Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Szybkie wykrywanie zjadliwości Helicobacter pylori i typowanie przy użyciu technologii znakowania kropkami kwantowymi

1.1K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/67792

⸱

13 czerwca 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Wśród licznych metod diagnostycznych dla Helicobacter pylori, immunofluorescencja kropek kwantowych może szybko wytypować i wykryć Helicobacter pylori, stanowiąc podstawę do podejmowania decyzji o leczeniu klinicznym. Niniejszy artykuł zawiera szczegółowe wprowadzenie do wartości aplikacyjnej technologii kropek kwantowych w typowaniu i wykrywaniu Helicobacter pylori.

Streszczenie

Prezentujemy metodę opartą na technologii znakowania kropkami kwantowymi do szybkiego wykrywania zjadliwości Helicobacter pylori i wykonywania typowania, mającą na celu przezwyciężenie ograniczeń konwencjonalnych metod diagnostycznych i zapewnienie podstawy do spersonalizowanego leczenia klinicznego. Zestaw został zaprojektowany przy użyciu metody kanapkowej z podwójnym antygenem. Wiązało się to z szeregiem skrupulatnych kroków, w tym ustanowieniem systemów reakcji buforowych oraz przeprowadzeniem procesów aktywacji i sprzęgania reakcji antygen-przeciwciało podczas przygotowywania zestawu. Ponadto istniały specjalne procedury pobierania, przetwarzania i testowania próbek w celu określenia statusu infekcji i typu wirulencji Helicobacter pylori. Poprzez ustanowienie modeli danych dla różnych wyników (ujemnych, typu II i typu I) zweryfikowano skuteczność technologii kropek kwantowych w wykrywaniu typowania. W przypadku próbek ujemnych stwierdzono słabe lub żadne istotne wartości sygnału w odpowiednich obszarach wykrywania. W przypadku próbek typu II zaobserwowano specyficzny wzorzec dodatnich i ujemnych wartości sygnału dla różnych przeciwciał, a dla próbek typu I odnotowano odrębny zestaw wartości sygnału dodatniego odpowiadających kluczowym przeciwciałom. Co więcej, jego zastosowanie w badaniach związanych z przewlekłym zapaleniem żołądka i rakiem żołądka wykazało jego wartość w służeniu jako wskaźnik przesiewowy. Metoda oparta na kropkach kwantowych ma zalety, takie jak lepsza czułość i swoistość w porównaniu z tradycyjnymi metodami diagnostycznymi. Wiąże się to jednak również z wyzwaniami, takimi jak potencjalny wpływ czasu przechowywania próbki i stosunkowo wysokie koszty. Niemniej jednak, dzięki ciągłym innowacjom technologicznym, oczekuje się, że w przyszłości będzie odgrywać bardziej znaczącą rolę w dziedzinie biomedycyny w wykrywaniu Helicobacter pylori i diagnozowaniu powiązanych chorób.

Wprowadzenie

Helicobacter pylori (H. pylori) to bakteria Gram-ujemna znajdująca się między błoną śluzową odźwiernika a błoną podśluzową błony śluzowej żołądka1,2. W 1994 roku Światowa Organizacja Zdrowia/Międzynarodowa Agencja Badań nad Rakiem (WHO/IARC) sklasyfikowała go jako czynnik rakotwórczy klasy I. W zależności od tego, czy wyrażają toksyny cytotoksyny A (VacA) i genu A związanego z cytotoksyną (CagA), dzielą się na dwa typy: wirus wirusa H. pylori typu I: bardziej zjadliwy i bardziej szkodliwy dla pacjentów. Zakażenie H. pylori typu II, ściśle związane z występowaniem wrzodów żołądka i dwunastnicy oraz raka żołądka, obejmuje szczepy o niskiej zjadliwości i słabej patogenności, zwykle objawiające się łagodną niestrawnością3,4. Naukowcy odkryli, że wskaźnik infekcji typu I jest wyższy niż typu II, przy czym wskaźniki infekcji typu I i typu II wynoszą odpowiednio 72,4% i 27,6%5. Szybkie wykrywanie typów H. pylori, zwłaszcza rozróżnienie między typem I a typem II, ma kluczowe znaczenie dla leczenia klinicznego i zapobiegania chorobie.

