Szkolenie królików laboratoryjnych w celu udoskonalenia rutynowych procedur hodowlanych

Podsumowanie

Protokoły treningowe obejmujące pozytywne wzmocnienie rutynowych procedur hodowlanych u królików zostały opracowane i okazały się skuteczne, ponieważ króliki niezawodnie wykazały wyuczone zachowania podczas cotygodniowego egzaminu ogólnego. Podnoszenie królików za pomocą skrzyni transportowej było mniej awersyjne niż konwencjonalna technika obsługi.

Streszczenie

Nieawersyjne techniki obchodzenia się i szkolenia zwierząt laboratoryjnych są wymagane, aby ułatwić eksperymentalne i rutynowe procedury hodowlane, poprawiając zarówno dobrostan zwierząt, jak i jakość naukową. Trening klikerowy został wykorzystany do opracowania protokołów treningowych dla królików w celu udoskonalenia stresujących rutynowych procedur hodowlanych, zwykle związanych z podnoszeniem (tj. podnoszeniem z podłogi) / krępowaniem (tj. trzymaniem w ramionach człowieka) ich. Trzynaście samic białych królików nowozelandzkich było szkolonych przez trzy tygodnie. Wszystkie króliki uczyły się wcześniej zdefiniowanych zachowań związanych z celem: podążały za drążkiem do celu, wskakiwały na wagę, wchodziły do skrzyni transportowej i stawały dęba, kładąc przednie łapy na dłoni trenera. Ponadto dziesięć zwierząt skoczyło z podłogi na kolana siedzącego trenera i pozwoliło trenerowi podnieść łapy z powierzchni, siedząc na kolanach trenera. W przypadku niektórych osób protokoły musiały zostać dostosowane poprzez dodatkowe etapy pośrednie. Pod koniec treningu króliki niezawodnie pokazywały oczekiwane zachowania bramkowe, nawet po krótkich i długich przerwach treningowych. Z nielicznymi wyjątkami, znajoma osoba inna niż trener mogła wydobyć od królików zachowania związane z celem (uogólnienie), chociaż do uogólnienia potrzebne były dalsze sesje. W teście podejścia dobrowolnego króliki preferowały interakcję z trenerem w^{pierwszym badaniu}, ale spędzały tyle samo czasu z nieznaną osobą, co z trenerem w^{drugim badaniu}. Obserwacje behawioralne sugerowały, że podnoszenie królików za pomocą skrzyni transportowej, jak opisano w protokole, zamiast krępowania ich karku i podnoszenia ich na ramieniu, było mniej awersyjne. Podsumowując, protokoły szkoleniowe były wykonalne i mogą służyć jako strategia udoskonalania w obiektach dla zwierząt laboratoryjnych. W interesie dobrostanu zwierząt protokoły szkoleniowe powinny być stosowane wszędzie tam, gdzie jest to możliwe.

Wprowadzenie

W latach 2015-2019 ponad 49 milionów zwierząt zostało wykorzystanych do celów naukowych w Unii Europejskiej (i Norwegii); 1 745 037 (3,5 %) z nich to króliki¹. Króliki są najczęściej wykorzystywane do badań regulacyjnych (np. kontroli jakości, testów toksyczności i innych testów bezpieczeństwa, w tym farmakologicznych) oraz rutynowej produkcji substancji biologicznych (np. produktów krwiopochodnych)². Chociaż podejmowane są wysiłki w celu zastąpienia doświadczeń na zwierzętach metodami bez udziału zwierząt, wykorzystanie zwierząt jest nadal konieczne do niektórych z tych celów. Zawsze, gdy nie można zastąpić doświadczenia na zwierzętach, konieczne jest zmniejszenie liczby zwierząt i udoskonalenie warunków doświadczalnych, a także warunków utrzymania i hodowli, aby zminimalizować cierpienie. Russel i Burch opisali tę strategię jako zasadę 3R (replace, reduce, refine) w 1959 roku³, a w 2010 roku została wdrożona do dyrektywy 2010/63/UE w sprawie ochrony zwierząt laboratoryjnych wykorzystywanych do celów naukowych⁴. Rola uszlachetnienia, czasami określana jako "Kopciuszek" z klasy 3Rs5, zyskuje coraz większe znaczenie. Podczas gdy zastępowanie i ograniczanie są długoterminowymi strategiami zmierzającymi do osiągnięcia ostatecznego celu dyrektywy, jakim jest całkowite zastąpienie doświadczeń na zwierzętach, udoskonalenie umożliwia natychmiastową poprawę dobrostanu zwierząt⁵, co z kolei może poprawić jakość naukową⁶. Zasadniczymi elementami udoskonalenia są obchodzenie się ze zwierzętami i ich szkolenie, jak wskazano w załączniku III do dyrektywy 2010/63/UE. Dyrektywa stanowi, że obiekty dla zwierząt powinny opracowywać programy habituacji i szkolenia zwierząt laboratoryjnych dostosowane do gatunku, procedury i projektu⁴. Załącznik A do ETS nr 123 sugeruje, że personel zajmujący się zwierzętami laboratoryjnymi spędza czas na "rozmowach, obchodzeniu się, szkoleniu i pielęgnacji zwierząt"⁷.

Niektóre procedury obsługi powodują stres, szczególnie dla lądowych zwierząt drapieżnych, takich jak króliki. Przykładami są bycie osaczonym, krępowanym (tj. chwytanym przez człowieka, trzymanym w ramionach człowieka lub unieruchomionym przez urządzenie) i podnoszonym (tj. podnoszonym z podłogi) w celu przeprowadzenia inspekcji sanitarnej lub procedur eksperymentalnych⁸. Ankieta skupiająca się na królikach domowych ujawniła, że 57-61% z nich zmagało się z podnoszeniem^9,10, a niektóre nawet wykazywały agresję związaną ze strachem (np. gryzienie)¹¹. Podkreśla to potrzebę delikatnego obchodzenia się z nimi i technik treningowych. Wykazano już w przypadku innych małych ssaków, takich jak myszy, że delikatne techniki obchodzenia się z nimi zmniejszają lęk¹². Co więcej, delikatne obchodzenie się z nim w połączeniu z treningiem zmniejsza stres, niepokój i zachowania podobne do depresji u myszy¹³. U makaków rezusów i szympansów pomiary fizjologiczne związane ze stresem były mniej naruszone, gdy były wcześniej trenowane w procedurze^14,15. Można założyć, że jeśli zwierzę może dobrowolnie zdecydować się na udział w szkoleniu, może aktywnie angażować się i kontrolować sytuację, co poprawia dobrostan zwierzęcia, a także może przyczynić się do uzyskania bardziej solidnych i wiarygodnych danych naukowych¹⁶.

Wiele procedur szkolenia zwierząt opiera się na zasadach warunkowania instrumentalnego, szczególnie na stosowaniu pozytywnego wzmocnienia i kształtowania^17,18,19. Warunkowanie instrumentalne wymaga od zwierzęcia wywoływania zachowań, które można następnie zwiększyć lub zmniejszyć²⁰. Istnieją cztery typowe sytuacje awaryjne, które są używane do opisania warunkowania instrumentalnego: pozytywne i negatywne wzmocnienie oraz pozytywna i negatywna kara^21,22. U królików kara pozytywna jest stosowana, gdy osoba zbliża się (niepożądany bodziec) do zwierzęcia, aby odsunąć je od lub w kierunku określonego miejsca²³. W kontekście obchodzenia się z królikiem na stole do badań, przykładem negatywnego wzmocnienia jest usunięcie nacisku (niepożądanego bodźca) na ciało królika, gdy królik pozostaje nieruchomy; Przykładem negatywnej kary jest wycofanie nagrody w postaci jedzenia (pożądanego bodźca), gdy królik zaczyna się szamotać. W szkoleniu zwierząt nie zaleca się ani pozytywnej/negatywnej kary, ani negatywnego wzmocnienia. Kara wywołuje negatywne emocje ²⁴, takie jak cierpienie, jak pokazano w dogs²⁵. Zamiast tego pozytywne wzmocnienie powinno być metodą wyboru podczas szkolenia zwierząt^25,26. Trening pozytywnego wzmocnienia (PRT) oznacza, że pożądany bodziec (np. nagroda w postaci jedzenia) jest dostarczany po tym, jak zwierzę wykazało pożądane zachowanie, co zwiększa prawdopodobieństwo, że zwierzę ponownie wykaże pożądane zachowanie w przyszłości²⁷. PRT często wiąże się z zastosowaniem kondycjonowanego wzmacniacza. Wzmacniacz warunkowy (wzmacniacz wtórny) jest zwykle bodźcem neutralnym, takim jak dźwięk, który zwierzę uczy się kojarzyć z bezwarunkowym wzmocnieniem (wzmacniaczem podstawowym, np. nagrodą w postaci jedzenia)²⁸. Po tym, jak zwierzę wykaże pożądane zachowanie, natychmiast prezentowany jest warunkowy wzmacniacz, po którym następuje prezentacja nagrody w postaci jedzenia²⁶. Dobrze znanym przykładem PRT jest trening klikerowy, w którym kliker jest używany do wytwarzania kliknięcia jako drugorzędny wzmacniacz²⁶.

Trening powinien przebiegać według przewidywalnych wzorców, co osiąga się poprzez zaprojektowanie protokołu treningowego. Protokół treningowy opisuje, w jaki sposób krok po kroku można osiągnąć cel zachowania (tj. kształtowanie zachowania), podczas gdy każdy krok jest zdefiniowany przez obiektywne kryteria i powinien być łatwo osiągnięty²⁶. Jeśli szkolenie odbywa się zgodnie z określonym protokołem, możliwe jest, że personel zwierząt laboratoryjnych będzie szkolony na przemian ze zwierzętami. Ważne jest, aby pamiętać, że personel musi znać zasady uczenia się i technik szkoleniowych, aby prawidłowo je stosować²⁶. Szkolenie zwierząt często obejmuje kształtowanie behawioralne. Ręczne kształtowanie behawioralne zostało celowo zastosowane po raz pierwszy przez Skinnera i współpracowników na początku lat czterdziestych XX wieku²⁹. W przeciwieństwie do tego, w poprzednich pracach Skinner skupiał się raczej na "dokonywaniu niewielkich zmian w środowisku fizycznym w celu implementacji programu sukcesywnego przybliżania"²⁹. W artykule opublikowanym w Scientific American wyjaśnił, że wzmacnianie zachowania zwiększa prawdopodobieństwo, że zachowanie się powtórzy, co "umożliwia kształtowanie zachowania zwierzęcia prawie tak, jak rzeźbiarz kształtuje bryłę gliny"³⁰. Od tego czasu kształtowanie zyskało na znaczeniu dla zwierząt żyjących w niewoli^29,30,31,32. Dla odtworzenia i ulepszenia protokołów kształtowania kluczowe znaczenie ma ich systematyczna i obiektywna ocena^33,34,35,36.

Niedawno opublikowany systematyczny przegląd i metaanaliza Pfaller-Sadovsky et al. wykazały, że wzmocnienie warunkowe było najczęściej badane u koni i psów, chociaż koty, bydło, ryby, kozy i naczelne nie były również badane³⁷. W naukach o zwierzętach laboratoryjnych PRT jest szeroko stosowany dla naczelnych innych niż ludzie^38,39,40 i dogs^41,42. Ponadto świnie⁴³, goats⁴⁴, a nawet małe ssaki, takie jak myszy¹³ i rats^45,46,47, zostały pomyślnie wyszkolone przy użyciu klikera w warunkach laboratoryjnych. Zgodnie z wiedzą autorów, wprowadzenie PRT dla królików laboratoryjnych było jeszcze rzadko zgłaszane⁴⁸; Istniejąca recenzowana literatura opublikowana kilkadziesiąt lat temu jest przestarzała i nie spełnia kryteriów współczesnych badań etycznych. Chociaż niewiele nierecenzowanych informacji sugeruje, że króliki można z powodzeniem szkolić za pomocą PRT⁴⁹, wydaje się, że brakuje wiedzy na temat odpowiednich protokołów szkolenia królików, które są trzymane w obiektach dla zwierząt laboratoryjnych. Podstawowe przyczyny mogą być różne. Na przykład stosowane techniki szkoleniowe mogą nie być szczegółowo opisane w artykułach naukowych lub dane są generowane na potrzeby badań regulacyjnych i w związku z tym nie są publikowane. Co więcej, króliki mogą nie być głównym przedmiotem badań udoskonalających, ponieważ inne gatunki, takie jak myszy i szczury, są częściej wykorzystywane w badaniach. Ponieważ króliki potrafią bardzo dobrze maskować stres i dyskomfort, ich negatywny stan emocjonalny podczas obchodzenia się z nimi może często pozostać nierozpoznany. Rozmiar królika pozwala ludziom na krępowanie tych zwierząt do zabiegów, podczas gdy inne gatunki, takie jak naczelne, nie mogą być trzymane rękami podczas podobnych interwencji bez poważnych obrażeń⁵⁰. Fakty te nie powinny jednak stanowić przeszkody w opracowywaniu lub udostępnianiu protokołów PRT dla królików laboratoryjnych.

