Artykuł metodologiczny

Test biologiczny śmiertelności przy użyciu Artemia salina L.

DOI:

10.3791/64472

⸱

11 października 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1CBIOS - Lusófona University's Center for Research in Biosciences & Health Technologies, Universidade Lusófona de Humanidades e Tecnologias, 2Facultad de Farmacia, Departamento de Ciencias Biomédicas (Área de Farmacologia; Nuevos agentes antitumorales, Acción tóxica sobre células leucémicas), Universidad de Alcalá de Henares, 3Instituto de Investigação do Medicamento (iMed.ULisboa), Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca ma na celu ocenę i przegląd procedury biologicznego testu śmiertelności Artemia salina, również identyfikowanej jako test śmiertelności krewetek solankowych. Ta prosta i tania metoda dostarcza informacji na temat ogólnej toksyczności (traktowanej jako wstępna ocena toksyczności) próbek, a mianowicie produktów naturalnych.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Produkty naturalne były używane od czasów starożytnych do produkcji leków. W dzisiejszych czasach istnieje wiele leków chemioterapeutycznych pozyskiwanych z naturalnych źródeł i stosowanych przeciwko wielu chorobom. Niestety, większość z tych związków często wykazuje toksyczność ogólnoustrojową i działania niepożądane. Aby lepiej ocenić tolerancję wybranych potencjalnie bioaktywnych próbek, krewetka solankowa (Artemia salina) jest zwykle stosowana jako model w badaniach śmiertelności. Test A. salina opiera się na zdolności badanych związków bioaktywnych do zabijania mikroskorupiaków w stadium larwalnym (nauplii). Metoda ta stanowi dogodny punkt wyjścia do badań cytotoksyczności, a także do ogólnych badań przesiewowych toksyczności produktów syntetycznych, półsyntetycznych i naturalnych. Można go uznać za prosty, szybki i tani test w porównaniu z wieloma innymi testami (komórki in vitro lub szczepy drożdży, danio pręgowany, gryzonie) ogólnie odpowiednie do wyżej wymienionych celów; Co więcej, można go łatwo wykonać nawet bez specjalnego szkolenia. Ogólnie rzecz biorąc, test A. salina stanowi użyteczne narzędzie do wstępnej oceny toksyczności wybranych związków i biosterowanego frakcjonowania ekstraktów produktów naturalnych.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Naturalne produkty z roślin, zwierząt lub mikroorganizmów były przez lata rosnącym obszarem zainteresowania w rozwoju nowych bioaktywnych molekuł, ze względu na ich różnorodny zakres działań biologicznych i farmakologicznych1. Jednak związane z tym skutki uboczne, oporność na leki lub nieodpowiednia specyficzność środków, zwłaszcza gdy są stosowane jako leki przeciwnowotworowe, stanowią główne czynniki, które mogą prowadzić do nieskutecznego leczenia1,2.

W ciągu ostatnich kilku dekad odkryto kilka czynników cytotoksycznych pochodzenia roślinnego, niektóre z nich były używane jako środki przeciwnowotworowe1,2,3. W tym kontekście paklitaksel jest opisywany jako jeden z najbardziej znanych i najbardziej aktywnych leków chemioterapeutycznych pochodzenia naturalnego3,4. Obecnie szacuje się, że ponad 35% wszystkich leków na rynku pochodzi z produktów naturalnych lub jest nimi inspirowanych5. Potencjalna wysoka toksyczność tych związków wymaga rozważenia we wszystkich fazach badania, ponieważ różne rodzaje zanieczyszczeń, a nawet składniki metaboliczne samej rośliny mogą powodować skutki toksyczne. Z tego powodu w fazie wstępnej należy opracować profile farmakologiczne i toksykologiczne, aby ocenić aktywność biologiczną i bezpieczeństwo nowych potencjalnych terapii opartych na roślinach. Aby ocenić toksyczność nowych próbek bioaktywnych, zwierzęta bezkręgowe mogą być uważane za najlepsze modele do badań. Wymagają one minimalnych wymagań etycznych i umożliwiają wstępne testy in vitro, aby nadać priorytet najbardziej obiecującym produktom do następnej rundy testów na kręgowcach1,6.

Powszechnie znany jako krewetka solankowa, A. salina to mały halofilny bezkręgowiec należący do rodzaju Artemia (rodzina Artemiidae, rząd Anostraca, podtyp Crustacea; Rysunek 1). W morskich i wodnych ekosystemach solankowych krewetki solankowe odgrywają ważną rolę odżywczą, ponieważ żywią się mikroalgami i są składnikami zooplanktonu wykorzystywanego do karmienia ryb. Co więcej, ich larwy (znane jako nauplii) są szeroko stosowane w ocenie ogólnej toksyczności podczas badań wstępnych1,3,7.

