Artykuł metodologiczny

Barwienie czerwienią Picrosiriusa do półilościowej oceny histopatologicznej odkładania się kolagenu w mysich modelach przewlekłego odrzucenia alloprzeszczepu płuc

2K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/66395

⸱

21 marca 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Thoracic Surgery, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg, 2Department of Plastic and Hand Surgery, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg, 3Department of Thoracic Surgery, Kyoto University Hospital, 4Department of Otolaryngology, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Czerwone barwienie Picrosiriusa to półilościowa metoda obiektywnej oceny odkładania się kolagenu w mysim zwłóknieniu płuc w sposób przestrzennie rozwiązany. Oprócz oceny całkowitego odkładania kolagenu, barwienie Picrosirius Red pozwala na różnicowanie włókien kolagenowych o różnej grubości.

Streszczenie

Zwłóknienie jest patofizjologiczną cechą przewlekłego odrzucenia po przeszczepie płuc i główną przeszkodą na drodze do długoterminowego przeżycia biorcy. Dostępnych jest kilka mysich modeli przeszczepu płuc do badania przewlekłego odrzucenia. Wykazują jednak niejednorodne wyniki dotyczące zmian zwłóknieniowych przeszczepu, a zakres histologiczny zwłóknienia jest w większości podawany jakościowo. Dlatego podejście rozdzielcze przestrzenne, które pozwala na analizę statystyczną, może pomóc w ocenie zwłóknienia w tych modelach. W niniejszym badaniu przedstawiono barwienie Picrosirius Red w celu półilościowej oceny organizacji kolagenu w mysich alloprzeszczepach płuc i porównano je ze standardowymi barwnikami Hematoxyliny i Eozyny, Trichromem Massona i Herovici. Barwienie przeprowadzono na wycinkach z dwóch różnych modeli przeszczepu myszy w oparciu o drobne i duże niezgodności kompleksu zgodności tkankowej (MHC). Metodę opracowano dla półilościowej analizy organizacji kolagenu w całych odcinkach płuc. W związku z tym może służyć jako narzędzie do mysich modeli eksperymentalnych zwłóknieniowych chorób płuc.

Wprowadzenie

Przeszczep płuc to zdecydowana opcja terapeutyczna dla pacjentów cierpiących na schyłkową chorobę płuc. Jednak długoterminowe przeżycie jest utrudnione przez przewlekłe odrzucenie, które dotyka 50% biorców w ciągu pierwszych pięciu lat po operacji1. Zwłóknienie małych dróg oddechowych i miąższu płuc jest histologiczną cechą charakterystyczną leżącą u podstaw postępującej utraty funkcji płuc w przewlekłym odrzucaniu alloprzeszczepu płuc2. Eksperymentalnie, przewlekłe odrzucenie alloprzeszczepu płuc można modelować za pomocą ortotopowego przeszczepu płuc u myszy między niedopasowanymi szczepami myszy MHC. Zaproponowano różne kombinacje szczepów w celu osiągnięcia fenotypu przewlekłego odrzucenia3. Wśród nich często stosuje się kombinację przeszczepu niewielkiego niedopasowanego dawcy C57BL/10 MHC i biorcy C57BL/64. Alternatywnie, płuca dawcy BALB/c mogą być przeszczepione biorcom C57BL/6 otrzymującym codzienne leczenie immunosupresyjne5. Modele te skutkują histologicznie różnymi stopniami zmian zwłóknieniowych6. Zmiany te są często zgłaszane jakościowo przy użyciu standardowej Hematoksyliny i Eozyny oraz barwienia Trichromem Massona.

