Artykuł metodologiczny

Szybkie wykrywanie zjadliwości Helicobacter pylori i typowanie przy użyciu technologii znakowania kropkami kwantowymi

DOI:

10.3791/67792

⸱

13 czerwca 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wśród licznych metod diagnostycznych dla Helicobacter pylori, immunofluorescencja kropek kwantowych może szybko wytypować i wykryć Helicobacter pylori, stanowiąc podstawę do podejmowania decyzji o leczeniu klinicznym. Niniejszy artykuł zawiera szczegółowe wprowadzenie do wartości aplikacyjnej technologii kropek kwantowych w typowaniu i wykrywaniu Helicobacter pylori.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Prezentujemy metodę opartą na technologii znakowania kropkami kwantowymi do szybkiego wykrywania zjadliwości Helicobacter pylori i wykonywania typowania, mającą na celu przezwyciężenie ograniczeń konwencjonalnych metod diagnostycznych i zapewnienie podstawy do spersonalizowanego leczenia klinicznego. Zestaw został zaprojektowany przy użyciu metody kanapkowej z podwójnym antygenem. Wiązało się to z szeregiem skrupulatnych kroków, w tym ustanowieniem systemów reakcji buforowych oraz przeprowadzeniem procesów aktywacji i sprzęgania reakcji antygen-przeciwciało podczas przygotowywania zestawu. Ponadto istniały specjalne procedury pobierania, przetwarzania i testowania próbek w celu określenia statusu infekcji i typu wirulencji Helicobacter pylori. Poprzez ustanowienie modeli danych dla różnych wyników (ujemnych, typu II i typu I) zweryfikowano skuteczność technologii kropek kwantowych w wykrywaniu typowania. W przypadku próbek ujemnych stwierdzono słabe lub żadne istotne wartości sygnału w odpowiednich obszarach wykrywania. W przypadku próbek typu II zaobserwowano specyficzny wzorzec dodatnich i ujemnych wartości sygnału dla różnych przeciwciał, a dla próbek typu I odnotowano odrębny zestaw wartości sygnału dodatniego odpowiadających kluczowym przeciwciałom. Co więcej, jego zastosowanie w badaniach związanych z przewlekłym zapaleniem żołądka i rakiem żołądka wykazało jego wartość w służeniu jako wskaźnik przesiewowy. Metoda oparta na kropkach kwantowych ma zalety, takie jak lepsza czułość i swoistość w porównaniu z tradycyjnymi metodami diagnostycznymi. Wiąże się to jednak również z wyzwaniami, takimi jak potencjalny wpływ czasu przechowywania próbki i stosunkowo wysokie koszty. Niemniej jednak, dzięki ciągłym innowacjom technologicznym, oczekuje się, że w przyszłości będzie odgrywać bardziej znaczącą rolę w dziedzinie biomedycyny w wykrywaniu Helicobacter pylori i diagnozowaniu powiązanych chorób.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Helicobacter pylori (H. pylori) to bakteria Gram-ujemna znajdująca się między błoną śluzową odźwiernika a błoną podśluzową błony śluzowej żołądka1,2. W 1994 roku Światowa Organizacja Zdrowia/Międzynarodowa Agencja Badań nad Rakiem (WHO/IARC) sklasyfikowała go jako czynnik rakotwórczy klasy I. W zależności od tego, czy wyrażają toksyny cytotoksyny A (VacA) i genu A związanego z cytotoksyną (CagA), dzielą się na dwa typy: wirus wirusa H. pylori typu I: bardziej zjadliwy i bardziej szkodliwy dla pacjentów. Zakażenie H. pylori typu II, ściśle związane z występowaniem wrzodów żołądka i dwunastnicy oraz raka żołądka, obejmuje szczepy o niskiej zjadliwości i słabej patogenności, zwykle objawiające się łagodną niestrawnością3,4. Naukowcy odkryli, że wskaźnik infekcji typu I jest wyższy niż typu II, przy czym wskaźniki infekcji typu I i typu II wynoszą odpowiednio 72,4% i 27,6%5. Szybkie wykrywanie typów H. pylori, zwłaszcza rozróżnienie między typem I a typem II, ma kluczowe znaczenie dla leczenia klinicznego i zapobiegania chorobie.

