Artykuł metodologiczny

Platforma do ilościowej detekcji komórek odpornościowych endometrium w oparciu o immunohistochemię i cyfrową analizę obrazu

DOI:

10.3791/65643

⸱

13 października 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Shenzhen Key Laboratory of Reproductive Immunology for Peri-implantation, Shenzhen Zhongshan Institute for Reproduction and Genetics, Fertility Center, Shenzhen Zhongshan Urology Hospital, 2Shenzhen Jinxin Medical Technology Innovation Center, Co., Ltd.

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutaj opracowano i zweryfikowano cyfrową platformę do analizy obrazów immunohistochemicznych w celu ilościowej analizy komórek odpornościowych endometrium pacjentek z nawracającymi poronieniami w oknie implantacji.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aby ocenić mikrośrodowisko immunologiczne endometrium u pacjentek z nawracającym poronieniem (RM), opracowano i zatwierdzono cyfrową platformę analizy obrazów immunohistochemicznych do ilościowej analizy komórek odpornościowych endometrium w środkowej fazie lutealnej. Wszystkie próbki endometrium pobrano w środkowej fazie lutealnej cyklu miesiączkowego. Tkanki endometrium zatopione w parafinie podzielono na szkiełka o grubości 4 μm i przeprowadzono barwienie immunohistochemiczne (IHC) w celu wykrycia komórek odpornościowych endometrium, w tym komórek uNK CD56 +, Treg Foxp3 +, makrofagów CD163 + M2, DC CD1a + i limfocytów T CD8 +. Slajdy panoramiczne zeskanowano za pomocą cyfrowego skanera slajdów, a do analizy ilościowej wykorzystano komercyjny system analizy obrazu. Procent komórek odpornościowych endometrium obliczono, dzieląc liczbę komórek odpornościowych w całkowitej liczbie komórek endometrium. Korzystając z komercyjnego systemu analizy obrazu, można łatwo i dokładnie przeanalizować ilościową ocenę komórek odpornościowych endometrium, które są trudne lub niemożliwe do analizy za pomocą konwencjonalnej analizy obrazu. Metodologia ta może być zastosowana do ilościowego scharakteryzowania mikrośrodowiska endometrium, w tym interakcji między komórkami odpornościowymi i jego niejednorodności u różnych pacjentek z niewydolnością rozrodczą. Platforma do ilościowej oceny komórek odpornościowych endometrium może mieć istotne znaczenie kliniczne w diagnostyce i leczeniu pacjentek z RM.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nawracające poronienia (RM) to utrata dwóch lub więcej kolejnych ciąż i jest złożoną chorobą, która w ostatnich latach przyciąga uwagę klinicystów. Częstość występowania RM u kobiet w wieku rozrodczym wynosi 1%-5% 1. Wyniki wcześniejszych badań pokazują, że czynniki immunologiczne są ściśle związane z patogenezą RM2,3,4,5. Utrzymanie homeostazy immunologicznej na styku matka-płód jest niezbędne do implantacji i rozwoju zarodka. Komórki odpornościowe endometrium pełnią kilka ról regulacyjnych w celu utrzymania tej homeostazy, takich jak promowanie inwazji trofoblastów, przebudowa tętnic spiralnych i przyczynianie się do rozwoju łożyska6,7,8,9.

