Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Niedojrzały mysi model odwracalnej jednostronnej niedrożności moczowodu

1.4K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/67238

⸱

4 kwietnia 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Urology Children's Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing Key Laboratory of Structural Birth Defect and Reconstruction, National Clinical Research Center for Child Health and Disorders, Ministry of Education Key Laboratory of Child Development and Disorders, 2Chongqing Key Laboratory of Structural Birth Defect and Reconstruction, Chongqing Key Laboratory of Children Urogenital Development and Tissue Engineering, Children's Hospital of Chongqing Medical University, 3Department of Urology, Children's Hospital of Chongqing Medical University

W tym artykule

Podsumowanie

Obecny protokół opisuje krok po kroku, powtarzalny model jednostronnej niedrożności moczowodu.

Streszczenie

Jednostronna niedrożność moczowodu (UUO) jest częstą przyczyną przewlekłej choroby nerek (PChN), prowadzącej do postępu zwłóknienia śródmiąższowego nerek i ostatecznie prowadzącej do nieodwracalnego uszkodzenia nerek. Złagodzenie UUO ma kluczowe znaczenie. W literaturze opracowano kilka zwierzęcych modeli odwracalnej jednostronnej niedrożności moczowodu (RUUO), które umożliwiają obserwację zmian strukturalnych i uszkodzeń funkcjonalnych, a także symulują zmiany fizjologiczne i patofizjologiczne po ustąpieniu niedrożności moczowodu. W tym badaniu ustalono model odwracalnej niedrożności w jednostronnym moczowodzie mysim za pomocą rurki silikonowej. Przed ustąpieniem niedrożności zaobserwowano znaczne uszkodzenie nerek, po którym odnotowano częściową poprawę. W przeciwieństwie do UUO, model ten zapobiega postępującemu wodonerczu, prowadzącemu do różnych patologicznych skutków. Ta prosta procedura chirurgiczna wykazuje wysoki wskaźnik sukcesu i jest obiecująca jako klasyczny model do badania odwracalnej nefropatii obturacyjnej i potencjalnych metod leczenia zwłóknienia śródmiąższowego nerek. Ponadto stanowi praktyczną platformę do badania mechanizmów powrotu do zdrowia po nefropatii obturacyjnej, regeneracji komórek nerkowych i przebudowy tkanek.

Wprowadzenie

Niedrożność cewki moczowej znacząco przyczynia się do zwłóknienia śródmiąższowego nerek i przewlekłej choroby nerek (PChN), potencjalnie prowadząc do nieodwracalnych uszkodzeń strukturalnych i zaburzeń funkcjonalnych w nerkach1. Chociaż jednostronna niedrożność moczowodu (UUO) jest szeroko stosowana do badania uszkodzenia nerek i PChN, nie odtwarza dokładnie mechanizmów spontanicznego powrotu do zdrowia, które występują po usunięciu niedrożności. Model UUO polega na podwiązaniu lewego moczowodu szwami, co skutkuje trwałą niedrożnością, rozszerzeniem moczowodu, wodonerczem, uciskiem miąższu nerki i ścieńczeniem kory mózgowej. Badanie histologiczne zazwyczaj ujawnia rozszerzenie kanalików, martwicę komórek nabłonka kanalików oraz postępujące zapalenie śródmiąższowe i zwłóknienie2. Model ten bada przede wszystkim zwłóknienie śródmiąższowe nerek i nieodwracalną utratę funkcji nerek z powodu uporczywej niedrożności.

Jednak wiele chorób nerek napotkanych w praktyce klinicznej, takich jak niedrożność spowodowana przez kamicę moczowodową lub guzy, jest odwracalna. Model odwracalnej jednostronnej niedrożności moczowodu (RUUO) pozwala na częściowe przywrócenie struktury nerek i funkcji dróg moczowych, ostatecznie rozwiązując wodonercze. Powrót do zdrowia można ocenić za pomocą technik obrazowania, badania histologicznego i analizy biomarkerów w celu ilościowego określenia zmniejszenia uszkodzenia nerek i zwłóknienia3. Model ten ściśle naśladuje fazę rekonwalescencji nefropatii obturacyjnej w warunkach klinicznych i jest bardziej odpowiedni niż UUO do badania kluczowych procesów, takich jak stan zapalny, odpowiedzi immunologiczne, regeneracja komórek i przebudowa tkanek4,5,6,7,8.