Przewlekłe zapalenie błony śluzowej żołądka spowodowane zakażeniem H. pylori może prowadzić do poważnych chorób układu pokarmowego, takich jak zanikowe zapalenie błony śluzowej żołądka, choroba wrzodowa żołądka, gruczolakorak żołądka i chłoniak tkanki limfatycznej związanej z błoną śluzową (MALT) u zakażonych pacjentów6,7,8. Badanie Global Burden of Disease Study z 2014 r. przewiduje, że począwszy od 2010 r., około 3,5 zgonu na 100 000 osób będzie spowodowanych chorobą wrzodową każdego roku9. Raporty z badań wykazały, że prawie 800 000 nowych przypadków raka żołądka na całym świecie w 2018 r. było związanych z infekcją H. pylori10. W ostatnich latach badania wykazały, że zakażenie H. pylori jest również ściśle związane z chorobami neurologicznymi, chorobami układu krążenia, cukrzycą itp. Zakażenie H. pylori stało się globalnym problemem zdrowia publicznego. Dlatego dokładne wykrycie zakażenia H. pylori jest ważne dla wykrywania chorób powiązanych. Leczenie ma kluczowe znaczenie, dzięki czemu dokładne wykrywanie H. pylori staje się punktem zapalnym badań.

Ponieważ wskaźnik infekcji H. pylori jest wysoki w Chinach, szybkie i dokładne wykrycie infekcji H. pylori jest pomocne we wczesnym wykrywaniu i leczeniu oraz ma pozytywne znaczenie dla zapobiegania i leczenia raka żołądka. Istnieją różne metody wykrywania zakażenia H. pylori, w tym metody inwazyjne, takie jak szybki test ureazowy (RUT), barwiona mikroskopia skrawków tkanki błony śluzowej żołądka, endoskopia i test oddechowy C13 lub C14 mocznikowy. (UBT), test antygenu kału H. pylori (SAT) i inne nieinwazyjne metody11,12,13. Te metody wykrywania mają pewne ograniczenia. Na przykład badanie histologiczne może dać fałszywie ujemne wyniki ze względu na jakość i wielkość próbki biopsji wybranej w miejscu biopsji; na test oddechowy może mieć wpływ niedawne stosowanie przez pacjenta antybiotyków lub inhibitorów pompy protonowej (PPI) oraz wpływ różnych czynników wpływających11,14,15. Ze względu na ograniczenia tradycyjnych metod, takie jak czasochłonność i niewystarczająca czułość i swoistość, opracowanie szybkich metod diagnostycznych opartych na immunofluorescencji kropek kwantowych (QD-IF) wykazało duży potencjał aplikacyjny w dziedzinie testów biologicznych16,17. Analiza QD-IF wprowadza sondy fluorescencyjne z kropkami kwantowymi w celu uzyskania specyficznego wykrywania celów molekularnych poprzez specyficzne wiązanie z celami molekularnymi18,19.

Kropki kwantowe to półprzewodnikowe nanocząstki o promieniu mniejszym lub zbliżonym do promienia ekscytonu Bohra, zazwyczaj od 1 do 10 nm. Kropki kwantowe są używane jako sondy fluorescencyjne. Sygnały fluorescencyjne są generowane przez wzbudzające kropki kwantowe, a dane ilościowe uzyskuje się poprzez pomiar urządzenia. Jego zalety to szeroki zakres długości fal wzbudzenia, wąskie długości fal emisji, regulowany rozmiar fluorescencji, wysoka czułość, dobra stabilność optyczna, długa żywotność fluorescencji, duże przesunięcie Stokesa i wysoka wydajność fluorescencji kwantowej. Kropki kwantowe przezwyciężają wady innych markerów, takie jak krótki czas luminescencji, precyzyjne wymagania środowiskowe, słaba powtarzalność, słaba stabilność (np. barwniki fluorescencyjne), inaktywacja enzymów i niska czułość. Test immunologiczny fluorescencji kropek kwantowych łączy w sobie zalety testu immunologicznego fluorescencji kropek kwantowych i testu immunologicznego fluorescencji biomarkerów oraz ma zalety prostoty, szybkości, wysokiej swoistości i wysokiej czułości20,21.