Nieprawidłowe komórki odpornościowe endometrium u kobiet z RM były wcześniej zgłaszane. Wyniki wskazują na ścisły związek między dużą gęstością komórek NK macicy (uNKs) a występowaniem RM10,11,12. Zwiększoną liczbę makrofagów odnotowano w endometrium kobiet z RM w porównaniu z tymi, które miały żywe urodzenie13. Limfocyty T regulatorowe (Treg) odgrywają rolę w matczynej tolerancji immunologicznej na zarodek, a ich poziom i funkcja są zmniejszone w decidua pacjentów z RM14. Limfocyty T o cytotoksyczności (CTL) i komórki dendrytyczne (DC) również odgrywają rolę w regulacji immunologicznej ciąży15,16. W związku z tym kompleksowa analiza ilościowa lokalnych komórek odpornościowych endometrium w środkowej fazie lutealnej może pomóc w lepszym zrozumieniu patogenezy RM. Niektóre obecne metody analizy ilościowej komórek odpornościowych endometrium wykorzystują cytometrię przepływową, która może dokładnie oznaczać komórki odpornościowe wieloma markerami17,18. Jednak kliniczne zastosowanie cytometrii przepływowej jest ograniczone, ponieważ można ją wykonać tylko na świeżej tkance. Uzyskanie świeżej tkanki jest możliwe tylko wtedy, gdy dostępna jest duża objętość nadmiaru guza, co jest rzadkim zjawiskiem w przypadku endometrium. Immunohistochemia może dobrze obserwować morfologię tkanek in situ, a także może oznaczać różne komórki odpornościowe, podczas gdy tradycyjne techniki immunohistochemiczne nie mogą przeprowadzić analizy ilościowej komórek odpornościowych.

W porównaniu z konwencjonalnymi eksperymentami immunohistochemicznymi, ilościowa analiza immunohistochemiczna komórek odpornościowych w endometrium ma ważne znaczenie kliniczne. Ocena intensywności IHC jest zwykle klasyfikowana w czteropunktowej skali lub silna i słaba w diagnostyce patologicznej i badaniach19,20,21. Jednak ta półilościowa technika jest subiektywna, wysoce niedokładna i wykazuje znaczną zmienność wewnątrz i między obserwatorami22. Jednym z możliwych rozwiązań jest zastosowanie uczenia maszynowego, które jest cenne w cyfrowej analizie obrazu23,24. Zapewniając pomiary ilościowe, podejście to umożliwia bardziej precyzyjną ocenę infiltracji, dystrybucji i gęstości komórek odpornościowych w tkance macicy. Te informacje ilościowe mogą pomóc w wyjaśnieniu dynamicznych zmian w populacjach komórek odpornościowych podczas cyklu miesiączkowego i w różnych stanach patologicznych. Ogólnie rzecz biorąc, możliwość ilościowej analizy komórek odpornościowych w endometrium za pomocą immunohistochemii daje cenny wgląd w mikrośrodowisko immunologiczne macicy.

Dlatego też protokół miał na celu opracowanie i walidację cyfrowej platformy analizy obrazów immunohistochemicznych do ilościowej analizy komórek odpornościowych endometrium, w tym komórek uNK, Treg, makrofagów, DC i cytotoksycznych limfocytów T podczas środkowej fazy lutealnej u pacjentów z RM.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Treść badań i protokół zostały etycznie sprawdzone i zatwierdzone przez komisję etyki badań Szpitala Urologicznego Shenzhen Zhongshan. Wszystkie kobiety (w wieku 20-40 lat) biorące udział w badaniu wyraziły świadomą zgodę na pobranie i wykorzystanie próbki.

1. Pobranie tkanki patologicznej

  1. Przygotuj narzędzia do pobierania tkanek, a mianowicie linijkę pomiarową, pęsetę, kasetę do zatapiania, papier do zatapiania i kosz na chusteczki.
  2. Obserwuj, czy ilość tkanki endometrium (większej niż fasola mung), pobrana przy użyciu standardowego podejścia z cewnikiem do pipeli, jest wystarczająca.
  3. Przenieś tkankę endometrium z formaliny na papier do zatapiania za pomocą pęsety i zmierz wymiary tkanki endometrium za pomocą linijki.
  4. Owiń tkankę endometrium papierem do zatapiania i umieść w kasecie do zatapiania.
  5. Umieść kasetę do osadzania w koszu na chusteczki w celu odwodnienia.

2. Odwodnienie tkanek

  1. Umieścić koszyk na chusteczki higieniczne w komorze reakcyjnej odwadniacza (patrz tabela materiałów) i rozpocząć procedurę rutynowego odwadniania tkanek: formalina przez 100 min; formalina przez 100 min; 75% alkoholu przez 60 min; 85% alkoholu przez 60 min; 95% alkoholu przez 60 min; 100% alkoholu przez 60 min; 100% alkoholu przez 60 min; ksylen przez 35 min; ksylen przez 20 min; ksylen przez 20 min; wosk do Czas trwania: 80 min; woskować przez 80 min; woskować woskiem przez 80 min. Proces trwa około 15 godzin.
  2. Pod koniec procedury odwadniania tkanek otwórz komorę reakcyjną odwadniacza, wyjmij kosz na tkanki.

