Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Kofermentacja Marsdenia tenacissima z Ganoderma lucidum i działanie przeciw rakowi płuc produktów fermentacji

1.3K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/64687

⸱

16 grudnia 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Minzu University of China, 2Ministry of Education, Key Laboratory of Ethnomedicine (Minzu University of China)

W tym artykule

Podsumowanie

Tutaj opisujemy protokół mający na celu ustanowienie systematycznego i wszechstronnego systemu kofermentacji w celu wytwarzania produktów biotransformacji bogatych w ostre saponiny przy użyciu Marsdenia tenacissima (Roxb.) Wight et Arn. (MT) jako pożywka fermentacyjna dla Ganoderma lucidum. Posłuży to jako metodologiczne odniesienie dla rozwoju innych leków etnicznych.

Streszczenie

Marsdenia tenacissima (Roxb.) Wight et Arn. (MT), jako tradycyjna medycyna chińska i dai, ma właściwości przeciwzapalne, przeciwbakteryjne i przeciwnowotworowe. Jednak większość jego głównych substancji czynnych to aglikony, takie jak tenacigenina A i tenacigenina B. Ponieważ biodostępność MT jest niska, a jego lecznicze składniki aktywne są trudne do syntezy, bada się go przede wszystkim za pomocą biotransformacji. Badanie to ma na celu wytworzenie produktów biotransformacji bogatych w ostre saponiny poprzez wykorzystanie MT jako pożywki fermentacyjnej dla Ganoderma lucidum (G. lucidum).

Dzięki wstępnym badaniom przesiewowym trzech grzybów leczniczych stwierdzono, że G. lucidum i Ophiocordyceps sinensis (O. sinensis) mogą generalnie rosnąć w pożywce dla MT; stąd skuteczność fermentacji dwóch typów grzybów została sprawdzona przy użyciu mysiego modelu raka płuc. Ostatecznie do dalszych badań wybrano kofermentację G. lucidum i MT. Niedocelową analizę metabolomiczną przeprowadzono na produktach MT z kofermentacją G. lucidum. Zidentyfikowaliśmy 12 specyficznych saponin MT z produktów fermentacji i uzyskaliśmy związek monomeryczny, tenacigeninę A, z produktów fermentacji.

Większość tenacigeniny wykazywała znaczącą tendencję wzrostową, poprzez poziomy tenacigeniny A i tenacigeniny B. Wyniki wykazały, że skuteczność MT poprawiła się po fermentacji przez G. lucidum. Ponadto biotransformacja glikozydów steroidowych C21 w MT była centralną reakcją w tym procesie fermentacji. Podsumowując, badanie to ustanowiło systematyczny i kompleksowy system kofermentacji oraz metodę oceny farmakodynamicznej MT, które nie tylko zwiększyły pełne wykorzystanie skutecznych substancji czynnych w MT, ale także zapewniły metodologiczne odniesienie dla rozwoju innych leków etnicznych.

Wprowadzenie

Rak płuc należy do kategorii "karbunkuł płuc" w tradycyjnej medycynie chińskiej. Patogeneza karbunkułu płuc to osłabienie zdrowego "Qi" pacjentów, brak równowagi Yin i Yang, toksyny i zastój w płucach, prowadzący do dysfunkcji płuc, zablokowania krwi i utraty płynu w płucach. W ten sposób długotrwały zastój krwi i toksyny plwociny w płucach tworzą masę płuc1. Dlatego wzmocnienie Qi i eliminacja czynników chorobotwórczych jest podstawową zasadą leczenia raka płuc. Metody odżywiania Yin w celu zrównoważenia Yin i Yang, usuwania ciepła, detoksykacji i rozpraszania stagnacji, uzupełniania Qi i odżywiania Yin oraz usuwania flegmy są stosowane w leczeniu i zapobieganiu tworzeniu się karbunkułów płuc2.