Tradycyjne narzędzia diagnostyczne do wykrywania H. pylori, w tym hodowla bakterii, test oddechowy mocznika i testy serologiczne, mają swoje własne ograniczenia. Hodowla bakterii jest czasochłonna i wymaga ścisłych warunków laboratoryjnych, co często skutkuje stosunkowo niską czułością ze względu na wybredne wymagania dotyczące wzrostu H. pylori. Test oddechowy z mocznikiem może dać fałszywie ujemne wyniki w pewnych okolicznościach, takich jak niedawne stosowanie antybiotyków lub inhibitorów pompy protonowej22,23,24. Testy serologiczne mogą w niektórych przypadkach wskazać jedynie wcześniejsze narażenie, a nie obecny stan infekcji i nie są w stanie rozróżnić różnych typów wirulencji patogenu.

Natomiast technologia immunofluorescencji kropek kwantowych (QD-IF) okazała się obiecującą alternatywą. QD-IF łączy w sobie doskonałe właściwości optyczne kropek kwantowych, takie jak wysoka intensywność fluorescencji, wąskie widma emisyjne i dobra fotostabilność, ze specyfiką reakcji immunologicznych. Umożliwia to szybkie i czułe wykrywanie antygenów lub przeciwciał H. pylori w próbkach biologicznych. Co więcej, ma wyjątkową zaletę polegającą na tym, że jest w stanie jednocześnie zidentyfikować typ zjadliwości infekującego szczepu, co jest trudne do osiągnięcia tradycyjnymi metodami. Wypełniając tę lukę w procesie diagnostycznym, technologia QD-IF ma ogromny potencjał, aby zrewolucjonizować sposób, w jaki diagnozujemy i leczymy infekcje H. pylori, ułatwiając bardziej spersonalizowane i skuteczne interwencje medyczne.

Ogólnie rzecz biorąc, istnieje pilna kliniczna potrzeba nieinwazyjnej, skutecznej metody diagnostycznej, która mogłaby jednocześnie wykrywać infekcję H. pylori i jej typy wirulencji (typ I i typ II). Niniejszy artykuł ma na celu wykorzystanie metody QD-IF do oceny obecności zakażenia H. pylori w próbkach tkanek oraz skonstruowanie szybkiej i dokładnej metody wykrywania typów infekcji H. pylori. Szybkie wykrywanie zakażenia H. pylori i jego typów wirulencji ma ogromne znaczenie dla osiągnięcia medycyny precyzyjnej, poprawy efektów leczenia, zmniejszenia ryzyka chorób pokrewnych i zapobiegania rakowi żołądka. Stanowi naukową podstawę teoretyczną dla personelu klinicznego do wyboru dokładnych metod wykrywania infekcji H. pylori.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To badanie (KY2025-191-01) zostało przeprowadzone zgodnie z wytycznymi komisji etycznej ds. badań na ludziach Prowincjonalnego Szpitala Ludowego w Guangdong (Akademia Nauk Medycznych Guangdong), Południowy Uniwersytet Medyczny. Niniejszy artykuł jest zgodny z wnioskiem o zwolnienie z obowiązku uzyskania świadomej zgody.

