Obecnie, angiografia fluoresceinowa (FA) jest preferowaną metodą identyfikacji wzorców przecieków w zwierzęcych modelach neowaskularyzacji naczyniówkowej (CNV). Jednak FA nie dostarcza informacji na temat morfologii naczyń krwionośnych. Protokół ten przedstawia zastosowanie angiografii zieleni indocyjaninowej (ICGA) do scharakteryzowania różnych typów zmian CNV indukowanych laserem w modelach mysich.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Charakterystyka morfologii naczyniowej neowaskularnego zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem za pomocą angiografii zieleni indocyjaninowej
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Zwyrodnienie plamki żółtej związane z wiekiem (AMD) jest główną przyczyną ślepoty wśród osób starszych, a jego częstość występowania gwałtownie wzrasta ze względu na starzenie się populacji. Neowaskularyzacja naczyniówkowa (CNV) lub wysiękowe AMD, które stanowi 10%-20% wszystkich przypadków AMD, jest odpowiedzialne za alarmujące 80%-90% ślepoty związanej z AMD. Obecne terapie anty-VEGF wykazują nieoptymalną odpowiedź u około 50% pacjentów. Oporność na leczenie anty-VEGF u pacjentów z CNV jest często związana z CNV tętniczków, podczas gdy osoby reagujące na leczenie mają zwykle naczyń włosowate CNV. Chociaż angiografia fluoresceinowa (FA) jest powszechnie stosowana do oceny wzorców przecieków u pacjentów z wysiękową postacią AMD i modelach zwierzęcych, nie dostarcza informacji na temat morfologii naczyń CNV (CNV tętniczek w porównaniu z CNV naczyń włosowatych). Protokół ten wprowadza zastosowanie zielonej angiografii indocyjaninowej (ICGA) do scharakteryzowania typów zmian w mysich modelach CNV indukowanych laserem. Metoda ta ma kluczowe znaczenie dla zbadania mechanizmów i strategii leczenia oporności na anty-VEGF w wysiękowym AMD. Zaleca się włączenie ICGA wraz z FA w celu kompleksowej oceny zarówno nieszczelności, jak i cech naczyniowych CNV w badaniach mechanistycznych i terapeutycznych.
Wprowadzenie
Zwyrodnienie plamki żółtej związane z wiekiem (AMD) jest powszechnym schorzeniem, które prowadzi do poważnej utraty wzroku u osób starszych1. Przewiduje się, że w samych Stanach Zjednoczonych liczba pacjentów z AMD podwoi się, osiągając prawie 22 miliony do 2050 roku, w porównaniu z obecnymi 11 milionami. Oczekuje się, że do 2040 r. na całym świecie szacowana liczba przypadków AMD osiągnie oszałamiającą liczbę 288 milionów2.
Neowaskularyzacja naczyniówkowa (CNV), znana również jako "mokre" lub neowaskularne AMD, może mieć niszczący wpływ na widzenie z powodu tworzenia się nieprawidłowych naczy....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Eksperymenty na zwierzętach przeprowadzone w tym badaniu otrzymały zgodę Instytucjonalnych Komitetów ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) w Baylor College of Medicine. Wszystkie procedury zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi określonymi w Oświadczeniu Stowarzyszenia Badań nad Wzrokiem i Okulistyką (ARVO) dotyczącym wykorzystania zwierząt w badaniach okulistycznych i wzrokowych. Do niniejszego badania wykorzystano młode (7-9 tygodni) i stare (12-16 miesięcy) samce i samice myszy C57BL/6J. Zwierzęta zostały pozyskane ze źródła komercyjnego (patrz tabela materiałów).
1. Przygotowanie systemu obrazowania
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Zgodnie z protokołem, przeprowadzono ICGA i FA w przypadku CNV indukowanej laserowo u młodych (7-9 tygodni) i starych (12-16 miesięcy) myszy C57BL/6J. FA dostarcza informacji o lokalizacji i przecieku zmian CNV (Rycina 1, panele lewe), podczas gdy ICGA ujawnia morfologię naczyniową zmian CNV (Rycina 1, panele prawe). U młodych myszy w zmianach CNV dominuje CNV kapilarna. W przeciwieństwie do nich, u starych myszy występuje CNV tętniczkowa, charakteryzująca się n.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Badanie to wykazało zastosowanie zielonej angiografii indocyjaninowej (ICGA) do identyfikacji morfologii naczyniowej tętniczki i naczynia włosowatego naczyniówki (CNV) w modelach mysich z CNV indukowanym laserem. Właściwości barwnika zieleni indocyjaninowej (ICG) związane z hemoglobiną i światłem podczerwonym umożliwiły wykrycie morfologii CNV, co jest trudne do osiągnięcia przy użyciu angiografii fluoresceinowej (FA), obecnej metody stosowanej przez społeczność naukową.
Pierwszym krytycznym k.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez granty z BrightFocus Foundation, Retina Research Foundation, Mullen Foundation i Sarah Campbell Blaffer Endowment in Ophthalmology dla YF, główny grant NIH 2P30EY002520 dla Baylor College of Medicine, oraz nieograniczony grant dla Wydziału Okulistyki w Baylor College of Medicine z Research to Prevent Blindness.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Strzykawka insulinowa 32-G | MHC Produkty medyczne | NDC 08496-3015-01 | |
| Alexa Fluor 488 kozie przeciwciało wtórne przeciwko królikowi | Invitrogen | A11008 | |
| Przeciwciało anty-&alfa przeciwko aktynie mięśni gładkich | Abcam | ab5694 | |
| Albumina surowicy bydlęcej | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-2323 | |
| Myszy C57BL/6J (7-9 tygodni) | Szczep laboratoryjny Jackson | #:000664 | |
| Sól sodowa fluoresceiny | Sigma-Aldrich | MFCD00167039 | |
| System terapii cieplnej z pompą Gaymar T | Gaymar | TP-500 | Pompa ciepła z obiegiem wody do odzyskiwania myszy po obrazowaniu |
| GenTeal Gel | Genteal | NDC 58768-791-15 | Przezroczysty nawilżający żel |
| pod oczyGS-IB4 Alexa-Mąka 568 sprzężona | z invitrogenem | I21412 | |
| Heidelberg Eye Explorerer | Heidelberg Engineering, Niemcy | HEYEX2 | |
| Indocyanine Green | Pfaultz & Bauer | I01250 | |
| Ketamina | Vedco Inc. | NDC 50989-996-06 | |
| Paraformaldehyd | Acros Organics | ||
| Roztwór okulistyczny chlorowodorku proparakainy (0,5%) | Sandoz | NDC 61314-016-01 | |
| Multimodalny system obrazowania Spectralis | Heidelberg Engineering, Niemcy | SPECTRALIS HRA+OCT | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100-1L | |
| Tropicamide roztwór okulistyczny (1%) | Bausch & Lomb | NDC 24208-585-64 | Do rozszerzania źrenic |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA 139-236 |
Bibliografia
- Fleckenstein, M., et al. Age-related macular degeneration. Nature Reviews Disease Primers. 7 (1), 1-25 (2021).
- Wong, W. L., et al. Global prevalence of age-related macular degeneration and diseas....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