Artemia spp. są szeroko stosowane w badaniach nad śmiertelnością i są również wygodnym punktem wyjścia do oceny toksyczności, śledząc toksyczność potencjalnie bioaktywnych związków na podstawie ich zdolności do zabijania nauplii hodowanych w laboratorium1,8. Z tego powodu zastosowanie A. salina zyskało na atrakcyjności w badaniach toksyczności ogólnej, ponieważ jest to metoda bardzo skuteczna i łatwa w użyciu, w porównaniu z innymi testami na modelach zwierzęcych9.

Dzięki ich prostej anatomii, niewielkim rozmiarom i krótkiemu cyklowi życia, ogromna liczba bezkręgowców może być badana w jednym eksperymencie. W związku z tym łączą w sobie łagodność genetyczną i tanią kompatybilność z badaniami przesiewowymi na dużą skalę1. W tym kontekście, zastosowanie krewetek solankowych w ogólnym teście toksyczności wykazuje kilka zalet, takich jak szybki wzrost (potrzeba 28-72 godzin od wylęgu do pierwszych wyników), opłacalność i długi okres trwałości jaj komercyjnych, które mogą być używane przez cały rok3,10. Z drugiej strony, ponieważ bezkręgowce mają prymitywny układ narządów i nie mają adaptacyjnego układu odpornościowego, nie stanowią doskonałego i wiarygodnego modelu dla komórek ludzkich1.

Jednakże, dostarcza wstępnej metody oceny ogólnej toksyczności wybranych próbek. Ponieważ jest szeroko stosowany jako test śmiertelności, może dostarczyć tymczasowych wskazówek na temat toksycznego działania potencjalnych środków przeciwnowotworowych. Często wykorzystuje się go również do uzyskania informacji zwrotnych na temat ogólnej toksyczności związków obdarzonych jakąkolwiek inną aktywnością biologiczną, dla których niezbędne jest wykazanie najniższego możliwego wskaźnika śmiertelności wśród krewetek Artemia.

W trwającym badaniu naszej grupy, różne ekstrakty z gatunków Plectranthus wykazywały działanie przeciwutleniające i przeciwbakteryjne (niepublikowane wyniki). Równolegle wyizolowane związki uzyskano poprzez oczyszczenie ekstraktów, a następnie zmodyfikowano chemicznie. Ekstrakty, czyste związki i półsyntetyczne pochodne zostały następnie przetestowane pod kątem ogólnej toksyczności. W tym kontekście, niniejsza praca ma na celu przedstawienie przeglądu zastosowania testu biologicznego letalności artemii do oceny ogólnej toksyczności i potencjalnej aktywności cytotoksycznej bioaktywnych ekstraktów i wyizolowanych związków z różnych roślin z rodzaju Plectranthus11.

figure-introduction-1
Rysunek 1: Artemia salina pod mikroskopem. Nowo wykluwające się nauplia A. salina widziane pod mikroskopem (powiększenie 12x). Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Przygotowanie sprzętu

  1. Zdobądź dostępny na rynku sprzęt wylęgowy. Wybierz odpowiednie miejsce, w którym ustawisz sprzęt do wylęgu (Rysunek 2A). Umieść pojemnik w kształcie lejka w czarnym wsporniku (dołączonym do zestawu) i obróć lejek w odpowiednim kierunku, aby zobaczyć znak poziomu i kran.
  2. Aby wykonać ręcznie robiony sprzęt do migracji, odetnij górną część dwóch plastikowych butelek o pojemności 0,5 l (5,8 cm średnicy), aby uzyskać ostateczną wysokość 12 cm. Wykonaj otwór o średnicy 1,5 cm z jednej strony w odległości 7 cm od dna w każdej butelce i włóż gumową rurkę o średnicy 13 cm (1,3 cm średnicy zewnętrznej i 0,9 cm wewnętrznej) między dwoma otworami. Uszczelnij otwory gorącym klejem (Rysunek 2B) i pozostaw do wyschnięcia na 15 minut; Połóż butelki na płaskiej powierzchni i napełnij je wodą, aby sprawdzić, czy nie ma wycieków.