Model RUUO umożliwia badaczom analizę naprawy i regeneracji nerek po złagodzeniu urazów, rozwiązując problemy UUO w badaniach dynamicznych. Porównując różne punkty czasowe przed i po niedrożności, naukowcy mogą badać szlaki molekularne zaangażowane w urazy i naprawy, w tym stan zapalny, apoptozę, zwłóknienie i regenerację. Takie podejście pozwala lepiej zrozumieć mechanizmy regeneracji nerek i zidentyfikować potencjalne cele terapeutyczne2,3,4,5,8,9,10. Podczas gdy zwłóknienie nerek jest często uważane za nieodwracalne, obserwacje kliniczne sugerują, że wczesne złagodzenie niedrożności w początkowych stadiach zwłóknienia może zatrzymać lub nawet odwrócić postęp choroby. Model RUUO stanowi cenną platformę eksperymentalną do badania tego zjawiska11.

Ponadto, model RUUO ułatwia badanie odwrócenia zwłóknienia po ustąpieniu niedrożności, oferując wgląd w mechanizmy odzyskiwania i potencjalne terapie przeciwzwłóknieniowe3,4. W związku z tym model ten jest bardzo praktyczny w badaniach translacyjnych. Głównym celem tego modelu eksperymentalnego jest wywołanie nefropatii obturacyjnej poprzez kaniulację moczowodu, a następnie standaryzowaną ulgę w określonym punkcie czasowym w celu zapewnienia spójności. Jest zoptymalizowany pod kątem prostoty, powtarzalności i bezpieczeństwa, dzięki czemu jest skutecznym narzędziem do badań eksperymentalnych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

To badanie na zwierzętach było zgodne z wytycznymi Deklaracji Helsińskiej i zostało zatwierdzone przez Komisję Etyki Badań Szpitala Dziecięcego Uniwersytetu Medycznego w Chongqing. W sumie 27 samców szczurów Sprague Dawley (SD) zostało pozyskanych komercyjnie i trzymanych w Centrum Zwierząt Laboratoryjnych Szpitala Dziecięcego Uniwersytetu Medycznego w Chongqing (SPF, numer licencji: SYXK (Chongqing) 2007-0016). Szczury były utrzymywane w kontrolowanych warunkach temperaturowych z 12-godzinnym cyklem światło/ciemność i miały dostęp ad libitum do pożywienia i wody.

Protokół został przeprowadzony na samcach szczurów SD w wieku 6-8 tygodni i ma zastosowanie do szczurów w każdym wieku z obustronnymi moczowodami. W tym badaniu piętnaście 6-tygodniowych samców szczurów SD zostało losowo przydzielonych do trzech grup: grupy rodzimej (n = 5), grupy UUO (n = 5) i grupy RUUO (n = 5). Dodatkowo pięć 8-tygodniowych szczurów SD (n = 5) zostało włączonych jako dodatkowa grupa kontrolna. Aby ustalić model RUUO, wykorzystano 12 szczurów, przy czym 7 dodatkowych szczurów pozyskano w celu uwzględnienia potencjalnych zagrożeń, takich jak śmiertelność śródoperacyjna i pooperacyjna, niepowodzenia chirurgiczne, niepełna niedrożność i nieudane odwrócenie. Zapewniło to minimum 5 szczurów w grupie do kolejnych analiz.

Wszystkie zabiegi chirurgiczne były przeprowadzane w ścisłej zgodności z instytucjonalnymi i krajowymi wytycznymi dotyczącymi opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych. Personel chirurgiczny przestrzegał protokołów dotyczących środków ochrony osobistej (PPE), w tym masek chirurgicznych, rękawiczek i fartuchów. Do każdego zabiegu używano sterylnych narzędzi chirurgicznych, które były sterylizowane w autoklawie przed i po użyciu w celu utrzymania sterylności. Materiały odpadowe, w tym ostre narzędzia i próbki biologiczne, zostały zutylizowane zgodnie z protokołami postępowania z odpadami niebezpiecznymi w celu ograniczenia ryzyka zanieczyszczenia i zapewnienia bezpieczeństwa.