Standardowe barwienie histologiczne za pomocą Hematoxyliny i Eozyny pozwala na przegląd próbki, ponieważ zabarwia ona jądra na niebiesko, podczas gdy cytoplazma i włókna kolagenowe wydają się czerwone. W przypadku barwienia trichromem Massona jądra są barwione na czarno, włókna kolagenowe są barwione na zielono do niebieskich, a tło, w tym cytoplazma, fibryna i mięśnie, jest czerwone. Ponieważ bejca Trichrome Massona może prowadzić do zaniżonych wartości, użycie czerwonej plamy Picrosirius jest uważane za korzystne7. Picrosirius Red to liniowy barwnik anionowy, który wiąże się z długimi kationowymi włóknami kolagenowymi i zapewnia bogate w kontrast czerwone zabarwienie. Co więcej, barwienie Picrosirius Red wzmacnia naturalną dwójłomność włókien kolagenowych w świetle spolaryzowanym krzyżowo8. W ten sposób można ocenić grubość włókien kolagenowych i upakowanie. Za pomocą filtra polaryzacyjnego tło ciemnieje i możliwe staje się rozróżnienie grubości osadzonego kolagenu. Podczas gdy grube włókna kolagenowe wydają się czerwone, cienkie włókna kolagenowe stają się zielone pod wpływem polaryzacji. Bezpośredni związek między dwójłomnością a podtypem kolagenu jest często opisywany w literaturze, przy czym dwójłomność czerwona jest przypisana do kolagenu I, a dwójłomność zielona do kolagenu III9.

Ten protokół opisuje użycie barwienia Picrosirius Red do oceny zwłóknienia w alloprzeszczepach płuc u myszy. Oprócz konwencjonalnego barwienia histologicznego pozwala na półilościową ocenę zmian zwłóknieniowych w mysich modelach przewlekłego odrzucenia, zapewnia sposób rozróżnienia grubych i cienkich włókien kolagenowych tylko w jednym barwieniu, jest opłacalny i łatwy do wykonania. Metoda ta może być równie dobrze zastosowana do innych mysich modeli eksperymentalnych charakteryzujących się zwłóknieniową przebudową miąższu płuca.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie protokoły dotyczące zwierząt są zgodne z zasadami etycznymi 3Rs w zakresie humanitarnego prowadzenia badań na zwierzętach i zostały zatwierdzone przez lokalną komisję etyki weterynaryjnej (Veterinäramt Kanton Zürich, Szwajcaria, numer badania 45/2014). Podobnie, czytelnicy powinni uzyskać zgodę odpowiednich instytucji przed przeprowadzeniem jakichkolwiek procedur na zwierzętach laboratoryjnych.

1. Pozyskiwanie próbek

  1. Przeprowadzić eksperymenty na zwierzętach zgodnie z indywidualnymi potrzebami i odpowiednią zgodą etyczną. Wszystkie operacje wykonuje jeden mikrochirurg, aby uniknąć dodatkowego wydłużenia czasu niedokrwienia.
    UWAGA: Aby uzyskać wyniki reprezentatywne dla naszych badań, należy pozyskać od Charles River Laboratories dorosłe samce myszy C57BL/6J, C57BL/10J i BALB/c wolne od specyficznych patogenów, o masie 27-30 g. W przypadku izograftów należy użyć zwierząt C57BL/6J zarówno jako dawców, jak i biorców. W modelu z niewielką niezgodnością (minor mismatched) należy przeszczepić płuca dawcy C57BL/10J biorcom C57BL/6J. W modelu z dużą niezgodnością (major mismatched) należy przeszczepić płuca dawcy BALB/c biorcom C57BL/6J, a po operacji codziennie wstrzykiwać podskórnie cyklosporynę (10 mg/kg/day) i metyloprednizolon (1.6 mg/kg/day)5. Do perfuzji należy użyć roztworu soli fizjologicznej, a płuca pobrać po 8 tygodniach (56 dniach).
  2. W celu eutanazji należy zaintubować zwierzę cewnikiem 20G i wentylować O2 z dodatkiem 2%-3% izofluranu. Odpowiednią głębokość znieczulenia potwierdza brak reakcji na uciśnięcie łapy.
  3. Wykonać medianową laparosternotomię poprzez nacięcie ściany brzusznej nożyczkami chirurgicznymi i przecięcie mostka na całej jego długości w celu odsłonięcia serca. Zidentyfikować żyłę główną dolną oraz uszko lewego przedsionka na podstawie ich lokalizacji anatomicznej.
  4. Szybko po sobie przeciąć żyłę główną dolną oraz uszko lewego przedsionka nożyczkami chirurgicznymi i przeprowadzić perfuzję zwierzęcia 3-5 mL 0.9% NaCl przez pierścień tętnicy płucnej za pomocą strzykawki, aby usunąć całą krew z krążenia płucnego.
    UWAGA: Eutanazję należy przeprowadzić zgodnie z odpowiednią zgodą etyczną. Można zastosować również inne metody. Zaleca się dokładne usunięcie krwi z krążenia płucnego, co można również osiągnąć poprzez perfuzję po zatrzymaniu krążenia.
  5. Usunąć perfundowane płuca za pomocą nożyczek.
  6. W celu utrwalenia inkubować próbki w 4% formalinie. Roztwór formaliny wstrzyknąć bezpośrednio do oskrzela i naczyń płucnych. Zanurzyć próbki w formalinie i inkubować przez co najmniej 6 h.
    UWAGA: W celu napowietrzenia płuc formaliną należy zastosować zstandaryzowaną procedurę, aby uzyskać porównywalne wyniki. Przykładowe protokoły takich procedur są opublikowane w innych źródłach10,11.
  7. Przyciąć organ zgodnie z potrzebami eksperymentalnymi. Przeciąć płuca poprzecznie na pół, aby na jednym skrawku ująć wszystkie części drzewa oskrzelowego.
  8. Przenieść próbki do automatycznego procesora tkanek w celu odwodnienia w sekwencji alkoholowej, przejrzystości w ksylolu i zatopienia w parafinie według następującego schematu: 70% etanol, 70% etanol, 80% etanol, 96% etanol, 100% etanol (po 1 h każdy), 100% etanol, 100% etanol, ksylol (po 2 h każdy), ksylol (1 h) oraz parafina 3x po 2 h.
  9. Roztopić parafinę i zatopić próbki w odpowiedniej orientacji w kasetkach do zatapiania z polioksymetylenu. Należy zadbać o to, aby próbki były zatopione powierzchnią cięcia skierowaną w dół. Użyć mikrotomu rotacyjnego do sekwencyjnego wycinania skrawków o grubości 5 µm. Pozostawić preparaty do wyschnięcia na 24 h w temperaturze 37 °C przed dalszą obróbką.