Marsdenia tenacissima (MT) to roślina lecznicza należąca do rodziny Asclepiadaceae (Marsdenia ssp.), znana również jako Wuguteng. Ma działanie oczyszczające ciepło i detoksykację, łagodzące kaszel i astmę, a także ma właściwości przeciwnowotworowe3. Iniekcja Xiaoaiping, preparat wykonany z pojedynczego zioła MT, jest szeroko stosowany w klinikach i wykazuje dobre terapeutyczne działanie przeciwnowotworowe4. Jednak wraz ze wzrostem liczby ludności gwałtownie wzrosło zapotrzebowanie na MT. W związku z tym zaopatrzenie w dzikie zasoby MT jest niewystarczające, a jakość uprawianych surowców leczniczych jest nierówna. Istnieją problemy, takie jak niska jakość surowców ziołowych, niestabilna zawartość składników i niska biodostępność, które poważnie zagrażają rozwojowi MT. Wśród tych związków bioaktywnych saponiny z MT zostały dokładnie przebadane. Zidentyfikowano ponad 100 saponin z MT; można je podzielić na dwa główne typy: (1) C21 glikozydy steroidowe w MT, w tym tenakisozyd A-P, marsdenozyd A-M, tenakigenozyd A-L i tenacigenina AD. (2) Pentacyliczne triterpeny, takie jak kwas oleanolowy i kwas ursolowy. Wiele badań wykazało, że aktywność przeciwnowotworowa ekstraktów eteru naftowego jest wyższa niż wysoce polarnych cząsteczek MT. Dlatego korzystne jest przekształcenie głównego polisacharydu saponin z MT w inny mniejszy aglikon MT o wyższej biodostępności i bioaktywności5.

Biotransformacja, znana również jako biokataliza, odnosi się do fizjologicznych i biochemicznych reakcji przemiany lub modyfikacji strukturalnej substratów egzogennych przy użyciu pokrewnych enzymów w systemach biologicznych6. Jest bardziej ekonomiczna, bezpieczniejsza, selektywna regionalnie i stereoselektywna niż tradycyjna synteza chemiczna i może wytwarzać pewne związki bioaktywne, które są trudne do przygotowania za pomocą konwencjonalnej chemii syntetycznej7,8. Dlatego rozwój tradycyjnej medycyny chińskiej i leków naturalnych ma zasadnicze znaczenie dla promowania modernizacji i internacjonalizacji tradycyjnej medycyny chińskiej.

System kofermentacji MT został stworzony przy użyciu biotransformacji. Pierwotne materiały lecznicze zostały przekształcone przez mikrobiologiczne systemy enzymatyczne. Z jednej strony ekstrakt z MT został wykorzystany jako substrat do wytworzenia kultury fermentacyjnej grzybów w tym trybie. Jednocześnie fermentacja grzybowa skróciła cykl rozmnażania się bakterii, obniżyła koszty produkcji i poprawiła wydajność produkcji9. Z drugiej strony, zwiększone wytrącanie składników aktywnych przez fermentację grzybową jest korzystne, wytwarzając składniki chemiczne i poprawiając skuteczność10. Zastosowanie technologii płynnej fermentacji dwukierunkowej jest pomocne w ochronie aktywnych składników materiałów leczniczych, poprawie skuteczności, oszczędzaniu źródeł leków i może zapewnić lepszą skuteczność dzięki zapewnieniu technik modyfikacji strukturalnej składników aktywnych materiałów ziołowych. Ma to ogromne znaczenie dla podniesienia poziomu unowocześnienia tradycyjnej medycyny chińskiej.

W tym badaniu, G. lucidum, O. sinensis i Inonotus obliquus (I. obliquus) zostały wybrane jako mikroorganizmy fermentacyjne we wczesnej fazie po przeglądzie literatury, a szczepy zostały wstępnie przebadane. Następnie określono końcowe szczepy fermentacyjne, badając skuteczność przesianych szczepów za pomocą mysiego modelu nowotworowego. Wreszcie, metabolity pierwotne i metabolity wtórne produktów fermentacji były systematycznie analizowane i oceniane przez LC-MS i otrzymaliśmy związek monomeryczny, tenacigeninę A, z produktów fermentacji.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

To badanie zostało przeprowadzone zgodnie z zaleceniami Centrum Zwierząt Doświadczalnych Uniwersytetu Minzu (No. ECMUC2019008AA). Protokół został zatwierdzony przez Komitet Etyki Zwierząt Doświadczalnych Uniwersytetu Minzu. MT został zebrany z Kunming w prowincji Yunnan.