1. Przygotowanie zwierząt i instrumentów

  1. Wszystkie procedury należy przeprowadzać przy użyciu sterylnych (autoklawowanych) narzędzi i materiałów eksploatacyjnych. Wysterylizowaną rurkę silikonową (średnica wewnętrzna: 1,5 mm, średnica zewnętrzna: 2,5 mm) pokrój na segmenty o długości około 1 cm. Wykonaj podłużne nacięcie wzdłuż jednej strony ścianki rurki do późniejszego użycia.
  2. Znieczulić szczury poprzez dootrzewnowe wstrzyknięcie pentobarbitalu (40 mg / kg) (zgodnie z instytucjonalnie zatwierdzonymi protokołami). Potwierdź odpowiednie znieczulenie, sprawdzając, czy nie ma reakcji odruchowych, takich jak odruch wycofania pedału, po uszczypnięciu palca. Nałóż weterynaryjną maść okulistyczną na oczy, aby zapobiec wysuszeniu rogówki podczas znieczulenia. Chlorowodorek buprenorfiny (0,05 mg/kg) należy podawać podskórnie (SC) jako zapobiegawczy środek przeciwbólowy na 30 minut przed nacięciem chirurgicznym.
  3. Wydepiluj brzuch szczura od wyrostka mieczykowatego do spojenia łonowego i rozciągnij się obustronnie do linii środkowej.
  4. Ułóż szczura w pozycji leżącej na podgrzewanej podkładce chirurgicznej i zabezpiecz jego kończyny gumowymi linami.
  5. Wykonaj antyseptykę skóry brzucha, inicjując peelingi na linii środkowej (pępek) i rozciągając obustronnie za pomocą naprzemiennych sterylnych aplikacji gazy 70% etanolu (suszonego na powietrzu), 5% jodu powidonu (≥1 min kontaktu) i 70% etanolu (suszonego na powietrzu) przez trzy pełne cykle, a następnie ostatnią warstwę jodu powidonu suszoną na powietrzu przed nacięciem w ciągu 15 minut. Następnie ułóż sterylny arkusz z okienkami, aby utrzymać sterylne pole. Wykonaj nacięcie skóry w linii środkowej wzdłuż brzucha, rozciągające się od obszaru podmieczykowatego do tuż poniżej pępka, aby zapewnić odpowiednią ekspozycję nerek i górnych moczowodów.
  6. Naciąć tkanki podskórne i powięź wzdłuż linii środkowej za pomocą nożyczek chirurgicznych. Wypreparuj skórę i leżące pod nią tkanki skrupulatnie warstwa po warstwie i całkowicie odsłonij przestrzeń zaotrzewnową za pomocą kleszczyków tkankowych.