2. Przygotowanie sztucznego roztworu soli

  1. W szklanej zlewce przygotować sztuczny roztwór soli (sól solankowa z krewetek) o stężeniu 35 g/l. Aby to zrobić, dodaj 28 g soli do 800 ml wody z kranu, zgodnie z instrukcjami producenta. Wymieszaj go z mieszadłem, aż cała sól dokładnie się rozpuści.
    UWAGA: Dostosuj objętość przygotowanego roztworu soli fizjologicznej do wielkości dostępnych pojemników.

3. Przygotowanie próbki

  1. Przygotować wszystkie próbki w probówce do mikrowirówki, rozpuszczając odpowiednią ilość ekstraktów (ekstrakty z Plectranthus, Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus; i Pe- P. ecklonii) lub związki 1-5 (dwa naturalne związki [1 i 2] otrzymane z Plectranthus spp. i trzy półsyntetyczne pochodne [3, 4, 5]; Rysunek 3) w dimetylosulfotlenku (DMSO)12, tak aby uzyskać końcowe stężenie 10 mg/ml (jeśli próbka jest rozpuszczalna w wodzie, użycie DMSO nie jest konieczne).
  2. Rozcieńczyć 10 μl każdej próbki (i DMSO dla kontroli ujemnej) w nowej probówce do mikrowirówki, używając 990 μl sztucznego roztworu soli przygotowanego w kroku 2.1, aby uzyskać końcowe stężenie 0,1 mg/ml.
  3. Pod dygestoriami, w kolbie Erlenmeyera, przygotować roztwór dichromianu potasu (K2Cr2O7) w wodzie destylowanej o stężeniu 1 mg/mL13,14,15.

4. Test biologiczny śmiertelności krewetek solankowych

UWAGA: Ten test jest opracowany na podstawie prac kilku autorów z modyfikacjami1,16,17,18,19.

  1. Napełnij naczynie wylęgowe pożywką przygotowaną w kroku 2.1 do znaku poziomu (500 ml) (Rysunek 2C).
  2. Umieść jedną łyżkę (około 0,75 g) cyst krewetek solankowych w roztworze soli, a następnie zamknij pojemnik. Umieść lampę (lampa stołowa, 40 W, 230 V, 50 Hz, z żarówką LED o mocy 8 W, 4 000 K, 830 lm) skierowaną bezpośrednio w stronę sprzętu (Rysunek 2A) i włącz ją.
  3. Podłącz system dostarczania powietrza (moc 3 W, 50 Hz, 230 V) do złącza umieszczonego na górze urządzenia i włącz pompę.
  4. Utrzymuj temperaturę pokojową na poziomie 25 ± 3 °C. Cysty krewetek solankowych wylęgają się w roztworze sztucznej soli, przy silnym napowietrzaniu, ciągłym oświetleniu i stabilnej temperaturze, po 24 godzinach do 48 godzin
    UWAGA: Alternatywnie można użyć inkubatora pionowego.
  5. Po wykluciu się jaj wyłącz pompę powietrza i poczekaj, aż naupliusy (poruszające się w kierunku dna lejka) zostaną oddzielone od pustych pojemników na jajka (unoszących się u góry).
  6. W celu oddzielenia niewyklutych jaj od żywych naupliiów, należy otworzyć kurek wylotowy na dole i wylać zawartość lejka do jednego z pojemników ręcznie wykonanego pojemnika na sprzęt do migracji (opisanego w kroku 1.2). Upewnij się, że roztwór zawierający naupliusy i resztki niewyklutych jaj znajduje się poniżej poziomu probówki. Do drugiego pojemnika dodać pozostały roztwór soli z kroku 2.1 powyżej wysokości probówki.
  7. Przykryj pojemnik naupliami i pozostałościami niewyklutych jaj za pomocą folii aluminiowej. Umieść lampę na drugim pojemniku z samym roztworem soli. Krewetki solankowe zostaną przyciągnięte przez światło i będą migrować z jednego pojemnika do drugiego (pojemnik do zbioru), co doprowadzi do skutecznego oddzielenia jaj (powoli sedymentowanych na dno) i żywej Artemii.
  8. Następnie umieść sprzęt w inkubatorze w tych samych warunkach, co w kroku 4.4 przez 4 godziny (Rysunek 2E). Z pojemnika do zbioru zebrać 900 μl roztworu soli zawierającego od 10 do 15 nauplii. Umieść roztwór soli fizjologicznej z naupliami w każdym dołku 24-dołkowej płytki (Rysunek 2F); Wszystkie próbki są badane w kwadrakcjach.
    9. Dodaj po 100 μl kontroli ujemnej (DMSO), kontroli pozytywnej (K2Cr2O7, dwuchromian potasu), sztucznego roztworu soli i każdej z próbek do odpowiedniego dołka (Rysunek 2F)13,14.
  9. UWAGA: Próbki w każdym dołku będą miały stężenie 0,01 mg/ml. Końcowe stężenie kontroli pozytywnej w roztworze soli wyniesie 0,1 mg/ml, aby upewnić się, że wszystkie nauplia w studzience są narażone na toksyczne działanie dichromianu potasu i umierają. Sztuczny roztwór soli będzie działał jako ślepa próba.
  10. Inkubować płytkę w temperaturze 25 ± 3 °C w świetle przez 24 godziny (Rysunek 2G). Po 24 godzinach zarejestruj liczbę martwych larw (nieruchliwe nauplia przez 5 s) w każdej studzience pod mikroskopem dwuokularowym (12x)20 (Rysunek 2H). Alternatywnie użyj soczewki ręcznej.
  11. Dodać 100 μl roztworu dichromianu potasu, aby wywołać śmierć pozostałych żywych larw i odczekać 6 godzin. Policz pod mikroskopem całkowitą liczbę martwych larw w każdej studzience. Określ współczynnik śmiertelności zgodnie z następującym równaniem.
    figure-protocol-1
  12. Wykonać wszystkie testy w trzech egzemplarzach. Oblicz odchylenia standardowe (SD) i wyraź wyniki jako średnią z trzech niezależnych eksperymentów, z których każde ma wewnętrzne poczwórne duplikaty (n = 12), ± SD. Jak wspomnieli Meyer i wsp., należy uznać surowe ekstrakty i czyste związki o LC50< 1,000 μg/ml za toksyczne; Należy również wziąć pod uwagę, że śmiertelność krewetek solankowych jest proporcjonalna do stężenia badanych próbek21.