Jeśli chodzi o potencjalne korzyści z PRT, podjęto pierwsze próby wypełnienia luki w wiedzy na temat odpowiednich protokołów szkolenia królików laboratoryjnych. Aby ułatwić rutynowe procedury, takie jak obsługa, inspekcje zdrowotne i ważenie, opracowano protokoły szkoleniowe i oceniono ich wykonalność w przypadku samic królików rasy białej nowozelandzkiej. Przeprowadzono porównania, aby ocenić, czy alternatywna technika postępowania opisana w protokołach szkoleniowych była mniej awersyjna niż konwencjonalna technika obchodzenia się oraz czy protokoły szkoleniowe mogą służyć jako środki udoskonalające. Rysunek 1 przedstawia harmonogram obecnego badania.

Utrzymanie zwierząt

Trzynaście samic białych królików nowozelandzkich zostało pozyskanych ze źródeł komercyjnych (przybycie do zakładu dla zwierząt w wieku około siedmiu tygodni). Zwierzęta były wolne od wszystkich patogenów wirusowych, bakteryjnych i pasożytniczych wymienionych w zaleceniach FELASA⁵¹. Podczas wykonywania czynności niniejszego protokołu noszono odzież i sprzęt ochronny (rękawice, maski, siatki na włosy). Grupa sześciu i grupa siedmiu zwierząt były trzymane razem w kojcu podłogowym odpowiednio o długości 2,8 m × 2,8 m (pomieszczenie podłogowe). Podłoga była pokryta drobnym i łuszczącym się drewnianym materiałem pościelowym (autoklawowanym). Ponadto na wierzchu ściółki rozrzucono materiał gniazdowy i wełnę papierową. Jako schrony służyły trzy plastikowe domki z dwoma otworami każdy (37 cm × 60 cm; wysokość 30 cm) oraz tunel foliowy (długość: 58 cm; średnica: 16 cm). Dodatkowo zapewniono przedmioty urozmaicające, takie jak drewniane klocki do gryzienia, kule z siana i wierzby oraz kulki z przekąskami wypełnione granulkami jedzenia, które wypadają podczas przesuwania piłki. Króliki miały swobodny dostęp do wody z kranu, granulowanej karmy oraz autoklawowanego siana i słomy. Więcej informacji na temat artykułów spożywczych i wzbogacających znajduje się w Tabeli materiałów. Pomieszczenie dla zwierząt było sprzątane w czwartki.

Króliki były utrzymywane w standardowych warunkach (temperatura pokojowa i wilgotność względna podane jako średnia ± odchylenie standardowe: 20,3 ± 0,4 °C i 50 ± 5%) w cyklu światło:ciemność trwającym 12:12 h (sztuczne światło z dodatkowym udziałem światła dziennego). Radio zostało włączone na 30 minut przed rozpoczęciem fazy światła na około 8 godzin, aby przyzwyczaić króliki do odgłosów otoczenia.

Protokół

Utrzymanie zwierząt zostało zatwierdzone przez Berliński Urząd Państwowy ("Landesamt für Gesundheit und Soziales", numer zezwolenia: ZH3 - Niemiecki Federalny Instytut Oceny Ryzyka, Berlin). Protokoły szkoleniowe zostały opracowane w ramach rutynowej hodowli zwierząt w celu udoskonalenia procedur, takich jak obchodzenie się, kontrola zdrowia i ważenie. Ponieważ protokoły treningowe nie powodowały żadnego bólu, cierpienia ani krzywdy, a wszystkie obserwacje zostały poczynione w kontekście rutynowej hodowli zwierząt, badanie to nie zostało uznane za eksperyment na zwierzętach zgodnie z prawodawstwem europejskim.

1. Ogólne wymagania dotyczące szkolenia

UWAGA: Następujące punkty są zazwyczaj wymagane do szkolenia zwierząt, niezależnie od obecnego protokołu.

1. Wyraźnie oznacz zwierzęta w celu identyfikacji.
2. Upewnij się, że masz nagrodę w postaci wysokiej jakości, np. bardzo smacznego jedzenia.
3. Zdefiniuj plan treningowy zawierający wszystkie kroki prowadzące do zachowania docelowego, tj. pożądanego zachowania, jakie zwierzę powinno przejawiać.
   UWAGA: Zachowanie celu jest kształtowane krok po kroku, a każdy krok jest definiowany przez obiektywne kryteria i powinien być łatwy do osiągnięcia.
4. Określ, czy zwierzętom powinno się udać wykonać 80% czy 100% kroków treningowych przed przejściem do następnego kroku.
5. Proszę przygotować dokumentację (np. tabelę uzupełniającą 1).
6. Nie trenuj zwierząt w pośpiechu i dbaj o maniery, ton głosu i szybkość ruchów, tj. mów cicho i spokojnie, poruszaj się powoli i przesądnie.
7. Przetestuj kroki, które zostały wytrenowane w poprzednim szkoleniu.
8. Nie należy trenować zwierzęcia, gdy ogólny stan zdrowia zwierzęcia jest osłabiony i/lub zwierzę nie jest zainteresowane interakcją z trenerem.

2. Procedury treningowe dla obecnego protokołu

UWAGA: Następujące procedury treningowe zostały zdefiniowane dla niniejszego protokołu.

1. Ustaw arenę treningową w pomieszczeniu/kojcu dla zwierząt (Rysunek 2) i, w zależności od zachowania celu, który ma być trenowany, umieść wagę lub skrzynię transportową (podłoga 30 cm × 50 cm; drzwi 27 cm × 25,5; z otworem w pokrywie 16 cm × 39 cm) na arenie.
2. Umieść wagę i skrzynię transportową na zewnątrz areny, aby zapoznać króliki z tymi nowymi obiektami, zanim zostaną wyszkolone zachowania związane z celem: "ważenie" i "pudełko transportowe".
3. W przypadku zachowań związanych z celami (patrz kroki 6-9) poprowadź królika na arenę treningową, zgodnie z opisem w kroku 5.7.
4. Usiądź na podłodze lub użyj niskiego stołka/stopnia, aby usiąść na arenie treningowej.
5. Trenuj zachowania związane z celami jedno po drugim, w kolejności opisanej w protokole, a nie jednocześnie. Zrób wyjątek, jeśli zwierzę nie nauczy się kroku zachowania do celu przez dwa kolejne dni - w takim przypadku trenuj jednocześnie zachowanie związane z kolejnym celem. Zmień kolejność zachowań związanych z celem, jeśli ułatwia to proces treningowy dla danej osoby.
6. Po przyzwyczajeniu i wprowadzeniu klikera rozpocznij szkolenie wszystkich zwierząt na 1 kroku zachowania celu "podążanie za celem" (tj. piłka na końcu kija tarczowego jest zdefiniowana jako cel). Należy pamiętać, że w zależności od ich indywidualnych wyników, mogą osiągnąć tego dnia różne etapy treningu. Kontynuuj trening zgodnie z indywidualnymi postępami zwierząt w kolejnych dniach.
7. Zaplanuj sesję treningową (np. około 30 minut dla grupy składającej się z sześciu do siedmiu zwierząt) na każdy dzień roboczy w ciągu tygodnia.
   UWAGA: Sesja treningowa rozpoczyna się, gdy trener znajduje się w pomieszczeniu/kojcu dla zwierząt i jest przygotowany do rozpoczęcia treningu. Sesja kończy się, gdy albo żaden z królików nie uczestniczy w treningu (już), albo wszystkie króliki osiągnęły ostatni etap szkolenia zachowania docelowego, które mają być trenowane w tej sesji. Rozpocznij każdą sesję treningową od ostatniego udanego kroku protokołu. Sesja składa się z co najmniej jednego lub więcej badań klinicznych na zwierzę.
8. Rozpocznij badanie, prosząc zwierzę o wykonanie określonego kroku szkolenia (tj. kroku 3.1 po tym, jak królik nauczył się dotykać celu nosem/ustami) i zakończ próbę, gdy zwierzę nie uczestniczy w treningu (już) lub zwierzę osiągnęło ostatni etap szkolenia w zakresie zachowania docelowego, które ma być trenowane. Pod koniec treningu otwórz arenę treningową i wyprowadź królika z areny; Następnie przytrzymaj drążek do celów (z celem skierowanym w stronę sufitu), a także miskę z nagrodami przed skrzynią.
9. Zaplanuj trening przed karmieniem, czyszczeniem, zabiegami lub procedurami eksperymentalnymi.
10. Użyj miski z nagrodami ze zintegrowanym klikerem (Rysunek 3, Dodatkowy plik kodowania 1) i, w przypadku niektórych zachowań związanych z celem, dodatkowy kij do celów.
11. Napełnij miskę z nagrodami smacznym jedzeniem, np. nasionami słonecznika i smakołykami na bazie zbóż.
    UWAGA: Króliki są roślinożercami i te przykłady nagród nie są optymalne; Jednak ze względu na ograniczenia higieniczne w pomieszczeniu dla zwierząt laboratoryjnych były one najlepszą dostępną alternatywą dla tych zwierząt. Jeśli to możliwe, świeże zioła powinny być preferowane jako nagroda w postaci jedzenia. Pamiętaj, że nagroda jest nagrodą tylko wtedy, gdy królik naprawdę ją faworyzuje.
12. Upewnij się, że zawsze trzymasz miskę z nagrodami w tej samej pozycji, np. przed klatką piersiową, i zacznij przesuwać miskę z nagrodami w kierunku królików dopiero po kliknięciu. Z wyjątkiem zachowania bramkowego "podnoszenia" i "skakania na kolanach", trzymaj kij celowniczy w jednej, a miskę z nagrodą w drugiej.
13. Przedstaw nagrodę w miejscu, w którym znajdował się nos/usta królika, gdy pożądane zachowanie zostało prawidłowo pokazane.
14. Uważaj, aby królik zjadał tylko niewielką ilość jedzenia podczas wręczania nagrody.
15. Jeśli królik wykaże pożądane zachowanie co najmniej cztery razy w bloku pięciu prób (80% skuteczności), przejdź do następnego kroku. Jeśli zwierzę nie jest w stanie wykonać następnego kroku (tj. nie wykona go więcej niż raz), wróć do poprzedniego kroku protokołu. Jeśli konieczny był powrót do poprzedniego kroku lub królik nie bierze udziału w treningu, zrewiduj protokoły treningowe (np. określ mniejsze kroki treningu), wybierz inną (smaczniejszą) nagrodę w postaci jedzenia lub sprawdź umiejętności treningowe trenera.
16. Jeśli królik poprawnie wykona ostatni krok treningowy zachowania docelowego, zakończ sesje treningowe dla tego królika tego samego dnia.
17. Wydrukuj arkusz dokumentacji (plik uzupełniający 1), szczegółowe protokoły treningowe, a także uproszczone protokoły treningowe (plik uzupełniający 2) i dołącz je do schowka lub otwórz na tablecie. Skorzystaj z arkusza dokumentacji, aby zanotować etapy treningu osiągnięte przez poszczególne zwierzęta podczas każdej sesji.

3. Warunkowanie/przyzwyczajenie kontekstowe

UWAGA: Sesje warunkowania/przyzwyczajania kontekstowego są wykonywane codziennie przez trenera i opiekunów zwierząt przez około 15 minut na grupę królików przez okres pięciu kolejnych dni (od poniedziałku do piątku).

1. Cicho mów do królików.
2. Oferuj nagrody w postaci smacznych potraw.
   UWAGA: Należy pamiętać, że nagłe zmiany w diecie mogą powodować problemy trawienne u królików. Dlatego powoli wprowadzaj nagrodę w postaci nowego jedzenia.
3. Przesuń miskę z nagrodami wypełnioną smacznym jedzeniem w kierunku królików i pozwól im z niej jeść.
4. Delikatnie dotykaj królików wokół szyi, ramion, grzbietu i zadu, nie krępując ich.

4. Przedstawiamy kliker

UWAGA: Zachowanie celu: Podejdź do trenera i zjedz nagrodę z miski po kliknięciuk. Celem jest, aby królik kojarzył nagrodę w postaci jedzenia z kliknięciem, tj. królik zjada nagrodę w postaci jedzenia po kliknięciu.

1. Pozwól królikowi się zbliżyć.
2. Kliknij raz i przesuń miskę z nagrodami w kierunku królika (określane jako klik i smakołyk lub C i T).
3. Powtórz krok 4.2 dziesięć razy. Klikając po raz dziesiąty, odczekaj sekundę przed wręczeniem nagrody i obserwuj zachowanie królika.
   UWAGA: Jeśli zwierzę szuka nagrody natychmiast po kliknięciu, można założyć, że kondycjonowanie dodatkowego wzmacniacza powiodło się.
4. Powtórz kroki 4.1.-4.3. następnego dnia, jeśli królik nie zjadł nagrody w postaci jedzenia po kliknięciu co najmniej osiem razy.

5. Podążanie za celem

UWAGA: Zachowanie celu: Podążaj za celem i dotykaj go nosem/ustami. Zachowania związane z celem w sekcjach 6-9 są modyfikacjami zachowania celu przedstawionego w sekcji 5.

