuk Jung; Elizabeth Shepherd; Robert Mihelic; Brynn H. Voy

doi:10.3791/63861

Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Izolacja preadipocytów z zarodków piskląt brojlerów

2.5K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/63861

⸱

4 sierpnia 2022

Minjeong Kim¹ , Usuk Jung¹ , Elizabeth Shepherd¹ , Robert Mihelic¹ , Brynn H. Voy¹

¹Department of Animal Science, University of Tennessee

W tym artykule

Podsumowanie

Obecny protokół opisuje prostą metodę izolowania preadipocytów z tkanki tłuszczowej w zarodkach brojlerów. Metoda ta umożliwia izolację z wysoką wydajnością, hodowlą pierwotną i różnicowaniem adipogennym preadipocytów. Barwienie czerwienią olejową O i barwienie lipidami/DNA mierzyło zdolność adipogenną izolowanych komórek indukowanych pożywką różnicującą.

Streszczenie

Pierwotne preadipocyty są cennym systemem eksperymentalnym do zrozumienia molekularnych szlaków kontrolujących różnicowanie i metabolizm adipocytów. Zarodki kurczaków dają możliwość wyizolowania preadipocytów już od najwcześniejszego etapu rozwoju tkanki tłuszczowej. Ta pierwotna komórka może być wykorzystana do identyfikacji czynników wpływających na proliferację preadipocytów i różnicowanie adipogenne, co czyni je cennym modelem do badań związanych z otyłością u dzieci i kontrolą nadmiernego odkładania się tłuszczu u drobiu. Szybki wzrost poporodowej tkanki tłuszczowej skutecznie marnuje paszę, alokując ją z dala od wzrostu mięśni u kurcząt brojlerów. Dlatego metody pozwalające zrozumieć najwcześniejsze etapy rozwoju tkanki tłuszczowej mogą dostarczyć wskazówek do regulacji tej tendencji i zidentyfikowania sposobów ograniczenia ekspansji tkanki tłuszczowej we wczesnym okresie życia. Niniejsze badanie miało na celu opracowanie skutecznej metody izolacji, hodowli pierwotnej i różnicowania adipogennego preadipocytów wyizolowanych z rozwijającej się tkanki tłuszczowej komercyjnych zarodków piskląt brojlerów (typu mięsnego). Procedura została zoptymalizowana w celu uzyskania komórek o wysokiej żywotności (~98%) i zwiększonej zdolności do różnicowania się w dojrzałe adipocyty. Ta prosta metoda izolacji, hodowli i różnicowania zarodków preadipocytów wspiera funkcjonalne analizy wzrostu i rozwoju tłuszczu we wczesnym okresie życia.

Wprowadzenie

Otyłość jest globalnym zagrożeniem dla zdrowia zarówno dorosłych, jak i dzieci. Dzieci z nadwagą lub otyłością są około pięć razy bardziej narażone na otyłość niż dorośli, co naraża je na znacznie zwiększone ryzyko chorób sercowo-naczyniowych, cukrzycy i wielu innych chorób współistniejących. Około 13,4% amerykańskich dzieci w wieku 2-5 lat cierpi na otyłość¹, co ilustruje, że tendencja do gromadzenia nadmiaru tkanki tłuszczowej może być uruchomiona bardzo wcześnie w życiu. Z bardzo różnych powodów nagromadzenie nadmiaru tkanki tłuszczowej jest problemem dla kurcząt brojlerów (typu mięsnego). Nowoczesne brojlery są niezwykle wydajne, ale nadal ....