1. Przygotowanie do badania

  1. Ekstrahować MT gorącą wodą (100 °C; MT/woda = 1/10, w/v) przez 30 minut i zebrać pozostałość po ekstrakcji MT jako materiał do badań.
  2. Utrzymuj linię komórkową mysiego raka płuc LLC w zmodyfikowanym pożywce Eagle (DMEM) firmy Dulbecco uzupełnionej 10% płodową surowicą bydlęcą, 100 U / ml penicyliny i 100 μg / ml streptomycyny w wilgotnej atmosferze w temperaturze 37 °C poniżej 5% CO2 .
  3. Myszy C57BL/6J w wieku 6-8 tygodni i o wadze 19 ± 2 g należy przechowywać w pomieszczeniu o kontrolowanej temperaturze 12 godzin/12 godzin i cieniu oraz z nieograniczonym dostępem do pożywienia i wody. Dezynfekuj je regularnie.

2. Wstępne badanie przesiewowe szczepów

  1. Inokulować trzy szczepy grzybów w stałym podłożu z agatora dekstrozy ziemniaczanej (PDA) przy użyciu sterylnych technik i hodować je w ciemności w temperaturze 28 °C. Po całkowitym pokryciu naczyń grzybami należy je przechowywać w temperaturze 4 °C.
  2. Zaszczepić szczepy zakonserwowane w stałym podłożu PDA w roztworze nasiennym kolby wstrząsowej pierwszego stopnia i hodować je w temperaturze 28 °C, wytrząsając z prędkością 120 obr./min przez 4-5 dni. Zaszczepić płyn grzybowy pierwszego stopnia do kolby wstrząsowej zawierającej wtórną ciecz grzybową w stosunku objętościowym 1:20 w wytrząsarce o stałej temperaturze przez 4-5 dni.
  3. Rozcieńczyć MT wodą do 100 mg/L (MT/woda) i dodać roztwór do agaru, aby uzyskać stałe podłoże. Zaszczepić 1 ml wtórnego płynu grzybowego każdego z trzech szczepów do stałej kultury zawierającej tylko MT, a następnie podzielić na systemy hodowli G. lucidum-MT, I. obliquus-MT i O. sinensis-MT. Umieścić te systemy hodowlane w temperaturze 28 °C, nie wstrząsając w ciemności.
  4. Po pewnym czasie obserwuj wzrost szczepów w powyższych trzech systemach hodowli i wybierz szczepy, które mogą rosnąć tylko z MT do dalszych badań przesiewowych.

3. Selekcja szczepów

UWAGA: Po wstępnym badaniu, tylko G. lucidum i O. sinensis mogły normalnie rosnąć na stałym podłożu zawierającym MT. Aby dalej wybrać system o dobrym działaniu przeciwnowotworowym, skuteczność przeciwnowotworową przetestowano na przeszczepionym modelu myszy.

  1. Inokulować G. lucidum i O. sinensis w płynnej pożywce zawierającej tylko MT-MT z kofermentacją G. lucidum (MGF) i MT z kofermentacją O. sinensis (MOF) i fermentować przez 10 dni w temperaturze 28 °C z wytrząsaniem przy 180 obr./min.
  2. Po fermentacji przefiltruj grzybnię przez gazę i wysusz ją. Ekstrakt z 80% etanolem 3 x 12 h.
  3. Sprawdź aktywność przeciwnowotworową sfermentowanego i niesfermentowanego MT u myszy C57BL / 6J z komórkami nowotworowymi LLC.
    1. Podskórnie wstrzyknąć komórki LLC (1,0 × 106 komórek w 0,2 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) na mysz) na mysz) w prawą flankę samców myszy C57BL / 6J (z wyjątkiem grupy kontrolnej).
    2. Aby potwierdzić pomyślne założenie modelu, dotknij guzków guza i sprawdź, czy mają rozmiar ~5 mm. Losowo pogrupuj myszy z guzem (n = 10 na grupę) do grupy modelowej, grupy MGF, grupy MOF, grupy MT i grupy cisplatyny (kontrola pozytywna). Podawać sól fizjologiczną grupie kontrolnej (bez komórek nowotworowych) i grupie modelowej. Poświęć myszy po 14 dniach leczenia i zbierz tkankę nowotworową.