2. Deparafinizacja i nawodnienie preparatów parafinowych

  1. Usuń parafinię, inkubując próbki dwukrotnie w 100% ksylolu przez 5 min za każdym razem.
    OSTRZEŻENIE: Ksylol jest łatwopalny i szkodliwy dla zdrowia. Należy go używać wyłącznie pod wyciągiem (dygestorium).
  2. Nawodnij próbki w 100% etanolu, 100% etanolu, 95% etanolu, 70% etanolu i 50% etanolu przez 2 min za każdym razem. Następnie płucz przez 2 min w wodzie destylowanej.

3. Barwienie czerwienią picrosiriusową

  1. Barwić preparaty przez 8 min w roztworze hemalum Meyera. Płukać preparaty przez 10 min pod bieżącą wodą z kranu.
  2. Inkubować preparaty przez 1 h w roztworze Picrosirius Red. Jako roztwór Picrosirius Red można zastosować gotowy roztwór barwiący lub 0,1% Direct Red 80 lub Sirius Red F 3B (CI 35780) rozpuszczony w nasyconym kwasie pikrykowym.
    UWAGA: Kwas pikrykowy jest łatwopalny i silnie wybuchowy, dlatego należy z nim obchodzić się ostrożnie.
    UWAGA: Dostępnych jest wielu dostawców zestawów do barwienia Picrosirius Red, wymienionych w Tabeli materiałów. Należy zwrócić uwagę na różnice w cenie i metodach barwienia oraz zawsze przestrzegać instrukcji dostawcy. Zaleca się stosowanie zestawów barwiących z konkretnym indeksem koloru dla Sirius Red F 3B (CI 35780).
  3. Zanurzyć preparaty 5–10 razy w roztworze kwasu octowego (0,5%). Delikatnie potrząsnąć preparatami, aby fizycznie usunąć roztwór.
  4. Odwodnić preparaty w 95% etanolu, 100% etanolu, 100% etanolu, 100% ksylolu i 100% ksylolu przez 5 min w każdym kroku.
  5. Zamontować preparaty, dodając jedną kroplę medium montażowego na każdą próbkę i przykrywając szkiełkiem nakrywkowym. Pozostawić preparaty do wyschnięcia pod dygestorium.