Przewlekłe zapalenie błony śluzowej żołądka spowodowane zakażeniem H. pylori może prowadzić do poważnych chorób układu pokarmowego, takich jak zanikowe zapalenie błony śluzowej żołądka, choroba wrzodowa żołądka, gruczolakorak żołądka i chłoniak tkanki limfatycznej związanej z błoną śluzową (MALT) u zakażonych pacjentów6,7,8. Badanie Global Burden of Disease Study z 2014 r. przewiduje, że począwszy od 2010 r., około 3,5 zgonu na 100 000 osób będzie spowodowanych chorobą wrzodową każdego roku9. Raporty z badań wykazały, że prawie 800 000 nowych przypadków raka żołądka na całym świecie w 2018 r. było związanych z infekcją H. pylori10. W ostatnich latach badania wykazały, że zakażenie H. pylori jest również ściśle związane z chorobami neurologicznymi, chorobami układu krążenia, cukrzycą itp. Zakażenie H. pylori stało się globalnym problemem zdrowia publicznego. Dlatego dokładne wykrycie zakażenia H. pylori jest ważne dla wykrywania chorób powiązanych. Leczenie ma kluczowe znaczenie, dzięki czemu dokładne wykrywanie H. pylori staje się punktem zapalnym badań.

Ponieważ wskaźnik infekcji H. pylori jest wysoki w Chinach, szybkie i dokładne wykrycie infekcji H. pylori jest pomocne we wczesnym wykrywaniu i leczeniu oraz ma pozytywne znaczenie dla zapobiegania i leczenia raka żołądka. Istnieją różne metody wykrywania zakażenia H. pylori, w tym metody inwazyjne, takie jak szybki test ureazowy (RUT), barwiona mikroskopia skrawków tkanki błony śluzowej żołądka, endoskopia i test oddechowy C13 lub C14 mocznikowy. (UBT), test antygenu kału H. pylori (SAT) i inne nieinwazyjne metody11,12,13. Te metody wykrywania mają pewne ograniczenia. Na przykład badanie histologiczne może dać fałszywie ujemne wyniki ze względu na jakość i wielkość próbki biopsji wybranej w miejscu biopsji; na test oddechowy może mieć wpływ niedawne stosowanie przez pacjenta antybiotyków lub inhibitorów pompy protonowej (PPI) oraz wpływ różnych czynników wpływających11,14,15. Ze względu na ograniczenia tradycyjnych metod, takie jak czasochłonność i niewystarczająca czułość i swoistość, opracowanie szybkich metod diagnostycznych opartych na immunofluorescencji kropek kwantowych (QD-IF) wykazało duży potencjał aplikacyjny w dziedzinie testów biologicznych16,17. Analiza QD-IF wprowadza sondy fluorescencyjne z kropkami kwantowymi w celu uzyskania specyficznego wykrywania celów molekularnych poprzez specyficzne wiązanie z celami molekularnymi18,19.

Kropki kwantowe to półprzewodnikowe nanocząstki o promieniu mniejszym lub zbliżonym do promienia ekscytonu Bohra, zazwyczaj od 1 do 10 nm. Kropki kwantowe są używane jako sondy fluorescencyjne. Sygnały fluorescencyjne są generowane przez wzbudzające kropki kwantowe, a dane ilościowe uzyskuje się poprzez pomiar urządzenia. Jego zalety to szeroki zakres długości fal wzbudzenia, wąskie długości fal emisji, regulowany rozmiar fluorescencji, wysoka czułość, dobra stabilność optyczna, długa żywotność fluorescencji, duże przesunięcie Stokesa i wysoka wydajność fluorescencji kwantowej. Kropki kwantowe przezwyciężają wady innych markerów, takie jak krótki czas luminescencji, precyzyjne wymagania środowiskowe, słaba powtarzalność, słaba stabilność (np. barwniki fluorescencyjne), inaktywacja enzymów i niska czułość. Test immunologiczny fluorescencji kropek kwantowych łączy w sobie zalety testu immunologicznego fluorescencji kropek kwantowych i testu immunologicznego fluorescencji biomarkerów oraz ma zalety prostoty, szybkości, wysokiej swoistości i wysokiej czułości20,21.

