Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Badanie zakażenia Candida w jamie ustnej u pacjentów z pierwotnym zespołem Sjögrena

3.5K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/66430

⸱

1 marca 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Stomatology, Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University, 2Beijing Laboratory of Oral Health, Capital Medical University, 3Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medicine, Capital Medical University, 4Central Laboratory, National Engineering Laboratory for Digital and Material Technology of Stomatology, Beijing Key Laboratory of Digital Stomatology, Peking University School and Hospital of Stomatology, 5Clinical Diagnosis Laboratory of Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University, 6Key Laboratory for Quality Control of In Vitro Diagnostics, NMPA, 7Beijing Engineering Research Center of Immunological Reagents Clinical Research, 8School of Chinese Medicine, The University of Hong Kong, 9Department of Rheumatology and Clinical Immunology, Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University

W tym artykule

Podsumowanie

Tutaj prezentujemy protokół badania infekcji Candida jamy ustnej u pacjentów z pierwotnym zespołem Sjögrena, który może być wykorzystany do szybkiego leczenia, a następnie uniknięcia związanych z nim powikłań.

Streszczenie

Pierwotny zespół Sjögrena (pSS) jest chorobą autoimmunologiczną charakteryzującą się takimi objawami jak suchość w ustach, suchość oczu i inne systematyczne objawy. Ze względu na hipoślinotok odczuwany przez pacjentów z pSS często dochodzi do dysbakteriozy jamy ustnej. Częstym powikłaniem pSS jest zakażenie jamy ustnej Candida. W artykule autorzy opisują systematyczne metody, które mogą skutecznie zdiagnozować zakażenie Candida w jamie ustnej i zidentyfikować szczepy Candida za pomocą śliny, wymazów z błony śluzowej jamy ustnej lub płynu do płukania jamy ustnej od pacjentów z pSS. Agar dekstrozowy Sabouraud (SDA), test tworzenia strzępek, test wymazu wodorotlenku potasu (KOH) i test barwienia bielą kalkofluorową (CFW) są stosowane w diagnostyce doustnego zakażenia Candida. Do identyfikacji szczepów Candida stosuje się agar diagnostyczny Candida. Wreszcie, testy wrażliwości przeciwgrzybiczej są stosowane w celu określenia odpowiedniego leczenia lekami przeciwgrzybiczymi. Ta ustandaryzowana metoda może poprawić diagnostykę, leczenie i przyszłe badania nad infekcjami Candida jamy ustnej związanymi z pSS. Wczesna diagnoza, przy użyciu tej metody, może również zapobiec wszelkim powikłaniom powstałym w wyniku opóźnienia w otrzymaniu odpowiedniego leczenia.

Wprowadzenie

Kandydoza jest wywoływana przez Candida spp., które są oportunistycznymi patogenami. Typowe szczepy to Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis i Candida dubliniensis1. Zakażenia oportunistyczne wywołane przez Candida spp. obejmują powierzchowne zakażenia Candida i inwazyjną kandydozę. Kandydoza inwazyjna występuje głównie u osób z obniżoną odpornością; na przykład u pacjentów z zespołem nabytego niedoboru odporności (AIDS) inwazyjna kandydoza może znacząco zagrozić jakości życia, a nawet długości życia2. Powierzchowne zakażenie Candida, takie jak kandydoza śluzówkowo-skórna, występuje częściej u pacjentów3.

Kandydoza jamy ustnej, powierzchowna infekcja Candida, jest najczęstszą infekcją grzybiczą u ludzi. Candida albicans jest normalnym komensalem jamy ustnej; stwierdzono, że częstość występowania Candida spp. waha się od 20% do 75% w populacji ogólnej bez żadnych objawów4. Przerost Candidy może prowadzić do miejscowego dyskomfortu u pacjentów, takiego jak zmieniony smak czucia, pieczenie w ustach, dysfagia z powodu złego odżywiania, opóźniony powrót do zdrowia i przedłużony pobyt w szpitalu. Długotrwała kandydoza jamy ustnej może prowadzić do ciężkiej inwazyjnej kandydozy, powodując znaczną zachorowalność i śmiertelność5. Kandydoza jamy ustnej może również zwiększać ryzyko raka jamy ustnej5. Upośledzona funkcja gruczołów ślinowych jest jednym z czynników ryzyka kandydozy jamy ustnej6. Inicjacją infekcji jest przyleganie Candidy do ścian komórkowych nabłonka. Po tym następuje proliferacja i filamentacja Candida oraz tworzenie i dojrzewanie biofilmu7. Biofilmy są niezwykle trudne do wyeliminowania i są oporne na konwencjonalne leczenie przeciwgrzybicze, co sprawia, że leczenie kliniczne jest wyzwaniem dla infekcji jamy ustnej Candida związanej z biofilmem7.