1. Umieść cel blisko nosa/pyska królika.
   UWAGA: Kula na końcu drążka tarczowego jest zdefiniowana jako cel.
   1. C i T, gdy królik dotyka celu nosem/ustami.
      UWAGA: Upewnij się, że nos/pysk królika nie dotyka patyczka w żadnym nieokreślonym miejscu poza piłką.
   2. Usuń cel z pola widzenia królika podczas nagradzania.
   3. Powtórz wszystkie powyższe kroki pięć razy, aż królik pomyślnie wykona ten krok co najmniej cztery z pięciu razy (wskaźnik sukcesu 80%).
2. Umieść cel w innym miejscu, w którym można go dotknąć nosem/ustami ruchami głowy bez poruszania całym ciałem.
   1. C i T, gdy królik dotyka celu nosem/pyskiem i postępować zgodnie z krokami 5.1.2 i 5.1.3.
3. Umieść cel w większej odległości od królika i pozwól królikowi rozciągnąć się w jego kierunku.
   1. C i T, gdy królik dotyka celu nosem/pyskiem i postępować zgodnie z krokami 5.1.2 i 5.1.3.
4. Jeszcze bardziej zwiększ odległość między celem a królikiem, wymagając od zwierzęcia wykonania jednego skoku, aby dotrzeć do celu.
   1. C i T, gdy królik dotyka celu nosem/pyskiem i postępować zgodnie z krokami 5.1.2 i 5.1.3.
5. Umieść cel tuż przed nosem/ustami królika, aby królik mógł dotknąć celu, a następnie powoli odsuń cel od królika. Upewnij się, że królik musi wykonać zmienną liczbę przeskoków, aby podążać za celem.
   UWAGA: W bloku pięciu prób, za pierwszym^{razem, 2}, 3, 4 i 5 królik jest nagradzany odpowiednio po 2, 1, 2, 3 i 2 skokach (średnio: po 2 skokach).
   1. C i T, gdy króliki wykonały wymaganą liczbę chmielu i postępuje zgodnie z krokami 5.1.2 i 5.1.3.
6. Powtórz krok 5.5 i przesuń cel przez korytarz między dwoma obiektami.
   UWAGA: Na tym etapie dwa obiekty, takie jak tunele, są umieszczane równolegle do siebie i tworzą korytarz.
   1. C i T, gdy króliki wykonały wymaganą liczbę chmielu i postępować zgodnie z krokami 5.1.2 i 5.1.3.
7. Powtórz krok 5.5 i przesuń cel w kierunku areny treningowej tak, aby królik do niej wszedł.
   1. C i T, gdy króliki wykonały wymaganą liczbę chmielu i postępować zgodnie z krokami 5.1.2 i 5.1.3.

6. Ważenie

UWAGA: Zachowanie celu: Pozostań na wadze przez co najmniej jedną sekundę. Jeśli powierzchnia wagi jest zbyt śliska, na wierzch można położyć podkładkę antypoślizgową. Jednak niektóre króliki mają tendencję do gryzienia podkładki.

1. Poprowadź królika z drążkiem tarczowym w kierunku skali, jak opisano w kroku 5.5.
   1. C i T, gdy królik dotyka celu nosem/ustami.
   2. Usuń cel z pola widzenia królika podczas nagradzania.
   3. Powtórz wszystkie wyżej opisane kroki pięć razy, aż królik pomyślnie wykona ten krok co najmniej cztery z pięciu razy (wskaźnik sukcesu 80%).
2. Przesuń cel nieco ponad skalę, tak aby królik nadepnął na niego przednimi łapami, aby dotknąć celu nosem/ustami.
   1. C i T oraz wykonaj kroki 6.1.2 i 6.1.3.
3. Przesuń cel nieco poza środek skali, tak aby królik nadepnął na niego przednimi łapami i rozciągnął się nad łuską, aby dotknąć celu nosem/ustami.
   1. C i T oraz wykonaj kroki 6.1.2 i 6.1.3.
4. Przesuń cel dalej poza środek skali, tak aby królik stanął na wadze przednimi i tylnymi łapami, aby dotknąć celu nosem/ustami.
   1. C i T oraz wykonaj kroki 6.1.2 i 6.1.3.
5. Zaprowadzić królika na wagę zgodnie z opisem w ppkt 4.4 i odczekać kilka sekund, zanim C i T.
   UWAGA: W tym kroku nagrodź królika po tym, jak siedział przez różną ilość czasu na wadze. W bloku pięciu prób, za pierwszym^{razem, 2}, 2, 3, 4 i 5, królik jest nagradzany odpowiednio po 0,5, 1,0, 2,0, 0,5 i 1,0 sekundy (średnio: 1,2 s). Podczas gdy królik pozostaje w tym czasie nieruchomy, wagę można odczytać z wagi. Jeśli waga potrzebuje więcej czasu na ustabilizowanie i zmierzenie wagi, wydłuż czas siedzenia zwierzęcia na wadze.
   1. C i T oraz wykonaj kroki 6.1.2 i 6.1.3.

7. Wprowadzanie do skrzyni transportowej

UWAGA: Zachowanie celu: Wchodzenie i wychodzenie z skrzyni transportowej. Do sesji treningowej należy wykorzystać skrzynię transportową (podłoga 30 cm × 50 cm; drzwiczki 27 cm × 25,5 cm) z otworem w pokrywie (16 cm × 39 cm), której dno pokryte jest zabrudzonym materiałem ściółkowym.

1. Poprowadź królika z kijem tarczowym w kierunku pudełka, jak opisano w kroku 5.5.
   1. C i T, gdy królik znajduje się przed wejściem do boksu.
   2. Usuń cel z pola widzenia królika podczas nagradzania.
   3. Powtórz wszystkie wyżej opisane kroki pięć razy, aż królik pomyślnie wykona zadanie co najmniej cztery z pięciu razy (wskaźnik sukcesu 80%).
2. Przytrzymaj kij do tarczy przez otwór w pokrywie i przenieś go do pudełka, motywując w ten sposób królika do wejścia do pudełka przednimi łapami.
   1. C i T, a następnie wykonaj kroki 7.1.2 i 7.1.3.
3. Wykonaj krok 7.2 i zaprowadź królika do pudełka (tj. wszystkie przednie i tylne łapy weszły do pudełka).
   1. C i T, a następnie wykonaj kroki 7.1.2 i 7.1.3.
4. Wykonaj krok 7.3 i zamknij drzwiczki skrzynki na kilka sekund. Następnie ponownie otwórz drzwi.
   1. C i T, a następnie wykonaj kroki 7.1.2 i 7.1.3.
5. Wykonaj krok 7.3 i zamknij drzwiczki skrzynki. Ostrożnie podnieś trochę pudełko (tj. kilka centymetrów nad podłogą). Umieść pudełko z powrotem na podłodze i otwórz drzwi.
   1. C i T, a następnie wykonaj kroki 7.1.2 i 7.1.3.
6. Wykonaj czynności opisane w kroku 7.5. Następnie wyprowadź królika z kijem tarczowym z pudełka.
   1. C i T, a następnie wykonaj kroki 7.1.2 i 7.1.3.

8. Hodowla

UWAGA: Zachowanie do celu: Połóż przednie łapy na dłoni podczas podnoszenia. Podczas sesji treningowej trzymaj w tej samej ręce zarówno kij do tarczy, jak i miskę z nagrodami.

1. Umieść cel nad głową królika tak, aby królik rozciągnął nos do góry, aby dotknąć celu nosem/ustami, podczas gdy wszystkie łapy pozostaną na ziemi.
   1. C i T.
   2. Usuń cel z pola widzenia królika podczas nagradzania.
   3. Powtórz wszystkie wyżej opisane kroki pięć razy, aż królik pomyślnie wykona ten krok co najmniej cztery z pięciu razy (wskaźnik sukcesu 80%).
2. Umieść cel nad głową królika, jak opisano w kroku 8.1. Po tym, jak królik rozciągnie nos do góry, przesuń cel dalej w górę, tak aby królik podniósł przednie łapy z ziemi i dotknął celu nosem/ustami.
   1. C i T, a następnie wykonaj kroki 8.1.2 i 8.1.3.
      UWAGA: Jeśli królik nie wykona 8.2, po 8.2 można dodać krok pośredni. W tym celu postępuj zgodnie z punktem 8.2, a następnie podejdź i dotknij przednich łap królika (powierzchnia dłoniowa) dłonią wolnej ręki. C i T i wykonaj kroki 8.1.2 i 8.1.3.
3. Umieść dłoń wolnej ręki przed królikiem i przesuń cel nad głowę królika tak, aby królik położył przednie łapy na dłoni, aby dotknąć celu nosem/ustami.
   1. C i T po jednej sekundzie i wykonaj kroki 8.1.2 i 8.1.3.
      UWAGA: Podczas gdy przednie łapy spoczywają na dłoni trenera, brzuch królika można sprawdzić wzrokowo.

9. Skakanie na kolanach

UWAGA: Zachowanie celu: Wskocz na kolana trenera i pozostań w pozycji siedzącej, gdy jesteś dotykany. W krokach 9.5-9.9 trzymaj zarówno kij do tarczy, jak i miskę z nagrodą w tej samej ręce, ponieważ jedna ręka musi dotknąć królika.

1. Poprowadź królika z kijem tarczowym w pobliżu trenera, jak opisano w kroku 5.5 protokołu.
   1. C i T, gdy królik dotyka celu nosem/ustami.
   2. Usuń cel z pola widzenia królika podczas nagradzania.
   3. Powtórz wszystkie wyżej opisane kroki pięć razy, aż królik pomyślnie wykona ten krok co najmniej cztery z pięciu razy (wskaźnik sukcesu 80%).
2. Przesuń cel nad nogi trenera tak, aby królik położył przednie łapy na nogach, aby dotknąć celu nosem/ustami.
   1. C i T i postępuj zgodnie z krokami 9.1.2 i 9.1.3.
3. Przesuń cel nad nogami i nieco dalej od królika, tak aby królik położył przednie łapy na nogach i rozciągnął się do przodu, aby dotknąć celu nosem/ustami.
   1. C i T, a następnie wykonaj kroki 9.1.2 i 9.1.3.
      UWAGA: Jeśli królik nie wykona 9.4, po 9.3 można dodać krok pośredni. W tym celu wykonaj krok 9.3, a następnie zwab królika za pomocą miski z nagrodami na kolana. Kiedy królik położył wszystkie cztery łapy na kolanach, C i T i wykonaj kroki 9.1.2 i 9.1.3.
4. Przesuń cel nad nogami, a nawet dalej od królika, tak aby królik wskoczył na kolana, aby dotknąć celu nosem/ustami.
   1. C i T i postępuj zgodnie z krokami 9.1.2 i 9.1.3.
5. Wykonaj krok 9.4. i ostrożnie pogłaszcz królika wolną ręką od czaszki do ogona (zaczynając od ramienia), podczas gdy królik siedzi na kolanach.
   1. C i T i postępuj zgodnie z krokami 9.1.2 i 9.1.3.
6. Wykonaj krok 9.4 i ostrożnie pogłaszcz uszy królika wolną ręką od czaszki do ogona, podczas gdy królik siedzi na kolanach.
   1. C i T i postępuj zgodnie z krokami 9.1.2 i 9.1.3.
7. Wykonaj krok 9.4. i delikatnie chwyć jedno z uszu królika, aby wizualnie sprawdzić uszy.
   1. C i T i postępuj zgodnie z krokami 9.1.2 i 9.1.3.
8. Wykonaj krok 9.4. i wolną ręką pogłaszcz przednią lub tylną łapę, podczas gdy królik siedzi na kolanach.
   UWAGA: Jeśli prawa strona ciała królika jest skierowana w stronę trenera, a lewa strona ciała od niego, lewą łapę można delikatnie dotknąć (i odwrotnie). Upewnij się, że trenujesz obie strony naprzemiennie.
   1. C i T i postępuj zgodnie z krokami 9.1.2 i 9.1.3.
9. Wykonaj krok 9.4. i ostrożnie podnieś przednią lub tylną łapę wolną ręką, podczas gdy królik siedzi na kolanach.
   UWAGA: Pazury można sprawdzić, gdy łapy są podniesione. Upewnij się, że trenujesz obie strony naprzemiennie.
   1. C i T i postępuj zgodnie z krokami 9.1.2 i 9.1.3.

Wyniki

W następujących sekcjach, obok reprezentatywnych wyników, przedstawiono informacje na temat materiałów i metod wykraczających poza protokół.

Statystyka

Dane uzyskane z opisanego powyżej protokołu przechowywano w arkuszach kalkulacyjnych i analizowano przy użyciu oprogramowania do zaawansowanych analiz statystycznych (Tabela materiałów). Dla parametrów ciągłych przeprowadzono testy normalności (wizualna inspekcja histogramów i wykresów qq-plot, porównanie średniej, odchylenia standardowego i mediany). Różnice między parametrami badanymi w teście podejścia dobrowolnego (czas interakcji z trenerem i osobą nieznajomą, dotyki przednimi łapami) analizowano za pomocą testu znaków Wilcoxona. Różnice między technikami obsługi analizowano za pomocą testu znaków Wilcoxona lub testu McNemara (w przypadku danych binarnych). Różnice uznano za istotne statystycznie przy p < 0.05. Podczas stosowania testu znaków Wilcoxona rozkład różnic musiał być symetryczny na podstawie wizualnej inspekcji histogramu.

