Tutaj prezentujemy krok po kroku protokół do zbadania terapeutycznych i hamujących naczyń krwionośnych efektów formuły Sanleng Jiashen na myszach BALB/c-nu z ortotopowym rakiem wątrobowokomórkowym.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Tutaj prezentujemy krok po kroku protokół do zbadania terapeutycznych i hamujących naczyń krwionośnych efektów formuły Sanleng Jiashen na myszach BALB/c-nu z ortotopowym rakiem wątrobowokomórkowym.
Śmiertelność raka wątroby i odporność na chemiczne leki zmusiły do poszukiwania skutecznych recept na tradycyjne zioła na raka wątroby. Modele zwierzęce, które są powtarzalne, łatwe do manipulowania i w dużym stopniu naśladują patofizjologiczne procesy raka wątroby, są warunkiem wstępnym udanych badań przesiewowych skutecznych kandydatów na leki. Tymczasem wiarygodne wskaźniki i środki oceny skuteczności leków są również gwarancją badań i rozwoju leków przeciw rakowi wątroby.
Formuła Sanleng Jiashen, reprezentatywna recepta tradycyjnej medycyny chińskiej zawierająca Sparganium stoloni erum,. -Ham. (Sanleng), żeń-szeń Panax C. A. Mey. (żeń-szeń), Rheum officinale Baill. (rabarbar) i Ligusticum chuanxiong Hort. (Chuanxiong), jest przepisywany w celu odżywienia wątroby i usunięcia ciepła, usunięcia toksyn i pobudzenia krążenia krwi w leczeniu raka wątroby. Ten protokół eksperymentalny opisuje przygotowanie liofilizowanej formuły Sanleng Jiashen i proces tworzenia raka wątroby in situ u myszy BALB / c-nu. Barwienie histopatologiczne, immunohistochemiczne wykrywanie markerów nowotworowych, obrazowanie in vivo myszy oraz test błony kosmówkowo-omoczniowej zarodka pisklęcia zastosowano w celu zbadania hamowania i antyangiogenezy wpływu formuły Sanleng Jiashen na złośliwą proliferację tkanki raka wątroby. Dane pokazują, że formuła Sanleng Jiashen może skutecznie przeciwdziałać złośliwej proliferacji tkanki raka wątroby, co objawia się zmniejszoną objętością masy guza, poprawą uszkodzeń patologicznych i niższym poziomem markera rakowego ki67.
Doskonałe hamowanie angiogenezy sugeruje również, że formuła Sanleng Jiashen może potencjalnie leczyć i zapobiegać postępowi i pogorszeniu się stanu raka wątroby. Cały schemat eksperymentalny przedstawia kompleksowy proces składników tradycyjnej medycyny chińskiej w leczeniu raka wątroby u myszy, który stanowi odniesienie do ustanowienia i optymalizacji modelu raka wątroby, a także badań i rozwoju leków do zapobiegania i leczenia raka wątroby.
Rak wątroby to śmiertelny nowotwór, który ma swoje źródło w wątrobie i jest drugą najczęstszą przyczyną zgonów związanych z rakiem na świecie1. Wskaźniki chorób wątroby w Stanach Zjednoczonych i niektórych krajach rozwijających się wykazują wysoki poziom, a do 2030 roku na całym świecie może wystąpić ponad 1 milion przypadków raka wątroby2. Ze względu na niezdrowe nawyki życiowe, takie jak palenie tytoniu, otyłość i picie alkoholu, a także spustoszenie wywołane przez wirusowe zapalenie wątroby typu B, C i inne wirusy, częstość występowania i śmiertelność z powodu raka wątroby znacznie wzrosła z roku na rok
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
BALB/c-nu samce nagich myszy, które były wolne od specyficznych patogenów, w wieku 5 tygodni i ważące 18-22 g, były karmione w Animal Experimental Center of Transformation Medical College of Jilin University; warunki karmienia wynosiły 22 °C-24 °C przy wilgotności względnej 40%-60%. Numer licencji na zwierzę doświadczalne to SYXK(Ji) 2018-0006, a proces eksperymentalny jest zgodny z zasadami i przepisami Komisji Etyki Uniwersytetu Jilin, a numer zatwierdzenia etyki zwierząt to 20221228-01.
