Wszystkie procedury przeprowadzone na szczurach w niniejszym badaniu były zgodne z Narodowym Standardem Wytycznych Dotyczących Dobrostanu i Etyki Zwierząt Laboratoryjnych (2018) oficjalnie przyjętym przez Chińską Republikę Ludową oraz Przewodnikiem po opiece i wykorzystaniu zwierząt laboratoryjnych wydanym przez National Academies Press15. Protokół ten składa się z trzech głównych etapów. Po pierwsze, kamizelki dla szczurów są szyte na miarę i dopasowane do indywidualnej budowy ciała szczurów o różnych wagach. Następnie, zgodnie ze standardowymi procedurami, przeprowadza się zabieg akupunktury. Na koniec szczury zostają zawieszone w kamizelkach przy pozostawieniu igieł w miejscach wkłucia, aby umożliwić jednoczesne interwencje u szczurów w obrębie tej samej grupy.
1. Przygotowanie przed nakłuwaniem
- Wykonanie kamizelki dla szczura
- Zważ szczury i zmierz ich budowę ciała przed wykonaniem kamizelek. Aby zweryfikować przydatność niniejszego protokołu dla szczurów o różnej masie ciała, wybierz osobniki ważące 220 g, 300 g, 400 g i 520 g do niezależnych pomiarów wymiarów ciała, obejmujących pomiary od a do f, zgodnie z Rysunkiem 2.
UWAGA: Korelacja między proporcjami ciała szczurów a odpowiadającymi im rozmiarami kamizelek przedstawiona jest również na Rysunku 2. Odpowiednie parametry długości ciała dla szczurów o różnej masie odnotowano w Tabeli 1.
- Wytnij prostokątny kawałek grubego, ciemnego materiału na kamizelkę dla szczura. Użyj materiału o szerokości rozłożonej równej obwodowi zmierzonemu w najgrubszej części brzucha szczura. Długość materiału powinna odpowiadać odległości od czubka nosa szczura do podstawy ogona (patrz Rysunek 2).
- Złóż materiał na pół i odetnij górny lewy róg pod kątem około 45°-65°, aby utworzyć trapez prostokątny (patrz Rysunek 3A).
- Mocno zszyj obie strony po lewej stronie bawełnianą nicią. W celu uzyskania dalszych instrukcji zapoznaj się z Rysunkiem 1B oraz Rysunkiem 3B.
- Wytnij dwa małe otwory, po jednym z każdej strony materiału, przez które przejdą kończyny górne i dolne szczura (patrz Rysunek 3C). Odległość między kończynami górnymi determinuje odstęp między górnymi otworami kamizelki. Odległość między kończynami dolnymi determinuje odstęp między dolnymi otworami kamizelki.
- Przyjmij odległość podłużną między pachą szczura a przednią częścią kości biodrowej jako odstęp między otworami górnymi a dolnymi kamizelki. Obwód stawu barkowego wykorzystaj do wyznaczenia obwodu otworu górnego, a obwód stawu biodrowego do wyznaczenia obwodu otworu dolnego w kamizelce.
- Przy każdym otworze przyszyj długi materiałowy pasek, który można skrzyżować i ciasno owinąć wokół ciała od strony otwartej kamizelki, aby unieruchomić szczura.
- Metoda zakładania kamizelki szczurowi
- Przed przystąpieniem do ubierania szczura w kamizelkę załóż rękawiczki. Zacznij od przytrzymania jedną ręką środkowej i tylnej części kamizelki na stole. Drugą ręką chwyć szczura za ogon w klatce i delikatnie umieść go w kamizelce.
- Gdy szczur przesunie się do przodu, jego głowa dotrze do części nakarczkowej kamizelki. W tym momencie obiema rękami ostrożnie wysuń jego lewą i prawą kończynę górną przez otwory w kamizelce.