UWAGA: To badanie ma na celu wykorzystanie technologii kropek kwantowych do zaprojektowania i opracowania zestawu do diagnozowania, czy gatunki krwi uczestników zawierają przeciwciała ureazy (Ureazy) Helicobacter pylori, przeciwciała przeciwko cytotoksynie A (VacA) i przeciwciała przeciwko toksynie genu A związanego z cytotoksyną (CagA) w celu określenia, czy H. pylori jest zakażony i czy zakażony szczep jest typu I czy II. Ten zaprojektowany zestaw wykorzystuje metodę kanapkową z podwójnym antygenem do pomiaru przeciwciał ureazy Helicobacter pylori, przeciwciał CagA i przeciwciał VacA. Gdy badana próbka zawierająca substancję docelową jest dodawana do podkładki na próbkę, przepływa ona przez podkładkę kwantową i membranę poprzez działanie syfonu, tworząc kompleks antygen-przeciwciało w fazie stałej. Po wykryciu linia detekcji i masa są odczytywane odpowiednio przez analizator. Wartość sygnału linii kontrolnej służy do określenia negatywnego i dodatniego statusu przeciwciała Urase, przeciwciała CagA i przeciwciała VacA na podstawie wartości sygnału T / C każdego z trzech przeciwciał. Schemat projektu jest pokazany w Rysunek 1.

figure-protocol-1
Rysunek 1: Schemat ideowy karty testowej do pisania H. pylori. Rysunek przedstawia strukturę i skład karty testowej. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

1. Przygotowanie zestawu

  1. Ustanowienie układu reakcji buforowej kwasu QDs-2-(n-morfina) etanosulfonowego (MES)
    1. Zrównoważyć oryginalny roztwór QD do temperatury pokojowej (RT). Następnie odessać 1000 μL i dodać równą objętość 2x roztworu MES (końcowe stężenie MES wynosiło 10 mmol/L).
    2. Mieszaj, wstrząsaj i sonikuj przez 30 s do 3 minut.
  2. aktywacja
    1. Dodać 20 mg/ml 1-etylo-3-(3-dimetyloaminopropylo)karbodimidu (EDC)/ N-hydroksysukcynimidu (NHS) do układu buforowego QDs-MES w stosunku 10:1. Wymieszaj, wstrząśnij i poddaj sonikacji przez 3 minuty.
    2. Przygotowany roztwór umieścić w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C na 15 minut i odwirować przy 13 000 × g przez 20 minut.
    3. Usunąć supernatant z odwirowanego roztworu i ponownie rozpuścić go w 1x roztworze MES. Kilkakrotnie przedmuchaj roztwór pipetą, potrząśnij nim w celu równomiernego wymieszania i poddaj sonikacji przez 3 minuty.
    4. Umieścić powyższy roztwór w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C na 15 minut i odwirować przy 13 000 × g przez 20 minut.
  3. sprzęg
    1. Dodać 0,03 mg antygenu ureazy, antygenu CagA, antygenu VacA i koziej anty-mysiej IgG do 1000 μl roztworu aktywacyjnego, kilkakrotnie pipetować końcówkę, wstrząsać i sonikować przez 3 minuty.
    2. Umieścić powyższy roztwór w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C i reagować przez 3 godziny.
  4. Zamknięcie i przechowywanie
    1. Dodać 100 μl roztworu blokującego (tabela uzupełniająca 1) i inkubować przez 1 godzinę.
    2. Odwirować zablokowany roztwór o stężeniu 13 000 × g przez 15 minut.
    3. Usunąć supernatant z odwirowanego roztworu, dodać 750 μl roztworu do rozpuszczenia (tabela uzupełniająca 1), kilkakrotnie pipetować, wstrząsać i dokonywać sonikacji przez 5 minut, a następnie przechowywać w temperaturze 4 °C.

2. Przygotowanie płyt powlekanych

  1. Przygotowanie padów kwantowych
    1. Rozcieńczyć kompleks antygenu H. pylori znakowany kropkami kwantowymi w stosunku 1:5 buforem do rozcieńczania kropek kwantowych, aby przygotować wymaganą ilość zgodnie z produkcją seryjną.
    2. Weź podkładkę kwantową i równomiernie rozpyl pewną ilość kompleksu antygenu H. pylori znakowanego kropkami kwantowymi na podkładkę za pomocą rozpylacza do folii i susz w temperaturze 37 °C przez 30 minut.
  2. Przygotowanie membrany
    1. Użyj bufora drukarskiego, aby rozcieńczyć materiały powłokowe linii kontrolnej i linii testowej i przygotuj wymaganą ilość w zależności od wielkości produkcji seryjnej.
    2. Przyklej membranę nitrocelulozową na płytce z polichlorku winylu (PVC), użyj rozpylacza do złota do zarysowywania folii, aby równomiernie pokryć linię kontroli jakości i materiały linii testowej na membranie i suszyć w temperaturze 57 °C przez 24 godziny.