Tradycyjne narzędzia diagnostyczne do wykrywania H. pylori, w tym hodowla bakterii, test oddechowy mocznika i testy serologiczne, mają swoje własne ograniczenia. Hodowla bakterii jest czasochłonna i wymaga ścisłych warunków laboratoryjnych, co często skutkuje stosunkowo niską czułością ze względu na wybredne wymagania dotyczące wzrostu H. pylori. Test oddechowy z mocznikiem może dać fałszywie ujemne wyniki w pewnych okolicznościach, takich jak niedawne stosowanie antybiotyków lub inhibitorów pompy protonowej22,23,24. Testy serologiczne mogą w niektórych przypadkach wskazać jedynie wcześniejsze narażenie, a nie obecny stan infekcji i nie są w stanie rozróżnić różnych typów wirulencji patogenu.

Natomiast technologia immunofluorescencji kropek kwantowych (QD-IF) okazała się obiecującą alternatywą. QD-IF łączy w sobie doskonałe właściwości optyczne kropek kwantowych, takie jak wysoka intensywność fluorescencji, wąskie widma emisyjne i dobra fotostabilność, ze specyfiką reakcji immunologicznych. Umożliwia to szybkie i czułe wykrywanie antygenów lub przeciwciał H. pylori w próbkach biologicznych. Co więcej, ma wyjątkową zaletę polegającą na tym, że jest w stanie jednocześnie zidentyfikować typ zjadliwości infekującego szczepu, co jest trudne do osiągnięcia tradycyjnymi metodami. Wypełniając tę lukę w procesie diagnostycznym, technologia QD-IF ma ogromny potencjał, aby zrewolucjonizować sposób, w jaki diagnozujemy i leczymy infekcje H. pylori, ułatwiając bardziej spersonalizowane i skuteczne interwencje medyczne.

Ogólnie rzecz biorąc, istnieje pilna kliniczna potrzeba nieinwazyjnej, skutecznej metody diagnostycznej, która mogłaby jednocześnie wykrywać infekcję H. pylori i jej typy wirulencji (typ I i typ II). Niniejszy artykuł ma na celu wykorzystanie metody QD-IF do oceny obecności zakażenia H. pylori w próbkach tkanek oraz skonstruowanie szybkiej i dokładnej metody wykrywania typów infekcji H. pylori. Szybkie wykrywanie zakażenia H. pylori i jego typów wirulencji ma ogromne znaczenie dla osiągnięcia medycyny precyzyjnej, poprawy efektów leczenia, zmniejszenia ryzyka chorób pokrewnych i zapobiegania rakowi żołądka. Stanowi naukową podstawę teoretyczną dla personelu klinicznego do wyboru dokładnych metod wykrywania infekcji H. pylori.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Niniejsze badanie (KY2025-191-01) zostało przeprowadzone zgodnie z wytycznymi komitetu etyki badań z udziałem ludzi w Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences) na Southern Medical University. Artykuł ten jest zgodny z wnioskiem o zwolnienie z obowiązku uzyskania świadomej zgody.

UWAGA: Celem niniejszego badania jest wykorzystanie technologii kropek kwantowych do zaprojektowania i opracowania zestawu do diagnostyki, który pozwoli ustalić, czy w próbkach krwi uczestników znajdują się przeciwciała przeciwko ureazie (Urease) Helicobacter pylori, przeciwciała przeciwko cytotoksynie wakuolowej A (VacA) oraz przeciwciała przeciwko toksynie z genu związanego z cytotoksycznością A (CagA), aby określić obecność zakażenia H. pylori oraz to, czy zainfekowany szczep jest typu I czy typu II. Zaprojektowany zestaw wykorzystuje metodę kanapkową z podwójnym antygenem do pomiaru przeciwciał przeciwko ureazie Helicobacter pylori, przeciwciałom CagA i przeciwciałom VacA. Po dodaniu próbki testowej zawierającej substancję docelową na podkładkę do próbek, przepływa ona przez podkładkę kwantową i membranę dzięki działaniu syfonu, tworząc kompleksy antygen-przeciwciało w fazie stałej. Po naniesieniu próbki, linia detekcji i masa są odczytywane odpowiednio przez analizator. Wartość sygnału linii kontrolnej służy do określenia stanu negatywnego lub pozytywnego dla przeciwciał przeciwko ureazie, CagA i VacA na podstawie wartości sygnału T/C dla każdego z trzech przeciwciał. Schemat projektu przedstawiono na Rysunku 1.