Pierwotny zespół Sjögrena (pSS) jest chorobą autoimmunologiczną, która charakteryzuje się suchością w ustach, suchością oczu i innymi systematycznymi objawami8. Suchość w ustach jest najczęstszym objawem pSS. Ślina pełni ważne fizjologiczne funkcje przeciwgrzybicze. Z jednej strony może rozcieńczać i szorować jamę ustną, a następnie usuwać organizmy z błony śluzowej. Z drugiej strony ślina zawiera białka przeciwdrobnoustrojowe, takie jak laktoferyna, sialoperoksydaza, lizozym, polipeptydy bogate w histydynę i specyficzne przeciwciała przeciwkandydowalne, które mogą wchodzić w interakcje z błoną śluzową jamy ustnej i zapobiegać przerostowi Candida6. Zmniejszony przepływ śliny może predysponować pacjentów z pSS do kandydozy jamy ustnej. Obserwacyjne badanie przekrojowe przeprowadzone na 61 pacjentach z pSS wykazało, że 13,1% pacjentów z pSS prezentowało objawy kandydozy w jamie ustnej, a jednostka tworząca kolonię (CFU)/ml Candida albicans była istotnie i ujemnie skorelowana z poziomem niestymulowanej śliny całej (UWS) i stymulowanej całej śliny (SWS)9.

Metody przedstawione w tym manuskrypcie mogą zidentyfikować doustne zakażenie Candida na podstawie charakteryzowanych cech morfologicznych (np. strzępek i komórek drożdży) w bezpośrednim rozmazie lub po hodowli10. Identyfikacja szczepu Candida za pomocą agaru diagnostycznego Candida opiera się na tworzeniu różnokolorowych kolonii o zróżnicowanej morfologii, które wynikają z rozszczepienia substratów chromogennych przez enzymy specyficzne dla gatunku11. W tym manuskrypcie przedstawiono systematyczne metody wykrywania zakażenia Candida w jamie ustnej, w tym tradycyjny posiew Candida w jamie ustnej i szybkie badanie za pomocą wymazu z wodorotlenku potasu (KOH) i testu barwienia bielą kalkofluorową (CFW)10. Dodatkowo wprowadzono test wrażliwości na leki przeciwgrzybicze, który może pomóc w klinicznym leczeniu zakażenia Candida jamy ustnej. W rzeczywistych sytuacjach nie jest konieczne wykonywanie wszystkich metod przedstawionych w tym manuskrypcie; doustne metody wykrywania Candida można wybrać w zależności od celu. Badanie zakażenia Candida jamy ustnej i określenie szczepów Candida u pacjentów z pSS nie tylko przynosi korzyści w leczeniu choroby, ale także pomaga w ocenie charakterystyki kandydozy jamy ustnej i profili gatunkowych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie procedury opisane poniżej zostały zatwierdzone przez Komisję Etyczną Szpitala Beijing Tiantan, Stołecznego Uniwersytetu Medycznego (nr KY2023-177-01), a wszyscy pacjenci biorący udział w tym badaniu wyrazili świadomą zgodę.