figure-protocol-2
Rysunek 2: Metoda badania biologicznego śmiertelności Artemia salina. (A) Dostępny na rynku sprzęt używany do wylęgu cyst krewetek solankowych; (B) Ręcznie robiony sprzęt migracyjny; C) Naczynie wylęgowe wypełnione roztworem soli fizjologicznej; D) zbieranie niewyklutych jaj i naupliusów; (E) Ręcznie wykonany sprzęt w inkubatorze na etapie migracji. Pojemnik z dala od lampy powinien być przykryty folią aluminiową; Jednak, aby uzyskać lepszy widok na instalację zestawu, tutaj została ona usunięta; (F) Zbieranie artemii w studniach przed wykonaniem testu. Związki powinny być umieszczone w sposób przedstawiony: - odnosi się do kontroli ujemnej (DMSO), + do kontroli dodatniej (K2Cr2O7), sól do sztucznego roztworu soli i 1 do 3 do próbek do badania (w tym przypadku związki 1-3); G) inkubacja 24-dołkowej płytki zawierającej artemię i wybrane próbki; (H) Liczba artemii pod mikroskopem lornetkowym. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

figure-protocol-3
Rysunek 3: Struktury wybranych związków. Struktura związków 1-2, ekstrahowanych z gatunków Plectranthus oraz związków 3-5, otrzymywanych w drodze półsyntezy. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ogólna toksyczność niektórych naturalnych produktów ostatnio badanych przez naszą grupę została oceniona za pomocą testu biologicznego na śmiertelność krewetek solankowych. Cztery ekstrakty (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindryczny; i Pe- P. ecklonii) z rodzaju Plectranthus, znanych ze swojej aktywności przeciwutleniającej (wyniki niepublikowane). Dodatkowo dwa naturalne związki (1 i 2) otrzymywane z Plectranthus spp. oraz trzy pochodne półsyntetyczne (3...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W ostatnich latach społeczność naukowa zwiększyła swoją uwagę na alternatywne modele badań przesiewowych toksyczności21. Oprócz testu biologicznego śmiertelności A. salina zwykle wykonuje się inne metodologie oceny tolerancji próbki i obejmują one testy biologiczne kręgowców (takich jak gryzonie), bezkręgowców (takich jak danio pręgowany), metody in vitro z wykorzystaniem szczepów lub komórek drożdży oraz metody in silico 22,23,24,25

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują brak konfliktów interesów, finansowych lub innych.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pamięci stylu Profesor Amilcar Roberto.