Badanie miało charakter eksploracyjny. Analiza mocy na podstawie czasu interakcji królików z „urządzeniami manipulacyjnymi” została przeprowadzona po zakończeniu badania (test znaków Wilcoxona; moc ≥ 0,999) przy użyciu programu G*Power (wersja 3.1.9.7)⁵².

Habituacja

Wszystkie króliki z wyjątkiem osobników nr 4 i nr 10 spożywały pokarm z miski z nagrodą i pozwalały trenerowi na dotyk podczas wszystkich sesji habituacji. Królik nr 4 nie przyjął nagrody pokarmowej w 1^{Nie podano tekstu źródłowego do tłumaczenia. Proszę o dostarczenie treści, którą należy przetłumaczyć na język polski.} sesji, ale zjadł cztery razy z miski z nagrodą w 2^nd sesji. Ilość przyjmowanej nagrody zwiększyła się jednak w późniejszych sesjach, a królika można było również dotykać. Królik nr 10 wymagał ponadto więcej czasu na habituację do trenera i nagrody pokarmowej. W pierwszej sesji królik zaakceptował nagrodę pokarmową od trenera po 5 minutach, lecz nie można go było dotykać. W drugiej sesji nie zaobserwowano zainteresowania pokarmem. W kolejnych sesjach królik nr 10 akceptował jednak zarówno nagrody pokarmowe, jak i dotyk.

Przedstawienie klikera

Dwanaście z trzynastu królików pomyślnie ukończyło sekcję 4 protokołu w ciągu jednego dnia i powiązało nagrodę pokarmową (pierwotny wzmacniacz) z kliknięciem (wtórny wzmacniacz) w ramach tej sesji treningowej. Powiązanie to przetestowano, obserwując zachowanie królików po dziesiątym wystąpieniu kliknięcia. Jeśli zwierzę szukało nagrody natychmiast po kliknięciu, uznano, że królik powiązał wzmacniacz pierwotny z wtórnym. Królik nr 4 nie zjadł nagrody pokarmowej po kliknięciu w pierwszym dniu. Królikowi nr 4 zajęło to o jeden dzień dłużej (tj. dwa dni), aby pomyślnie powiązać kliknięcie z nagrodą pokarmową.

Śledzenie celu

Tabela 1 przedstawia liczbę sesji treningowych (podaną jako medianę, 25.^th percentyl i 75.^th percentyl) wymaganych do nauczenia królików zachowań docelowych przewidzianych w protokołach. Króliki potrzebowały mediany 2 sesji treningowych, aby podążać za kijkiem wskazującym do areny treningowej (Tabela 1). Wszystkie króliki osiągnęły ostatni etap (5.7) tego zachowania docelowego.

Królik nr 4 i królik nr 7 wymagali odpowiednio 7 i 8 sesji treningowych, zanim zaczęli podążać za kijkiem docelowym do areny treningowej. Ponieważ królik nr 7 nie ukończył kroku 5.4 i nie wykonał skoku, aby podążyć za kijkiem docelowym, po kroku 5.3 w protokole wprowadzono dodatkowy krok treningowy (5.3+). W kroku 5.3+ kijek docelowy umieszczano w większej odległości od królika niż w kroku 5.3, tak aby królik musiał się w jego stronę wyciągać w różnych kierunkach, jednak kijek wciąż pozostawał w zasięgu bez konieczności wykonywania skoku. Królik nr 4 miał problemy z krokiem 5.5 i nie był w stanie podążać za kijkiem docelowym, umieszczonym tuż przed nosem/pyskiem, przez zmienną liczbę skoków. W związku z tym do protokołu dodano dodatkowy krok 5.4+. W tym przypadku kijek docelowy umieszczano tuż przed nosem/pyskiem królika, a następnie przesuwano go w różnych kierunkach, co wymagało od królika wykonania jednego skoku. Ten sam dodatkowy krok został z sukcesem zastosowany również w przypadku królika nr 7. Po ukończeniu dodatkowych kroków treningowych ze skutecznością co najmniej 80%, zwierzęta mogły przejść do kolejnych etapów.

Ważenie

Króliczki wymagały 1 sesji treningowej (mediana) do momentu wykonania kroku 6.5 (tj. pozostawania na wadze przez zmienny czas) (Tabela 1). Wszystkie króliki osiągnęły końcowy etap (6.5) tego pożądanego zachowania.

Wprowadzenie do skrzynki transportowej

Króliczki pomyślnie wykonały wszystkie kroki od 7.1 do 7.6 (tj. wchodzenie do skrzynki transportowej i wychodzenie z niej po podniesieniu) w ciągu 2 sesji treningowych (mediana) (Tabela 1). Wszystkie króliki osiągnęły końcowy krok (7.6) tego docelowego zachowania.

Gdy króliki nr 2 i 3 po raz pierwszy pomyślnie wykonały krok 7.6, nie chciały ponownie wejść do transportera, aby powtórzyć ten etap. W związku z tym stworzono krok 7.5+: po tym, jak zwierzę podążyło za kijem wskaźnikiem w stronę transportera, przez otwór w pokrywie przyłożono miseczkę z nagrodą, aby zwabić zwierzę do wnętrza. Gdy królik wszedł do środka, zamknięto drzwiczki i ostrożnie uniesiono transporter. Po ponownym postawieniu transportera na podłodze otwarto drzwiczki i za pomocą kija wskaźnika wyprowadzono królika na zewnątrz. Oba zwierzęta pomyślnie wykonały krok 7.5+ co najmniej 4 razy, a następnego dnia przeszły do kroku 7.6.

Hodowla

Do pomyślnego wykonania kroku 8.3 (tj. położenia przednich łap na dłoni tresera) wymagana była 1 sesja treningowa (mediana) (Tabela 1). Ponieważ 11 z 13 królików (tj. wszystkie poza osobnikami nr 3 i nr 7) nie zdołało wykonać kroku 8.3, dla tych zwierząt zdefiniowano dodatkowy krok treningowy 8.2+ po kroku 8.2. W kroku 8.2+ kij docelowy (target stick) przesuwano nad głowę królika tak, aby zwierzę uniosło przednie łapy z ziemi i dotknęło celu nosem lub pyszczkiem. Gdy królik dotykał celu, treser podchodził i dotykał przednich łap (powierzchni dłoniowej) wnętrzem wolnej dłoni. Po pomyślnym wykonaniu kroku 8.2+ w co najmniej czterech z pięciu prób, ponownie trenowano i ukończono krok 8.3.

Wskakiwanie na kolana

Do przeszkolenia królików w krokach od 9.1 do 9.9 konieczne było średnio 2,5 sesji treningowych (mediana) (Tabela 1). Dziesięć królików zdołało dotrzeć do ostatniego kroku 9.9 (tj. akceptacji dotykania łap podczas siedzenia na kolanach trenera). Królik nr 4 osiągnął jedynie krok 9.2 (tj. kładzenie przednich łap na nogach trenera), a królik nr 10 osiągnął krok 9.3 (tj. wskakiwanie na kolana trenera). Królik nr 7 osiągnął krok 9.3+, który był dodatkowym krokiem przejściowym po kroku 9.3. W tym przypadku królik kładł przednie łapy na nogach trenera, zgodnie z opisem w kroku 9.2, a następnie był zachęcany miseczką z nagrodą znajdującą się na kolanach trenera. Gdy wszystkie cztery łapy spoczęły na kolanach trenera, wykonano kliknięcie i podano nagrodę. Krok ten został pomyślnie dodany do protokołu u ośmiu królików, aby ułatwić wykonanie kolejnych etapów.

Generalizacja

Aby ocenić, czy króliki przeniosły wyuczone wskazówki na wykonywanie zachowań docelowych z innymi osobami niż trener, opiekunka zwierząt (kobieta), która była znana królikom, ale miała niewielkie wcześniejsze doświadczenie w treningu z klikerem, poprosiła króliki o wykonanie wyuczonych zachowań docelowych: „ważenie”, „wchodzenie do boksu transportowego”, „stanie na tylnych łapach” oraz „skakanie na kolana”. Jeśli królik nie opanował wcześniej ostatniego etapu „skakania na kolana”, należało zaprezentować ostatni pomyślnie wykonany etap treningu.

Sesje odbyły się w ciągu pięciu kolejnych dni po zakończeniu 3-tygodniowego treningu (Rycina 1). Opiekun zwierząt zapoznał się z protokołami treningowymi przed 1^st sesji. Na początku 1.^{Proszę podać tekst źródłowy do tłumaczenia.} Podczas sesji trener przeprowadziła krótką demonstrację wszystkich zachowań docelowych. Następnie pozostała w zagrodzie, wydawała instrukcje w trakcie sesji i dokumentowała, który etap zachowań docelowych wykazały króliki. Jeśli królik nie wykazał konkretnego etapu, opiekun zwierząt miał polecenie powrotu do poprzedniego kroku w protokole.

Wszystkie króliki, z wyjątkiem królika nr 4, wykonały zachowania docelowe „ważenie”, „wchodzenie do skrzynki transportowej” oraz „stanie na tylnych łapach” odpowiednio po 1 sesji, 2 sesjach i 2 sesjach (dane podano jako medianę) (Tabela 2). Królik nr 4 nie wykazywał żadnych etapów tych zachowań docelowych.

Osiem z dziesięciu zwierząt, które były w stanie wykonać ostatni etap „skakania na kolana” (9.9), zaprezentowało to zachowanie po 3 sesjach (mediana). Chociaż króliki nr 3 i nr 11 opanowały wcześniej ostatni etap „skakania na kolana” (9.9), w obecności opiekuna zwierząt wykonywały one jedynie etap 9.3. Króliki nr 4, nr 7 i nr 10 wykazały ten sam etap co w obecności trenera (9.2, 9.3+ i 9.3).

Wykonanie zachowań celowych po jednotygodniowych przerwach w treningu

Aby sprawdzić, czy zwierzęta są w stanie zapamiętać końcowe etapy „ważenia”, „wchodzenia do pudełka transportowego”, „stania na tylnych łapach” oraz „skakania na kolana”, trener przywołał docelowe zachowania jeden tydzień oraz dwa tygodnie po sesjach generalizacji (Rysunek 1). W czasie tych przerw zwierzęta nie były trenowane i nie otrzymywały żadnych nagród.

W obu punktach czasowych wszystkie króliki były w stanie wykonać końcowe etapy „ważenia” (6,5), „wchodzenia do skrzynki transportowej” (7,6) oraz „stania na tylnych łapach” (8,3), których nauczyły się podczas poprzedniego, 3-tygodniowego treningu. Zwierzęta (n = 10), które opanowały ostatni etap „skakania na kolana” (9,9), wykazały to zachowanie w obu punktach czasowych; te, które nie opanowały ostatniego etapu tego zachowania docelowego (n = 3), były w stanie zaprezentować ostatni etap, który osiągnęły wcześniej (królik nr 4: etap 9,2; królik nr 7: etap 9,3+; królik nr 10: etap 9,3) po pierwszej 1-tygodniowej przerwie. Po drugiej 1-tygodniowej przerwie trzy te króliki wykonały te same etapy co w poprzednim tygodniu, ale poproszono je również o wykonanie kolejnych kroków, i osiągnęły etap 9,9.

Wykonywanie zachowań celowych po przerwie w treningu trwającej około 8,5 tygodnia

Po przerwie w treningu zwierząt trwającej około 7,5 tygodnia (#1-5, #13) lub 9,5 tygodnia (#6-12), ponownie przywołano zachowania docelowe. Wszystkie zwierzęta były w stanie wykonać końcowy krok „ważenia” (6,5), „wchodzenia do skrzynki transportowej” (7,6) oraz „stania na tylnych łapach” (8,3). Dwanaście królików zaprezentowało końcowy krok „skakania na kolana” (9,9), podczas gdy królik #7 położyła jedynie przednie łapy na nogach trenera i wyciągnęła się do przodu, aby dotknąć celu nosem/pyskiem (9,3).

Dobrowolne podejście do znanego tresera i nieznanej osoby

Trzy tygodnie po treningu przetestowano dobrowolne zachowania dążenia królików, aby zbadać ich interakcje z zapoznanym trenerem oraz z nieznaną osobą (obie kobiety). Przed testem obie osoby wzięły prysznic, używając tego samego żelu pod prysznic i szamponu, a następnie ubrały ten sam rodzaj odzieży i sprzętu ochronnego (rękawiczki, maski, siatki na włosy). W kojcu dla zwierząt przeprowadzono dwie 5-minutowe próby z 2-minutową przerwą pomiędzy nimi. Jak pokazano na Rysunku 4A, zapoznany trener i nieznana osoba siedzieli (w tej samej pozycji) naprzeciwko siebie na podłodze kojca, tyłem do jego ściany. Z kojca usunięto dwa domki; pozostały domek oraz tunel umieszczono przy pozostałych dwóch ścianach, w tej samej odległości od obu osób. W 2^nd próbie osoby te zamieniły się miejscami, aby wykluczyć potencjalne preferencje przestrzenne królików. Podczas 5-minutowych prób nie poruszały się ani nie rozmawiały. Jeśli królik gryzł spodnie lub uszczypnął w nogę, delikatnie przesuwano dłoń w stronę zwierzęcia, aby je powstrzymać. Należy zaznaczyć, że obserwacje poszczególnych zwierząt prowadzono w obrębie grupy, co oznacza, że króliki mogły wchodzić w interakcje ze sobą podczas obu prób.