1. Kryteria włączenia i wykluczenia pacjenta

  1. Kryteria włączenia: Klasyfikuj pacjentów jako pacjentów z pSS, jeśli spełniają kryteria American College of Rheumatology (ACR)/European League Against Rheumatism (EULAR) z 2016 r.12. W szczególności oprzyj końcowe kryteria klasyfikacji na ważonej sumie pięciu pozycji: dodatni wynik przeciwciał anty-SSA/Ro i ogniskowe limfocytarne zapalenie sialadenitis z wynikiem ogniskowania ≥ 1 ogniska / 4 mm2, z których każdy uzyskał 3 punkty; nieprawidłowy wynik barwienia oka wynoszący ≥ 5 (lub wynik van Bijstervelda wynoszący ≥ 4), wynik testu Schirmera wynoszący ≤ 5 mm/5 min i niestymulowane natężenie przepływu śliny ≤ 0,1 ml / min, każdy wynik 1. Osoby z oznakami i/lub objawami sugerującymi SS, które uzyskały łączny wynik ≥ 4 dla powyższych pozycji, spełniają kryteria pSS.
  2. Kryteria wyłączenia: Wykluczenie pacjentów, którzy nie mogą współpracować przy pobieraniu próbek oraz pacjentów leczonych z powodu zakażenia Candida w jamie ustnej.
    UWAGA: Należy zauważyć, że opisane poniżej metody są również odpowiednie do kompleksowej charakterystyki zakażeń Candida jamy ustnej u osób z wtórnym SS.
  3. Aby zapobiec potencjalnym zanieczyszczeniom podczas pobierania, transportu i hodowli próbek Candida, należy podjąć skrupulatne środki ostrożności. Obejmuje to skrupulatne przygotowanie eksperymentu, użycie materiałów jednorazowego użytku i sterylnych, właściwe oznakowanie, bezpieczne uszczelnienie probówek do pobierania próbek oraz przeprowadzenie procedur eksperymentalnych w profesjonalnej komorze bezpieczeństwa biologicznego.

2. Pobieranie próbek

  1. Pobieranie śliny: Poinstruuj pacjentów, aby trzymali rurkę z lejkiem i pozwolili, aby ślina stopniowo spływała do rurki wzdłuż dolnej wargi. Na koniec pobierania krwi poproś pacjenta, aby wypluł całą pozostałą ślinę z ust do probówki. Zbieraj ślinę przez 15 minut.
  2. Płukanie jamy ustnej i pobieranie wymazów: Jeśli pacjent nie ma lub ma bardzo niski niestymulowany przepływ śliny (mniej niż 0,03 ml/min), należy pobrać wymaz z obszaru błony śluzowej jamy ustnej z podejrzeniem zakażenia Candida co najmniej 10 razy, a następnie poprosić pacjenta o użycie 5 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS; patrz Tabela materiałów) do płukania jamy ustnej przez 1 minutę. Przechowuj płyn do płukania jamy ustnej w sterylnej probówce o pojemności 50 ml i włóż wacik do probówki do płukania jamy ustnej.
    UWAGA: W przypadku pacjentów z pSS z niestymulowanym przepływem śliny większym niż 0,03 ml/min, krok 2.2 może być nadal stosowany do pobierania próbek do doustnego wykrywania zakażenia Candida.

3. Przetwarzanie próbek

  1. Dodaj 1 ml PBS do pobranej śliny. Nie należy dodawać PBS do płynu do płukania jamy ustnej z PBS. Wibruj rurkę płynu do płukania jamy ustnej za pomocą wiru przez 1 minutę.

4. Kultura Candida

  1. Aby przygotować pożywkę z agaru Sabouranda (SDA), rozpuść 70 g SDA (patrz tabela materiałów) w 1000 ml podwójnie destylowanej wody.
  2. Sterylne w autoklawie w temperaturze 121 °C przez 15 minut, umieścić 10 ml tej pożywki SDA w 10-centymetrowym naczyniu do hodowli mikrobiologicznej (patrz tabela materiałów) i schłodzić.
  3. Pobrać 200 μl próbki przygotowanej w kroku 3 i rozsypać ją na 10-centymetrowych szalkach do hodowli mikrobiologicznych przygotowanych z użyciem 10 ml pożywki SDA w kroku 4.2.
  4. Inkubować przez 48 godzin w temperaturze 37 °C, a kolonia Candida dojrzeje. Tymczasowo przechowywać naczynie SDA z koloniami Candida w temperaturze 4 °C. Kolonie Candida wyhodowane na szalce SDA można przechowywać przez 2-4 tygodnie.