3. Montaż

  1. Wklej kolejno kwant i podkładki z próbkami na pokrytą folią płytkę PVC.

4. Cięcie na paski

  1. Użyj obcinaka do pasków, aby pociąć zmontowaną dużą deskę na paski testowe.

5. Opakowanie wewnętrzne

  1. Skompletuj opakowanie zgodnie z wymaganiami dotyczącymi składu zestawu.
    UWAGA: Elementy zestawu są następujące: (i) Karta testowa: Składa się z obudowy paska testowego i paska testowego. Pasek testowy składa się z płytki PVC, podkładki na próbkę, podkładki kwantowej (kompleks antygenowy znakowany kropkami kwantowymi; kompleks zawiera antygen ureazy, antygen CagA, antygen VacA i mysią IgG), membrany nitrocelulozowej (obszar wykrywania jest utrwalony za pomocą antygenu VacA, antygenu CagA i antygenu ureazy (ekspresja eukariotyczna rekombinowanego antygenu), a obszar kontroli jakości jest pokryty kozim anty-mysim IgG (kozie przeciwciało poli)), i papier chłonny. Różne specyfikacje opakowań mają różne ilości kart testowych. Do odczynnika dla jednej osoby wymagana jest jedna karta testowa. (ii) Karta SD: 1 sztuka / pudełko. Nie wolno mieszać elementów karty testowej i bezpiecznej karty cyfrowej (SD) z różnych partii zestawów testowych.

6. Przetwarzanie próbek

UWAGA: Aby pobrać próbki, zapoznaj się z Procedurami Operacyjnymi Krajowego Laboratorium Klinicznego.

  1. Zebrać krew do probówki z żelem separacyjnym. Uważaj, aby uniknąć hemolizy.
  2. Zbadać oddzieloną próbkę surowicy w ciągu 4 godzin w temperaturze pokojowej (RT). Jeśli nie można jej przetestować na czas, należy przechowywać próbkę w temperaturze 2-8 °C przez 3 dni. W przypadku długotrwałego (w ciągu 1 roku) należy go zamknąć i przechowywać w temperaturze poniżej -20 °C.
  3. Przywróć próbki do RT i dokładnie je wymieszaj przed użyciem.
    UWAGA: Zamrożone i rozmrożone próbki muszą zostać całkowicie rozmrożone przed użyciem, a liczba cykli zamrażania i rozmrażania nie powinna przekraczać pięciu. Powtarzające się zamrażanie i rozmrażanie próbek może powodować pogorszenie jakości analitu i należy tego unikać. Ciężkie próbki chyle i hemolizy również wpłyną na test i należy ich unikać.