Nagrania wideo przeanalizowano retrospektywnie przy użyciu programu BORIS⁵³. Zgodnie z etogramem zdefiniowanym dla tego badania, uznano, że królik wchodzi w interakcję z osobą, gdy wszystkie cztery łapy znajdowały się w kwadracie o wymiarach 70 cm × 70 cm wokół danej osoby lub na linii granicznej tego kwadratu. Ponadto monitorowano, czy królik kładzie obie przednie łapy na nogach lub wskakuje na kolana (kładąc na nich wszystkie cztery łapy).

Rysunek 4B przedstawia czas interakcji królików z dwiema osobami. Test znaków rang Wilcoxona wykazał, że czas interakcji z trenerem oraz z osobą nieznajomą różnił się istotnie w 1^st próba (z = -2,040, p = 0,041, współczynnik korelacji Pearsona r = 0,57), lecz nie w 2^nd próba (z = 0,245, p = 0,807, r = 0,07). W 1.^Wprowadzenie w trakcie próby króliki poświęciły więcej czasu na interakcję z trenerem.

Trzy (#1, #5, #6) i pięć (#1, #6, #7, #8, #12) królików położyło przednie łapy na nogach trenera odpowiednio w próbie 1 i 2. Pięć zwierząt wskoczyło wszystkimi czterema łapami na kolana trenera (próba 1: #1, #3, #5, #6; próba 2: #9). Podczas gdy cztery zwierzęta (#1, #2, #8, #9) w 1^st próbie i trzy (#1, #4, #8) zwierzęta w 2^nd próbie wspięły się przednimi łapami na nogi nieznanej osoby, żadne z nich nie wskoczyło wszystkimi czterema łapami na jej kolana. Średnia różnic w liczbie „dotknięć przednimi łapami nóg” nie różniła się istotnie między trenerem a nieznaną osobą ani w próbie 1 (z = -0.264, p = 0.792, r = 0.07), ani w próbie 2 (z = -0.707, p = 480, r = 0.20).

Wpływ technik manipulowania na zachowanie królików wobec „urządzenia do manipulowania”

Aby zbadać, czy techniki stosowane do podnoszenia królików z podłoża wpłynęły na ich zachowanie, po wykonaniu tej procedury przeprowadzono 2-minutową obserwację behawioralną w ramach ogólnego badania w dwa kolejne dni (Rycina 1). Obserwację tę przeprowadzono u siedmiu zwierząt.

W 1. dniu króliki zostały zabrane do boksu transportowego. W tym celu zwierzęta podążały za kijkiem zachęcającym do wnętrza boksu, który następnie zamknięto i przeniesiono na stół badawczy, zgodnie z opisem w kroku treningowym 7.5. Następnie delikatnie przeniesiono je z boksu na stół, podtrzymując ciało zwierzęcia obiema dłońmi/ramionami. Przeprowadzono kontrolę stanu zdrowia (obejmującą palpację ciała, badanie wzrokowe uszu, oczu, nozdrzy, siekaczy oraz okolic okołoodbytniczo-płciowych), po czym podano im nagrodę w postaci pokarmu. Po kontroli stanu zdrowia zwierzęta zostały delikatnie skierowane dłońmi z powrotem do boksu transportowego. Na stole badawczym nie używano kijka zachęcającego, aby dłonie tresera pozostały wolne i mogły bezpiecznie podtrzymywać zwierzęta. Gdy króliki wróciły do boksu i zamknięto drzwiczki, boks przeniesiono do kojca i otwarto drzwiczki. Królik został poprowadzony kijkiem zachęcającym do wyjścia z boksu, po czym zaprezentowano nagrodę pokarmową, zgodnie z opisem w kroku treningowym 7.6.

W drugim dniu króliki chwytać należy konwencjonalną techniką rutynowo stosowaną przez opiekunów zwierząt (tj. unieruchamiać je jedną ręką za kark i krótko podnosić na drugie ramię, tak aby głowa była skierowana w stronę zgięcia łokcia). Następnie przeniesiono je na stół badawczy i przeprowadzono kontrolę stanu zdrowia, zgodnie z powyższym opisem. Po kontroli stanu zdrowia z miseczki z nagrodami zaoferowano im pokarm. Na koniec ponownie unieruchomiono je za kark i krótko podniesiono na ramię, aby przenieść je z powrotem do zagrody. Po zwolnieniu zwierząt ponownie zaoferowano im pokarm w ramach nagrody.

Po zaoferowaniu nagrody pokarmowej królikom w kojcu, trener usiadł na podłodze bez wchodzenia w interakcje ze zwierzętami, a następnie nagrano 2-minutowy film, który poddano retrospektywnej analizie za pomocą programu BORIS⁵³. Należy zaznaczyć, że obserwacje poszczególnych osobników prowadzono w obrębie grupy, ponieważ powinny być one monitorowane w ich naturalnym środowisku. Oznacza to, że króliki mogły wchodzić ze sobą w interakcje. Zbadano i zdefiniowano następujące parametry: czas spędzony na interakcji z trenerem lub transporterem (tzn. królik znajdował się w strefie interakcji z trenerem lub transporterem, gdy nos znajdował się w odległości mniejszej niż długość ciała od trenera lub pudełka); czas spędzony w transporterze (zdarzenie to miało miejsce, gdy zwierzę znajdowało się w strefie interakcji z pudełkiem; rozpoczynało się, gdy króliki wchodziły do środka wszystkimi czterema łapami i kończyło się, gdy jedna lub więcej łap znalazło się poza pudełkiem); czas spędzony na jedzeniu (tzn. królik spożywał słomę, siano, pelet lub odchody; żucie ubrań lub butów trenera nie było uznawane za jedzenie); czas spędzony na ukrywaniu się (zdarzenie to rozpoczynało się, gdy królik wchodził do domku lub tunelu wszystkimi czterema łapami; kończyło się, gdy królik opuszczał schronienie jedną lub wieloma łapami); wskakiwanie na kolana (tzn. królik wskakiwał na kolana trenera i opierał na nich wszystkie cztery łapy; zdarzenie to miało miejsce, gdy zwierzę znajdowało się w strefie interakcji z trenerem); opieranie przednich łap o nogi (tzn. królik kładł obie przednie łapy na nogach trenera; zdarzenie to miało miejsce, gdy zwierzę znajdowało się w strefie interakcji z trenerem).

Analiza behawioralna została przeprowadzona przez trenera oraz osobę całkowicie zaślepioną w stosunku do realizowanej procedury. Zgodnie z Landis i Koch⁵⁴, niezawodność między sędziami dla trenera i osoby zaślepionej, obliczona przy użyciu programu BORIS⁵³ (Kappa Cohena), była od znaczącej do niemal idealnej. Do dalszych analiz wykorzystano dane wyekstrahowane przez zaślepionego obserwatora.

Testy znaków Wilcoxona wykazały, że konwencjonalna technika chwytania znacząco skróciła czas interakcji z „urządzeniem do chwytania”, tzn. sumę czasu interakcji z trenerem i pudełkiem po podniesieniu zwierzęcia (z = 2.366, p = 0.018, r = 0.89; Rysunek 5A). Technika chwytania nie wpłynęła znacząco na czas interakcji z trenerem (z = 1.014, p = 0.310, r = 0.28; Rysunek 5B). W przeciwieństwie do tego, podnoszenie królików za pomocą pudełka zwiększyło czas interakcji z pudełkiem (z = 2.366, p = 0.018, r = 0,66; Rysunek 5C) oraz czas spędzony w pudełku (z = 2.201, p = 0.028, r = 0.61; Rysunek 5D) w porównaniu do konwencjonalnej techniki chwytania. Ponadto zwierzęta spędzały więcej czasu chowając się w schronieniach po podniesieniu za pomocą konwencjonalnej techniki chwytania (z = -1.992, p = 0.046, r = 0.046; Rysunek 5F).

Technika manipulacji nie miała istotnego wpływu na czas spędzony przez zwierzęta na jedzeniu (z = 0.944, p = 0.345, r = 0.26; Rysunek 5E), liczbę królików kładących przednie łapy na nogach trenera (test McNemara: p = 1.000) ani liczbę królików, które wskoczyły trenerowi na kolana (test McNemara: p = 0.500). Niezależnie od techniki manipulacji, królik nr 9 wskoczył trenerowi na kolana, a królik nr 12 położyła przednie łapy na nogach trenera. Ponadto króliki nr 8 i nr 11 położyły przednie łapy na nogach po tym, jak zostały podniesione wraz z boksem transportowym.

Podczas gdy nagroda pokarmowa oferowana na stole badawczym została przyjęta przez wszystkie króliki po krótkim transporcie w pudle, tylko jeden królik (#8) zaakceptował ją po zastosowaniu konwencjonalnej techniki manipulacji. Różnica ta była istotna (test McNemara: p = 0.031). W kojcu nagroda pokarmowa została przyjęta przez sześć królików (wszystkie z wyjątkiem #7) po opuszczeniu pudła transportowego oraz przez cztery króliki (#7, #9, #10 i #12) po zwolnieniu z uścisku (konwencjonalna technika manipulacji; test McNemara: p = 0.625).

Rycina 1: Harmonogram czasowy. Wszystkie sesje habituacji, treningu i generalizacji, a także obserwacje behawioralne były przeprowadzane rano, przed karmieniem i sprzątaniem. W 1. tygodniu (tj. cztery dni po przybyciu) opiekunowie zwierząt oraz autor korespondencyjny (wszystkie kobiety) przeprowadzili pięć sesji warunkowania kontekstowego/habituacji (od poniedziałku do piątku; sekcja protokołu 3), po których nastąpił 3-tygodniowy okres treningowy w tygodniach 2-4 (od poniedziałku do piątku; sekcje protokołu 4-9). Sesje treningowe były prowadzone przez autora korespondencyjnego, który jest lekarzem weterynarii wyspecjalizowanym w nauce o zwierzętach laboratoryjnych i doświadczonym w trenowaniu królików, myszy, kurczat i koni. Następnie przez dwa kolejne dni przeprowadzono obserwacje behawioralne, aby zbadać, czy technika podnoszenia królików z podłoża wpływała na ich zachowanie. W 5. tygodniu przeprowadzono pięć sesji generalizacji (od poniedziałku do piątku), aby ocenić, czy króliki wykonają wyuczone zachowania docelowe w obecności osoby innej niż trener. W 6. i 7. tygodniu (w czwartki) oraz w 14. tygodniu (poniedziałek/wtorek) trener, w ramach cotygodniowej kontroli stanu zdrowia, sprawdzał, czy króliki utrzymały i wykazują zachowania docelowe. W 7. tygodniu przeprowadzono test dobrowolnego podejścia do trenera i nieznanej osoby, aby zbadać reakcje behawioralne królików wobec osób znanych i nieznanych. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Rysunek 2: Arena treningowa. Arena treningowa (patrz Tabela materiałów) została przygotowana na kilka minut przed rozpoczęciem treningu. (A) Aby ułatwić transport i montaż, arena składała się z dwóch części, które zostały połączone ze sobą w zagrodzie. (B) Dwa rzędy przezroczystych paneli plastikowych utworzyły arenę o wymiarach około 136 cm × 90 cm × 70 cm. Drzwi zostały przymocowane do pozostałych paneli za pomocą opasek zaciskowych, co umożliwiało ich otwieranie i zamykanie. Drzwi można zablokować za pomocą klipsa. Ponieważ ściany areny treningowej były przezroczyste, królik po wejściu do areny miał kontakt wizualny, węchowy i akustyczny z członkami grupy. W arenie można umieścić niski stołek/stopień jako siedzisko dla trenera oraz, w zależności od trenowanego zachowania docelowego, wagę lub boks transportowy. Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.