5. Identyfikacja szczepu Candida

  1. Aby przygotować pożywkę, wyjmij 47,7 g proszku agaru diagnostycznego Candida (patrz Tabela Materiałów), wsyp go do 1000 ml podwójnie destylowanej wody i podgrzej do 100 °C.
  2. Gdy podłoże lekko się zagotuje, umieść 10 ml w naczyniu do hodowli mikrobiologicznych o średnicy 10 cm i pozostaw do ostygnięcia.
  3. Rozpuść kolonie Candida w 500 μl pożywki SDA (etap 4), zawiesij i dysocjuj przez pipetowanie.
  4. Umieścić 50 μl próbki z koloniami Candida (etap 5.3) na pożywce przygotowanej w kroku 5.2. Inkubować przez 48 godzin w temperaturze 37 °C, aż kolonie Candida osiągną dojrzałość.
  5. Zgodnie z kolorem i wzorami kolonii Candida, określ szczep (szczepy) nabytego Candida od pacjentów z pSS. Użyj następujących kryteriów identyfikacji szczepu Candida: szmaragdowozielona kolonia to Candida albicans, niebiesko-szara kolonia to Candida tropicalis, różowe kolonie z rozmytymi krawędziami, a mikrokosmki to Candida krusei, fioletowo-czerwona mała kolonia to Candida glabrata, mleczno-biała kolonia zawiera kilka szczepów, w tym Candida parapsilosis.

6. Test tworzenia biofilmu Candida

  1. Aby przygotować pożywkę z drożdżową zasadą azotową (YNB)-50 glukozy (G), należy zważyć 1,34 g YNB (patrz Tabela materiałów) i 1,98 g D (+)-glukozy (patrz Tabela materiałów). Rozpuść je w 200 ml podwójnie destylowanej wody.
  2. Aby przygotować pożywkę YNB-100G, wyjmij 1,34 g YNB i 3,96 g D (+)-glukozy i rozpuść je w 200 ml podwójnie destylowanej wody.
  3. Przefiltrować roztwory za pomocą filtra strzykawkowego 0,22 μm (patrz tabela materiałów). Przefiltrowane podłoże YNB-50G i YNB-100G można przechowywać w temperaturze 4 °C przez 3 miesiące.
  4. Wybierz 3 (lub więcej) kolonie z tego samego szczepu na szalkach w kroku 5 i przenieś je do 200 μl pożywki YNB-50G (kroki 6.1 i 6.3) na 96-dołkowej płytce (patrz Tabela materiałów). Zrób to dla szczepów obserwowanych w naczyniu. Hodowla przez noc w temperaturze 37 °C z wytrząsaniem przy 200 obr./min.
  5. Odessać zawiesinę Candida, dodać 1 ml PBS, odwirować komórki drożdży przy 1500 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej i odrzucić supernatant. Powtórz ten krok 2x w tej samej probówce.
  6. Ponownie zawiesić komórki w 1 ml pożywki YNB-100G i przygotować różne rozcieńczenia (1:10, 1:100 i 1:1000) komórek. Weź 200 μl gradientowej zawiesiny komórek i umieść ją na 10 cm podłożu SDA metodą płytki spiralnej13. Posiewanie odbywa się za pomocą maszyny, która osadza znaną objętość próbki na obracającej się płytce agarowej w coraz mniejszej ilości w postaci spirali Archimedesa. Hodowla przez 24-48 h w temperaturze 37 °C.
  7. Oblicz stężenie komórek w różnych rozcieńczeniach w zależności od liczby CFU na płytce SDA w oparciu o standardową metodę13. Pokrótce policz dobrze oddzielone kolonie na każdym talerzu. Policz kolonie w jednym oktancie od zewnętrznej krawędzi w kierunku środka, aż zaobserwuje się co najmniej 25 kolonii. Policz również pozostałą część tego łuku, w którym wystąpiło 25. liczenie. Oblicz stężenie komórek, dzieląc liczbę kolonii przez objętość cieczy odpowiadającą obszarowi, na którym uzyskano liczbę kolonii13. Dostosuj stężenie komórek do 1 x 107 komórek/ml.
  8. Umieścić 100 μl zawiesiny komórek w YNB-100G na 96-dołkowej płytce i inkubować w temperaturze 37 °C przez 2 godziny, wytrząsając z prędkością 200 obr./min.
  9. Ostrożnie wyjmij supernatant, przemyj 2x PBS i usuń pływające komórki drożdży. Biofilm Candida tworzy się na dnie 96-dołkowej płytki.

