Method Article

Aktualne techniki i modele oceny toksyczności rozwojowej zanieczyszczeń środowiska

DOI:

10.3791/64981

March 3rd, 2023

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

OMÓWIONE ARTYKUŁY:

Ding, J. et al. Używanie barwienia czerwienią alizarynową do wykrywania chemicznie indukowanej utraty kości u larw danio pręgowanego. Dziennik Eksperymentów Wizualnych. (178), E63251 (2021).

Huang, Y. et al. Wykorzystanie immunofluorescencji do wykrywania uszkodzeń DNA wywołanych przez PM2.5 w sercach zarodków danio pręgowanego. Dziennik Eksperymentów Wizualnych. (168), E62021 (2021).

Jiang, Q. X., Xu, X. H., DeWitt, J. C., Zheng, Y. X. Wykorzystanie zarodka kurzego jako potężnego narzędzia do oceny kardiotoksyczności rozwojowej. Dziennik Eksperymentów Wizualnych. (169), E62189 (2021).

Song, Y., Li, R., Li, L., Ouyang, F., Men, X. Ocena wpływu pestycydów na larwy pszczół samotnic. Dziennik Eksperymentów Wizualnych. (176), E62946 (2021).

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Na etapie rozwojowym zwierzęta są bardzo podatne na skutki zanieczyszczenia środowiska. Wykazano, że narażenie na chemikalia w krytycznych stadiach ciąży prowadzi do wrodzonych wad rozwojowych i poronień samoistnych. Dlatego zrozumienie sposobu działania potencjalnych substancji toksycznych byłoby korzystne w zapobieganiu lub leczeniu samoistnych poronień lub chorób wrodzonych spowodowanych zanieczyszczeniami środowiska. Jednak badanie mechanizmów leżących u podstaw toksyczności rozwojowej chemikaliów środowiskowych przy użyciu tradycyjnych modeli zwierzęcych jest trudne ze względu na złożoność, żmudność i nadmierne koszty związane z tymi eksperymentami. W tym zbiorze metod autorzy z różnych dziedzin badań zastosowali nowatorskie techniki i alternatywne modele do badania toksyczności rozwojowej chemikaliów środowiskowych.

Wiadomo, że serce jest jednym z najwcześniejszych narządów, które powstały podczas embriogenezy i jest to narząd szczególnie podatny na zniewagi środowiskowe. Szacunki badań pokazują, że wrodzone choroby serca stanowią około jednej trzeciej wszystkich znanych wad wrodzonych, a także są główną przyczyną śmiertelności niemowląt1. Niestety, tradycyjne modele zwierzęce są albo zbyt pracochłonne, albo niewrażliwe, aby wykryć toksyczne skutki rozwoju serca. W dwóch pracach z tego zbioru metod badano niekorzystny wpływ drobnego pyłu zawieszonego w otoczeniu (PM2,5), substancji per- i polifluoroalkilowych (PFAS), spalin z silników wysokoprężnych (DE) oraz nanomateriałów na rozwój serca przy użyciu danio pręgowanego i zarodków kurczaka 2,3. Wykorzystując zasady techniki testu immunofluorescencyjnego, 8-hydroksy-2'deoksygenaza (8-OHdG), marker oksydacyjnego uszkodzenia DNA, oraz H2AX, czuły marker pęknięć dwuniciowych DNA, są konsekwentnie wykrywane w sercu zarodków danio pręgowanego po ekspozycji na ekstrahowalną materię organiczną (EOM) z PM2,52. Podobnie, uszkodzenie DNA kardiomiocytów i grubość ściany prawej komory są również wyraźnie pokazane w izolowanej tkance serca przy użyciu tych samych technik immunofluorescencji i histochemii3.

Model danio pręgowanego może być również wykorzystany do badania morfogenezy szkieletu. Powszechnie donoszono, że narażenie na ołów powoduje gromadzenie się tej substancji chemicznej w szkielecie na wszystkich etapach rozwoju, co prowadzi do uszkodzenia kości. Ding i in. użyli czerwieni Alizaryny do oznaczenia struktur kostnych i wykazali, że narażenie na ołów znacznie zmniejszyło mineralizację kości u larw danio pręgowanego, co wskazuje, że narażenie na ołów jest czynnikiem ryzyka utraty masy kostnej podczas rozwoju szkieletu4.