2. Chirurgia obturacyjna odwracalnej jednostronnej niedrożności moczowodu

  1. Cofnij jelito na prawą stronę jamy brzusznej za pomocą sterylnego wacika, aby ułatwić bezpośrednią wizualizację lewego moczowodu. Przykryj moczowód gazą nasączoną solą fizjologiczną, aby zapobiec wysuszeniu.
  2. Wypreparuj i zmobilizuj lewy moczowód za pomocą mikroskopijnych kleszczy, uwalniając około 1,5 cm od otaczających tkanek.
  3. Umieść silikonową rurkę o długości 1 cm (średnica wewnętrzna: 1,5 mm, średnica zewnętrzna: 2,5 mm) pod uwolnionym moczowodem. Użyj kleszczyków, aby zapewnić całkowite zamknięcie w tubie.
  4. Podwiązywać silikonową rurkę i środkową część moczowodu za pomocą jedwabnej nici 3-0, aby wywołać niedrożność moczowodu. Unikaj nadmiernej siły podwiązania. Stopniowo przeciągaj silikonową rurkę wzdłuż osi podłużnej moczowodu, aby zapewnić bezpieczne, ale antypoślizgowe podwiązanie.
  5. Ostrożnie ułóż jelito w jamie otrzewnej, zapewniając prawidłowe wyrównanie bez napięcia i niedrożności.
  6. Zszyj warstwy mięśni brzucha i powięzi za pomocą niewchłanialnego szwu 3-0 z zakrzywioną igłą tnącą w sposób ciągły, aby zapewnić odpowiednią wytrzymałość na rozciąganie. Zamknij skórę za pomocą niewchłanialnego szwu biegnącego 4-0, zapewniając anatomiczne wyrównanie i równomierne napięcie, aby przyspieszyć gojenie i zminimalizować ryzyko rozejścia się rany.
  7. Pozwól szczurom dojść do siebie w kontrolowanych warunkach w stałej temperaturze przez 7 dni.
    UWAGA: Analgezja pooperacyjna utrzymywała się przy wielokrotnych podskórnych iniekcjach buprenorfiny (0,05 mg/kg) w odstępach 8-12 godzin przez 48-72 godziny po operacji. Podanie przeciwbólowe nie przekraczało 72 godzin.

3. Chirurgia ulgowa odwracalnej jednostronnej niedrożności moczowodu

  1. Przygotuj niezbędne zwierzęta i narzędzia, zapewniając sterylne ustawienie do ponownego otwarcia jamy brzusznej i pełnego odsłonięcia jamy brzusznej.
  2. Ostrożnie rozetnij węzeł silikonowej rurki za pomocą ostrza skalpela. Wyjmij rurkę i przepłucz jamę brzuszną zwykłą solą fizjologiczną, aby zminimalizować ryzyko adhezji i infekcji.
  3. Zmień położenie jelita i zszyj nacięcie ściany brzucha warstwami za pomocą niewchłanialnych szwów 4-0. Umieść szczura w środowisku o kontrolowanej temperaturze na 7-dniowy okres rekonwalescencji po operacji.
  4. W 14 dniu po operacji znieczulij szczury (postępując zgodnie z procedurą opisaną w kroku 1.2) i pobierz próbki nerek, dzieląc nerki poprzecznie na dwie połowy9.
  5. Przechowywać jedną połowę w 4% paraformaldehydzie do badania histopatologicznego, a drugą połowę szybko zamrażać w ciekłym azocie w celu przechowywania w temperaturze -80 °C do późniejszej analizy molekularnej. Pobranie próbek krwi do analiz biochemicznych.
  6. Potwierdź eutanazję przez obustronną torakotomię za pomocą nożyczek chirurgicznych po znieczuleniu końcowym, z bezpośrednią wizualizacją zatrzymania krążenia.

4. Oceny uzupełniające

  1. Śledź masę ciała po RUUO, aby ocenić ogólny powrót do zdrowia. Porównaj zmiany masy ciała z grupą kontrolną i grupą UUO.
  2. Zmierz masę nerek i objętość nerek, aby ocenić regenerację nerek.
  3. Monitoruj poziom kreatyniny (Scr) w surowicy jako wskaźnik poprawy czynności nerek9.
  4. Wstrzyknąć błękit metylenowy do miedniczki nerkowej, aby potwierdzić drożność moczowodu. Obserwuj perystaltykę i zabarwienie moczowodu, aby ocenić powrót do zdrowia po obturacji.
  5. Wykonaj barwienie H&E, aby ocenić integralność kanalików i strukturę nerek po RUUO8,10.
  6. Przeprowadź barwienie trichromowe Massona, aby ocenić regresję zwłóknienia śródmiąższowego nerek8,10.
  7. Porównaj wyniki uszkodzenia nerek3,8między grupami UUO i RUUO, aby określić ilościowo regenerację tkanek.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Oceniono wpływ UUO i jego późniejszego zniesienia (RUUO) na masę ciała, masę nerek, objętość nerek oraz poziom kreatyniny w surowicy (Scr), co podsumowano w Tabeli 1. Dane przedstawiono jako średnia ± odchylenie standardowe (SD), przy n = 5 na grupę.