7. Test tworzenia strzępek

UWAGA: Tylko Candida, która może tworzyć strzępki (takie jak Candida albicans) może być indukowana do tworzenia strzępek. Przejdź do kroku 8, aby uzyskać dalszą charakterystykę Candida, która nie może tworzyć strzępek (np. Candida glabrata).

  1. Ponownie zawiesić zawiesinę komórek drożdży w kroku 6.6 i dostosować stężenie komórek do 1 x 106 komórek/ml za pomocą pożywki YNB-100G.
  2. Aby przygotować kompletną pożywkę wzrostową RPMI 1640, dodaj 50 ml płodowej surowicy bydlęcej (patrz tabela materiałów) do 450 ml pożywki RPMI 1640 (patrz tabela materiałów) i przechowuj w temperaturze 4 °C do dalszych eksperymentów.
  3. Przenieść 2 μl zawiesiny komórek Candida rozcieńczonej w 200 μl kompletnej pożywki wzrostowej RPMI 1640 na 96-dołkową płytkę i hodować przez noc w temperaturze 37 °C, aby umożliwić utworzenie strzępek i komórek drożdży.

8. Test wymazu KOH i test barwienia CFW

  1. Pobrać 1 μl próbek z etapu 3, 6 lub 7 za pomocą precyzyjnie uformowanej pętli (patrz tabela materiałów) i rozsmarować powierzchnię 1 cm x 1 cm na szkiełkach podstawowych. Poczekaj, aż wyschnie w temperaturze pokojowej.
  2. Aby przygotować 10% roztwór KOH, odważ 10 g proszku KOH (patrz tabela materiałów) i rozpuść go w 100 ml podwójnie destylowanej wody.
  3. Lekko podgrzać szkiełko lampą alkoholową, aż próbka się rozpuści. Preparaty przygotowane w kroku 8.1 zabarwić 10% KOH (krok 8.2) i przykryć szkiełkiem krypkowym. Lekko docisnąć szkiełko nakrywkowe, aby próbka była przezroczysta.
  4. Wizualizuj strzępki i komórki drożdży pod mikroskopem.
  5. Szkiełka podstawowe przygotowane w kroku 8.1 zalać kroplą CFW (patrz Tabela Materiałów), przykryć szkiełkiem nakrywkowym i odczekać 1 min.
  6. Wizualizuj strzępki za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego przy powiększeniach 100x i 200x. CFW jest wzbudzany przy 355 nm i wykrywany przy 300-440 nm. Sfotografuj obrazy w czasie naświetlania. Powtórz 3 razy, aby uniknąć wyników fałszywie dodatnich.

9. Test wrażliwości na leki przeciwgrzybicze

UWAGA: Ten test jest wykonywany zgodnie z instrukcjami producenta dla zestawu do wykrywania grzybów drożdżopodobnych (mikrorozcieńczenie; patrz Tabela Materiałów).

  1. Przygotować kolonie Candida (krok 4) w wieku poniżej 4 dni za pomocą ampułki 0,85% NaCl (patrz Tabela Materiałów) i uzyskać zawiesinę o zmętnieniu odpowiadającym 2 McFarlandowi. Określ zmętnienie zgodnie z zestawem McFarland Standards Kit (patrz tabela materiałów). Przygotowana zawiesina Candida należy zużyć natychmiast.
  2. Odpipetować 135 μl pożywki ATB F2 w zestawie zawierającym 3 x 104 komórek drożdży/ml do każdej kubki w pasku testowym i przykryć pokrywką. Umieść pasek testowy w szczelnie zamkniętym pojemniku. Posiew przez 24 godziny w temperaturze 35 °C.
  3. Obserwuj wzrost Candidy z interpretacją wizualną (patrz instrukcja obsługi). Wartość referencyjna (zakres odniesienia) można znaleźć w instrukcji obsługi. Sprawdź, czy otwór kontrolny odpowiednio się powiększa. Jeśli wzrost otworu kontrolnego jest niewystarczający lub nie rośnie, wyniki nie mogą być odczytane i wymagają kolejnych 24 godzin uprawy.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