Rysunek 3: Miseczka z nagrodą z zintegrowanym klikerem. Miseczka z nagrodą została wydrukowana w technologii 3D z białego polikwasu mlekowego (PLA). Wymiary kwadratowej miseczki: 8 cm × 8 cm × 3 cm; wymiary cylindrycznego uchwytu: 9,5 cm × 2,3 cm. Do uchwytu przymocowano kliker palcowy (patrz Tabela materiałów). Plik do druku 3D miseczki z nagrodą znajduje się w Uzupełniającym Pliku Kodowym 1. Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rysunek 4: Test dobrowolnego zbliżania się. (A) W dwóch 5-minutowych próbach znany trener oraz nieznana kobieta siedzieli naprzeciw siebie w zagrodzie, tyłem do jej ścian. Domek i tunel umieszczono przy dwóch pozostałych ścianach w tej samej odległości od obu osób. (B>) Dla każdego królika przeanalizowano czas trwania interakcji z osobą. Przyjęto, że królik wchodził w interakcję z osobą, gdy wszystkie cztery łapy znajdowały się w kwadracie 70 cm × 70 cm wokół danej osoby lub na linii brzegowej tego kwadratu. Symbole wskazują dane dla każdego pojedynczego zwierzęcia. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rysunek 5: Wpływ technik manipulacji na zachowanie królików. (A-F) Ilustracje danych behawioralnych zebranych od siedmiu królików po ich manipulacji przy użyciu transportera lub metodą konwencjonalną (tzn. poprzez unieruchomienie za kark i podniesienie na ramieniu). Ponieważ trener oraz transporter zostały uznane za „urządzenia manipulacyjne”, (A) ten panel przedstawia sumę paneli B i C. Symbole wskazują dane dla każdego pojedynczego zwierzęcia. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Królik	Liczba sesji treningowych potrzebnych do wypracowania docelowego zachowania
	Podążanie za celem	Ważenie	Wchodzenie do transportera	Stanie na tylnych łapach	Wskakiwanie na kolana
#1	1	1	2	2	2
#2	1	1	4	1	5
#3	2	1	3	1	4
#4	7	2	1	3	2 (krok 9.2)
#5	2	1	3	1	3
#6	2	1	2	1	1
#7	8	1	2	2	3 (krok 9.3+)
#8	2	1	2	1	1
#9	2	1	2	1	2
#10	2	2	3	3	5 (krok 9.3)
#11	2	1	2	2	4
#12	2	1	1	1	1
#13	2	3	1	2	4
Mediana (percentyl 25.–75.)	2	1	2	1	2.5
	(2–2)	(1–1.5)	(1.5–3)	(1–2)	(1–4)*

Tabela 1: Liczba sesji potrzebnych do wytrenowania zachowań celowych. Jeśli królik nie nauczył się ostatniego etapu zachowania celowego, w nawiasach wskazano ostatni osiągnięty etap treningu.

Definicja sesji treningowej: około 30 min na grupę (6-7 zwierząt); od poniedziałku do piątku przez trzy tygodnie; rozpoczyna się w momencie, gdy trener siada w zagrodzie i jest przygotowany do rozpoczęcia treningu; kończy się, gdy żadne z królików nie uczestniczy już w treningu lub wszystkie króliki osiągnęły końcowy krok docelowego zachowania; zwierzę może wykonać więcej niż jedną próbę w ramach jednej sesji.

* Króliki #4, #7, #10 zostały wyłączone z tego obliczenia, ponieważ nie osiągnęły końcowego etapu „skakania na kolana”.

Królik	Liczba sesji treningowych do momentu osiągnięcia końcowego etapu zachowania docelowego
	Ważenie (5 kroków szkoleniowych)	Wchodzenie do transportera (6 etapów treningu)	Hodowla (3 etapy szkolenia)	Skakanie na kolana (9 etapów treningu)
#1	1	3	1	1
#2	1	3	1	1
#3	1	3	1	F (9,3)
#4	F	F	F	3 (9.2)
#5	2	3	2	2
#6	1	1	3	3
#7	1	1	3	3 (9.3+)
#8	1	1	1	3
#9	1	1	1	3
#10	1	3	3	3 (9.3)
#11	1	1	3	F (9,3)
#12	1	1	3	3
#13	1	3	2	5
Mediana (25.–75. percentyl)	1	2	2	3
	(1–1)	(1–3)	(1–3)	(1.25–3)
	(z wyłączeniem #4)	(z wyłączeniem #4)	(z wyłączeniem #4)	(z wyłączeniem #3, #4, #7, #10, #11)

Tabela 2: Generalizacja. W ciągu pięciu sesji (od poniedziałku do piątku) opiekun zwierząt znany królikom polecał im wykonanie końcowych etapów (lub ostatniego osiągniętego etapu) wytrenowanych zachowań celowych. Jeśli nie osiągnięto końcowego etapu zachowania celowego, w nawiasach wskazano ostatni osiągnięty etap treningowy. F (failure – niepowodzenie) zaznaczono w przypadku, gdy zwierzę nie wykonało ostatniego etapu zachowania celowego, który został wcześniej osiągnięty podczas treningu. Definicja sesji: od poniedziałku do piątku w ciągu jednego tygodnia; rozpoczyna się w momencie, gdy opiekun zwierząt i trener siadają w zagrodzie; kończy się, gdy żaden z królików już nie bierze udziału w ćwiczeniu lub gdy wszystkie króliki wykazały końcowy etap (lub ostatni osiągnięty etap) pożądanego zachowania celowego; zwierzę może wykonać więcej niż jedną próbę w ramach jednej sesji.

Plik uzupełniający z kodem 1: Plik do druku 3D „miseczka z nagrodą”. Do druku można wykorzystać polikwas mlekowy (PLA). Prosimy kliknąć tutaj, aby pobrać ten plik.

Plik uzupełniający 1: Arkusz dokumentacyjny dla sześciu królików. Arkusz należy wydrukować lub otworzyć na tablecie w celu dokumentowania postępów w szkoleniu każdego królika. W każdej sesji szkoleniowej należy odnotować, jakie etapy szkolenia osiągnęły poszczególne zwierzęta lub czy wymagane były adaptacje protokołu. Należy również dokumentować wszelkie szczególne zdarzenia (np. czynniki zewnętrzne, pogorszenie stanu zdrowia). Prosimy kliknąć tutaj, aby pobrać ten plik.

Plik uzupełniający 2: Uproszczone protokoły szkoleniowe. Tabele opisują w uproszczony sposób kroki sekcji 3-9 protokołu. W celu uzyskania szczegółowych informacji należy zapoznać się z krokami protokołu w głównym manuskrypcie. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.

Dyskusja

Protokoły szkoleniowe zostały opracowane w celu udoskonalenia rutynowych procedur, takich jak obchodzenie się z królikami, inspekcje zdrowotne i ważenie. Ich wykonalność została oceniona w tym badaniu eksploracyjnym z wykorzystaniem trzynastu samic białych królików nowozelandzkich. Protokoły treningowe mogą być niezawodnie stosowane w celu skutecznego szkolenia królików. Większość królików była w stanie nauczyć się zachowań związanych z celami zdefiniowanymi w protokołach treningowych w czasie krótszym niż 3-tygodniowy okres treningowy, zapamiętywała je po 1-tygodniowych przerwach treningowych i uogólniała je na inną osobę niż trener. Trzeba było wprowadzić niewiele zmian w protokole, aby sprostać potrzebom poszczególnych zwierząt. Głównym wnioskiem z niniejszego badania było to, że udoskonalona technika chwytania królików, opisana w protokołach treningowych, była mniej awersyjna niż konwencjonalna technika obchodzenia się. Co ciekawe, wyszkolone króliki wykazywały swoje zachowania eksploracyjne nie tylko w stosunku do znajomego trenera, ale także do nieznajomej osoby w teście dobrowolnego podejścia.

Znaczenie celu

Cel ten posłużył jako podstawa dla niniejszego protokołu szkoleniowego. Podczas wprowadzania celu zwierzęta dowiedziały się, że ich zachowanie wpływa na środowisko i generuje konsekwencje. Wprowadzenie celu buduje zaufanie między człowiekiem a zwierzęciem, jak pokazano na przykładzie królika #4, zajęło to 7 sesji treningowych, zanim podążył za kijem docelowym na arenę treningową, ale szybko nauczył się następujących zachowań celu (tj. w ciągu 1-3 sesji treningowych). Ten królik #4 wydawał się zdobywać zaufanie do trenera podczas wprowadzania celu, co ułatwiło trening innych zachowań związanych z celem. Jednak ten królik nadal nie miał zaufania do innych osób i nie był skłonny do pokazywania większości zachowań celowych w sesjach uogólniających.

Należy zauważyć, że cel nie został zdefiniowany jako punkt końcowy w niektórych sekcjach protokołu. Zamiast tego, na przykład, zwierzęta musiały podążać za celem przez zmienną liczbę chmielu lub pozostawać na skali przez zmienną liczbę sekund. Zmienny wzorzec nagradzania został wybrany, aby zwiększyć i utrzymać uwagę i motywację królików podczas treningu.

Sygnały

Po pomyślnym wykonaniu kroku 5.1 przez króliki, we wszystkich kolejnych sesjach treningowych trener umieszczał cel w bliskiej odległości od nosa królika, aby zasygnalizować królikowi, że rozpoczęła się próba treningowa. Jeśli królik dotknął celu nosem/ustami, rozważano chęć udziału w treningu i rozpoczynano szkolenie.

Obecne protokoły nie zawierały żadnych innych sygnałów, np. waga, skrzynka transportowa czy wskazówka nie były uznawane za sygnały. Zamiast tego tarcza była używana do prowadzenia zwierzęcia na arenę treningową, na wagę, do skrzyni transportowej, w powietrze (hodowla) lub na kolana trenera. Oznacza to, że zachowania związane z celem "ważenie", "wchodzenie do skrzyni transportowej", "wstawanie" i "skakanie na kolanach" były modyfikacjami "podążania za celem". Powodem tego były wymagania dotyczące protokołu szkolenia: powinno być możliwe do przeprowadzenia przez personel obiektów dla zwierząt, który może nie być ekspertem w dziedzinie szkolenia zwierząt, i powinno być łatwe do zintegrowania z codzienną rutyną pracy. Dlatego protokoły muszą być skuteczne i szybko osiągać cele w zachowaniach.

Jednak ręka, która jest umieszczona przed królikiem (krok 8.3), waga lub pudełko transportowe również mają potencjał, aby stać się zarówno sygnałem, jak i celem dla łap. W związku z tym możliwe jest zdefiniowanie dalszych kroków, które wykraczają poza obecne protokoły i nie wymagają użycia drążka tarczowego. Na przykład, gdy tylko królik zobaczy łuskę, łuska sygnalizuje królikom, aby wskoczyły na nią wszystkimi czterema łapami.

Dostosowania protokołów

Chociaż można się spodziewać, że fenotyp prawie identycznych genetycznie zwierząt laboratoryjnych jest bardzo podobny, istnieją behawioralne "różnice między osobnikami, które są spójne w czasie i w różnych sytuacjach [i] są określane jako osobowość"⁵⁵, np. niektóre zwierzęta są raczej nieśmiałe, a inne^odważne56. Nieśmiałe, mniej eksploracyjne zwierzęta mogą potrzebować więcej czasu, aby nauczyć się zdefiniowanych zachowań docelowych w protokole (np. królik #4). Nawet jeśli standardowe protokoły szkolenia mogą być odpowiednie dla większości, szkolenie musi uwzględniać potrzeby poszczególnych zwierząt i w razie potrzeby dostosowywać się do nich²⁶. W związku z tym należy określić dodatkowe mniejsze etapy pośrednie dla tych królików, które nie nauczą się kroku szkolenia w ramach protokołu. Dodatkowe etapy szkolenia pośredniego powinny pomóc im z powodzeniem przejść do następnego etapu. Zwłaszcza, że plany treningowe są opracowywane w teorii, a następnie testowane w praktyce, może się okazać, że do wytrenowania określonego zachowania docelowego wymagane są dodatkowe kroki treningowe.

W odniesieniu do obecnych protokołów treningowych, niektóre etapy treningu pośredniego musiały zostać dodane dla zachowań docelowych "podążanie za celem", "wchodzenie do skrzyni transportowej", "wychowywanie się" i "skakanie na kolanach", jak opisano szczegółowo w sekcji dotyczącej reprezentatywnych wyników, ponieważ poszczególne zwierzęta nie kontynuowały następnego etapu treningu. Co ciekawe, kroki pośrednie 8,2+ i 9,3+ były wymagane przez większość królików, co podkreśla ich znaczenie. W związku z tym kroki te zostały dodane jako uwaga do protokołów szkoleniowych.

Alternatywnie, do zdefiniowanego kroku 8.2+, trener może położyć rękę na podłodze z dłonią skierowaną do góry i pozwolić królikowi nadepnąć na rękę jedną, a ostatecznie obiema przednimi łapami. Co więcej, można sobie wyobrazić, że królik wymaga dodatkowych kroków pośrednich przed krokiem 9.3+, np. najpierw królik kładzie jedną tylną łapę, a następnie obie tylne łapy na kolanach trenera. Jeśli królik nie zgadza się na dotyk w krokach 9.5-9.9, czas dotykania różnych części ciała może być stopniowo wydłużany. Co więcej, początkowo tylko palec wskazujący i środkowy mogły być używane do głaskania zwierząt z lekkim jak piórko naciskiem. Następnie liczbę palców używanych do dotykania i nacisk można zwiększyć w kilku krokach.

Doskonalenie technik obchodzenia się z odpadami

Można założyć, że obchodzenie się z nimi jest wysoce awersyjne, szczególnie u królików o nieśmiałej osobowości. Króliki są lądowymi zwierzętami drapieżnymi, a podnoszenie (tj. podnoszenie z podłogi) lub krępowanie (tj. trzymanie w ramionach człowieka) w celu przeprowadzenia inspekcji sanitarnej i procedury eksperymentalnej może powodować niepokój i niepokój. W protokołach treningowych wprowadzono jedną z opcji udoskonalenia metod obchodzenia się z królikiem: zamiast krępować królika za kark i podnosić królika na drugie ramię, królika można wprowadzić za pomocą kija tarczowego do pudełka i przenieść w pudełku na stół do badań,^{jak wcześniej sugerowano. 57}, gdzie królik jest delikatnie przenoszony z pudełka na stół. Alternatywnie górną część pudełka można zdjąć lub królika można prowadzić za pomocą drążka celowniczego po wyjęciu z pudełka.