4. Digitalizacja i przetwarzanie obrazu

  1. Ustaw ostrość próbek pod mikroskopem świetlnym przy użyciu odpowiedniego oprogramowania do obrazowania, aż obraz stanie się wyraźny i ostry. Dodaj filtr polaryzacyjny i dostosuj stopień polaryzacji, aż tło stanie się całkowicie ciemne lub czarne. Osiągnięcie jak najciemniejszego tła oznacza prawidłową polaryzację.
    UWAGA: Wizualizacja barwienia Picrosirius Red jest możliwa również przy użyciu konwencjonalnego światła przechodzącego i bez filtra polaryzacyjnego. W tym celu zaleca się stosowanie Sirius Red z Fast Green, ponieważ wykazano, że jest on bardziej czuły niż sam Sirius Red12,13. Mikroskopia polaryzacyjna jest jednak niezbędna do rozróżnienia grubych i cienkich włókien kolagenowych.
  2. Zeskanuj wszystkie próbki w całości przy powiększeniu 20x i wyeksportuj je do formatu .tiff. Przenieś pliki do oprogramowania Fiji14. Upewnij się, że preparaty zostały wcześniej odpowiednio oczyszczone i zastosuj zestandaryzowane ustawienia czasu ekspozycji oraz intensywności źródła światła.
  3. Obrysuj ręcznie próbkę i wytnij ją w oprogramowaniu za pomocą funkcji Edit > Clear Outside. Zmierz całkowitą powierzchnię, klikając Analyze > Measure.
    UWAGA: Wybór obszaru do pomiaru jest krytycznym krokiem w uzyskaniu wiarygodnych i porównywalnych wyników. Dzięki cyfryzacji i zaznaczeniu całej próbki wyświetlany jest reprezentatywny przekrój, a tkanki heterogeniczne są traktowane jako całość. Można jednak ograniczyć się do konkretnych obszarów w próbkach, takich jak opłucna lub poszczególne oskrzela. Należy pamiętać, aby zawsze wybierać obszary do porównania w sposób zestandaryzowany. W przypadku, gdy próbki wykazują dużą zmienność w stopniu napowietrzenia, zaleca się wyłączenie obszarów przestrzeni powietrznej z analizowanego obszaru15.
  4. Zmierz całkowitą zawartość kolagenu na próbkę, stosując próg kolorystyczny poprzez kliknięcie Image > Adjust > Color Threshold, a następnie dostosuj ustawienia, klikając Analyze > Analyze Particles. Ustaw Size = 1 - Infinity, Clear, Summarize. Brightness = 35 - 255. Hue = 2 - 130
    UWAGA: Odpowiednie ustawienie progów kolorystycznych jest kluczowe dla uzyskania wiarygodnych wyników.
  5. Powtórz procedurę dla grubych i cienkich włókien kolagenowych, dostosowując parametr Hue na kolor czerwony figure-protocol-1 dla grubych włókien kolagenowych (Hue 2-30) oraz żółto-zielony figure-protocol-2 dla cienkich włókien kolagenowych (Hue 31-130). Wynikiem będzie powierzchnia zabarwionych pikseli.
  6. Skonfiguruj makro do zautomatyzowanego przetwarzania, klikając Plugins > Macros > Record, a następnie powtórz czynność dla wszystkich próbek.
  7. Aby otrzymać końcowe wartości zestandaryzowane do powierzchni przekroju, podziel powierzchnię zabarwionych pikseli dla wszystkich parametrów przez całkowitą powierzchnię zmierzoną odpowiednio w krokach 4.3 i 4.5 dla każdej próbki.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Opisany powyżej protokół umożliwia obiektywną, półilościową ocenę odkładania kolagenu w tkance płuc myszy. Przebudowa włóknista jest patofizjologiczną cechą charakterystyczną przewlekłego odrzucania po transplantacji płuc. W związku z tym barwienie czerwienią Picrosirius Red zastosowano w modelach przewlekłego odrzucania allograftu płuc z wykorzystaniem lewostronnego ortotopowego przeszczepu płuc myszy. Transplantacja płuc z dużą niezgodnością MHC od dawcy BALB/c do biorcy C57BL/6 przy łagodnej immunosupresji prowadzi do...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Standardowe metody histologiczne, takie jak hematoksylina i eozyna oraz barwienie trichromowe Massona, są szeroko stosowane do wykrywania zmian zwłóknieniowych w płucach myszy w sposób przestrzennie rozdzielczy 16,19. Jednak często konieczne są dodatkowe metody, aby określić ilościowo te zmiany i ocenić skład kolagenu w tkance.