W niniejszym badaniu wybrano 12 pacjentów z pSS jako reprezentatywną grupę i poddano ich badaniu przesiewowemu w kierunku infekcji jamy ustnej grzybami z rodzaju Candida (Tabela 1). Wśród tych pacjentów u niektórych wystąpiły typowe zmiany w jamie ustnej charakterystyczne dla infekcji Candida, w tym zapalenie kątów ust (charakteryzujące się pęknięciami w kącikach ust, złuszczaniem i przekrwieniem, Rycina 1A), jasnoczerwony obrzęk błony śluzowej dziąseł, żół...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W niniejszym manuskrypcie przedstawiamy szereg systematycznych, prostych i wykonalnych metod wykrywania zakażeń Candida w jamie ustnej, identyfikacji szczepów Candida i testowania wrażliwości przeciwgrzybiczej powszechnie stosowanych leków u pacjentów z pSS.

W praktyce nie wszystkie metody przedstawione w tym manuskrypcie są konieczne. Doustne metody wykrywania Candida można wybrać w zależności od konkretnego celu. Testy cytologiczne KOH i testy barwienia CFW, przy ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

Podziękowania

To badanie było wspierane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (82201084), Chińską Fundację Nauk Podoktoranckich (2022M722232), Pekińską Fundację Badań Podoktoranckich (2023-ZZ-020), Projekt Miaopu Szpitala Tiantan, Stołeczny Uniwersytet Medyczny (2023MP10) oraz Fundusz Badań Ogólnych, Radę Grantów Badawczych Hongkongu (27111820 i 17116521).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
0,22 &mikro; m Filtr strzykawkowyMERCKSLGV004SL
1,5 ml Probówka wirówkowaaxygen axygenMCT-150-C-S
10 cm Naczynia do kultur mikrobiologicznychJet Bio-Filtration Co., LtdTCD000100
15 mL Probówka wirówkowaJet Bio-Filtration Co., LtdCFT011150
50 ml Probówka wirówkowaCorning430290
96-dołkowa MicroplatesCorning3599
API 0,85% Ampułka NaClBIOMERIEUX20070
Calcofluor White StainSigma-Aldrich18909-100ML-F
CHROMagar CandidaCHROMagarP002860Candida diagnostyczny agar
D(+)-Monohydrat glukozySinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10010518
Surowica bydlęca płodu Zestaw standardów Gibco26170035
McFarlandBIOMERIEUX70900
Precyzyjnie formowane pętle Nunc ThermoFisher Scientific254399
Sól fizjologiczna buforowana fosforanemGibcoC10010500BT
Wodorotlenek potasuAladynP112284-500g
Zestaw do izolacji DNA PowerSoil MO BIO12888-50
RPMI 1640 MediumGibco11875119
Agar Sabourand's Agar MediumSolarbioS9710
Drożdżowa baza azotowa bez aminokwasówSolarbioY8040
Zestaw do badania wrażliwości na grzyby drożdżopodobne (mikrorozcieńczenie)BIOMERIEUX14204