1. Przygotowanie liofilizowanej formuły Sanleng Jiashen15
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Jak pokazano w Rysunek 2A, stworzyliśmy model raka wątroby in situ myszy BALB/c-nu i oceniliśmy działanie przeciwnowotworowe formuły Sanleng Jiashen. Rysunek 2B pokazuje, że formuła Sanleng Jiashen może znacząco zahamować wzrost nowotworów wątroby. Wyniki patologiczne wskazały, że w porównaniu z grupą kontrolną, ogniska nowotworowe w grupie modelowej miały wyraźne granice z otaczającą tkanką, większe ogniska guza, ekspansję guzkową i wzrost kompresji. Tymczasem u.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Duża ilość dowodów potwierdziła, że Sanleng, żeń-szeń, rabarbar i Chuanxiong w formule Sanleng Jiashen mają działanie farmakologiczne w leczeniu raka wątroby. Badania wykazały, że Sanleng może znacznie hamować proliferację i wzrost komórek nowotworowych, aby zapobiec inwazji komórek nowotworowych i przerzutom, indukować apoptozę komórek oraz regulować cykl komórkowy i mikrośrodowisko guza20. Udowodniono, że kemferol, aktywny składnik Sanleng, może hamować występowanie i rozwój raka żołądka
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Ta praca była wspierana przez Chińską Fundację Filozofii i Nauk Społecznych (20VYJ070), Projekt Departamentu Edukacji Prowincji Jilin (JJKH20230963KJ) oraz Drugą Partię Projektu Inżynieryjnego Xinglin Scholars na Uniwersytecie Medycyny Chińskiej w Changchun (QNKXJ2-2021+ZR25).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 0,25% roztwór trypsyny | HyClone, Ameryka | SH30042.01B | |
| 1 ml jednorazowa strzykawka | Mingankang Medical Equipment Co., Ltd., Chiny | RWSB | |
| 1% roztwór penicyliny i streptomycyny | Hyklon, Ameryka | SV30010 | |
| 1,5 ml probówka wirówkowa | Corning, Ameryka | MCT-150-C-S | |
| Szczypce | igłowe 12 cmHesdick, Chiny | HKQS-211 | |
| 6-0 szwy chirurgiczne | Shanghai Jinhuan Medical Equipment Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | CR631 | |
| 75% alkoholu | Sichuan Youbang Enterprise Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 1.00009E+11 | |
| 96-dołkowe płytki | NEST, Chiny | 701001 | |
| Aceton | Tianjin Dingfu Chemical General Plant, Tianjin, Chiny | GB686-89 | |
| BALB/c-nu samce nagich myszy | Pekin Weitonglihua Experimental Animal Technology Co., Ltd., Pekin, Chiny | SYXK(Ji) 2018-0006 | |
| Maszyna do pieczenia tkanek biologicznych | Leica, Niemcy Leica | HI1220 | |
| Naczynie do hodowli komórkowych | NEST, Chiny | NEST.706001 | |
| Roztwór kwasu cytrynowego | Wuhan Canos Technology Co., Ltd., Wuhan, Chiny | sj1074 | |
| D-lucyferin | Gold Biotechnology®, Inc., Chiny | LUCK-100 | |
| DMEM | Hyclone, Ameryka | SH30243.01 | |
| Iluminator jaj | Shandong Weizhen Incubation Equipment Company, Shandong, Chiny | WZSDT | |
| Roztwór do barwienia Eosin | Hunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, Chiny | 110703061 | |
| Maść do oczu z erytromycyną | Cisen Pharmaceutical Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | H37022025 | |
| Surowica bydlęca | płodu Clark, Ameryka | FB25015 | |
| W pełni automatyczny inteligentny inkubator dla piskląt | Shandong Weizhen Incubation Equipment Company, Shandong, Chiny | 29538 | |
| Roztwór lentiwirusa GFP | Suzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, Chiny | F22AZ | |
| Surowica kozia | Shenyang Wanlei Biotechnology Co., Ltd., Shengyang, Chiny | WLA067 | |
| Ręczna wiertarka do czaszki myszy | STRONGWT, Chiny | 190 | |
| Linia komórkowa HCCLM3 | WheLab, Szanghaj, Chiny | C1010 | |
| Zhongke Life Technology Co., Ltd., Hangzhou, Chiny | GEJRD-10W | ||
| Hematoxylin | Hunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, Chiny | B-YH250-1 | |
| Inteligentny garnek na wywar | Hangzhou Jiuyang living Appliance Co., Ltd., Hangzhou, Chiny | 3003BQ | |
| Mikroskop odwróconej fluorescencji | Olympus, Japonia | IX73 | |
| ki67 przeciwciało pierwotne | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, Chiny | GB121141-100 | |
| Lodophor środek dezynfekujący | Cofoe Medical Technology Co., Ltd., Hunan, Chiny | 202110073 | |
| Lucyferazy | Suzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, Chiny | E26JZ | |
| Corning, Ameryka | 356234 | ||
| Gaza medyczna | Yunnan Chenye Biotechnology Co., Ltd., Yunnan, Chiny | 71712049971 | |
| Metanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd., Guangdong, Chiny | 1.17001.023 | |
| Nożyczki okulistyczne | Hesdick, Chiny | HKQS-209 | |
| Pęseta okulistyczna | Hesdick, Chiny | HKCL-20 | |
| Maszyna do zatapiania parafiny | Leica, Niemcy | ||
| Krajalnica parafiny | Leica, Niemcy Leica | CM1950 | |
| Paraformaldehyde | Biosharp, Chiny | BL539A | |
| PBS Bufor | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, Chiny | G2156-1L | |
| Puromycin | Pekin Solarbio Nauka i Technology Co., Ltd., Pekin, Chiny | P8230 | |
| Lodówka | Thermo Scientific, Ameryka | TDE40086FV-ULTS | |
| Skalpel | Hesdick, Chiny | HKCL-93 | |
| Przeciwciało wtórne | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, Chiny | GB23301 | |
| System obrazowania na żywo małych zwierząt | Caliper Life Sciences, Ameryka | IVIS Lumina XR | |
| Sorafenib | Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | 284461-73-0 | |
| Przezroczysty opatrunek | 3M, Ameryka | 9534HP | |
| Triton X-100 | Pekin Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Pekin, Chiny | T8200 | |
| Liofilizator próżniowy | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., Ltd., Ningbo, Chiny | sz-10N | |
| Jaja kurze z białych piór | Shandong Haotai Experimental Animal Breeding Co., Ltd., Shandong, Chiny | SCXK(Lu) 20180004 | |
| Xylene | Sigma-Aldrich, , Ameryka | 534056 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Ten artykuł został opublikowany
Film wkrótce dostępny