Schemat testu z przepływem bocznym, podkład z kropkami kwantowymi, znaczniki przeciwciał, płyta PVC, membrana NC.
Rycina 1: Schemat karty testowej do typowania H. pylori. Na rysunku przedstawiono strukturę i skład karty testowej. Aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny, kliknij tutaj.

1. Przygotowanie zestawu

  1. Utworzenie układu reakcyjnego kropek kwantowych (QDs) w buforze kwasu 2-(N-morfolino)etanosulfonowego (MES)
    1. Dostosować temperaturę oryginalnego roztworu QDs do temperatury pokojowej (RT). Następnie pobrać 1000 µL i dodać równą objętość 2x roztworu MES (końcowe stężenie MES wyniosło 10 mmol/L).
    2. Wymieszać, wstrząsnąć i poddać sonikacji przez 30 s do 3 min.
  2. Aktywacja
    1. Dodać 20 mg/mL 1-etylo-3-(3-dimetylaminopropylokarbodiimidu (EDC)/ N-hydroksy-sukcynimidu (NHS) do układu QDs-bufor MES w stosunku 10:1. Wymieszać, wstrząsnąć i poddać sonikacji przez 3 min.
    2. Umieścić przygotowany roztwór w kąpieli wodnej o temperaturze 37 °C na 15 min, a następnie odwirować przy 13 000 × g przez 20 min.
    3. Usunąć nadfiltr z odwirowanego roztworu i rozpuścić ponownie za pomocą 1x roztworu MES. Wielokrotnie przepłukiwać roztwór pipetą, wstrząsnąć w celu dokładnego wymieszania i poddać sonikacji przez 3 min.
    4. Umieścić powyższy roztwór w kąpieli wodnej o temperaturze 37 °C na 15 min i odwirować przy 13 000 × g przez 20 min.
  3. Koniugacja
    1. Dodać 0,03 mg antygenu ureazy, antygenu CagA, antygenu VacA oraz koziego przeciwciała anty-mysiego IgG do 1000 µL roztworu aktywacyjnego, wielokrotnie pipetować, wstrząsnąć i poddać sonikacji przez 3 min.
    2. Umieścić powyższy roztwór w kąpieli wodnej o temperaturze 37 °C i inkubować przez 3 h.
  4. Blokowanie i przechowywanie
    1. Dodać 100 µL roztworu blokującego (Tabela uzupełniająca 1) i inkubować przez 1 h.
    2. Odwirować zablokowany roztwór przy 13 000 × g przez 15 min.
    3. Usunąć nadfiltr z odwirowanego roztworu, dodać 750 µL roztworu do rekonstytucji (Tabela uzupełniająca 1), wielokrotnie pipetować, wstrząsnąć i poddać sonikacji przez 5 min, a następnie przechowywać w temperaturze 4 °C.

2. Przygotowanie płyt pokrytych

  1. Przygotowanie podkładek kwantowych
    1. Rozcieńczyć kompleks antygenu H. pylori znakowany kropkami kwantowymi w stosunku 1:5 buforem do rozcieńczania kropek kwantowych, aby przygotować wymaganą ilość zgodnie z wielkością partii produkcyjnej.
    2. Wziąć podkładkę kwantową i równomiernie nanieść na nią określoną ilość kompleksu antygenu H. pylori znakowanego kropkami kwantowymi za pomocą rozpylacza powłok, a następnie suszyć w temperaturze 37 °C przez 30 min.
  2. Przygotowanie membrany
    1. Użyć buforu do drukowania w celu rozcieńczenia materiałów do powlekania linii kontrolnej i linii testowej i przygotować wymaganą ilość zgodnie z objętością partii produkcyjnej.
    2. Przykleić membranę nitrocelulozową do płyty z polichlorku winylu (PVC), użyć rozpylacza złota do równomiernego naniesienia materiałów linii kontrolnej jakości i linii testowej na membranę, a następnie suszyć w temperaturze 57 °C przez 24 h.

