Tutaj opisujemy protokół, w którym model ksenoprzeszczepu uzyskany od pacjenta z ostrą białaczką limfoblastyczną jest używany jako strategia oceny i monitorowania toksyczności związanej z receptorem chimerycznego antygenu T ukierunkowanym na CD19.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Ocena toksyczności związanej z chimerycznym receptorem antygenowym limfocytów T przy użyciu mysiego modelu ksenoprzeszczepu pobranego od pacjenta z ostrą białaczką limfoblastyczną
W tym artykule
Informacja o sprostowaniu
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Podsumowanie
Streszczenie
Terapia komórkami CART (Chimeric antigen receptor T (CART) stała się potężnym narzędziem do leczenia wielu typów nowotworów złośliwych CD19+, co doprowadziło do niedawnego zatwierdzenia przez FDA kilku terapii komórkowych CART (CART19) ukierunkowanych na CD19. Jednak terapia komórkowa CART wiąże się z unikalnym zestawem toksyczności, które niosą ze sobą własną zachorowalność i śmiertelność. Obejmuje to zespół uwalniania cytokin (CRS) i zapalenie nerwów (NI). Wykorzystanie przedklinicznych modeli mysich miało kluczowe znaczenie w badaniach i rozwoju technologii CART do oceny zarówno skuteczności, jak i toksyczności CART. Dostępne modele przedkliniczne do testowania tej adoptywnej immunoterapii komórkowej obejmują modele syngeniczne, ksenoprzeszczepowe, transgeniczne i humanizowane mysie. Nie ma jednego modelu, który płynnie odzwierciedlałby ludzki układ odpornościowy, a każdy model ma mocne i słabe strony. Niniejszy artykuł ma na celu opisanie modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta przy użyciu blastów białaczkowych od pacjentów z ostrą białaczką limfoblastyczną jako strategii oceny toksyczności związanej z CART19, CRS i NI. Wykazano, że model ten podsumowuje toksyczność związaną z CART19, a także skuteczność terapeutyczną, którą zaobserwowano w klinice.
Wprowadzenie
Terapia komórkami T z chimerycznym receptorem antygenowym (CART) zrewolucjonizowała dziedzinę immunoterapii nowotworów. Okazał się skuteczny w leczeniu nawrotowej/opornej na leczenie ostrej białaczki limfoblastycznej (ALL), chłoniaka z dużych komórek B, chłoniaka z komórek płaszcza, chłoniaka grudkowego i szpiczaka mnogiego1,2,3,4,5,6,7, co doprowadziło do niedawnych zatwierdzeń FDA. Pomimo początkowych sukcesów w badaniach klinicznych, l....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Ten protokół jest zgodny z wytycznymi Instytucjonalnej Komisji Rewizyjnej (IRB) Kliniki Mayo, Instytucjonalnego Komitetu ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC A00001767) oraz Instytucjonalnego Komitetu Bezpieczeństwa Biologicznego (IBC, Bios00000006.04).
UWAGA: Wszystkie materiały używane do pracy z myszami muszą być sterylne.
1. Wstrzyknięcie busulfanu myszom NSG
- Zdobądź samce, 8-12 tygodniowe, z obniżoną odpornością, NOD-SCID IL2rγnull (NSG) myszy i zważ je przed wstrzyknięciem.
UWAGA: W celu uzyskania istotności statystycznej zaleca się użycie co najmniej pięciu myszy na ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Celem niniejszego protokołu jest ocena toksyczności związanej z komórkami CART z wykorzystaniem modelu mysiego PDX z komórek nowotworowych pacjentów z ALL (Rycina 1). W pierwszej kolejności myszy NSG otrzymały dożylne wstrzyknięcia busulfanu (30 mg/kg) w celu immunosupresji i ułatwienia przyjęcia komórek CART.28Następnego dnia otrzymali ~5 × 106 PBMC (dożylnie) pochodzące od pacjentów z ALL. Myszy monitorowano pod kątem przyjęcia przeszczepu przez ok. 13 ty.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
W niniejszym raporcie opisano metodologię oceny toksyczności związanej z komórkami CART przy użyciu modelu ALL PDX. Mówiąc dokładniej, model ten ma na celu naśladowanie dwóch zagrażających życiu toksyn, CRS i NI, których pacjenci często doświadczają po infuzji komórek CART. Podsumowuje wiele cech charakterystycznych toksyczności CART obserwowanych w klinice: utratę masy ciała, dysfunkcję motoryczną, zapalenie nerwów, produkcję cytokin zapalnych i chemokiny oraz infiltrację różnych komórek efektorowych do ośrodkowego ukła.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
S.S.K. jest wynalazcą patentów w dziedzinie immunoterapii CAR, na które udziela licencji Novartis (na mocy umowy między Mayo Clinic, University of Pennsylvania i Novartis) oraz Mettaforge (poprzez Mayo Clinic). R.L.S. i S.S.K. są wynalazcami patentów w dziedzinie immunoterapii CAR, które są licencjonowane przez Humanigen. S.S.K. otrzymuje fundusze na badania od Kite, Gilead, Juno, Celgene, Novartis, Humanigen, MorphoSys, Tolero, Sunesis, Leahlabs i Lentigen.