3. Osadzanie tkanek

  1. Wyjmij odpowiednią formę do zatapiania w zależności od wielkości próbki i wypełnij woskiem parafinowym w temperaturze 70 ° C.
  2. Szybko umieść chusteczkę w formie i ostrożnie wyreguluj, aby tkanka znajdowała się w środku formy.
  3. Płynnie przesuwaj formę do płyty chłodzącej i delikatnie dociśnij chusteczkę, podczas gdy parafina na dnie zastygnie.
  4. Umieść kasetę do zatapiania na wierzchu formy i uzupełnij większą ilością wosku.
  5. Umieść formę na płycie chłodzącej, a gdy parafina całkowicie zastygnie, wyjmij blok z dołączoną kasetą z dala od formy.

4. Sekcje tkanek

  1. Włóż blok na klips do próbki mikrotomu, umieść ostrze w uchwycie, wyreguluj kąt między płaszczyzną bloku a ostrzem, wyreguluj grubość przekroju do 4 μm, obróć pokrętło ręczne i rozpocznij krojenie.
  2. Odsłoń odpowiednią powierzchnię tkanki, wycinając kilka cienkich odcinków z bloku. Wyjmij ciągłe i całe sekcje za pomocą pędzla.
  3. Po wycięciu wystarczającej liczby odcinków przestań obracać pokrętłem, usuń niewykwalifikowane sekcje z przodu za pomocą pęsety i unieś sekcje na powierzchni wody o temperaturze 42 °C w łaźni wodnej za pomocą pęsety i szczotki.
  4. Po całkowitym spłaszczeniu sekcji wybierz sekcje na szkiełkach zapobiegających odklejaniu się i przenieś do podgrzewacza do szkiełek o temperaturze 65 °C, aby piec przez 60 minut.
  5. Po zakończeniu pieczenia wyjmij szkiełka z podgrzewacza do szkiełek.

5. Barwienie immunohistochemiczne

  1. Rozcieńczyć przeciwciało pierwszorzędowe w roztworze roboczym z rozcieńczalnikiem przeciwciał. Szczegółowe informacje znajdują się w tabeli 1.
  2. Umieść rozcieńczony roztwór przeciwciała w specjalnej butelce z odczynnikiem, a zestaw do wykrywania w komorze na odczynniki w automatycznym przyrządzie do barwienia IHC (patrz Tabela materiałów).
  3. Umieść szkiełka na uchwycie szkiełka, przykrytym specjalną pokrywą, i włóż je do eksperymentalnej komory reakcyjnej instrumentu.
  4. Po tym, jak przyrząd automatycznie rozpozna odczynnik i informacje eksperymentalne na szkiełku, kliknij przycisk Start, aby rozpocząć barwienie immunohistochemiczne. Eksperyment trwa około 3 godzin.

6. Odwodnienie i uszczelnienie zjeżdżalni

  1. Po barwieniu immunohistochemicznym wyjmij uchwyt szkiełka, zdejmij specjalną osłonę, włóż zabarwione szkiełko do uchwytu szkiełka i zmyj pozostały barwnik na szkiełku czystą wodą.
  2. Przenieść uchwyt szkiełka do automatycznego szkiełka nakrywkowego (patrz Tabela materiałów), wybrać i uruchomić procedurę odwadniania i uszczelniania.
  3. Wyjmij szkiełka po odwodnieniu i uszczelnieniu.

7. Skanowanie slajdu

  1. Umieść preparaty na stojaku na szkiełka panoramicznego skanera obrazów patologicznych (patrz Tabela materiałów) i umieść je w komorze na szkiełka podstawowe w celu panoramicznego skanowania obrazu patologicznego. Skanowanie trwa 2 minuty. Zobacz Rysunek 1.