Bibliografia

  1. Wang, X., et al. Microbiota dysbiosis in primary Sjögren's syndrome and the ameliorative effect of hydroxychloroquine. Cell Rep. 40 (11), 111352(2022).
  2. Humphrey, S. P., Williamson, R. T. A review of saliva: normal composition, flow, and function. J Prosthet Dent. 85 (2), 162-169 (2001).
  3. Marsh, P. D., Do, T., Beighton, D., Devine, D. A. Influence of saliva on the oral microbiota. Periodontol 2000. 70 (1), 80-92 (2016).
  4. Vila, T., Rizk, A. M., Sultan, A. S., Jabra-Rizk, M. A. The power of saliva: Antimicrobial and beyond. PLoS Pathog. 15 (11), e1008058(2019).
  5. Serrano, J., et al. Risk factors related to oral candidiasis in patients with primary Sjögren's syndrome. Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 25 (5), e700-e705 (2020).
  6. Napeñas, J. J., Rouleau, T. S. Oral complications of Sjögren's syndrome. Oral Maxillofac Surg Clin North Am. 26 (1), 55-62 (2014).
  7. Mathews, S. A., Kurien, B. T., Scofield, R. H. Oral manifestations of Sjögren's syndrome. J Dent Res. 87 (4), 308-318 (2008).
  8. Leung, K. C. M., McMillan, A. S., Cheung, B. P. K., Leung, W. K. Sjögren's syndrome sufferers have increased oral yeast levels despite regular dental care. Oral Dis. 14 (2), 163-173 (2008).
  9. Lundstrom, I. M., Lindstrom, F. D. Subjective and clinical oral symptoms in patients with primary Sjögren's syndrome. Clin Exp Rheumatol. 13 (6), 725-731 (1995).
  10. Alam, M. Z., et al. Candida identification: a journey from conventional to molecular methods in medical mycology. World J Microbiol Biotechnol. 30 (5), 1437-1451 (2014).
  11. Bauters, T. G., Nelis, H. J. Comparison of chromogenic and fluorogenic membrane filtration methods for detection of four Candida species. J Clin Microbiol. 40 (5), 1838-1839 (2002).
  12. Soto-Rojas, A. E., Villa, A. R., Sifuentes-Osornio, J., Alarcón-Segovia, D., Kraus, A. Oral candidiasis and Sjögren's syndrome. J Rheumatol. 25 (5), 911-915 (1998).
  13. Gilchrist, J. E., Campbell, J. E., Donnelly, C. B., Peeler, J. T., Delaney, J. M. Spiral plate method for bacterial determination. Appl Microbiol. 25 (2), 244-252 (1973).
  14. Biomerieux. ATB FUNGUS 3 Sensitivity test for yeast-like fungi. REF 14204. Biomerieux. , (2014).
  15. Zhang, L., et al. The widely used ATB FUNGUS 3 automated readings in China and its misleading high MICs of Candida spp. to Azoles: Challenges for developing countries' clinical microbiology labs. PLoS One. 9 (12), e114004(2014).
  16. Hu, L., Zhou, P., Zhao, W., Hua, H., Yan, Z. Fluorescence staining vs. routine KOH smear for rapid diagnosis of oral candidiasis-A diagnostic test. Oral Dis. 26 (5), 941-947 (2020).
  17. Samaranayake, L. P. Candida krusei infections and fluconazole therapy. Hong Kong Med J. 3 (3), 312-314 (1997).
  18. Lee, Y., Puumala, E., Robbins, N., Cowen, L. E. Antifungal drug resistance: Molecular mechanisms in Candida albicans and beyond. Chem Rev. 121 (6), 3390-3411 (2021).
  19. Rihab, B., Lina, E. H., Noémie, S. T., Jean, S., Marjolaine, G. The experience of dry mouth and screening for Sjogren's syndrome by the dentist: patient-reported experiences. BMC Oral Health. 23 (1), 1010(2023).
  20. Panpetch, W., et al. Oral Candida administration in a Clostridium difficile mouse model worsens disease severity but is attenuated by Bifidobacterium. PLoS One. 14 (1), e210798(2019).
  21. Alwaily, E. R., Abood, M. S., Al Uobody, R. M. Diagnosis of oral candidiasis in patients under 12 years: 18S rRNA as a marker of molecular characterization of Candida tropicalis. Arch Razi Inst. 78 (1), 475-483 (2023).
  22. Chen, C. L., et al. Candida infection as an early sign of subsequent Sjögren's syndrome: A population-based matched cohort study. Front Med (Lausanne). 8, 796324(2022).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Przeglądaj więcej artykułów

Pierwotny zespół Sjögrenaidentyfikacja szczepów Candidatesty wrażliwości na środki przeciwgrzybiczepobieranie ślinywymaz z błony śluzowej jamy ustnejagar Sabourauda z dekstroząpreparat z wodorotlenkiem potasubarwienie bielą calcofluortest tworzenia strzępek
Badanie zakażenia Candida w jamie ustnej u pacjentów z pierwotnym zespołem Sjögrena
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.