W 6. tygodniu grupa natywna wykazywała średnią masę ciała 234 g ± 16 g, masę nerek 0,9107 g ± 0,0475 g oraz objętość nerek 0,8962 cm³ ± 0,0502 cm³. Do 8. tygodnia w grupie kontrolnej odnotowano istotne zwiększenie masy ciała (291 ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Model ten wykorzystuje silikonową rurkę do otaczania moczowodu, zapewniając wsparcie strukturalne, a następnie podwiązanie jedwabną nicią w celu wywołania całkowitej niedrożności moczowodu poprzez ucisk. Po siedmiu dniach podwiązanie i rurka silikonowa są usuwane, aby ułatwić dekompresję nerek oraz przywrócenie integralności i funkcjonalności dróg moczowych.

Rurki silikonowe, wykonane z elastomerów silikonowych, zapewniają doskonałą elastyczność, biokompatybilność, odporność chemiczną i stabil...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez Program for Youth Innovation in Future Medicine, Chongqing Medical University (W0056), Chongqing Science and Health Joint TCM Technology Innovation and Application Development Project (2020ZY023877).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
KleszczeShanghai Medical Devices Co., Ltd20220032
GauzeSichuan Kelun Co., Ltd20172140152
Zestaw do barwienia hematoksyliny i eozynySolarbioG1120
Igły do insulinyKDL Urządzenia medyczne20193140938
Masson' s Zestaw bejc trichromowychSolarbioG1340
Medyczne kulki bawełnianeSichuan Kelun Co., Ltd20170037
Medyczne patyczki bawełnianeSichuan Kelun Co., Ltd20172140026
Błękit metylenowyTianjin Dengfeng Fabryka odczynników chemicznych14038-43-8
Kleszcze mikroskopijneSuqian Shifeng Medical Devices Co., LtdS50985
Uchwyty igiełSuqian Shifeng Medical Devices Co., LtdS7005
Roztwór jodu powidonuSichuan Kelun Co., Ltd514001
SalineSichuan Kelun Co., Ltd20220004
SD RatsSPF(Beijing)Biotechnology Co., LtdD025
Rurki silikonoweTaizhou Chunshi New Materials Co., LtdCS356
Szew jedwabny Qiangsheng Medical Devices Co., LtdSA84G
Ostrze chirurgiczneHuanan Yunyue Medical Devices Co., LtdCE0434
Nożyczki chirurgiczneShanghai Medical Devices Co., LtdJ21130
StrzykawkaTongmai urządzenia medyczne20183140304
Kleszcze do tkanekJiangxi Yuyuan Medical Equipment Co., LtdJ36030