- Weź sznur wiążący z otwartego końca kamizelki, przekrzyżuj go z lewej na prawą stronę i bezpiecznie owiń wokół tułowia szczura. Zawiąż go mocno po przeciwnej stronie tułowia, aby zapewnić odpowiednią stabilizację. Po unieruchomieniu kończyn górnych powtórz tę samą procedurę w celu unieruchomienia kończyn dolnych.
- Zachowaj ostrożność, aby uniknąć ugryzień lub zadrapań pazurami szczura podczas wysuwania kończyn z otworów kamizelki. Upewnij się, że stopień zaciśnięcia sznura jest odpowiednio dostosowany, tj. nie jest zbyt ciasny, aby nie wywołać miejscowej niedokrwienności kończyn i hipoksji u szczurów, oraz nie jest zbyt luźny, co pozwoliłoby szczurowi na łatwą ucieczkę (patrz Wideo 1).
- Stelaż mocujący i żelazne haki w kształcie litery S
- Stelaż mocujący składa się z dwóch ciężkich żelaznych tacek (24 cm długości, 12 cm szerokości i 2 cm wysokości) oraz żelaznej kolumny (60 cm długości), która jest trwale przyspawana do każdej tacki. Zamocuj solidny żelazny pręt (145 cm długości) na tej samej wysokości na obu żelaznych kolumnach, używając regulowanego połączenia śrubowego, które można utrzymać na stałej wysokości (patrz Rysunek 4A).
- Do połączenia szczura w kamizelce z żelaznym prętem użyj haków w kształcie litery S (o średnicy 11 cm). Owiń jeden koniec haka wokół paska kamizelki, a drugi zawieś na żelaznym pręcie. Użyj dwóch haków w kształcie litery S, aby zabezpieczyć szczura na pręcie. Całościową strukturę przedstawiono na Rysunku 1D oraz Rysunku 4B.

Rysunek 2: Odpowiadający schemat budowy ciała szczura i dopasowanego rozmiaru kamizelki dla szczura.Na schemacie parametr a reprezentuje odległość poprzeczną z tyłu stawu między kończynami górnymi a tułowiem szczura. Wartość ta jest wykorzystywana jako pomiar odstępu między otworami dla kończyn górnych w kamizelce dla szczura. Podobnie parametr b reprezentuje odległość poprzeczną na grzbiecie w miejscu, gdzie obustronne kończyny dolne szczura łączą się z tułowiem. Pomiar ten określa odstęp między otworami dla kończyn dolnych w kamizelce dla szczura. Parametr c oznacza obwód najgrubszej części brzucha szczura, który może być wykorzystany jako pomiar szerokości materiału kamizelki dla szczura. Parametr d reprezentuje odległość od pachy szczura do przedniej części jego kości biodrowej, określając odległość podłużną między otworami górnymi a dolnymi w kamizelce. Parametr e odpowiada odległości podłużnej od czubka nosa szczura do nasady ogona, służąc jako pomiar długości materiału kamizelki dla szczura. Parametr f oznacza obwód stawu łączącego kończynę górną z tułowiem szczura, służąc jako obwód otworu, przez który przechodzą kończyny górne. Parametr g reprezentuje obwód stawu łączącego kończyny dolne z tułowiem szczura, określając obwód otworu, przez który przechodzą kończyny dolne. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.
| Masa ciała (g) | Parametry kształtu ciała (cm) |
| a | b | c | d | e | f | g |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tabela 1. Wyniki pomiarów parametrów budowy ciała szczurów o różnej masie ciała.