Obserwacje behawioralne przeprowadzone po odebraniu królików przy użyciu konwencjonalnej techniki obchodzenia się lub skrzyni transportowej ujawniły, że konwencjonalna technika obchodzenia się wiązała się z większą liczbą zachowań związanych ze stresem i lękiem niż technika alternatywna. Wniosek ten został wyciągnięty z dużej liczby zwierząt odmawiających przyjęcia nagrody w postaci jedzenia na stole do badań oraz wydłużonego czasu spędzonego w ukryciu w schroniskach, gdy zastosowano konwencjonalną technikę obchodzenia się z nim. Co ciekawe, technika obchodzenia się nie wpłynęła na czas interakcji z trenerem, co wskazuje, że proces obchodzenia się mógł nie zaburzyć relacji człowiek-zwierzę. Jednak oprócz trenażera, skrzynia transportowa służyła również jako "urządzenie manipulacyjne" (tj. urządzeniem manipulacyjnym w technice konwencjonalnej był trenażer, urządzeniami manipulacyjnymi techniki alternatywnej był zarówno trenażer, jak i skrzynia transportowa). W związku z tym przeanalizowany został również czas interakcji ze skrzynią transportową. Chociaż króliki zostały właśnie odebrane z pudełkiem transportowym, spędziły więcej czasu na interakcji z pudełkiem lub w pudełku niż podczas podnoszenia konwencjonalną techniką. Sugerowało to, że skrzynia transportowa może kojarzyć się z pozytywnym afektem. Porównując czas spędzony na interakcji z oboma "urządzeniami manipulacyjnymi" (tj. suma czasu spędzonego na interakcji z pudełkiem i trenerem), technika obsługi pudełek wydłużyła czas interakcji z "urządzeniami manipulacyjnymi", tj. technika ta miała wyraźny pozytywny wpływ na reakcję behawioralną królików na "urządzenia manipulacyjne" w oczekiwaniu na bycie dotykanym. Podobne odkrycia dokonano na myszach laboratoryjnych, wykazując, że delikatne techniki obchodzenia się i szkolenie zmniejszyły stres i niepokój: zwierzęta, które zostały podniesione za pomocą tunelu lub złożonych rąk, spędzały więcej czasu na dobrowolnej interakcji z "urządzeniem manipulacyjnym" i wykazywały mniej zachowań związanych z lękiem niż myszy z ogonem^. Trening wydawał się wzmacniać ten efekt. Leidinger i in. wykazali, że myszy z delikatnym uchwytem (tunel / kubek) wykazywały mniej oddawania moczu, defekacji i wokalizacji, gdy były powstrzymywane przez kark i mniej unoszące się zachowanie w teście Morris Water Maze, gdy były trenowane przy użyciu PRT w porównaniu z niewyszkolonymi myszami¹³.

Wykonalność protokołów dla codziennej pracy - czas trwania szkolenia, utrzymanie i uogólnienie

Liczba sesji treningowych wymaganych do nauczenia się zachowania docelowego zależała od indywidualnego zwierzęcia i zachowań związanych z celem, które obejmowały różną liczbę kroków, począwszy od sekcji 3 do sekcji 9 protokołu przedstawionego powyżej.

W zależności od liczby zwierząt, którym udało się nauczyć zachowania docelowego i liczby adaptacji, które musiały zostać wprowadzone do protokołów dla poszczególnych zwierząt, etapy treningu miały różne poziomy trudności. Zachowanie "podążanie za celem" było pierwszym doświadczeniem treningowym królików i dlatego niektórym zwierzętom zajęło więcej czasu trenowanie tego zachowania niż inne zachowanie celowe, jak omówiono powyżej. Podczas gdy wszystkie zwierzęta mogły być szkolone w zakresie "ważenia" zgodnie z obecnym protokołem, wymagane były dodatkowe kroki pośrednie w przypadku "wejścia do skrzyni transportowej" przez dwa zwierzęta oraz "odchowywania" i "skakania na kolanach" przez prawie wszystkie króliki. Można to wytłumaczyć stopniem kontaktu fizycznego między zwierzęciem a trenerem, który był niezbędny do wykonywania różnych zachowań związanych z celem. "Ważenie" i "wchodzenie do skrzyni transportowej" nie wiązało się z żadnym fizycznym kontaktem między zwierzęciem a człowiekiem. Ostatni etap "odchowywania" (8.3) i kroki 9.2-9.4 "skakania na kolanach" wymagały od królików nawiązania kontaktu fizycznego z trenerem. Dodatkowo trener dotykał ramienia, grzbietu, zadu, uszu lub łap królika w krokach 9.5-9.9 "skakania na kolanach", zwiększając stopień kontaktu fizycznego między zwierzęciem a trenerem. Zaakceptowanie dotyku było trudniejsze dla niektórych królików niż dla innych. Jak wspomniano powyżej, korzystne było dostosowanie protokołów treningowych do tych zachowań związanych z celami i dodanie kroków pośrednich.

Jednak trzy króliki wymagały dodatkowych sesji treningowych, aby ukończyć zachowanie docelowe "skakanie na kolanach" (#4, #7, #10). Można wykluczyć upośledzenie fizyczne, które uniemożliwiało tym zwierzętom wskakiwanie na kolana trenera. Co więcej, króliki były w stanie wskoczyć na swoje domy, których wysokość była wyższa niż kolana trenera.

Zauważono, że dwa z tych trzech królików (#4 i #10) potrzebowały więcej czasu, aby przyzwyczaić się do trenera, a także nagrody w postaci jedzenia w sesjach habituacyjnych i częściowo potrzebowały więcej sesji treningowych, aby osiągnąć ostatni krok innych zachowań związanych z celem. Dotyczyło to również królika #7, który doznał kontuzji ogona z powodu walk w grupie od czwartej sesji habituacyjnej. Dlatego królik #7 został podniesiony, przeniesiony na stół do badań, leczony i sprawdzany codziennie przez 15 dni, co mogło skutkować zwiększoną ostrożnością wobec ludzi. Z jednej strony należy zauważyć, że na wyniki treningowe może mieć wpływ np. pogorszenie stanu zdrowia, zwiększony poziom stresu lub zaburzona relacja człowiek-zwierzę spowodowana innymi interwencjami. Z drugiej strony, obserwacje te pokazały, jak ważne jest przyzwyczajenie do trenera i nagrody w postaci jedzenia. Niektóre zwierzęta mogą potrzebować więcej czasu, aby zapoznać się z obecnością trenera i zaakceptować nagrodę w postaci jedzenia od trenera. Gdyby przeprowadzono dodatkowe sesje habituacyjne, króliki #4 i #10 mogłyby osiągać lepsze wyniki w sesjach treningowych. Znaczenie przyzwyczajania królików do ludzi zostało już opisane w literaturze. Hodowca komercyjny, od którego zakupiono króliki wykorzystane w tym badaniu, wprowadził niedawno regularne sesje pieszczot, które zmniejszyły zachowania związane ze stresem i wyeliminowały agresję⁵⁸. We wcześniejszym badaniu wykazano, że głaskanie i obchodzenie się z młodymi królikami zmniejsza zachowania związane z lękiem, zwiększa ich przyrost masy ciała i zmniejsza śmiertelność⁵⁹.

Gdy króliki nauczyły się różnych zachowań związanych z celem, nadal były w stanie je przejawiać po dwóch krótkich (jeden tydzień) i długich (około 7,5-9,5 tygodnia) przerwach treningowych, z wyjątkiem indywidualnych wyjątków. Obserwacje te mogą wskazywać na to, że wystarczy raz w tygodniu poprosić króliki o wykonanie wytrenowanych zachowań celowych, gdy wykonywane jest badanie ogólne i czyszczony jest pokój/kojec.

Dla wykonalności protokołu w codziennym życiu zawodowym ważne jest również, aby króliki uogólniały wytrenowane zachowania związane z celami na inne osoby niż trener. W przypadku urlopu lub choroby, inna osoba musi kontynuować szkolenie i opiekować się zwierzętami. Większość królików (dwanaście z trzynastu) uogólniła zachowania docelowe "ważenie", "wchodzenie do skrzyni transportowej" i "wychowiwanie" na opiekuna zwierzęcia, chociaż w niektórych przypadkach króliki potrzebowały więcej niż jednej sesji treningowej, aby pokazać pożądane zachowanie. "Ważenie" wydawało się najlepiej uogólniać; po których następują słowa "wejście do skrzyni transportowej" i "hodowla". Jednak "skakanie na kolanach" okazało się trudniejsze do uogólnienia na inną osobę. Zwierzętom zajęło więcej czasu, aby zademonstrować pożądane zachowanie (9.9.), a dwa króliki, które wcześniej nauczyły się ostatniego kroku 9.9, nie wykazały tego docelowego zachowania, prawdopodobnie z powodu wymaganego większego kontaktu fizycznego (patrz wyżej). Jeden królik (#4) nie wykazywał żadnych kroków zachowań związanych z celem: "ważeniem", "wchodzeniem do skrzyni transportowej" i "odchowywaniem" i nie był zainteresowany interakcją z opiekunem zwierzęcia. Królik #4 był jednym ze zwierząt, które potrzebowały więcej czasu, aby przyzwyczaić się do trenera i nagrody w postaci jedzenia podczas sesji habituacyjnych. Może to wskazywać na to, że dla niektórych^{osób korzystne są} dodatkowe sesje, podczas których opiekunowie zwierząt spędzają czas z królikami, przyzwyczajają je do przyjmowania od nich nagrody w postaci jedzenia i budują pozytywną więź. Króliki mogą być w stanie rozróżnić różne osoby, jak wykazano w przypadku szczurów⁶⁰. Kolejnymi czynnikami, które mogą potencjalnie wpływać na wyniki królików w sesjach z trenerem i opiekunem zwierząt, mogą być nieświadome sygnały, które trener dawał zwierzętom podczas sesji treningowych, np. pozycja kija do gry lub miski z nagrodą, pozycja ciała lub ruch. Jeśli trener nie jest świadomy tych sygnałów, nie zostaną one udokumentowane, a inne osoby nie będą naśladować tych sygnałów.

Ponadto umiejętności szkoleniowe osób pracujących ze zwierzętami, w tym rutyna posługiwania się kijem do tarczy i prezentacja nagrody, mogą wpływać na zachowanie zwierząt. Oprócz wiedzy na temat zasad uczenia się i komunikacji ze zwierzętami, potrzebne są praktyczne doświadczenia, aby skutecznie wyszkolić zwierzę⁶¹ i odzyskać celowe zachowanie. Ponieważ sesje uogólniania z udziałem osoby wykwalifikowanej i niewykwalifikowanej nie zostały porównane, nie można określić znaczenia czynnika "umiejętności treningowych". Jednakże, zgodnie z wiedzą autorów, duża część personelu zwierząt laboratoryjnych nie jest przeszkolona w zakresie szkolenia zwierząt, a zatem warunki, w których przeprowadzono sesje uogólniające (tj. z udziałem opiekuna zwierząt z niewielkim wcześniejszym doświadczeniem w szkoleniu z użyciem klikera) stanowiły realistyczne warunki w obiektach dla zwierząt laboratoryjnych.

Reprezentatywne dane zawarte w protokołach dają obiektom dla zwierząt wyobrażenie o obciążeniu pracą związaną z trenowaniem różnych zachowań związanych z celem. Dane te mogą pomóc obiektom hodowlanym w tworzeniu własnych harmonogramów pracy podczas wdrażania (części) protokołu. W zależności od indywidualnych zachowań zwierzęcia i celu, należy zarezerwować trochę dodatkowego czasu na proces uogólniania. Jednak czas pracy może się różnić w przypadku pracy z samcami królików lub inną rasą królików. W obiektach dla zwierząt należy przeprowadzić dyskusję na temat tego, czy istnieje odpowiedni czas i co należy zmienić, aby dać czas na szkolenie zwierząt.

Oprócz czasu potrzebnego na szkolenie zwierząt, należy wziąć pod uwagę, że szkolenie wymaga wykwalifikowanych trenerów, a nauczenie personelu, jak szkolić zwierzęta, może być również czasochłonne. Gdyby szkolenie było obowiązkową częścią kształcenia personelu zwierząt laboratoryjnych, tj. opiekunów zwierząt, weterynarzy i badaczy, wdrożenie szkolenia zwierząt w obiektach byłoby ułatwione i zajęłoby mniej czasu. Zgodnie z załącznikiem III do dyrektywy 2010/63/UE "zakłady ustanawiają programy habituacyjne i szkoleniowe odpowiednie dla zwierząt, procedur i czasu trwania projektu", tj. szkolenie zwierząt jest wymagane przez prawo. W Niemczech takie programy należy przedłożyć przy ubieganiu się o licencję na badania na zwierzętach. Wymaga to, aby osoby planujące eksperymenty na zwierzętach i pracujące ze zwierzętami laboratoryjnymi były wykwalifikowane w szkoleniu zwierząt. Jednak przynajmniej w Niemczech szkolenie zwierząt nie jest częścią harmonogramu szkoleń opiekunów zwierząt w dziedzinie badań i kliniki 62,63,64. Ponadto nie jest ona wyraźnie wymieniona w zaleceniach UE dotyczących ram kształcenia i szkolenia⁶⁵ . Dlatego, dopóki szkolenia nie zostaną wdrożone w tych przepisach, ciągły rozwój zawodowy skupiający się na treningu pozytywnego wzmacniania wymaga większej uwagi. Personel zajmujący się zwierzętami laboratoryjnymi musi nauczyć się zasad uczenia się i technik szkolenia, niezbędnych kryteriów, przekazywania procedur między trenerami, prowadzenia dokumentacji oraz sposobu reagowania na zwierzęta, które nie uczestniczą w zajęciach w pożądany sposób, aby zapewnić spójność i przewidywalność.