Ta praca była wspierana finansowo przez Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, Portugalia) w ramach projektów UIDB/04567/2020 i UIDP/04567/2020 przypisanych CBIOS i grantu doktoranckiego SFRH/BD/137671/2018 (Vera Isca).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Płytki 24-dołkoweThermo Fisher Scientific, Dania174899Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 wielotalerzowa
folia aluminiowaAlbal-Możnakupić w supermarkecie
Artemio SetJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Niemcy61066000Można kupić w sklepach zoologicznych
Mikroskop dwuokularowyCeti, Belgia  1700.0000Flexum-24AED, 220-240 V, 50 Hz
Butelki-0,5 L Średnica: 5,8 cm; Wysokość: 12 cm
Cysty krewetek solankowychJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Niemcy3090700Można kupić w sklepach zoologicznych
Sól krewetkowa solankowaJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Niemcy3090600Można kupić w sklepach zoologicznych
Dimetylosulfotlenek (DMSO)Chemikalia VWRCAS: 67-68-5  99% czystości
Końcówki do bliznowaniaDiamentF171500Zakres głośności: 100 - 1000 i mikro; L
Mikroprobówki EppendorfMARKI7,80,546Mikroprobówki, PP, 2 mL, BIO-CERT  JAKOŚĆ PCR
Kolba ErlenmeyeraVWR chemicals4,47,109objętość: 100 ml
Szklana zlewkaNormax3.2111654NObjętość: 1000 ml
RękawiceGuantes LunaGLSP3-GraphPad
PrismGraphPad Software, San Diego, CA, USA-GraphPadPrism wersja 5.00 dla systemu Windows, www.graphpad.com, dostęp 5 lutego 2021 r.; statystyka handlowa oprogramowanie analityczne
Domowy hodowca A. salina - -Domowejroboty: dwie plastikowe butelki połączone wężem
Gorący klejParksidePHP500E3230 V, 50 Hz, 25 W
InkubatorHeidolph Instruments, Dania  -Jeden sprzęt Heidolph Unimax 1010 i jeden Heidolph Inkubator 1006
LightRoblanSKYC3008FE14żarówka LED
MikropipetyVWR chemicals613-5265Zakres głośności: 100 - 1000 &mikro; L
Dwuchromian potasu (K2Cr2O7)VWR chemicalsCAS: 7778-50-9  Pompa o czystości 99%
ProAir a50JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Niemcy -W zestawie Artemio Set+1
Rurka gumowa-średnica zewnętrzna 1,3 cm i średnica wewnętrzna 0,9 cm
Pręt mieszającyVWR chemicals441-0147figure-materials-1 6 mm, 250 mm
TermometrVWR chemicals620-08210 - 100 ° Z
-