7. Procedura testu

  1. Wyjmij zestaw odczynników i materiały do kontroli jakości, aby zrównoważyć się z RT.
  2. Przygotowanie próbki: Odwirować próbki krwi pełnej o masie 1467 g przez 10 minut.
  3. Sprawdź, czy numer partii karty SD jest zgodny z numerem zestawu odczynników. Włóż kartę SD do przyrządu w celu automatycznej kalibracji.
  4. Włącz przyrząd i komputer operacyjny. Uruchom wyznaczone oprogramowanie i wybierz moduł Test. Wybierz Ustawienia inicjalizacji, aby zainicjować instrument i poczekaj na pomyślne zakończenie.
  5. Uzyskaj dostęp do obszaru odczynnika przyrządu i wyjmij gniazdo karty testowej. Otwórz zestaw odczynników i wybierz wymaganą liczbę kart testowych.
  6. Otwórz foliowe woreczki kart testowych i umieść je w gnieździe zgodnie ze wskazaną orientacją. Włóż ponownie gniazdo karty do obszaru odczynnika instrumentu.
  7. Testy kontroli jakości (QC)
    1. W module Test wybierz pozycję Wprowadzanie ręczne. Kliknij opcję Wprowadzanie informacji i wprowadź określone informacje o materiale kontroli jakości. Kliknij przycisk Generuj. Umieść materiały QC w wyznaczonym stojaku na próbki, zapewniając prawidłową kolejność i orientację.
    2. Kliknij przycisk Rozpocznij test, aby rozpocząć testowanie kontroli jakości. Igła do pobierania próbek przyrządu zasysa 80 μl próbki i dozuje ją pionowo do dołka próbki. Przyrząd automatycznie rozpocznie odmierzanie czasu po dozowaniu próbki. Po 15 minutach przyrząd wykona detekcję, odczyta wartości pomiaru i wyświetli wyniki.
  8. Przykładowe testowanie: W module Test wybierz opcję Dwukierunkowy LIS. Umieść próbki do badania w wyznaczonym stojaku na próbki, zapewniając odpowiednią kolejność i orientację. Kliknij przycisk Rozpocznij test. Przyrząd w podobny sposób zasysa 80 μl próbki z każdego z nich i przetwarza je identycznie jak w procesie kontroli jakości.
  9. Po zakończeniu testów wyjmij zużyte karty testowe z przyrządu i wyrzuć je jako odpady medyczne.

8. Kontrola jakości

  1. H. pylori ujemny: Sprawdź i upewnij się, że wyniki ujemnych produktów referencyjnych Helicobacter pylori, a mianowicie przeciwciała ureazy, przeciwciała CagA i przeciwciała VacA, są ujemne.
  2. Zakażenie H. pylori typu II: Sprawdź i upewnij się, że produkt referencyjny Helicobacter pylori typu II, czyli przeciwciało ureazy, jest dodatni, a wyniki przeciwciał CagA i przeciwciał VacA są ujemne.
  3. Zakażenie H. pylori typu I: Należy sprawdzić i upewnić się, że produkt referencyjny Helicobacter pylori typu I, tj. przeciwciało ureazy jest dodatnie, przeciwciało CagA i/lub przeciwciało VacA są dodatnie.

9. Analiza wyników

  1. Zakażenie typu II słabymi lub nietoksycznymi szczepami: Gdy odczyt przeciwciał ureazy jest dodatni, a odczyty przeciwciał CagA i przeciwciał VacA są ujemne, zinterpretuj to jako zakażenie słabym lub nietoksycznym szczepem H. pylori.
  2. Zakażenie typu I wysoce zjadliwymi szczepami wytwarzającymi toksyny: Gdy odczyt przeciwciał ureazy jest dodatni, a odczyt przeciwciała CagA lub przeciwciała VacA jest dodatni, lub oba są dodatnie, należy to zinterpretować jako zakażenie wysoce zjadliwym szczepem wytwarzającym toksynę H. pylori.
  3. Negatywny: Gdy odczyty przeciwciała Ureazy, przeciwciała CagA i przeciwciała VacA są ujemne, zinterpretuj to jako brak zakażenia szczepami H. pylori.
  4. Nieprawidłowy: Gdy przyrząd oceni wynik jako nieważny, sprawdź, czy nie ma nieprawidłowego działania lub awarii zestawu odczynników i spróbuj ponownie wykonać procedurę.