8. Analiza obrazów

  1. Importowanie obrazu
    1. Otwórz oprogramowanie do analizy obrazu patologicznego (patrz Tabela materiałów) i utwórz nowy folder. Importuj obrazy immunohistochemiczne do analizy.
  2. Zbuduj klasyfikator tkankowy
    1. Zaznacz kilka tkanek i puste adnotacje, aby wytrenować i ustanowić klasyfikator do identyfikacji odpowiednio tkanki i pustego obszaru.
    2. Korzystaj z dostrajania w czasie rzeczywistym, aby obserwować zdolność rozpoznawania oprogramowania w czasie rzeczywistym podczas adnotacji znaków. Jeśli rozpoznanie nie nastąpi w odpowiednim czasie, dodaj adnotację i trenuj ponownie, aż rozpoznanie tkanki będzie dokładne.
  3. Algorytm analizy kompilacji
    1. Wybierz standardowy algorytm w oprogramowaniu w zależności od rodzaju eksperymentu: multipleks IHC.
    2. Ustaw parametry kolorów rozpoznawania komórek, wybierając typowy piksel ujemny i dodatni.
      Na tej podstawie ustaw parametry jądra, cytoplazmy i błony komórkowej oraz obserwuj sytuację rozpoznawania komórek w czasie rzeczywistym, aż zostaną znalezione najbardziej odpowiednie parametry dla obrazu.
    3. Ustaw dodatni próg rozpoznawania komórek i obserwuj sytuację rozpoznawania w czasie rzeczywistym, aż odpowiedni próg zostanie dostosowany.
    4. Wybierz klasyfikator tkankowy w algorytmie i sprawdź część tkankową w klasyfikatorze tkankowym, tak aby zidentyfikować komórki na podstawie tkanek. W tym momencie tworzenie algorytmu analizy jest zakończone.
  4. Uruchamianie analizy obrazu
    1. Wybierz obszar zestawienia. Użyj ustalonego algorytmu do analizy obrazów.
  5. Po zakończeniu analizy oprogramowania ręcznie sprawdź, czy rozpoznawanie obrazu jest dokładne, w tym rozpoznawanie tkanek, rozpoznawanie komórek ujemnych i dodatnich.
  6. Jeśli rozpoznawanie obrazu nie jest dokładne, ponownie dostosuj algorytm i próg parametrów, a następnie uruchom ponownie analizę obrazu, aż do uzyskania pomyślnego wyniku. Eksportuj wyniki analizy. Zobacz Rysunek 1.
  7. Inne komórki odpornościowe mogą być również analizowane zgodnie z powyższymi krokami (patrz Rysunek 1). Ustaw różne parametry analizy zgodnie z rzeczywistą ekspresją różnych markerów immunologicznych endometrium (komórki CD56 + uNK, Foxp3 + Treg, makrofagi CD68 +, makrofagi CD163 + M2, CD1a + DC i limfocyty T CD8 + sup25,26).
  8. Poprzez obliczenia oprogramowania uzyskaj proporcję komórek odpornościowych endometrium (patrz Tabela 2). Wykorzystaj to do oceny poziomu różnych komórek odpornościowych w błonie śluzowej macicy u pacjentek z nawracającymi poronieniami.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aby ilościowo ocenić komórki odpornościowe endometrium i zmniejszyć niestabilność spowodowaną błędami operacyjnymi spowodowanymi przez człowieka, stworzyliśmy cyfrową platformę analizy ilościowej dla komórek odpornościowych endometrium, korzystając z automatycznego wykrywania immunohistochemicznego i cyfrowego systemu oceny ilościowej. Stworzono platformę do analizy obrazów immunohistochemicznych w celu ilościowej analizy komórek odpornościowych endometrium pacjentek z nawracającym poronieniem (RM) w oknie implantacji. W...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W protokole tym stworzono cyfrową platformę analizy obrazu immunohistochemicznego do ilościowej analizy komórek odpornościowych endometrium pacjentek z RM. W tym przypadku wykryto sześć markerów immunologicznych endometrium w celu oceny mikrośrodowiska immunologicznego endometrium u pacjentek z RM.