Rysunek 3: Schemat przedstawiający wygląd i zastosowanie kamizelki dla szczura. (A) Widok zewnętrzny kamizelki dla szczura w rzucie płaskim. Kształt kamizelki przypomina trapez prostokątny, z oddzielnymi otworami po lewej i prawej stronie, przez które przechodzą kończyny górne i dolne szczura. (B) Widok zewnętrzny rozłożonej kamizelki dla szczura. Zamknięcie nakrycia głowy tworzy półzamkniętą wnękę, która służy jako kluczowy element zachęcający szczury do wejścia. (C) Widok boczny szczura w kamizelce. Po przejściu kończyn szczura przez otwory w ubraniu, pasy są krzyżowane na brzusznej stronie tułowia i bezpiecznie zapinane z tyłu z odpowiednim napięciem. Zapewnia to względną unieruchomienie szczura. (D) Widok brzuszny szczura w kamizelce. Brzuszna strona kamizelki odsłania skórę brzucha szczura, umożliwiając wygodny dostęp do punktów akupunktury na brzuchu. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.
Film 1: Zakładanie kamizelki dla szczura.Ten film przedstawia typowy proces ubierania szczura w kamizelkę. Kliknij tutaj, aby pobrać ten film.

Rycina 4: Schemat przedstawiający wygląd i zastosowanie podwyższonego stojaka do unieruchamiania. (A) Podwyższony stojak do unieruchamiania. Stojak ten składa się głównie z dwóch pionowych żelaznych kolumn (o długości 60 cm) przyspawanych do każdej tacy, a także długiego poziomego żelaznego pręta (o długości 145 cm) umieszczonego równolegle do podłoża. Do zabezpieczenia poziomego pręta na tej samej wysokości co kolumny pionowe zastosowano śruby. (B) Zawieszenie szczurów na stojaku do unieruchamiania. Szczury w specjalnych kamizelkach są bezpiecznie przymocowane do stojaka za pomocą dwóch haczyków w kształcie litery S na każde zwierzę. (C) Jednoczesne zabiegi elektroakupunktury u wielu szczurów. Aby zapobiec potencjalnym zakłóceniom wynikającym z ruchu ogonów, konieczne było zachowanie odpowiednich odstępów między szczurami, odpowiadających długości ogona szczura. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.
2. Procedura elektroakupunktury
- Przygotowanie rutynowe
- Umieścić stelaż do unieruchamiania na poziomym blacie lub podłożu.
- Przed przystąpieniem do nakłuwania usunąć futro wokół punktów akupunkturowych za pomocą golarki elektrycznej, aby zapewnić ich pełną ekspozycję. W przypadku punktów znajdujących się na brzuchu szczura, takich jak Guanyuan (CV4, około 25 mm poniżej pępka), odpowiednio zwęzić ubranko dla szczura, aby odsłonić brzuszne punkty akupunkturowe.
- Zlokalizować punkt akupunkturowy przez otwór w linii środkowej brzucha, który nie jest zakryty przez ubranko dla szczura (patrz Rysunek 3D), a następnie wprowadzić igłę.
- Gdy punkty do nakłucia znajdują się na głowie szczura, np. Baihui (GV20, zlokalizowany w środku kości ciemieniowej), wykonać niewielkie nacięcie w odpowiednim miejscu na głowie, aby w pełni odsłonić skórę wokół GV20 (patrz Rysunek 1C).
- Podczas akupunktury punktów na kończynach szczura, takich jak Neiguan (PC6, po wewnętrznej stronie przedniej kończyny, między szwami promieniowym a łokciowym, około 3 mm od stawu nadgarstkowego) w kończynie górnej lub Zusanli (ST36, po stronie tylno-bocznej stawu kolanowego, około 2 mm poniżej głowy kości strzałkowej) w kończynie dolnej, ze względu na wyraźną ekspozycję punktów, jedną ręką wspomagać unieruchomienie kończyny, podczas gdy drugą można bezpośrednio przeprowadzić zabieg akupunktury.
- Jeśli punkt znajduje się na grzbiecie lub w pasie szczura, np. Shenshu (BL23, poniżej 2. kręgu lędźwiowego, 6 mm od linii środkowej grzbietu), wyciąć otwór o szerokości około 2 cm w centrum ubranka szczura, aby w pełni odsłonić skórę w odpowiednim miejscu (patrz Rysunek 1C).