Barwienie Picrosirius Red zostało po raz pierwszy opisane w 1964 roku w celu identyfikacji kolagenu: pod mikr...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Birte Ohm jest wspierana przez-Ottenstein-Program for Clinician Scientists, Faculty of Medicine, University of Freiburg. Steffen U Eisenhardt jest profesorem Uniwersytetu Heisenberga w Niemieckiej Fundacji Badawczej (DFG) i wspierał tę pracę osobistymi grantami. Ponadto chcielibyśmy podziękować Sheenie Kreuzaler za jej pomoc techniczną. Rysunek 1 został stworzony z pomocą Biorender.com. Obrazowanie wykonano w Lighthouse Core Facility, który jest częściowo finansowany przez Wydział Medyczny Uniwersytetu we Fryburgu (numery projektów 2023/A2-FOL; 2021/B3-FOL), DKTK i DFG (numer projektu 450392965).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Kwas octowyHoneywell, Charlotte, USA33209
Axio ObserverZeiss, Oberkochen, Niemcy4633000956 (numer seryjny)
Szkiełko nakrywkowe 1.5Roth, Karlsruhe, NiemcyKCY5.1
Formaldehyd 37%Fisher Scientific, Leicestershire, Wielka BrytaniaF/1501/PB15
Roztwór hemalumu MeyeraMerck, Darmstadt, Niemcy109249
Picrosirius Red SolutionMorphisto, Offenbach am Main, Niemcy13422alternatywy, które można zastosować: ab150681, abcam, Cambridge, Wielka Brytania; SRS250 ScyTek Laboratories, Logan City US
Filtr polaryzacyjnyZeiss, Oberkochen, Niemcy0000000-1121-813
Mikrotom obrotowy, HistoCore AUTOCUTLeica, Wetzlar, Niemcy149AUTO00C1, 14051956472
Medium montażowe ROTI HistokittRoth, Karlsruhe, Niemcy6638.1
ROTI Plast ParaffinRoth, Karlsruhe, Niemcy6642.5
Kasety do zatapiania Rotilabo, POMRoth, Karlsruhe, NiemcyK113.1
Superfrost Plus Adhesion Microscope Slideepredia, Portsmouth, Wielka BrytaniaJ1800AMNZ
Procesor tkanek Leica, Wetzlar, NiemcyTP 1020
Software
Fiji wersja oprogramowania 2.14.0/1.54fOprogramowanie do obrazowania Open Source
ZEN 3.4.91Zeiss, Oberkochen, Niemcy