4. Analiza składu chemicznego produktów fermentacji

UWAGA: Po sprawdzeniu skuteczności fermentacji, G. lucidum został wybrany jako szczep fermentacyjny w tym badaniu. Przeprowadziliśmy analizę metabolomiczną MGF za pomocą chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (LC-MS)11.

  1. Ekstrahować 10 mg MT, G. lucidum i MT z kofermentacją G. lucidum (MGF) z 500 μl metanolu:H 2O (7:3), wstrząsać w temperaturze 4 °C przez 1 min, sonikować przez 30 min i wirować przez 20 min w temperaturze 1 200 × g. Zebrać supernatanty, przefiltrować je przez membranę z polifluorku winylidenu o wielkości 0,22 μm i wstrzyknąć do zestawu do chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas tandem (LC-MS/MS).
    UWAGA: Metabolity oddzielone ultrasprawną chromatografią cieczową (UPLC) i biblioteka próbek kontroli jakości (QC) zostały skonstruowane za pomocą spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości (patrz tabela materiałów).
  2. Należy użyć następujących warunków UPLC: kolumna C18 (100 mm x 2,1 mm; 8 μm), kwas mrówkowy w fazie ruchomej A-0,1% (v/v) w wodzie ultraczystej, faza ruchoma B-acetonitryl. Ustawić gradientowy profil elucji na 0 min 5% B; 2 min 5% B; 14 min 98% B; 17 min 98% B; 17,1 min 5% B; 20 min 5% przy natężeniu przepływu 0,3 ml/min.
  3. Wykrywanie i identyfikacja metabolitów za pomocą spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości. Ustawić temperaturę kolumny na 40 °C, temperaturę automatycznego wtryskiwacza na 4 °C, a objętość wtrysku na 2 μL. Utrzymuj następujące warunki MS: napięcie źródła jonów elektrorozpylania: +5,500/-4,500 V; ciśnienie gazu kurtynowego, źródła jonów 1 i źródła jonów 2: odpowiednio 35, 60 i 60 psi; temperatura źródła jonów: 600 °C; potencjał depolimeryzacyjny: ± 100 V.
  4. Przygotować próbki kontroli jakości (QC), mieszając równe objętości ekstraktów MT, GL i MGF, a następnie nazwać odpowiednio trzy powtórzenia QC 1-3. Przetwarzaj i wykrywaj próbki do kontroli jakości i analizy, wykonując te same czynności. Wprowadzić próbkę kontroli jakości dla każdych trzech próbek, aby zbadać powtarzalność wykrywania i analizy.

5. Ekstrakcja i izolacja produktów fermentacji

  1. Ekstrakt fermentacyjny otrzymany z bulionu fermentacyjnego rozpuścić w wodzie destylowanej i dokładnie wymieszać.
    UWAGA: Tutaj uzyskano 2 kg ekstraktu fermentacyjnego z 40 l bulionu fermentacyjnego.
  2. Z sekcji 4 wymyj 10%, 30%, 50%, 70% i 95% frakcji etanolu za pomocą kolumny z makroporowatą żywicą adsorpcyjną i zbierz frakcje.
    UWAGA: Tutaj uzyskano 10,72 g 95% frakcji etanolu, 34,72 g 70% frakcji etanolu, 61,57 g 50% frakcji etanolowej i 79,7 g 30% frakcji etanolu.
  3. Na podstawie polarności frakcji wymyj 70% frakcję etanolu za pomocą chromatografii kolumnowej z żelem krzemionkowym z elucjącją: octan etylu: metanol i zbierz frakcje.
    UWAGA: Tutaj zebrano ks. 1-7.
  4. Przeprowadzić chromatografię kolumnową Sephadex LH-20 w celu dalszego oczyszczenia frakcji (tutaj Fr. 3 i Fr. 4), a następnie półpreparatywne rozdzielanie fazy ciekłej po oczyszczeniu przy użyciu 1,0 g każdej frakcji.
    UWAGA: Stosując półpreparatywną chromatografię cieczową i chromatografię kolumnową z żelem krzemionkowym, wyizolowaliśmy i oczyściliśmy 95% frakcję etanolu.
  5. Wykonaj mikrospektroskopię i spektroskopię magnetycznego rezonansu jądrowego i porównaj strukturę związku (związków) ze strukturami z baz danych dla 600 M i 700 M oraz określ płaską strukturę związku (związków).
    UWAGA: W tym przypadku użyto hybrydowego spektrometru mas do określenia masy cząsteczkowej mieszaniny. Zidentyfikowaliśmy strukturę jednego związku (patrz rysunek uzupełniający S1).

