Opisano nową metodę iniekcji dootrzewnowej (IP) u dorosłych ryb pręgowanych. W przypadku stosowania związków toksycznych, takich jak doksorubicyna, procedura ta jest bardziej skuteczna niż dwie wcześniej opisane metody IP. Technika ta została zaprojektowana tak, aby mogła być łatwo zaadoptowana przez badaczy z ograniczonym doświadczeniem w modelowaniu danio pręgowanego.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Technika iniekcji dootrzewnowej u dorosłych danio pręgowanego, która minimalizuje uszkodzenia ciała i związaną z nimi śmiertelność
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Dorosły danio pręgowany (Danio rerio), który jest genetycznie dostępny, jest wykorzystywany jako cenny model kręgowców do badania ludzkich zaburzeń, takich jak kardiomiopatia. Wstrzyknięcie dootrzewnowe (IP) jest ważną metodą, która dostarcza związki do organizmu w celu testowania efektów terapeutycznych lub generowania modeli chorobowych, takich jak kardiomiopatia wywołana doksorubicyną (DIC). Obecnie istnieją dwie metody wstrzykiwania adresu IP. Obie metody mają ograniczenia w obchodzeniu się ze związkami toksycznymi, takimi jak doksorubicyna, które powodują skutki uboczne objawiające się poważnym uszkodzeniem kształtu ciała i śmiercią ryb. Chociaż te niedociągnięcia można przezwyciężyć poprzez szeroko zakrojone szkolenie badaczy, pożądana jest nowa metoda wstrzykiwania IP, która ma minimalne skutki uboczne. W tym miejscu opisano unikalną metodę wstrzykiwania IP, która jest w stanie poradzić sobie z toksycznymi związkami. Konsekwentne obniżanie czynności serca może skutkować bez ponoszenia znacznej śmierci ryb. Technika ta może być łatwo opanowana przez badaczy, którzy mają minimalne doświadczenie z dorosłymi danio pręgowanymi.
Wprowadzenie
Danio rerio) zyskał uwagę jako eksperymentalny model do badania chorób ludzkich, ponieważ zwierzę to charakteryzuje się wysoką homologią genów i narządów do ludzi, zewnętrznym zapłodnieniem, łatwością manipulacji genetycznej i przezroczystością ciała do wczesnej dojrzałości, co ułatwia niezliczone zastosowania obrazowania1. W przeciwieństwie do prostego procesu dostarczania leków bezpośrednio do wody dla zarodków i larw danio pręgowanego, podawanie leków dorosłym danio pręgowanym stanowi bardziej skomplikowane i wymagające przedsięwzięcie2.
U dorosłych ryb związki mogą być dostarczane....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie przeprowadzone procedury zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Korzystania ze Zwierząt Mayo Clinic, zgodnie ze standardami określonymi w „Guide for the Care and Use of Laboratory Animals” (National Academies Press, 2011). Wszystkie danio pręgowane wykorzystane w badaniu należą do szczepu Wild Indian Karyotype (WIK). Szczegóły dotyczące odczynników i sprzętu użytego w badaniu znajdują się w Tabeli materiałów.
1. Przygotowanie i przechowywanie roztworu zapasowego doksorubicyny
- Należy pozyskać doxorubicinę z komercyjnego źródła.
UWAGA: Doxorubicyna jest świa....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Wcześniej w celu podania doksorubicyny u dorosłych rybek danio-zebrafish stosowano dwie metody doszpikowe (IP)4,10. W metodzie I, znanej również jako klasyczna metoda iniekcji IP opisana przez Kinkela i współpracowników4, igłę wprowadzano pod kątem 45° względem linii środkowej między płetwami brzusznymi, z brzuchem skierowanym do góry. W metodzie II, czyli alternatywnej metodzie iniekcji IP opisanej przez Ma i współpracowników
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
W odróżnieniu od dwóch istniejących metod wstrzykiwania IP 4,10, nowa metoda wstrzykiwania IP charakteryzuje się następującymi odrębnymi cechami. Po pierwsze, stosowany jest unikalny kąt penetracji igły (bliski zeru); po drugie, igła wnika w rybę przez unikalne miejsce, tj. naturalny otwór na brzusznej powierzchni ryby, który ułatwiłby wstrzyknięcie; I wreszcie ruch igły odbywa się od przodu do tyłu. Regulacje te skutecznie zmniejszają uszkodzenia narząd.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Podziękowania
To badanie było wspierane przez NIH (HL107304 i HL081753) oraz Fundację Mayo (Centrum Odkryć Biomedycznych i Badań Sercowo-Naczyniowych) do X.X. J.L. jest finansowane przez Fundusze Badań Podstawowych dla Centralnych Uniwersytetów Central South University, nr 56021702. Specjalne podziękowania dla Beninio Gore'a i Quentina Stevensa za zarządzanie obiektem dla danio pręgowanego.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 10 μ L Strzykawka NanoFil | World Precision Instruments, Inc | Narzędzie do iniekcji | NANOFIL |
| 34 G igła | World Precision Instruments, Inc | NI34BV-2 | narzędzie do wkłuwania |
| 60 mm szalka Petriego | fisher scientific/fisherbrand | FB0875713A | umieszczania gąbki |
| Mikroskop preparacyjny | Nikon | SMZ800 | Injceting Dox Dox |
| chlorowodorek doksorubicyny | lek Sigma | D1515-10MG | do tworzenia modelu DIC |
| Echokardiografia | VISUAL SONICS | Vevo 3100 | pomiar czynności serca |
| Gąbka piankowa | Jaece Industries | L800-D Umieszczanie | ryb |
| Zrównoważony roztwór soli Hanka (HBBS) | Thermo Fisher | 14025076 | Pojazd do |
| mikrowirówki Dox | southernlabware | MyFuge/C1012 | zbiera rozwiązanie Dox |
| Waga precyzyjna | Torbal | AD60 | Waga cyfrowa |
| Tricaine | Argent | MS-222 | znieczulająca do ryb |
| Eppendorf | 1,5 ml | przechowywanie | |
| vevo LAB oprogramowanie | FUJIFILM VISUAL SONICS | 5.6.0 | Kwantyfikacja serca |
Bibliografia
- Tavares, B., Lopes, S. S. The importance of Zebrafish in biomedical research. Acta Medica Portuguesa. 26 (5), 583-592 (2013).
- Dang, M., Henderson, R. E., Garraway, L. A., Zon, L. I. Long-term drug administration in the adult zebrafish using oral gava....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