3. Montaż

  1. Naklej kolejno podkładki kwantowe i próbkowe na pokrytą folią płytkę PVC.

4. Krojenie na paski

  1. Użyj przecinaka do pasków, aby pociąć złożoną dużą płytkę na paski testowe.

5. Opakowanie wewnętrzne

  1. Dopełnić pakowanie zgodnie z wymaganiami dotyczącymi składu zestawu.
    UWAGA: Składniki zestawu są następujące: (i) Karta testowa: składa się z obudowy paska testowego i paska testowego. Pasek testowy składa się z płyty PVC, podkładki na próbkę, podkładki kwantowej (kompleks antygenowy znakowany kropkami kwantowymi; kompleks zawiera antygen ureazy, antygen CagA, antygen VacA oraz IgG mysie), membrany nitrocelulozowej (obszar detekcji jest unieruchomiony antygenem VacA, antygenem CagA i antygenem ureazy (rekombinowany antygen o ekspresji eukariotycznej), a obszar kontroli jakości jest pokryty kozim przeciwciałem anty-IgG mysim (poliklonalne przeciwciało kozie)) oraz papierem wchłaniającym. Różne specyfikacje opakowań mają różną liczbę kart testowych. Jedna karta testowa jest wymagana dla odczynników na jedną osobę. (ii) Karta SD: 1 szt./pudełko. Komponenty karty testowej i karty pamięci SD z różnych partii zestawów testowych nie mogą być mieszane.

6. Przetwarzanie próbek

UWAGA: W celu pobrania próbek należy zapoznać się z Procedurami Operacyjnymi Narodowego Laboratorium Klinicznego.

  1. Pobrać krew do probówki z żelem separacyjnym. Należy zachować ostrożność, aby uniknąć hemolizy.
  2. Próbkę oddzielonego serum należy przebadać w ciągu 4 h w temperaturze pokojowej (RT). Jeśli nie jest możliwe przeprowadzenie badania w tym czasie, próbkę należy przechowywać w temperaturze 2-8 °C przez 3 dni. W przypadku długoterminowego przechowywania (do 1 roku), próbkę należy szczelnie zamknąć i przechowywać w temperaturze poniżej -20 °C.
  3. Próbki należy doprowadzić do temperatury RT i dokładnie wymieszać przed użyciem.
    UWAGA: Próbki zamrożone i rozmrożone muszą zostać całkowicie rozmrożone przed użyciem, a liczba cykli zamrażania i rozmrażania nie powinna przekraczać pięciu. Wielokrotne zamrażanie i rozmrażanie próbek może prowadzić do degradacji anality i powinno być unikane. Próbki z silną chylomią oraz hemolizą również wpłyną na wynik testu i powinny być odrzucane.

7. Procedura badania

  1. Wyjąć zestaw odczynnikowy oraz materiały do kontroli jakości i pozostawić je do wyrównania temperatury do RT.
  2. Przygotowanie próbek: Odwirować próbki krwi pełnej przy 1467 g przez 10 min.
  3. Sprawdzić, czy numer partii karty SD zgadza się z numerem partii zestawu odczynnikowego. Włożyć kartę SD do instrumentu w celu automatycznej kalibracji.
  4. Włączyć instrument oraz komputer sterujący. Uruchomić wyznaczone oprogramowanie i wybrać moduł Test . Wybrać Initialization Settings , aby zainicjować instrument, i poczekać na pomyślne zakończenie procesu.
  5. Uzyskać dostęp do obszaru odczynników instrumentu i wyjąć gniazdo kart testowych. Otworzyć zestaw odczynnikowy i wybrać wymaganą liczbę kart testowych.
  6. Otworzyć foliowe opakowania kart testowych i umieścić je w gnieździe zgodnie ze wskazaną orientacją. Włożyć gniazdo kart z powrotem do obszaru odczynników instrumentu.
  7. Testy Kontroli Jakości (QC)
    1. W module Test wybrać Manual Entry. Kliknąć Information Entry i wprowadzić szczegółowe informacje o materiale QC. Kliknąć Generate. Umieścić materiały QC w wyznaczonym statywie na próbki, zapewniając prawidłową kolejność i orientację.
    2. Kliknąć Start Test, aby rozpocząć testy QC. Igła pobierająca instrumentu aspiruje 80 µL próbki i dozuje ją pionowo do dołka na próbkę. Instrument automatycznie rozpocznie pomiar czasu po dozowaniu próbki. Po 15 min instrument przeprowadzi detekcję, odczyta wartości pomiarowe i wyświetli wyniki.
  8. Analiza próbek: W module Test wybrać Bidirectional LIS. Umieścić próbki do analizy w wyznaczonym statywie na próbki, zapewniając prawidłową kolejność i orientację. Kliknąć Start Test. Instrument w analogiczny sposób aspiruje 80 µL z każdej próbki i przetwarza je identycznie jak w procesie QC.
  9. Po zakończeniu testów wyjąć zużyte karty testowe z instrumentu i zutylizować je jako odpady medyczne.

