Przetestowano rutyny na odpowiedziach falowych ABR na serię impulsów (click), zaczynając od poziomu 75 dB i obniżając go w krokach co 5 dB aż do poziomu 5 dB. Dane te uzyskano zgodnie z wcześniejszym opisem.19Przetestowaliśmy również narzędzie na danych z pipowania tonów, otrzymując podobne wyniki. Dane ABR z większości systemów ABR można eksportować do plików .txt (ASCII). Wczytaliśmy pliki ABR ASCII na komputer i otworzyliśmy je w programie RStudio zgodnie z opisem w protokole. Po uruchomieniu procedury FindPeaks.R w trybie wsadowym otrzymaliśmy przebiegi falowe próbek z automatycznym etykietowaniem (Rysunek 1) oraz plik .csv z wynikami. Wyniki poddano przeglądowi w celu usunięcia nieistotnych pików. Aby zwalidować automatyczne etykietowanie, wykorzystaliśmy również funkcję programu ABR umożliwiającą ręczne oznaczenie pierwszych pięciu pików i dołków na każdym przebiegu fali uzyskany w ramach opisanej powyżej serii kliknięć. Osoba wykonująca to zadanie posiadała 2-letnie doświadczenie w rejestracji i analizie danych ABR. Rycina 2 przedstawia to porównanie, w którym dane z automatycznego programu FindPeaks.R zaznaczono na czerwono, a dane uzyskane ręcznie na czarno. Każdy ślad odpowiada danym z jednej myszy. Wyświetlono również średnią dla obu metod wraz z jednym odchyleniem standardowym. Wyniki uzyskane za pomocą FindPeaks.R silnie korelują z wynikami uzyskanymi ręcznie (patrz Rycina uzupełniająca S4).

Rysunek 1: Reprezentatywna odpowiedź w formie przebiegu fali na bodziec klikowy 75 dB u młodej myszy F1. Na osi x naniesiono latencję w milisekundach, a na osi y amplitudę w mikrowoltach. Szczyty zostały zidentyfikowane automatycznie za pomocą programu FindPeaks.R i są oznaczone na czerwono, natomiast minima są oznaczone na niebiesko. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rysunek 2: Porównanie danych uzyskanych z ręcznie zidentyfikowanych pików z danymi dostarczonymi przez analizę FindPeaks.R. (A,C,E,G,I) Amplitudy w mikrovoltach i (B,D,F,H,J) latencje w milisekundach wykreślono dla poziomów dźwięku od 5 dB do 75 dB (oś x, wszystkie wykresy) dla pików I-V w przebiegach uzyskanych dla bodźców kliknięć zaprezentowanych 12 myszom. Wartości uzyskane ręcznie (czarne) porównano z tymi samymi zestawami danych analizowanymi za pomocą FindPeaks.R (czerwone). Średnie przedstawiono jako grube linie, a zacieniowany obszar reprezentuje jedno odchylenie standardowe. Nie stwierdzono różnic między metodami w ocenie testem sumy rang Kruskala-Wallisa (A, różnica = 0,0547977 ± 0,0010028, max = 0,96, p = 0,9216; B, różnica = −0,0001734 ± 0,0001214, max = 0,04, p = 0,8289; C, różnica = −0,0212209 ± 0,0006806, max = 0,92, p = 0,9687; D, różnica = −0,0011047 ± 0,0001556, max = 0,06, p = 0,771; E, różnica = −0,0323077 ± 0,0006169, max = 0,66, p = 0,899; F, różnica = −0,0072189 ± 0,0001460, max = 0,04, p = 0,8644; G, różnica = 0,201754 ± 0,0007407, max = 0,64, p = 0,9312; H, różnica = −0,0007018 ± 0,0001717, max = 0,09, p = 0,8013; I, różnica = 0,0347561 ± 0,0007343, max = 1,05, p = 0,8856; J, różnica = −0,0078049 ± 0,0002762, max = 0,16, p = 0,886), a wyniki były silnie skorelowane (wartości chi-kwadrat: A, 0,009696; B, 0,046684; C, 0,0015395; D, 0,084742; E, 0,016102; F, 0,029153; G, 0,0074604; H, 0,063322; I, 0,020699; J, 0,020544; różnice przedstawione jako średnia ± SEM; max = bezwzględna maksymalna różnica). Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.
Rycina uzupełniająca S1: Analiza za pomocą FindPeaks.R. (A) Wybór katalogu roboczego (patrz krok protokołu 3.2); (B) ładowanie programu (patrz krok protokołu 3.3). Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
Rycina uzupełniająca S2: Wyniki skryptu i polecenia analizy kształtów fal. Polecenia dla (A) pojedynczych plików oraz (B) przetwarzania wsadowego. (C) Wyjściowy plik PDF przedstawiający kształty fal z oznakowanymi szczytami i dolinami. Patrz krok 3.4 protokołu. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
Rysunek uzupełniający S3: Weryfikacja analizy. (A) Ładowanie danych przebiegu fali (patrz krok protokołu 4.1). (B) Lokalizacja przycisku Run App. Wskazano również przykładowy plik z danymi. (C) Okno Shiny z przebiegiem fali. W tym przypadku poziom dźwięku wynosi 75 dB, zgodnie z wprowadzonymi danymi w górnym oknie. Kliknięcie wybranego piku, a następnie następującego po nim minimum, zapisuje w tabeli dane dotyczące amplitudy i latencji (krok protokołu 4.6). Przedstawiono dane dla piku 3. Prosimy kliknąć tutaj, aby pobrać ten plik.
Rycina uzupełniająca S4: Porównanie poszczególnych danych uzyskanych z ręcznie zidentyfikowanych pików z danymi dostarczonymi przez analizę FindPeaks.R. (A,C,E,G,I) Amplitudy w mikrowoltach i (B,D,F,H,J) latencje w milisekundach są przedstawione dla poziomów dźwięku od 5 dB do 75 dB (oś x, wszystkie wykresy) dla pików I-V w przebiegach fal uzyskanych dla bodźców klikowych prezentowanych 12 myszom. Każde zwierzę zostało oznaczone unikalnym kolorem, jak pokazano w legendzie. Dane uzyskane za pomocą FindPeaks.R są oznaczone kolorami nasyconymi, natomiast dane uzyskane ręcznie są oznaczone mniej nasyconymi wersjami tych samych kolorów. Chociaż oba zestawy danych są naniesione na tę rycinię, w przypadku gdy są one identyczne, widoczna jest tylko jedna linia. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.