Receptywne endometrium w środkowej fazie lutealnej jest kluczem do udanej implantacji i ciąży27,28. Dlatego ocena procentowej liczby komóre...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy są wdzięczni wszystkim kobietom, które wyraziły zgodę i przekazały próbki do tego badania.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zautomatyzowane szkiełko nakrywkoweSakurausDRS-Prisma-P-JCS& Film-JC2
CD163GrowGn BiotechnologiaNCL-L-CD163
CD1aGene TechGM357129
CD56Gene TechGT200529
CD8NovocastraNCL-L-CD8-4B11
SuszarkaThermo FisherExcelsior ES
Patologia cyfrowa ilaboratoria IndicaHALO
Foxp3YILIFANG biologiczny14-477-82
Barwnik IHCLeicaBOND III
Platforma analizy obrazuIndica labsHALO
Skaner slajdówOlympus life scienceVS200

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Practice Committee of the American Society for Reproductive. Evaluation and treatment of recurrent pregnancy loss: a committee opinion. Fertility and Sterility. 98 (5), 1103-1111 (2012).
  2. Dimitriadis, E., Menkhorst, E., Saito, S., Kutteh, W. H., Brosens, J. J. Recurrent pregnancy loss. Nature Reviews. Disease Primers. 6 (1), 98(2020).
  3. Kavvadas, D., et al. Immunohistochemical Evaluation of CD3, CD4, CD8, and CD20 in Decidual and Trophoblastic Tissue Specimens of Patients with Recurrent Pregnancy Loss. 12 (2), 177-193 (2022).
  4. Arora, R., Rathee, A., Sachdeva, M., Agrawal, U. Unexplained repeated pregnancy loss and T helper cells. European Journal of Obstetrics, Gynecology, and Reproductive Biology. 254, 277-283 (2020).
  5. Du, M., et al. Elevated percentage of CD3(+)T cells and pregnancy outcome in women with recurrent pregnancy loss. Clinica Chimica Acta. 486, 341-346 (2018).
  6. Faas, M. M., de Vos, P. Uterine NK cells and macrophages in pregnancy. Placenta. 56, 44-52 (2017).
  7. Huppertz, B., Berghold, V. M., Kawaguchi, R., Gauster, M. A variety of opportunities for immune interactions during trophoblast development and invasion. American Journal of Reproductive Immunology. 67 (5), 349-357 (2012).
  8. Meyer, N., et al. Chymase-producing cells of the innate immune system are required for decidual vascular remodeling and fetal growth. Scientific Reports. 7, 45106(2017).
  9. Smith, S. D., Dunk, C. E., Aplin, J. D., Harris, L. K., Jones, R. L. Evidence for immune cell involvement in decidual spiral arteriole remodeling in early human pregnancy. American Journal of Pathology. 174 (5), 1959-1971 (2009).
  10. Clifford, K., Flanagan, A. M., Regan, L. Endometrial CD56+ natural killer cells in women with recurrent miscarriage: a histomorphometric study. Human Reproduction. 14 (11), 2727-2730 (1999).
  11. Chen, X., et al. Measurement of uterine natural killer cell percentage in the periimplantation endometrium from fertile women and women with recurrent reproductive failure: establishment of a reference range. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 217 (6), 680 e1-680 e6 (2017).
  12. Tuckerman, E., Mariee, N., Prakash, A., Li, T. C., Laird, S. Uterine natural killer cells in peri-implantation endometrium from women with repeated implantation failure after IVF. Journal of Reproductive Immunology. 87 (1-2), 60-66 (2010).
  13. Laird, S. M., et al. A review of immune cells and molecules in women with recurrent miscarriage. Human Reproduction Update. 9 (2), 163-174 (2003).
  14. Keller, C. C., Eikmans, M., van der Hoorn, M. P., Lashley, L. Recurrent miscarriages and the association with regulatory T cells; A systematic review. Journal of Reproductive Immunology. 139, 103105(2020).
  15. Vallvé-Juanico, J., Houshdaran, S., Giudice, L. C. The endometrial immune environment of women with endometriosis. Human Reproduction Update. 25 (5), 564-591 (2019).