8. Kontrola jakości

  1. Wynik negatywny dla H. pylori: Sprawdź i upewnij się, że wyniki produktów referencyjnych negatywnych dla Helicobacter pylori, mianowicie przeciwciała przeciw ureazie, przeciwciała przeciw CagA oraz przeciwciała przeciw VacA, są wszystkie negatywne.
  2. Zakażenie H. pylori typu II: Sprawdź i upewnij się, że produkt referencyjny dla Helicobacter pylori typu II, czyli przeciwciało przeciw ureazie, jest pozytywny, a wyniki dla przeciwciała przeciw CagA oraz przeciwciała przeciw VacA są negatywne.
  3. Zakażenie H. pylori typu I: Sprawdź i upewnij się, że produkt referencyjny dla Helicobacter pylori typu I, tzn. przeciwciało przeciw ureazie, jest pozytywne, a przeciwciało przeciw CagA i/lub przeciwciało przeciw VacA są pozytywne.

9. Analiza wyników

  1. Zakażenie typu II szczepami słabymi lub nietoksygennymi: Gdy odczyt przeciwciał przeciw ureazie jest dodatni, a odczyty przeciwciał przeciw CagA i VacA są ujemne, interpretuje się to jako zakażenie słabym lub nietoksygennym szczepem H. pylori .
  2. Zakażenie typu I szczepami wysoce patogennymi produkującymi toksyny: Gdy odczyt przeciwciał przeciw ureazie jest dodatni, a odczyt przeciwciał przeciw CagA lub VacA jest dodatni, lub oba są dodatnie, interpretuje się to jako zakażenie wysoce patogennym, produkującym toksyny szczepem H. pylori .
  3. Wynik ujemny: Gdy odczyty przeciwciał przeciw ureazie, CagA i VacA są wszystkie ujemne, interpretuje się to jako brak zakażenia szczepami H. pylori .
  4. Wynik nieważny: Gdy urządzenie oceni wynik jako nieważny, należy sprawdzić, czy nie wystąpił błąd w obsłudze lub awaria zestawu odczynników, a następnie powtórzyć procedurę.

10. Kalibracja analizatora fluorescencji

  1. W pierwszej kolejności włącz analizator i pozostaw go na około 15 min w celu rozgrzania i stabilizacji parametrów pracy. Następnie umieść dostarczony przez producenta standard kalibracyjny w uchwycie na próbki.
  2. Następnie przejdź do funkcji kalibracji w interfejsie analizatora i uruchom ten proces. Analizator automatycznie wykryje fluorescencję standardu i odpowiednio dostosuje parametry wewnętrzne, aby dopasować je do ustawionych wartości referencyjnych.
  3. Po tym kroku wyjmij standard kalibracyjny i wprowadź próbkę blank (próbkę ślepą), aby zweryfikować, czy odczyty znajdują się w dopuszczalnym zakresie.
  4. Regularne powtarzanie tych kroków zgodnie z zalecanym harmonogramem pomaga utrzymać dokładność analizatora, co zapewnia wiarygodność pomiarów.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Rysunek 2 przedstawia zasadę działania immunoanalizatora fluorescencyjnego z wykorzystaniem kropek kwantowych. Składa się on głównie ze źródła światła wzbudzenia, odbiornika światła, modułu obwodu konwersji fotoelektrycznej, obwodu przetwarzania sygnału, obwodu konwersji wartości AD oraz modułu obliczeniowego przetwarzania sygnału; źródło światła wzbudzenia generuje znaczniki fluorescencyjne. Pochłaniają one światło monochromatyczne o zbliżonej długości fali, które przez ścieżkę wzbudzenia p...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Obecne metody diagnostyczne Helicobacter pylori dzielą się głównie na dwie kategorie: inwazyjne i nieinwazyjne26. Metody takie jak szybki test ureazy (RUT), histologia, biologia molekularna i hodowla bakterii mają ograniczenia pod względem inwazyjności, czułości, swoistości, ograniczeń czasowych, kosztów, wymagań sprzętowych, obsługi próbek i monitorowania w czasie rzeczywistym. Bardziej powszechne są szybkie diagnostyki in vitro z wykorzystaniem metod takich jak badanie oddechu ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Podziękowania