- Ubrać szczura w ubranko. Po zdezynfekowaniu skóry w obrębie punktów akupunkturowych gazikami nasączonymi alkoholem, rozpocząć procedurę akupunktury.
- Technika nakłuwania: Precyzyjnie zlokalizować punkt akupunkturowy. Wprowadzić sterylną jednorazową igłę do akupunktury (0,16 mm x 7 mm) w punkt akupunkturowy szczura na odpowiednią głębokość.
- Procedura elektroakupunktury
- Owinąć przewód elektrody wokół poziomego żelaznego pręta. Krok ten zmniejsza ryzyko wypadnięcia igły pod wpływem siły grawitacji działającej na klips do elektroakupunktury. Następnie bezpiecznie przymocować koniec przewodu elektrody do trzonka igły.
- Włączyć zasilanie i wybrać odpowiednie parametry częstotliwości, prądu oraz czasu. W niniejszym eksperymencie parametry ustawiono na 2 Hz, 1 mA i 15 min. Po dostrojeniu parametrów rozpocząć proces zabiegu elektroakupunktury (patrz Wideo 2 i Wideo 3).
- Jednoczesna elektroakupunktura u szczurów: Podczas zabiegu zawiesić razem szczury z tej samej grupy na żelaznym pręcie za pomocą haków w kształcie litery S, aby poddać je interwencji elektroakupunktury jednocześnie.
- UWAGA: Żelazny pręt powinien być nie tylko wytrzymały, ale także wystarczająco długi, aby móc traktować grupę szczurów w tym samym czasie. W tym eksperymencie, zapewniając odpowiednie odstępy i brak zakłóceń między zwierzętami, jednocześnie można traktować 3-4 szczury (patrz Rysunek 4C).
- Obserwacja reakcji szczurów podczas zabiegu elektroakupunktury: Ocenić przydatność tej metody unieruchamiania w elektroakupunkturze szczurów na podstawie następujących czynników, takich jak liczba personelu wymaganego do przeprowadzenia operacji, czas potrzebny na unieruchomienie szczura, reakcja szczurów podczas zabiegu elektroakupunktury, liczba igieł wypadłych podczas procedury oraz wszelkie przypadkowe zgony, które mogły wystąpić podczas operacji.
- Usuwanie igieł
- Po upływie zaprogramowanego czasu aparat do elektroakupunktury automatycznie się wyłączy. Zdjąć mały klips przymocowany do trzonka igły i ostrożnie usunąć igłę do akupunktury spod skóry szczura, kończąc tym samym proces zabiegu elektroakupunktury.
- Poluzować paski, podnieść osłonę głowy w ubranku szczura i umieścić szczura nad klatką. Szczur będzie mógł wtedy samodzielnie wydostać się z ubranka i wejść do klatki (patrz Wideo 4).
Wideo 2. Nakłuwanie punktów akupunktu w okolicy lędźwiowej.W tym filmie zaprezentowano kompleksową i spójną procedurę obejmującą założenie szczurowi kamizelki, wprowadzenie igieł do akupunktury w punkty w pasie oraz późniejsze podłączenie aparatu do elektroakupunktury. Kliknij tutaj, aby pobrać ten film.
Wideo 3. Nakłuwanie punktów akupunkturowych w obrębi brzucha i kończyny dolnej.W tym filmie zaprezentowano kompleksową i spójną procedurę obejmującą ubranie szczura w kamizelkę, wprowadzenie igieł akupunkturowych do punktów znajdujących się w obrębie brzucha i kończyny dolnej, a następnie podłączenie aparatu do elektroakupunktury. Kliknij tutaj, aby pobrać to wideo.
Wideo 4. Zdejmowanie kaftanka z raty. Ten film prezentuje rutynową procedurę zdejmowania kaftanka z raty. Kliknij tutaj, aby pobrać to wideo.