Interakcja człowiek-zwierzę

Intensywny czas interakcji człowiek-zwierzę podczas sesji treningowych zapewnia optymalne warunki do wzmocnienia relacji między poszczególnymi królikami a trenerem^26,66. Pozytywna relacja człowiek-zwierzę jest korzystna dla dobrostanu zwierząt, ponieważ może zmniejszyć ich poziom stresu w warunkach hodowlanych i doświadczalnych⁶⁷. W obecnych protokołach treningowych trener bierze pod uwagę sprawczość królików i może zdecydować o udziale (lub nieudziale) w szkoleniu na zasadzie dobrowolności. Zapewnienie zwierzętom sprawczości jest korzystne dla ich dobrostanu ¹⁶ i dlatego powinno być wykorzystywane zarówno w eksperymentach, jak i w pomieszczeniach inwentarskich i hodowlanych. Istnieją różne poziomy sprawczości behawioralnej⁶⁸; uczestnictwo w PRT można przypisać poziomowi sprawczości opartej na działaniu, tj. "aktywnemu działaniu w celu osiągnięcia bieżących rezultatów [np. pozyskiwania żywności]"⁶⁸.

Analizując dobrowolne podejście królików do trenera i nieznanej osoby, można zaobserwować intensywną interakcję człowiek-zwierzę. Wyniki ujawniły, że wszystkie króliki, z wyjątkiem jednego zwierzęcia w^{pierwszym badaniu (} #12), wchodziły w interakcje zarówno z trenerem, jak i nieznaną osobą. Wydawało się, że rozpoznają trenera, ponieważ wykazali wyraźną preferencję do interakcji z trenerem w^{pierwszej próbie} , a niektórzy z nich skakali wszystkimi czterema łapami na kolana trenera; zachowanie, które nie zostało pokazane w stosunku do nieznanej osoby. Chociaż króliki spędzały więcej czasu na interakcji z trenerem niż z nieznaną osobą w^{pierwszym badaniu} , czas interakcji nie różnił się już w^{drugim badaniu} . Powodem tej obserwacji może być fakt, że króliki spodziewały się otrzymać nagrodę w postaci jedzenia od trenera w^{pierwszym badaniu} , a z powodu braku nagród w postaci jedzenia w teście podejścia dobrowolnego nie spędzały już więcej czasu z trenerem w^{drugim badaniu} . Dane te podkreśliły jednak, że wyszkolone króliki szybko przyzwyczaiły się do obecności nieznanej osoby i żaden z nich nie był zbyt nieśmiały, aby wchodzić w interakcje. W przeciwieństwie do tego, byli bardzo odkrywczy i zainteresowani nieznaną osobą. Ponieważ jednak nie badano nieprzeszkolonej grupy kontrolnej, wpływ treningu na zachowanie królików wynikające z dobrowolnego podejścia jest niejasny.

Hipoteza wyjaśniająca zachowanie królika #12 w^{pierwszym badaniu jest} taka, że osobnik ten nadal musiał przyzwyczaić się do obecności nieznanej osoby w^{pierwszym badaniu i} był bardziej zainteresowany interakcją zarówno z trenerem (70 sekund), jak i nieznaną osobą (9 sekund) w^{drugim badaniu}. Króliki mają różne cechy osobowości, które mogą wpływać na poziom komfortu w pobliżu nieznanych osób, a co za tym idzie, na opóźnienie w zbliżaniu się lub czas trwania interakcji z osobą^69,70.

Ograniczenia

Zdajemy sobie sprawę, że wszystkie króliki w kojcu/pomieszczeniu, nie tylko ten uczestniczący w treningu, mogą usłyszeć kliknięcie (tj. warunkowy wzmacniacz) podczas sesji treningowej, a jego wzmacniający efekt może być osłabiony, ponieważ nagroda w postaci jedzenia (tj. naturalny/nieuwarunkowany wzmacniacz) nie jest prezentowana. Jeśli królik poza areną treningową wykazuje wytrenowane zachowanie i słyszy kliknięcie, ale nie jest prezentowane żadne jedzenie (a ten scenariusz występuje kilka razy), wytrenowane zachowanie może zostać wygaszone. Zjawisko to określa się mianem wymierania ^64,71. Ponieważ jednak wszystkie zachowania związane z celem obecnych protokołów zależą od celu przedstawionego przez trenera, jest mało prawdopodobne, aby wyginięcie nastąpiło w naszym środowisku treningowym.

Ponieważ ściany areny treningowej były przezroczyste, a arena treningowa znajdowała się w kojcu, króliki mogły się nawzajem widzieć, słyszeć i wąchać podczas treningu, co jest wyraźną zaletą związaną z dobrostanem. Co więcej, króliki mogły obserwować członków swojej grupy podczas sesji treningowych i uczyć się od siebie nawzajem. U szczurów wykazano wcześniej, że osobniki nauczyły się wykonywać zachowanie celowe, obserwując, jak ich kolega z klatki jest szkolony przez PRT⁴⁵. Fakt ten można uznać zarówno za zaletę, jak i wadę. Postęp w nauce zwierząt może być szybszy, gdy mogą się nawzajem obserwować. Jednak na dane dotyczące poszczególnych zwierząt mogą mieć wpływ wyniki członków grupy i nie mogą być one przypisywane wyłącznie szkoleniu poszczególnych zwierząt. W związku z tym szkolenie zwierząt bez kontaktu z członkami ich grupy lub królikami trzymanymi w jednym pomieszczeniu może trwać dłużej.

Obserwacje behawioralne osób (w teście podejścia dobrowolnego i po zastosowaniu różnych technik obchodzenia się) przeprowadzono w ich znajomym środowisku społecznym i grupie, aby uniknąć stresu i rozproszenia spowodowanego nowym środowiskiem i oddzieleniem od grupy, co z kolei wpłynęłoby na obserwacje behawioralne. Wadą jest jednak to, że króliki mogły wpływać na swoje zachowanie podczas sesji obserwacyjnych.

Efekty stosowania tych technik postępowania badano tylko na siedmiu zwierzętach, w tym trenera jako osobę zajmującą się zwierzętami. Autorzy planują badanie uzupełniające, w tym obliczenie a priori wielkości próby, aby odtworzyć wyniki z innymi osobami zajmującymi się obsługą i dokładniej zbadać różnice między technikami obsługi.

Wszyscy ludzie zaangażowani w szkolenie, obsługę i test dobrowolnego podejścia byli kobietami. Nie badano, czy wyniki treningowe królików lub ich zachowanie różniłyby się, gdyby zaangażowane były samce.

Obecne protokoły treningowe powinny dać czytelnikowi wyobrażenie o tym, co można wytrenować u królików, ale nie obejmują wszystkich potencjalnych zachowań celowych, które byłyby korzystne do trenowania u królików laboratoryjnych. Na przykład oznaczenie królika zgodnie z sugestią zawartą w sekcji protokołu dotyczącej ogólnych wymagań byłoby również warte trenowania przy użyciu PRT.

Jak wskazano powyżej, wybór odpowiedniej nagrody nie jest trywialny. Ze względu na ograniczenia higieniczne, stosowanie świeżych ziół jako nagród w postaci pożywienia jest niedozwolone w niektórych obiektach dla zwierząt laboratoryjnych, dlatego należy stosować mniej odpowiednie nagrody żywnościowe, takie jak nasiona słonecznika lub przysmaki na bazie zbóż. Jeśli chodzi o decyzję o nagrodzie w postaci jedzenia, niektóre zasady i przepisy dotyczące obecnych praktyk laboratoryjnych są szkodliwe dla dobrostanu zwierząt i skutecznego szkolenia, a zatem mogą wymagać ponownego rozważenia w każdym indywidualnym przypadku. Możliwe jest również zastosowanie alternatyw dla nagród w postaci jedzenia, np. delikatnych dotknięć lub interakcji z trenerem lub przedmiotów wzbogacających. Jednak trener musi upewnić się dla każdego zwierzęcia z osobna, że alternatywą jest nagrodzenie zwierzęcia, ponieważ nagroda jest nagrodą tylko wtedy, gdy królik naprawdę ją faworyzuje. Zwłaszcza dotyk może nie być odbierany jako nagroda przez wszystkie króliki.

Wnioski

Podsumowując, niniejsze badanie było pierwszym krokiem w kierunku wypełnienia luki w wiedzy na temat odpowiednich protokołów szkolenia królików laboratoryjnych. Samice królików rasy białej nowozelandzkiej mogą być szkolone do rutynowych procedur hodowlanych przy użyciu PRT i uogólniać zachowania docelowe, których się nauczyliśmy, na inne osoby, chociaż dodatkowy czas powinien być zarezerwowany na proces uogólniania. Zachowania związane z celem bez kontaktu fizycznego wydawały się łatwiejsze do nauczenia niż zachowania, które wymagały kontaktu fizycznego z ludźmi. Po pomyślnym zakończeniu treningu zachowań związanych z celem, wystarczyło przynosić je raz w tygodniu w ramach ogólnego badania i czyszczenia kojca. Protokoły treningowe uważane za ogólnie stosowane dla wszystkich królików są wygodne, ale trener musi mieć świadomość, że w niektórych przypadkach muszą być dostosowane do potrzeb zwierzęcia. Wyniki dotyczące technik obchodzenia się z królikami sugerowały, że podnoszenie królików za pomocą skrzyni transportowej zamiast krępowania ich za kark i podnoszenia ich na ramieniu było mniej awersyjne. Podsumowując, obecne protokoły zawierają wykonalne instrukcje dotyczące procesu przyzwyczajania i szkolenia królików i mogą służyć jako udoskonalenie w obiektach dla zwierząt laboratoryjnych.

Zwierzęta nie mogą cierpieć z powodu oszczędności pracy, czasu lub pieniędzy (przynajmniej zgodnie z niemiecką ustawą o dobrostanie zwierząt⁷²). Ważne jest, aby dbać o wszystkie zwierzęta i obchodzić się z nimi w jak najdelikatniejszy sposób. Ponieważ niewyszkolone zwierzęta cierpią w większym stopniu z powodu niepokoju i dystresu spowodowanego eksperymentalnymi i rutynowymi procedurami hodowlanymi niż ich wyszkolone^{odpowiedniki13}, szkolenie jest prostym środkiem doskonalącym, który skutecznie zapobiega doświadczaniu przez nie negatywnych stanów afektywnych.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Łóżko-r' Nest	The Andersons, Inc., Maumee, Stany Zjednoczone		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
Finger Clicker	ASCO		https://ascoshop.de/products/fingerclicker
G*Power		wersja 3.1.9.7
Heu-Proppen	Ssniff Spezialdiä ten GmbH, Soest, Niemcy		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
IBM Corp. wydany w 2020 r. IBM SPSS Statistics dla systemu Windows,  Armonk, Nowy Jork: IBM Corp	IBM Corp	w wersji 27.0.	w manuskrypcie określany jako "oprogramowanie do zaawansowanej analizy statystycznej"
Kaninchen Haltung + 25 mg/kg Salinomycyna-Natrium-Sondermischung	Ssniff Spezialdiä ten GmbH, Soest, Niemcy		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
Blok Lignocel	Lignocel J. Rettenmaier & Sö hne GmbH + Co KG, Rosenberg, Niemcy		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
Lillebro geschä lte Sonnenblumenkerne", Martina GmbH, Mü nchen, Niemcy) i Rainbow Foraging Bits (Bio-Serv, Flemington, USA)	Martina GmbH, Mü nchen, Niemcy		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
Microsoft Excel dla Microsoft 365 MSO	Microsoft	Corporation Wersja 2305	w rękopisie określanym jako "arkusz kalkulacyjny"
Nowa Zelandia Białe króliki	Charles River Laboratories Francja
Plattformwaage DE 35K5DL	KERN & SOHN GmbH, Balingen-Frommern, Niemcy		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
Pościel naukowa premium (delikatna i płatkowa)	SAFE, Augy, Francja		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
Rainbow Foraging Bits	Bio-Serv, Flemington, Stany		Zjednoczone Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
Przekąski fü r Kaninchen – 7 cm	TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Niemcy		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
Kij do celów ze zintegrowanym klikerem	TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Niemcy		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
Trixi Transportbox Capri Open Top	TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Niemcy		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.
Weiden-Heuball	JR FARM GmbH, Holzheim-Pessenburgheim, Niemcy		Pomyślne wdrożenie protokołu nie zależy od tego konkretnego produktu. Możesz użyć porównywalnych produktów innych firm.