To badanie zostało sfinansowane przez Guangdong Provincial Basic and Applied Basic Research Fund Project (Grant nr: 2021A1515220022, 2022A1515220023).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Chlorowodorek 1-(3-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodimidu (EDC)Sigma25952-53-85 g / butelkę
Kwas 2-(n-morfiny) etanosulfonowy (MES)Sigma145224-94-8100 g / butelkę
WirówkaSigma3K15
Fluorescencyjny analizator immunologicznyGuangzhou Labsim Biotech Co., LtdProwincja Guangdong Nr rejestracyjny urządzenia medycznego
Zestaw do pisania Helicobacter pylori Chongqing iSIA BIO-Technology Co., LtdKrajowa rejestracja wyrobu medycznego nr 20203400330QDs Metoda immunofluorescencji
Sól sodowa N-hydroksytiosuccinimidu (NHS)Sigma106627-54-71 g / butelkę
2017221743

Bibliografia

  1. Tacconelli, E., et al. research and development of new antibiotics: WHO priority list of antibioticresistant bacteria and tuberculosis. Lancet Infect Dis. 18 (3), 318-327 (2018).
  2. Kamboj, A. K., et al. Helicobacter pylori: past, present, and future of treatment. Mayo Clin Proc. 92 (4), 599-604 (2017).
  3. Yamaoka, Y. Disease mechanisms: Helicobacter pylori virulence factors. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 7 (11), 629-641 (2010).
  4. Sharndama, H. C., Mba, I. E. Helicobacter pylori: an updated overview on its virulence and pathogenesis. Braz J Microbiol. 53 (1), 33-50 (2022).
  5. Lin, Y., et al. Infection status of type I and type II Helicobacter pylori in areas with high incidence of gastric cancer and its impact on gastrin and pepsinogen levels. World J Gastroenterol. 26 (25), 3673-3685 (2020).
  6. Li, Y. H., et al. Global prevalence of Helicobacter pylori infection from 1980 to 2022: a systematic review and metaanalysis. Lancet Gastroenterol Hepatol. 8 (6), 553-564 (2023).
  7. Karbalaei, M., Keikha, M. Rescue effect of lactobacillicontaining bismuth regimen on Helicobacter pylori treatment failure. New Microbiol New Infect. 42, 100904(2021).
  8. Malfertheiner, P., et al. Helicobacter pylori infection. Nat Rev Dis Primers. 9 (1), 19(2023).
  9. Stewart, B., et al. Global burden of disease requiring emergency surgery. Br J Surg. 101 (1), e9-e22 (2014).
  10. de Martel, C., et al. The global burden of cancer attributable to infection in 2018: a global incidence analysis. Lancet Glob Health. 8 (2), e180-e190 (2020).
  11. Godbole, G., et al. Review: diagnosis of Helicobacter pylori infection. Helicobacter. 25 (S1), e12735(2020).
  12. Lee, Y. C., et al. Diagnosis and treatment of Helicobacter pylori infection. Annu Rev Med. 73 (1), 183-195 (2022).
  13. Fischbach, W., Malfertheiner, P. Helicobacter pylori infection. Ger Int Med J. 115, 429-436 (2018).
  14. Zhang, C., et al. Survey on the quantitative detection of serum Helicobacter pylori antibodies in clinical laboratories in my country. J Clin Lab Anal. 36 (1), e24069(2021).
  15. Wan, W. S., et al. Improving the detection rate of Helicobacter pylori in chronic gastritis biopsies: a comparative analysis of H&E, methylene blue, WarthinStarry, immunohistochemistry, and quantum dot immunohistochemistry. Front Oncol. 13, 1229871(2023).
  16. Bodo, J., et al. Quantitative in situ detection of phosphoproteins in fixed tissues using quantum dot technology. J Histochem Cytochem. 57 (7), 701-708 (2009).
  17. Chen, C., et al. Quantum dotbased immunofluorescence technology for quantitative determination of HER2 expression in breast cancer. Biomaterials. 30 (15), 2912-2918 (2009).
  18. Kuang, H., et al. Recent developments in quantum dot analytical applications. TrAC Trends Anal Chem. 30 (10), 1620-1636 (2011).