  16. Yang, F., Zheng, Q., Jin, L. Dynamic Function and Composition Changes of Immune Cells During Normal and Pathological Pregnancy at the Maternal-Fetal Interface. Frontiers in Immunology. 10, 2317(2019).
  17. Hey-Cunningham, A. J., et al. Comprehensive analysis utilizing flow cytometry and immunohistochemistry reveals inflammatory changes in local endometrial and systemic dendritic cell populations in endometriosis. Human Reproduction. 36 (2), 415-428 (2021).
  18. Zhong, Q., et al. Patterns of Immune Infiltration in Endometriosis and Their Relationship to r-AFS Stages. Frontiers in Genetics. 12, 631715(2021).
  19. Attems, J., et al. Neuropathological consensus criteria for the evaluation of Lewy pathology in post-mortem brains: a multi-centre study. Acta Neuropathologic. 141 (2), 159-172 (2021).
  20. Kovacs, G. G., et al. Multisite Assessment of Aging-Related Tau Astrogliopathy (ARTAG). Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 76 (7), 605-619 (2017).
  21. Modis, L. V., et al. Extracellular matrix changes in corneal opacification vary depending on etiology. Molecular Vision. 27, 26-36 (2021).
  22. Walker, R. A. Quantification of immunohistochemistry--issues concerning methods, utility and semiquantitative assessment I. Histopathology. 49 (4), 406-410 (2006).
  23. Jensen, K., Krusenstjerna-Hafstrom, R., Lohse, J., Petersen, K. H., Derand, H. A novel quantitative immunohistochemistry method for precise protein measurements directly in formalin-fixed, paraffin-embedded specimens: analytical performance measuring HER2. Modern Pathology. 30 (2), 180-193 (2017).
  24. Moreno-Ruiz, P., Wik Leiss, L., Mezheyeuski, A., Ehnman, M. Double Immunohistochemistry and Digital Image Analysis. Methods in Molecular Biology. 1913, 3-11 (2019).
  25. Li, D., Zheng, L., Zhao, D., Xu, Y., Wang, Y. The Role of Immune Cells in Recurrent Spontaneous Abortion. Reproductive Sciences. 28 (12), 3303-3315 (2021).
  26. Diao, L., et al. New endometrial immune cell-based score (EI-score) for the prediction of implantation success for patients undergoing IVF/ICSI. Placenta. 99, 180-188 (2020).
  27. Hewitt, S. C., Korach, K. S. Cell biology. A hand to support the implantation window. Science. 331 (6019), 863-864 (2011).
  28. Afshar, Y., Stanculescu, A., Miele, L., Fazleabas, A. T. The role of chorionic gonadotropin and Notch1 in implantation. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 24 (7), 296-302 (2007).
  29. Tan, W. C. C., et al. Overview of multiplex immunohistochemistry/immunofluorescence techniques in the era of cancer immunotherapy. Cancer Communication (London,England). 40 (4), 135-153 (2020).
  30. Algars, A., et al. Type and location of tumor-infiltrating macrophages and lymphatic vessels predict survival of colorectal cancer patients. International Journal of Cancer. 131 (4), 864-873 (2012).
  31. Carey, C. D., et al. Topological analysis reveals a PD-L1-associated microenvironmental niche for Reed-Sternberg cells in Hodgkin lymphoma. Blood. 130 (22), 2420-2430 (2017).
  32. Ascierto, M. L., et al. Transcriptional Mechanisms of Resistance to Anti-PD-1 Therapy. Clinical Cancer Research. 23 (12), 3168-3180 (2017).
  33. O'Rourke, D. M., et al. A single dose of peripherally infused EGFRvIII-directed CAR T cells mediates antigen loss and induces adaptive resistance in patients with recurrent glioblastoma. Science Translational Medicine. 9 (399), eaaa0984(2017).
  34. Canesin, G., et al. Treatment with the WNT5A-mimicking peptide Foxy-5 effectively reduces the metastatic spread of WNT5A-low prostate cancer cells in an orthotopic mouse model. PLoS One. 12 (9), e0184418(2017).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Immunohistochemistry AnalysisRecurrent MiscarriageEndometrial Tissue SectioningImmune Cell QuantificationPanoramic Slide ScanningImage Analysis SoftwareImmune Cell MarkersTissue Classifier

Powiązane artykuły