Pestycydy są dobrze znane ze swojej wysokiej trwałości w środowisku. Powszechne stosowanie pestycydów jest czynnikiem ryzyka dla liczebności i różnorodności owadów zapylających, które odgrywają zasadniczą rolę w usługach ekosystemowych nowoczesnego rolnictwa światowego. Song i in. przedstawili nowatorską metodę zanurzenia w celu zbadania toksycznego wpływu chloropiryfosu, bardzo popularnego pestycydu, na larwy pszczoły samotnicy, Osmia excavata5. Zidentyfikowali wartość LD50 dla chloropiryfosu za pomocą larw O. excavata i stwierdzili, że narażenie na chloropiryfos znacznie zmniejszyło szybkość eklozji w sposób zależny od dawki.

Ramy ścieżki skutków ubocznych (AOP), które kładą nacisk na przyczyny molekularne i ułatwiają wykorzystanie alternatywnych modeli testowych6, są kluczowym elementem toksykologii w XXI wieku (Tox21)6. Według Leista i wsp., AOP ustanawia związek między molekularnym zdarzeniem inicjującym (MIE) a niepożądanym niepożądanym wynikiem niepożądanym (AO) poprzez kluczowe zdarzenia (KE), zgodnie z definicją kluczowych zależności zdarzeń (KER)7. W związku z tym ramy rocznego planu operacyjnego mogą ułatwić przełożenie danych molekularnych i mechanistycznych z badań na zwierzętach na punkty końcowe do wykorzystania w ocenach bezpieczeństwa6 . Artykuły zawarte w tym zbiorze metod dostarczają potężnego zestawu technik i modeli do badania mechanizmów molekularnych, za pomocą których zanieczyszczenia środowiska powodują różne toksyczne skutki rozwojowe. Mamy nadzieję, że zbiór ten będzie bardzo przydatny w ocenie ryzyka związanego z zanieczyszczeniami środowiska.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Komercyjne zastosowanie badań autora objęte jest zgłoszeniem patentowym (CN111024935A).

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Praca badawcza w laboratorium autora korespondencyjnego jest finansowana przez Narodową Fundację Nauk o Przyrodzie w Chinach (numery grantów: 81972999, 81870239 i 82171689) oraz Priorytetowy Program Akademicki Rozwoju Instytucji Szkolnictwa Wyższego w Jiangsu.

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Changing landscape of congenital heart disease. Circulation Research. 120 (6), 908-922 (2017).">Bouma, B. J., Mulder, B. J. Changing landscape of congenital heart disease. Circulation Research. 120 (6), 908-922 (2017).
  2. Using immunofluorescence to detect PM2.5-induced DNA damage in zebrafish embryo hearts. Journal of Visualized Experiments. (168), e62021(2021).">Huang, Y., et al. Using immunofluorescence to detect PM2.5-induced DNA damage in zebrafish embryo hearts. Journal of Visualized Experiments. (168), e62021(2021).
  3. Using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities. Journal of Visualized Experiments. (169), e62189(2021).">Jiang, Q. X., et al. Using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities. Journal of Visualized Experiments. (169), e62189(2021).
  4. Using Alizarin Red staining to detect chemically induced bone loss in zebrafish larvae. Journal of Visualized Experiments. (178), e63251(2021).">Ding, J., et al. Using Alizarin Red staining to detect chemically induced bone loss in zebrafish larvae. Journal of Visualized Experiments. (178), e63251(2021).
  5. Evaluating the effect of pesticides on the larvae of the solitary bees. Journal of Visualized Experiments. (176), e62946(2021).">Song, Y., et al. Evaluating the effect of pesticides on the larvae of the solitary bees. Journal of Visualized Experiments. (176), e62946(2021).
  6. The adverse outcome pathway: A multifaceted framework supporting 21(st) century toxicology. Current Opinion in Toxicology. 9, 1-7 (2018).">Ankley, G. T., Edwards, S. W. The adverse outcome pathway: A multifaceted framework supporting 21(st) century toxicology. Current Opinion in Toxicology. 9, 1-7 (2018).
  7. Adverse outcome pathways: Opportunities, limitations and open questions. Archives of Toxicology. 91 (11), 3477-3505 (2017).">Leist, M., et al. Adverse outcome pathways: Opportunities, limitations and open questions. Archives of Toxicology. 91 (11), 3477-3505 (2017).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Developmental ToxicityEnvironmental PollutantsAlizarin Red StainingBone LossZebrafish LarvaePM2 5DNA DamageChicken EmbryoDevelopmental CardiotoxicitiesSolitary BeesPesticide EffectImmunofluorescenceJournal Of Visualized Experiments

Related Articles