6. Analizy statystyczne

  1. Powtórz wszystkie eksperymenty fermentacyjne sześć razy. Oceń istotność statystyczną za pomocą testu t-Studenta. Wyrazić wszystkie dane jako średnią ± SD, powtórzyć wszystkie eksperymenty w trzech egzemplarzach i ustawić p < 0,05 dla istotności statystycznej (*0,01 ≤ p ≤ 0,05, **0,001 ≤ p ≤ 0,01, ***p ≤ 0,001).
  2. Użyj oprogramowania SCIEX OS do identyfikacji metabolitów głównie na podstawie błędu masy, czasu retencji, dopasowania izotopów, wyniku czystości biblioteki MS / MS i obliczeniowego wzoru molekularnego. Użyj następujących parametrów ustawień biblioteki: błąd masy < 5 ppm, różnica proporcji izotopów < 20 i wynik biblioteki > 50.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Wstępne wyniki przesiewowe szczepów
W celu poszukiwania grzybów zdolnych do współfermentacji z MT wybrano trzy gatunki: G. lucidum, I. obliquus oraz O. sinensis. W pierwszej kolejności przeprowadzono aktywację szczepów: G. lucidum, I. obliquus, oraz O. sinensis zasiano na podłoże PDA, co przedstawiono na Rysunku 1A-C; Rysunek 1D-F...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Po eksperymentach przesiewowych szczepów stwierdziliśmy, że nie wszystkie grzyby lecznicze mogą normalnie przetrwać na materiałach ziołowych. Bez żadnej dodatkowej pożywki przetrwanie grzybów leczniczych zależy od degradacji składników w materiałach leczniczych przez ich własne enzymy w celu syntezy wymaganych źródeł węgla i azotu. Można wywnioskować, że I. obliquus może nie zawierać enzymów zdolnych do rozkładu saponin MT. W przypadku G. lucidum i O. sinensis , które mogą być współfermentowane...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie są im znane żadne konkurencyjne interesy finansowe ani powiązania osobiste, które mogłyby mieć wpływ na pracę opisaną w tym artykule.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez granty z Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (81973977). Próbki MT zostały zidentyfikowane przez profesora Tongxiang-Liu i przechowywane w Szkole Farmacji Uniwersytetu Minzu w Chinach.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
AcetonitrylTonguang Fine Chemicals Company, Pekin, Chiny20200923
AgarSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd., USANO.20080107
AutoklawBinJiang Medical Co., Ltd., Jiangyin, ChinyLS-50LD
Zhicheng Inc. Wszelkie prawa zastrzeżone., Szanghaj, ChinyZWY-100D
Ganoderma lucidumBeNa Culture Collection, Pekin, Chiny31732
Inonotus obliquusBeNa Culture Collection, Pekin, Chiny117822
LLC Mysia komórka raka płucKrajowa infrastruktura zasobów linii komórkowych, Pekin, ChinyPUMC000673
Samce myszy C57BL/6JVital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd., Beiijng, ChinyNo.110011210107024684
MethanolTonguang Fine Chemicals Company, Pekin, Chiny20210723
Ophiocordyceps sinensisBeNa Culture Collection, Pekin, Chiny118371
Poly tetra fluoroetylenJinteng Experiment Equipment Co., Ltd., Tianjing, ChinyNo.997
QTRAP 5500 LC/MSAB Sciex Pte. Ltd., USACV20231711
Parownikobrotowy BUCHI Co., Ltd., Szanghaj, ChinyR-300
StrzykawkaZhiyu Medical Instrument Co., Ltd., Jinagsu, ChinyV500111
Ultra-czystaławka BOXUN Medica Bioological Instrument Co., Ltd., Szanghaj, ChinySW-CJ-LFD
Inkubator do ciągłego wytrząsania

