Ten protokół wprowadza technikę indukowania modeli zespołu policystycznych jajników (PCOS) u myszy poprzez kontrolowane uwalnianie letrozolu za pomocą mini-pomp. W odpowiednim znieczuleniu minipompa została wszczepiona podskórnie, a PCOS został pomyślnie wywołany u myszy po pewnym czasie od uwolnienia minipompy.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Zmodyfikowana technika wywoływania zespołu policystycznych jajników u myszy
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Zespół policystycznych jajników (PCOS) jest jedną z głównych przyczyn niepłodności u kobiet. Modele zwierzęce są szeroko stosowane do badania mechanizmów etiologicznych PCOS i do opracowywania powiązanych leków. Mysie modele indukowane letrozolem replikują fenotypy metaboliczne i reprodukcyjne pacjentów z PCOS. Tradycyjna metoda leczenia letrozolem u myszy PCOS wymaga codziennego dawkowania przez pewien okres, co może być pracochłonne i powodować znaczny stres u myszy. Badanie to opisuje prostą i skuteczną metodę wywoływania PCOS u myszy poprzez wszczepienie kontrolowanej minipompy uwalniającej letrozol. Wyprodukowano mini-pompę zdolną do stabilnego, ciągłego uwalniania ilościowej ilości letrozolu i wszczepiono ją podskórnie myszom w znieczuleniu. Badanie to wykazało, że model mysi z powodzeniem naśladował cechy PCOS po implantacji minipompy letrozolu. Materiały i sprzęt użyte w tym badaniu są łatwo dostępne dla większości laboratoriów i nie wymagają specjalnego dostosowywania. Podsumowując, ten artykuł przedstawia unikalną, łatwą do wykonania metodę indukowania PCOS u myszy.
Wprowadzenie
Zespół policystycznych jajników (PCOS) jest jednym z najczęstszych schorzeń wśród kobiet w wieku rozrodczym1. Dotyka do 18% kobiet na całym świecie i jest główną przyczyną niepłodności kobiet na całym świecie2,3. PCOS charakteryzuje się szeregiem powiązanych ze sobą nieprawidłowości rozrodczych, w tym zaburzonym wydzielaniem gonadotropin, przewlekłym brakiem owulacji, zwiększoną produkcją androgenów i morfologią policystycznych jajników4. Oprócz zaburzeń ginekologicznych, PCOS zwiększa również ryzyko chorób sercowo-naczyniowych5,
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie protokoły eksperymentalne na zwierzętach w tym badaniu zostały zatwierdzone przez Komisję Etyki Zwierząt Uniwersytetu Fudan. Wykorzystano tu samice myszy C57BL/6J w wieku 4 tygodni. Szczegółowe informacje na temat zwierząt, odczynników i sprzętu użytego w tym badaniu są wymienione w Tabeli Materiałów.
1. Przygotowanie mini-pompy
- Weź letrozol w proszku (50 mg) przechowywany w oryginalnej butelce do opakowania, odwiruj proszek letrozolu w butelce o sile 300 x g przez 5 s (w temperaturze pokojowej), a następnie otwórz nakrętkę.