  19. Park, Y., et al. Medically transformable quantum dots for biosensing and imaging. J Photochem Photobiol C Photochem Rev. 30, 51-70 (2017).
  20. SanmartinMatalbobs, J., et al. Semiconductor quantum dots as target analytes: properties, surface chemistry and detection. Chem Detect Nanomaterials. 12 (14), 2501(2022).
  21. Katan, C., Mercier, N., Even, J. Quantum and dielectric confinement effects in lowerdimensional hybrid perovskite semiconductors. Chem Rev. 119 (5), 3140-3192 (2019).
  22. Chinese Medical Association Branch of Health Management. Physical examination population 13C expert consensus on technical specifications for urea breath tests. Health Exam Manag. 2 (2), 94-96 (2021).
  23. National Clinical Medical Research Center for Digestive Diseases. Expert consensus on clinical application of Helicobacter pyloriurea breath test (2020). Chin J Health Manag. 14 (2020), 510-513 (2020).
  24. Zhang, Y., et al. The influence factors of Helicobacter pylori infection were detected by urea breath test. Chin J Clin Gastroenterol. 32 (3), 197-202 (2020).
  25. Lin, B., et al. Diagnostic value of gastric function triad and Helicobacter pylori typing in chronic gastritis and gastric cancer. Labeled Immunoassays Clin Med. 30 (1), 74-76 (2023).
  26. Cardos, A. I., et al. Evolution of diagnostic methods for Helicobacter pylori infection: from traditional tests to hightech, advanced sensitivity and identification tools. Diagnostics. 12 (508), 1-23 (2022).
  27. Ding, S. Z., et al. Chinese consensus report on familybased Helicobacter pylori infection control and management (2021 edition). Gut. 71 (2), 238-253 (2021).
  28. Wan, W., et al. Comparison of quantum dot immunofluorescence histochemistry and conventional immunohistochemistry in detecting Helicobacter pylori infection in paraffinembedded tissue of gastric biopsy. J Mol Histol. 52, 461-466 (2021).
  29. Zhou, Y., et al. Development of a fast and sensitive doubleantigen sandwich lateral flow immunoassay based on quantum dot nanobeads and its clinical performance in detecting SARSCoV2 total antibodies. Sens Actuators B Chem. 343, 130139(2021).
  30. Liu, H., et al. Consistency analysis of highsensitivity cardiac troponin I in peripheral blood and venous blood using quantum dot immunofluorescence method and its clinical application in acute myocardial infarction. J Chest Dis. 14 (4), 1267-1274 (2022).
  31. Xirong, W., et al. Development of quantum dotbased lateral flow immunoassay test strips for rapid and sensitive detection of SARSCoV2 neutralizing antibodies. Sci Rep. 13, 22253(2023).
  32. Purwidyantri, A., et al. Programmable graphenebased microfluidic sensor for DNA detection. Sens Actuators B Chem. 367, 132044(2022).
  33. Lee, K. S., Wagner, M., Stocker, R. Ramanbased sorting of microbial cells to link functions to their genes. Microb Cell. 7 (3), 62-65 (2020).
  34. Hu, C., et al. Design and fabrication of carbon dots for energy conversion and storage. Chem Soc Rev. 48 (8), 2315-2337 (2019).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Wykrywanie Helicobacter pyloritypowanie wirulencjiwiązanie antygen-przeciwciałoodczynniki do immunochromatografiipodwójna kanapka antygenowaprzesiewowe badanie w kierunku przewlekłego zapalenia żołądkabiomarkery raka żołądkacharakterystyka operacyjna odbiornikaczułość diagnostyczna
Szybkie wykrywanie zjadliwości Helicobacter pylori i typowanie przy użyciu technologii znakowania kropkami kwantowymi
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.