Bibliografia

  1. Jansen, B. J., Liang, H., Ye, J. International Conference on Cognitive Based Information Processing and Applications (CIPA 2021). 85, Springer Nature. (2021).
  2. WANG, J., et al. Literature-based research on common syndromes of cough variant asthma). Chinese General Practice. , (2022).
  3. Meng, H., et al. Influence of different substrate and plant growth regulators on rooting of cutting of Marsdenia tenacissima. Journal of Yunnan Agricultural University. 29 (4), 540-543 (2014).
  4. Xing, W., Chen, B., Mi, H., Wu, Y. Textual research of Wuguteng. Zhong yao cai=Zhongyaocai=. Journal of Chinese Medicinal Materials. 26 (7), 524-526 (2003).
  5. Yin, C. Investigation of Polyoxypregnane Compounds Isolated from Marsdenia Tenacissima for the Anti-Cancer Activity and Circumvention of Multidrug Resistance. The Chinese University of Hong Kong. , Hong Kong. Doctoral Dissertation (2019).
  6. Singer, A. C., Crowley, D. E., Thompson, I. P. Secondary plant metabolites in phytoremediation and biotransformation). Trends in Biotechnology. 21 (3), 123-130 (2003).
  7. Bianchini, L. F., et al. Microbial biotransformation to obtain new antifungals. Frontiers in Microbiology. 6, 1433(2015).
  8. Pimentel, M. R., Molina, G., Dionísio, A. P., Maróstica Junior, M. R., Pastore, G. M. The use of endophytes to obtain bioactive compounds and their application in biotransformation process. Biotechnology Research International. 2011, 576286(2011).
  9. Hsu, B. Y., Lu, T. J., Chen, C. H., Wang, S. J., Hwang, L. S. Biotransformation of ginsenoside Rd in the ginseng extraction residue by fermentation with lingzhi (Ganoderma lucidum). Food Chemistry. 141 (4), 4186-4193 (2013).
  10. Wang, D., et al. Biotransformation of gentiopicroside by asexual mycelia of Cordyceps sinensis. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 17 (11), 3195-3197 (2007).
  11. Li, R., et al. Nontargeted metabolomics study and pharmacodynamic evaluation of bidirectional fermentation for Ganoderma lucidum with Marsdenia tenacissima. Frontiers in Pharmacology. , 4590(2022).
  12. Zhang, H., et al. Five new C21 steroidal glycosides from the stems of Marsdenia tenacissima. Steroids. 75 (2), 176-183 (2010).
  13. Deng, J., Liao, Z., Chen, D. Marsdenosides A-H, polyoxypregnane glycosides from Marsdenia tenacissima. Phytochemistry. 66 (9), 1040-1051 (2005).
  14. Xia, Z. -H., et al. Pregnane glycosides from the stems of Marsdenia tenacissima. Journal of Asian Natural Products Research. 6 (2), 79-85 (2004).
  15. Deng, J., Liao, Z., Chen, D. Three new polyoxypregnane glycosides from Marsdenia tenacissima. Helvetica Chimica Acta. 88 (10), 2675-2682 (2006).
  16. Hu, Y., et al. Mechanism of Marsdenia tenacissima extract promoting apoptosis of lung cancer by regulating Ca2+/CaM/CaMK signaling. Journal of Ethnopharmacology. 251, 112535(2020).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Produkty biotransformacjiglikozydy steroidowetenacygenina Awzbogacanie saponinmetabolomika nietarczowaocena farmakodynamiczna
Film wkrótce dostępny
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.