Podziękowania
Ta praca była częściowo wspierana przez National Institutes of Health (R37CA266344, 1K99CA273304), Departament Obrony (CA201127), Mayo Clinic K2R pipeline (S.S.K.), Mayo Clinic Center for Individualized Medicine (S.S.K.) oraz Fundację Predolin (R.L.S.). Ponadto chcielibyśmy podziękować personelowi Mayo Clinic NMR Core Facility. Rysunek 1 został utworzony w BioRender.com
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Tablet APC Anti-Human CD19 | Biolegend | 302211 | |
| Alcohol Prep Pad Wecol | 6818 | ||
| Analyze 14.0 Analyze 14.0 | AnalyzeDirect Inc. | Nie dotyczy | https://analyzedirect.com/analyze14/ |
| Sztuczne łzy (olej mineralny i wazelina) | Akorn | 17478-062-35 | Miejscowy żel okulistyczny zapobiegający suchości oczu |
| Roztwór lizujący BD FACS | BD | 349202 | Bufor lizujący czerwone krwinki |
| Strzykawki insulinowe BD Micro-Fin IV | BD | 329461 | |
| Brillian Violet 421 Anti-Human CD45 | Biolegend | 304032 | |
| Bruker Avance II 7 Tesla | Maszyna do rezonansu magnetycznego | Bruker Biospin | N/A |
| Busulfan (NSC-750) | Selleckchem | S1692 | |
| CountBright Absolutne koraliki do liczenia | Invitrogen | C36950 | |
| CytoFLEX System B4-R2-V2 Cytometr | przepływowy Beckman Coulter | C10343 | |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanami Dulbecco | Gibco | 14190-144 | |
| Moduł sterujący/bramkujący ERT | SA Instruments | Model 1030 | Monitorowanie małych zwierząt Układ oddechowy i bramkowy |
| Surowica bydlęca | płodu Millipore Sigma | F8067 | |
| Hemocytometr | Bright-Line | Z359629-1EA | |
| Ludzka surowica AB; Dawcy płci męskiej; typu AB; US | Corning | 35-060-CI | |
| Izofluran (płyn) | Sigma-Aldrich | 792632 | |
| LIVE/DEAD Zestaw do mocowania barwników Aqua Dead Cell, do wzbudzenia 405 nm | Invitrogen | L34966 | |
| Microvette 500 Heparyna litowa | Sarstedt | 20.1345.100 | Probówka do pobierania krwi |
| MILLIPLEX Huma/Cytokina/Chemokine Panel kulek magnetycznych | Millipore Sigma | HCYTMAG-60K-PX38 | Test immunologiczny Multiplex do identyfikacji cytokin i chemokin |
| Omniscan | Ge Healthcare, Inc. | 0407-0690-10 | Środek przeciwutleniający na bazie gadolinu |
| Pd Anti-Mouse CD45 | Biolegend | 103106 | |
| Penicylina-Streptomycyna-Glutamina (100x), płyn | Gibco | 10378-016 | |
| Probówka z polistyrenu z okrągłym dnem | Corning | 352008 | |
| Azek sodu, 5% (w/v) | Ricca Chemical | 7144.8-16 | |
| Stal nierdzewna chirurgiczna Blade | Bard-Parker | 371215 | |
| X-VIVO 15 Bezemisyjne Medium Krwiotwórcze | Lonza | 04-418Q |
Bibliografia
- Turtle, C. J., et al. Immunotherapy of non-Hodgkin's lymphoma with a defined ratio of CD8+ and CD4+ CD19-specific chimeric antigen receptor-modified T cells. Science Translational Medicine. 8 (355), (2016).
- Kochenderfer, J. N., et al.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
Sprostowanie
Formal Correction: Erratum: Assessment of Chimeric Antigen Receptor T Cell-Associated Toxicities Using an Acute Lymphoblastic Leukemia Patient-derived Xenograft Mouse Model
Posted by JoVE Editors on 3/14/2023. Citeable Link.
An erratum was issued for: Assessment of Chimeric Antigen Receptor T Cell-Associated Toxicities Using an Acute Lymphoblastic Leukemia Patient-derived Xenograft Mouse Model. The Authors section was updated from:
Claudia Manriquez Roman1,2,3,4,5
R. Leo Sakemura1,2
Fang Jin6
Roman H. Khadka6
Mohamad M. Adada1,2
Elizabeth L. Siegler1,2
Aaron J. Johnson6
Saad S. Kenderian1,2,6
1T Cell Engineering Laboratory, Mayo Clinic, Rochester,
2Division of Hematology, Mayo Clinic, Rochester,
3Mayo Clinic Graduate School of Biomedical Sciences, Mayo Clinic, Rochester,
4Department of Molecular Medicine, Mayo Clinic, Rochester,
5Regenerative Sciences PhD Program, Mayo Clinic, Rochester,
6Department of Immunology, Mayo Clinic, Rochester
to:
Claudia Manriquez Roman1,2,3,4,5
R. Leo Sakemura1,2
Brooke L. Kimball1,2
Fang Jin6
Roman H. Khadka6
Mohamad M. Adada1,2
Elizabeth L. Siegler1,2
Aaron J. Johnson6
Saad S. Kenderian1,2,6
1T Cell Engineering Laboratory, Mayo Clinic, Rochester,
2Division of Hematology, Mayo Clinic, Rochester,
3Mayo Clinic Graduate School of Biomedical Sciences, Mayo Clinic, Rochester,
4Department of Molecular Medicine, Mayo Clinic, Rochester,
5Regenerative Sciences PhD Program, Mayo Clinic, Rochester,
6Department of Immunology, Mayo Clinic, Rochester