- Powoli dodać 625 μl DMSO do proszku letroz....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Protokół eksperymentalny oraz niektóre krytyczne etapy przedstawiono na Rysunku 1 i Rysunku 2. Poziomy testosteronu w surowicy przedstawiono na Rysunku 3A. Myszy leczone letrozolem za pomocą minipomp (zwane dalej myszami LTZ) wykazały znacznie podwyższone poziomy testosteronu w surowicy w porównaniu z samicami myszy kontrolnych. Tymczasem analiza histologiczna jajników wykazała, że u myszy LTZ wystąpiły jajniki policystyczne ze znac.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Raport ten przedstawia prosty protokół indukcji PCOS u myszy przy użyciu łatwo dostępnych materiałów. Mysi model PCOS jest niezbędny do badania mechanizmów PCOS i badań przesiewowych leków26. Spośród dostępnych metod indukowania modeli PCOS u myszy, indukcja letrozolu jest jedną z najczęściej stosowanych. Stosowanie letrozolu może rozwijać i utrzymywać stan hiperandrogenny poprzez hamowanie konwersji testosteronu do estradiolu lub zwiększanie syntezy testosteronu27. Mysi mo.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Badanie było wspierane przez Narodowy Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Chin (granty 2021YFC2700701), Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (granty 82088102, 82071731, 82171613, 8227034, 81601238), Fundusz Innowacji Chińskiej Akademii Nauk Medycznych dla Nauk Medycznych (grant 2019-I2M-5-064), Komisję Nauki i Technologii Gminy Szanghaj (granty 21Y11907600), Miejską Komisję Zdrowia i Planowania Rodziny w Szanghaju (grant 20215Y0216), Wspólny program innowacyjny Miejskiej Komisji Zdrowia w Szanghaju (grant 2020CXJQ01), Plan badań klinicznych Centrum Rozwoju Szpitala w Szanghaju (grant SHDC2020CR1008A), Centrum Badań Klinicznych Chorób Ginekologicznych w Szanghaj....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Strzykawka | Bofeng Biotech | BD300841 | 1ML (sterylna) |
| Probówka wirówkowa | Biological Hope | 1850-K | 15ML (sterylna) |
| Pipeta | Eppendorf | 3123000268-A | 100μ L-1000μ L (sterylna) |
| Pipeta | TopPette | 7010101008 | 10μ L-100μ L (sterylny) |
| Letrozol w proszku | Sigma | L6545-50MG | Leki o podstawowym działaniu (sterylne) |
| PEG (poli(glikol etylenowy))Solarbio | P8250 | Używany do rozpuszczania (sterylny) | |
| Sterylny fizjologiczny roztwór soli fizjologicznej Biosharp | BL158A | Mini-pompa do przechowywania | |
| Pompy osmotyczne | ALZET | 1004 | Przechowywanie letrozolu i przedłużone uwalnianie (sterylne) |
| Dimetylosulfotlenek | Biosharp | BS087 | Używany do rozpuszczania (sterylnego) |
| Maszyna do znieczulenia małych zwierząt | RWD | R500IP | Używany do znieczulenia |
| Izofluran | RWD | 20071302 | Używany do znieczulenia |
| Hemostatyki | Biosharp | BS-HF-S-125 | Narzędzie chirurgiczne |
| Nożyczki | Biosharp | BS-SOR-S-100P | Instrument chirurgiczny |
| Uchwyt igły | ShangHaiJZ | J32010 | Narzędzie chirurgiczne |
| Kleszcze | RWD | F12028 | Instrument chirurgiczny |
| Igła i wchłanialny szew 4-0 | JINGHUAN | CR413 | Instrument chirurgiczny |
| Waciki powidonowo-jodowe | SingleLady | GB26368-2010 | Dezynfekcja skóry |
| Krem do depilacji | ZIKER BIOTECHNOLOGY | ZK-L2701 | Środek do depilacji zwierząt laboratoryjnych |
| Rękawice nitrylowe | Biosharp | BC040-L | Używany do operacji aseptycznych |
| Sterylna gaza | ZHENDE | BA69087 | Służy do wycierania płynów |
| C57BL/6J Myszy | Shanghai Model Organisms Center | N/A | Wiek: 4 tygodnie |
| Smar do oczu zwierząt BAITE | SHF021153 | Używany do smaru do oczu myszy | |
| Meloksykam do wstrzykiwań | MEIDAJIA | R21064-21 | Stosowany do analgezji myszy (sterylny) |
Bibliografia
- Dapas, M., Dunaif, A. Deconstructing a syndrome: Genomic insights into PCOS causal mechanisms and classification. Endocr Rev. 43 (6), 927-965 (2022).
- Teede, H., et al. Anti-müllerian hormone in PCOS: A review informing intern....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
