W obecnym protokole, funkcja bariery śródbłonkowej gruczołu podżuchwowego (SMG) została oceniona poprzez wstrzyknięcie różnych molekularnych znaczników fluorescencyjnych do żył kątowych badanych modeli zwierzęcych in vivo pod dwufotonowym laserowym mikroskopem skaningowym.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
In vivo (in vivo) Wykrywanie przepuszczalności naczyń krwionośnych w mysim gruczole podżuchwowym
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Ślina odgrywa ważną rolę w zdrowiu jamy ustnej i ogólnym zdrowiu. Nienaruszona funkcja bariery śródbłonkowej naczyń krwionośnych umożliwia wydzielanie śliny, podczas gdy dysfunkcja bariery śródbłonka jest związana z wieloma zaburzeniami wydzielniczymi gruczołów ślinowych. Niniejszy protokół opisuje metodę wykrywania przepuszczalności parakomórkowej in vivo w celu oceny funkcji ścisłych połączeń śródbłonka (TJ) w mysich gruczołach podżuchwowych (SMG). Najpierw znakowany fluorescencyjnie dektrans o różnych masach cząsteczkowych (4 kDa, 40 kDa lub 70 kDa) wstrzyknięto do żył kątowych myszy. Następnie jednostronny pistolet maszynowy został wypreparowany i umieszczony w dostosowanym uchwycie pod dwufotonowym mikroskopem skaningowym laserowym, a następnie zarejestrowano obrazy naczyń krwionośnych, acini i przewodów. Wykorzystując tę metodę, monitorowano dynamiczny wyciek w czasie rzeczywistym znaczników różnej wielkości z naczyń krwionośnych do podstawowych stron acini, a nawet przez nabłonek zrazikowy do przewodów, aby ocenić zmianę funkcji bariery śródbłonkowej w warunkach fizjologicznych lub patofizjologicznych.
Wprowadzenie
Różne gruczoły ślinowe produkują ślinę, która przede wszystkim działa jako pierwsza linia obrony przed infekcjami i wspomaga trawienie, odgrywając tym samym istotną rolę w zdrowiu jamy ustnej i ogólnym zdrowiu1. Ukrwienie ma kluczowe znaczenie dla wydzielania gruczołów ślinowych, ponieważ stale dostarcza wodę, elektrolity i cząsteczki, które tworzą ślinę pierwotną. Funkcja bariery śródbłonkowej, regulowana przez kompleks ścisłego połączenia (TJ), ściśle i delikatnie ogranicza przenikanie naczyń włosowatych, które są wysoce przepuszczalne dla wody, substancji rozpuszczonych, białek, a nawet komórek przemieszczających się z krążących naczyń krwio....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie procedury eksperymentalne zostały zatwierdzone przez Komitet Etyki Badań nad Zwierzętami, Centrum Nauk o Zdrowiu Uniwersytetu Pekińskiego i były zgodne z Przewodnikiem dotyczącym opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych (publikacja NIH nr 85-23, poprawiona w 1996 roku). Do niniejszego badania wykorzystano samce myszy typu dzikiego (WT) w grupie wiekowej 8-10 tygodni. Zwierzęta doświadczalne były starannie traktowane, aby zminimalizować ich ból i dyskomfort.
1. Procedury na zwierzętach
- Przygotuj i podaj środki znieczulające i znacznikowe.
- Utrzymuj sterylne warunki przez cały czas trwani....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Zgodnie z protokołem, jednostronnie wyizolowany SMG przymocowano do specjalnie wykonanego uchwytu, a gruczoł oddalono jak najdalej od ciała myszy, aby zapobiec powstawaniu artefaktów ruchowych wywołanych oddychaniem. Pod mikroskopem obserwowano szybki przepływ erytrocytów (czarne kropki) w naczyniach krwionośnych. Po zlokalizowaniu obszaru tkanki przez okular, należy przełączyć się na sterowanie oprogramowaniem mikroskopu. W grupie kontrolnej oba znaczniki znajdowały się w naczyniach krwionośnych SMG myszy. W szczególnoś.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Utrzymanie i regulacja funkcji bariery śródbłonkowej są niezbędne dla homeostazy naczyń krwionośnych. Komórki śródbłonka i ich połączenia międzykomórkowe odgrywają kluczową rolę w utrzymaniu i kontrolowaniu integralności naczyń krwionośnych12. Siła ścinająca przepływu krwi, czynniki wzrostu i czynniki zapalne mogą powodować zmiany przepuszczalności naczyń, a tym samym uczestniczyć w występowaniu i rozwoju chorób ogólnoustrojowych, takich jak nadciśnienie, cukrzyca, choroby autoimmunologiczne 13,14.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
To badanie było wspierane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (granty 31972908, 81991500, 81991502, 81771093 i 81974151) oraz Pekińską Fundację Nauk Przyrodniczych (grant 7202082).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Mikroskop 2-fotonowy (TCS-SP8 DIVE) | Leica, Niemcy | ||
| 4 kDa dekstran znakowany FITC | Sigma Aldrich | 46944 | |
| 70 kDa rodamina znakowana B dekstran | Sigma | Aldrich R9379 | |
| separacja tkanek nikiel | Bejinghuabo Company | NZW28 | |
| Krem do depilacji | Veet | ||
| Jednorazowa sterylna strzykawka | Zhiyu Company | 1 ml | |
| Image J | oprogramowanie National Institutes of Health | ||
| Strzykawka insulinowa | Becton, Dickinson and Company | 0253316 | 1 ml |
| Oprogramowanie Leica Application Suite X | Mikroprobówki Leica Microsystems | ||
| Axygen | MCT-150-C | 1,5 ml | |
| buforowane fosforanem sól fizjologiczna 1x | Servicebio | G4207-500 | |
| Nożyczki do tkanek | Bejinghuabo Company | M286-05 | |
| Tribromoetanol | JITIAN Bio | JT0781 |
Bibliografia
- Carpenter, G. H. The secretion, components, and properties of saliva. Annual Review of Food Science and Technology. 4, 267-276 (2013).
- Garrett, J. R. The proper role of nerves in salivary secretion: A review. Journal of Dental Research.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