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
  2. Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing source of novel drug leads. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. 1830 (6), 3670-3695 (2013).
  3. Ntungwe, E., et al. General toxicity screening of Royleanone derivatives using an artemia salina model. Journal Biomedical and Biopharmaceutical Research. 18 (1), 114(2021).
  4. Seca, A., Plant Pinto, D. secondary metabolites as anticancer agents: Successes in clinical trials and therapeutic application. International Journal of Molecular Sciences. 19 (1), 263(2018).
  5. Calixto, J. B. The role of natural products in modern drug discovery. Anais da Academia Brasileira de Ciências. 91 (3), 1-7 (2019).
  6. Mandrell, D., et al. Automated zebrafish chorion removal and single embryo placement: optimizing throughput of zebrafish developmental toxicity screens. Journal of Laboratory Automation. 17 (1), 66-74 (2012).
  7. Zhang, Y., Mu, J., Han, J., Gu, X. An improved brine shrimp larvae lethality microwell test method. Toxicology Mechanisms and Methods. 22 (1), 23-30 (2012).
  8. Domínguez-Villegas, V., et al. antioxidant and cytotoxicity activities of methanolic extract and prenylated flavanones isolated from leaves of eysehardtia platycarpa. Natural Product Communications. 8 (2), 177-180 (2013).
  9. Hamidi, M. R., Jovanova, B., Panovska, T. K. Toxicological evaluation of the plant products using Brine Shrimp (Artemia salina L.) model. Macedonian Pharmaceutical Bulletin. 60 (01), 9-18 (2014).
  10. Libralato, G., Prato, E., Migliore, L., Cicero, A. M., Manfra, L. A review of toxicity testing protocols and endpoints with Artemia spp. Ecological Indicators. 69, 35-49 (2016).
  11. Mendes Hacke, A. C., et al. Cytotoxicity of cymbopogon citratus (DC) Stapf fractions, essential oil, citral, and geraniol in human leukocytes and erythrocytes. Journal of Ethnopharmacology. 291, 115147(2022).
  12. Thangapandi, V., Pushpanathan, T. Comparison of the Artemia salina and Artemia fransiscana bioassays for toxicity of Indian medicinal plants. Journal of Coastal Life Medicine. 2 (6), 453-457 (2014).
  13. Syahmi, A. R. M., et al. Acute oral toxicity and brine shrimp lethality of Elaeis guineensis Jacq., (Oil Palm Leaf) methanol extract. Molecules. 15 (11), 8111-8121 (2010).
  14. Sasidharan, S., et al. Acute toxicity impacts of Euphorbia hirta L extract on behavior, organs body weight index and histopathology of organs of the mice and Artemia salina. Pharmacognosy Research. 4 (3), 170(2012).
  15. Libralato, G. The case of Artemia spp. in nanoecotoxicology. Marine Environmental Research. 101, 38-43 (2014).
  16. Okumu, M. O., et al. Artemia salina as an animal model for the preliminary evaluation of snake venom-induced toxicity. Toxicon: X. 12, 100082(2021).
  17. Rajabi, S., Ramazani, A., Hamidi, M., Naji, T. Artemia salina as a model organism in toxicity assessment of nanoparticles. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences. 23 (1), 20(2015).
  18. Svensson, B. -M., Mathiasson, L., Mårtensson, L., Bergström, S. Artemia salina as test organism for assessment of acute toxicity of leachate water from landfills. Environmental Monitoring and Assessment. 102 (1), 309-321 (2005).
  19. Banti, C., Hadjikakou, S. Evaluation of toxicity with brine shrimp assay. Bio-Protocol. 11 (2), 3895(2021).
  20. Pecoraro, R., et al. Artemia salina: A microcrustacean to assess engineered nanoparticles toxicity. Microscopy Research and Technique. 84 (3), 531-536 (2021).
  21. Lillicrap, A., et al. Alternative approaches to vertebrate ecotoxicity tests in the 21st century: A review of developments over the last 2 decades and current status. Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (11), 2637-2646 (2016).
  22. Ribeiro, I. C., et al. Yeasts as a model for assessing the toxicity of the fungicides Penconazol, Cymoxanil and Dichlofulanid. Chemosphere. (10), 1637-1642 (2000).
  23. Armour, C. D., Lum, P. Y. From drug to protein: using yeast genetics for high-throughput target discovery. Current Opinion in Chemical Biology. 9 (1), 20-24 (2005).
  24. Modarresi Chahardehi, A., Arsad, H., Lim, V. Zebrafish as a successful animal model for screening toxicity of medicinal plants. Plants. 9 (10), 1345(2020).
  25. Fischer, I., Milton, C., Wallace, H. Toxicity testing is evolving. Toxicology Research. 9 (2), 67-80 (2020).
  26. de Araújo, G. L., et al. Alternative methods in toxicity testing: the current approach. Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences. 50 (1), 55-62 (2014).
  27. Toussaint, M., et al. A high-throughput method to measure the sensitivity of yeast cells to genotoxic agents in liquid cultures. Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis. 606 (1), 92-105 (2006).
  28. Horzmann, K. A., Freeman, J. L. Making waves: New developments in toxicology with the zebrafish. Toxicological Sciences. 163 (1), 5-12 (2018).
  29. Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: An introduction. Journal of Visualized Experiments. (69), e4196(2012).
  30. Cunliffe, V. T. Zebrafish: A Practical Approach. Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. , Oxford University Press. (2002).
  31. Sitarek, P., et al. Insight the biological activities of selected Abietane Diterpenes isolated from Plectranthus spp. Biomolecules. 10 (2), 194(2020).
  32. Matias, D., et al. Cytotoxic activity of Royleanone Diterpenes from Plectranthus madagascariensis Benth. ACS Omega. 4 (5), 8094-8103 (2019).
  33. Garcia, C., et al. Royleanone derivatives from Plectranthus spp. as a novel class of P-glycoprotein inhibitors. Frontiers in Pharmacology. 11, (2020).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Bioassay z wykorzystaniem Artemia salinaletalno krewetek solankowychog lny screening toksyczno citest cytotoksyczno ciekstrakty z produkt w naturalnychmiertelno naupli wkontrola dichromianem potasuprzygotowanie pr bekmikroskopia binokularnaprocedura wyl gania

Powiązane artykuły