Bibliografia

  1. Chaves, L. D., et al. Contrasting effects of systemic monocyte/macrophage and CD4+ t cell depletion in a reversible ureteral obstruction mouse model of chronic kidney disease. Clin Dev Immunol. 2013, 836989(2013).
  2. Chevalier, R. L., Forbes, M. S., Thornhill, B. A. Ureteral obstruction as a model of renal interstitial fibrosis and obstructive nephropathy. Kidney Int. 75 (11), 1145-1152 (2009).
  3. Aranda-Rivera, A. K., et al. Sulforaphane protects from kidney damage during the release of unilateral ureteral obstruction (RUUO) by activating nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (nrf2): Role of antioxidant, anti-inflammatory, and antiapoptotic mechanisms. Free Radic Biol Med. 212, 49-64 (2024).
  4. Narváez Barros, A., et al. Reversal unilateral ureteral obstruction: A mice experimental model. Nephron. 142 (2), 125-134 (2019).
  5. Cochrane, A. L., et al. Renal structural and functional repair in a mouse model of reversal of ureteral obstruction. J Am Soc Nephrol. 16 (12), 3623-3630 (2005).
  6. Kaeidi, A., et al. The therapeutic approaches of renal recovery after relief of the unilateral ureteral obstruction: A comprehensive review. Iran J Basic Med Sci. 23 (11), 1367-1373 (2020).
  7. Liu, Y., et al. A porcine model of relief of unilateral ureteral obstruction: Study on self-repairing capability over multiple time points. Mol Cell Biochem. 419 (1-2), 115-123 (2016).
  8. Puri, T. S., et al. Chronic kidney disease induced in mice by reversible unilateral ureteral obstruction is dependent on genetic background. Am J Physiol Renal Physiol. 298 (4), F1024-F1032 (2010).
  9. Chevalier, R. L., Kim, A., Thornhill, B. A., Wolstenholme, J. T. Recovery following relief of unilateral ureteral obstruction in the neonatal rat. Kidney Int. 55 (3), 793-807 (1999).
  10. Hesketh, E. E., et al. A murine model of irreversible and reversible unilateral ureteric obstruction. J Vis Exp. (94), e52559(2014).
  11. Klahr, S., Morrissey, J. Obstructive nephropathy and renal fibrosis. Am J Physiol Renal Physiol. 283 (5), F861-F875 (2002).
  12. Jin, B., et al. Loss of men1 leads to renal fibrosis and decreases HGF-ADAMTS5 pathway activity via an epigenetic mechanism. Clin Transl Med. 12 (8), e982(2022).
  13. Fischer, N. G., He, J., Aparicio, C. Surface immobilization chemistry of a laminin-derived peptide affects keratinocyte activity. Coatings (Basel). 10 (6), 560(2020).
  14. Song, J., et al. Losartan accelerates the repair process of renal fibrosis in UUO mouse after the surgical recanalization by upregulating the expression of tregs. Int Urol Nephrol. 51 (11), 2073-2081 (2019).
  15. Song, J., et al. Regulatory t cells accelerate the repair process of renal fibrosis by regulating mononuclear macrophages. Am J Med Sci. 361 (6), 776-785 (2021).
  16. Yao, Y., et al. Interferon-γ improves renal interstitial fibrosis and decreases intrarenal vascular resistance of hydronephrosis in an animal model. Urology. 77 (3), e768-e761.e713 (2011).
  17. Chevalier, R. L., Thornhill, B. A., Chang, A. Y., Cachat, F., Lackey, A. Recovery from release of ureteral obstruction in the rat: Relationship to nephrogenesis. Kidney Int. 61 (6), 2033-2043 (2002).
  18. Lucarelli, G., et al. Delayed relief of ureteral obstruction is implicated in the long-term development of renal damage and arterial hypertension in patients with unilateral ureteral injury. J Urol. 189 (3), 960-965 (2013).
  19. Ito, K., et al. Renal damage progresses despite improvement of renal function after relief of unilateral ureteral obstruction in adult rats. Am J Physiol Renal Physiol. 287 (6), F1283-F1293 (2004).
  20. Song, J., et al. A modified relief of unilateral ureteral obstruction model. Ren Fail. 41 (1), 497-506 (2019).
  21. Morrissey, J., et al. morphogenetic protein-7 improves renal fibrosis and accelerates the return of renal function. J Am Soc Nephrol. 13 (suppl_1), S14-S21 (2002).
  22. Ulm, A. H., Miller, F. An operation to produce experimental reversible hydronephrosis in dogs. J Urol. 88, 337-341 (1962).
  23. Park, H. C., et al. Postobstructive regeneration of kidney is derailed when surge in renal stem cells during course of unilateral ureteral obstruction is halted. Am J Physiol Renal Physiol. 298 (2), F357-F364 (2010).
  24. Forni, L. G., et al. Renal recovery after acute kidney injury. Intensive Care Med. 43 (6), 855-866 (2017).
  25. Varela, S., Omling, E., Borjesson, A., Salo, M. Resolution of hydronephrosis after pyeloplasty in children. J Pediatr Urol. 17 (1), e101-e102.e7 (2021).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Przeglądaj więcej artykułów

Odwracalna niedrożność moczowodówwłóknienie śródmiąższowe nerekregeneracja po uszkodzeniu nerekmysi model niedrożnościregeneracja komórek nerkowychprzebudowa tkankianaliza histologicznabarwienie trichromem Massonaskala uszkodzenia nerek
Niedojrzały mysi model odwracalnej jednostronnej niedrożności moczowodu
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.