Bibliografia

  1. Weigt, S., DerHovanessian, A., Wallace, W., Lynch, J., Belperio, J. Bronchiolitis Obliterans Syndrome: The Achilles' heel of lung transplantation. Semin Respir Crit Care Med. 34 (3), 336-351 (2013).
  2. Verleden, G. M., et al. Chronic lung allograft dysfunction: Definition, diagnostic criteria, and approaches to treatment-A consensus report from the Pulmonary Council of the ISHLT. J Heart Lung Transplant. 38 (5), 493-503 (2019).
  3. Lama, V. N., et al. Models of lung transplant research: A consensus statement from the National Heart, Lung, and Blood Institute workshop. JCI Insight. 2 (9), e93121(2017).
  4. Martinu, T., et al. Spectrum of chronic lung allograft pathology in a mouse minor-mismatched orthotopic lung transplant model. Am J Transplant. 19 (1), 247-258 (2019).
  5. de Vleeschauwer, S., et al. Chronic rejection pathology after orthotopic lung transplantation in mice: The development of a murine BOS model and its drawbacks. PLoS One. 7 (1), e29802(2012).
  6. Yamada, Y., et al. Chronic airway fibrosis in orthotopic mouse lung transplantation models-An experimental reappraisal. Transplantation. 102 (2), e49-e58 (2018).
  7. Whittaker, P., Kloner, R. A., Boughner, D. R., Pickering, J. G. Quantitative assessment of myocardial collagen with picrosirius red staining and circularly polarized light. Basic Res Cardiol. 89 (5), 397-410 (1994).
  8. Puchtler, H., Waldrop, F. S., Valentine, L. S. Polarization microscopic studies of connective tissue stained with picro-sirius red FBA. Beitr Pathol. 150 (2), 174-187 (1973).
  9. Junqueira, L. C. U., Cossermelli, W., Brentani, R. Differential staining of collagens type I, II and III by Sirius Red and polarization microscopy. Arch Histol Jpn. 41 (3), 267-274 (1978).
  10. Davenport, M. L., Sherrill, T. P., Blackwell, T. S., Edmonds, M. D. Perfusion and inflation of the mouse lung for tumor histology. J Vis Exp. (162), e60605(2020).
  11. Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research. J Vis Exp. (102), e52964(2015).
  12. Segnani, C., et al. Histochemical detection of collagen fibers by Sirius Red/Fast Green is more sensitive than van Gieson or Sirius Red alone in normal and inflamed rat colon. PLoS One. 10 (12), e0144630(2015).
  13. Courtoy, G. E., et al. Digital image analysis of Picrosirius Red staining: A robust method for multi-organ fibrosis quantification and characterization. Biomolecules. 10 (11), 1585(2020).
  14. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  15. Ségard, B. D., et al. Quantification of fibrosis extend and airspace availability in lung: A semi-automativ ImageJ/Fiji toolbox. PloS. 2 (2), e0298015(2024).
  16. Zhou, X., Moore, B. B. Lung section staining and microscopy. Bio Protoc. 7 (10), e2286(2017).
  17. Herovici, C. Picropolychrome: histological staining technic intended for the study of normal and pathological connective tissue. Rev Fr Etud Clin Biol. 8, 88-89 (1963).
  18. Sweat, F., Puchtler, H., Rosenthal, S. Sirius Red F3BA as a stain for connective tissue. Arch Pathol. 78, 69-72 (1964).
  19. Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections. Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).
  20. Montes, G. S., Junqueira, L. C. The use of the Picrosirius-polarization method for the study of the biopathology of collagen. Mem Inst Oswaldo Cruz. 86, Suppl 3 1-11 (1991).
  21. Rittié, L. Method for Picrosirius Red-polarization detection of collagen fibers in tissue sections. Methods Mol Biol. 1627, 395-407 (2017).
  22. Diehm, Y. F., et al. Stem cell-enriched hybrid breast reconstruction reduces risk for capsular contracture in a hybrid breast model. Plast Reconstr Surg. 152 (3), 572-580 (2023).
  23. Rich, L., Whittaker, P. Collagen and Picrosirius Red staining: A polarized light assessment of fibrillar hue and spatial distribution. Braz J Morphol Sci. 22 (2), 97-104 (2005).
  24. Datar, U. V., et al. Clinicopathologic study of a series of giant cell fibroma using picrosirius red polarizing microscopy technique. Arch Iran Med. 17 (11), 746-749 (2014).
  25. Nishat, R., Kumar, H. Collagen fibers in oral submucous fibrosis - A polarizing microscopy study using two special stains. Indian J Pathol Microbiol. 62 (4), 537-543 (2019).
  26. Lattouf, R., et al. Picrosirius red staining: a useful tool to appraise collagen networks in normal and pathological tissues. J Histochem Cytochem. 62 (10), 751-758 (2014).
  27. López De Padilla, C. M. Picrosirius Red staining: Revisiting its application to the qualitative and quantitative assessment of collagen type I and type III in tendon. J Histochem Cytochem. 69 (10), 633-643 (2021).
  28. Junqueira, L. C. U., Bignolas, G., Brentani, R. R. Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections. Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).
  29. Zheng, L., et al. Scar collagen deposition in the airways of allografts of lung transplant recipients. Am J Respir Crit Care Med. 155 (6), 2072-2077 (1997).
  30. Astbury, S., et al. Reliable computational quantification of liver fibrosis is compromised by inherent staining variation. J Pathol Clin Res. 7 (5), 471-481 (2021).
  31. Feingold, B., et al. Diffuse myocardial fibrosis among healthy pediatric heart transplant recipients: Correlation of histology, cardiovascular magnetic resonance, and clinical phenotype. Pediatr Transplant. 21 (5), 12986(2017).
  32. vander Ploeg, E. A., Melgert, B. N., Burgess, J. K., Gan, C. T. The potential of biomarkers of fibrosis in chronic lung allograft dysfunction. Transplant Rev (Orlando). 35 (3), 100626(2021).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Przewlek e odrzucenie p ucprzeszczep p uc u myszyocena p ilo ciowaanaliza w knieniamikroskopia polaryzacyjnatrichrom Massonacyfrowa analiza obrazu

Powiązane artykuły