10. Kalibracja analizatora fluorescencji

  1. Najpierw włącz analizator i pozwól mu się rozgrzać przez około 15 minut, aby ustabilizować jego działanie. Następnie włóż wzorzec kalibracyjny dostarczony przez producenta do uchwytu na próbkę.
  2. Następnie uzyskaj dostęp do funkcji kalibracji w interfejsie analizatora i rozpocznij proces. Analizator automatycznie wykryje fluorescencję wzorca i odpowiednio dostosuje jego parametry wewnętrzne, aby dopasować je do wstępnie ustawionych wartości odniesienia.
  3. Następnie usuń wzorzec kalibracyjny i włóż ślepą próbkę, aby sprawdzić, czy odczyty mieszczą się w dopuszczalnym zakresie.
  4. Regularne powtarzanie tych kroków zgodnie z zalecanym harmonogramem pomaga utrzymać dokładność analizatora w celu uzyskania wiarygodnych pomiarów.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rysunek 2 pokazuje zasadę działania immunoanalizatora fluorescencji kropek kwantowych. Składa się głównie ze źródła światła wzbudzającego, odbiorczego źródła światła, modułu obwodu konwersji fotoelektrycznej, obwodu przetwarzania sygnału, obwodu konwersji wartości AD i modułu obliczeniowego przetwarzania sygnału; Wzbudzenie źródła światła generuje markery fluorescencyjne. Pochłania światło monochromatyczne o podobnej długości fali, a światło monochromatyczne pada na stały punkt skanowania pa...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obecne metody diagnostyczne Helicobacter pylori dzielą się głównie na dwie kategorie: inwazyjne i nieinwazyjne26. Metody takie jak szybki test ureazy (RUT), histologia, biologia molekularna i hodowla bakterii mają ograniczenia pod względem inwazyjności, czułości, swoistości, ograniczeń czasowych, kosztów, wymagań sprzętowych, obsługi próbek i monitorowania w czasie rzeczywistym. Bardziej powszechne są szybkie diagnostyki in vitro z wykorzystaniem metod takich jak badanie oddechu ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To badanie zostało sfinansowane przez Guangdong Provincial Basic and Applied Basic Research Fund Project (Grant nr: 2021A1515220022, 2022A1515220023).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Chlorowodorek 1-(3-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodimidu (EDC)Sigma25952-53-85 g / butelkę
Kwas 2-(n-morfiny) etanosulfonowy (MES)Sigma145224-94-8100 g / butelkę
WirówkaSigma3K15
Fluorescencyjny analizator immunologicznyGuangzhou Labsim Biotech Co., LtdProwincja Guangdong Nr rejestracyjny urządzenia medycznego
Zestaw do pisania Helicobacter pylori Chongqing iSIA BIO-Technology Co., LtdKrajowa rejestracja wyrobu medycznego nr 20203400330QDs Metoda immunofluorescencji
Sól sodowa N-hydroksytiosuccinimidu (NHS)Sigma106627-54-71 g / butelkę
2017221743

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tacconelli, E., et al. research and development of new antibiotics: WHO priority list of antibioticresistant bacteria and tuberculosis. Lancet Infect Dis. 18 (3), 318-327 (2018).
  2. Kamboj, A. K., et al. Helicobacter pylori: past, present, and future of treatment. Mayo Clin Proc. 92 (4), 599-604 (2017).
  3. Yamaoka, Y. Disease mechanisms: Helicobacter pylori virulence factors. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 7 (11), 629-641 (2010).
  4. Sharndama, H. C., Mba, I. E. Helicobacter pylori: an updated overview on its virulence and pathogenesis. Braz J Microbiol. 53 (1), 33-50 (2022).
  5. Lin, Y., et al. Infection status of type I and type II Helicobacter pylori in areas with high incidence of gastric cancer and its impact on gastrin and pepsinogen levels. World J Gastroenterol. 26 (25), 3673-3685 (2020).
  6. Li, Y. H., et al. Global prevalence of Helicobacter pylori infection from 1980 to 2022: a systematic review and metaanalysis. Lancet Gastroenterol Hepatol. 8 (6), 553-564 (2023).
  7. Karbalaei, M., Keikha, M. Rescue effect of lactobacillicontaining bismuth regimen on Helicobacter pylori treatment failure. New Microbiol New Infect. 42, 100904(2021).
  8. Malfertheiner, P., et al. Helicobacter pylori infection. Nat Rev Dis Primers. 9 (1), 19(2023).
  9. Stewart, B., et al. Global burden of disease requiring emergency surgery. Br J Surg. 101 (1), e9-e22 (2014).
  10. de Martel, C., et al. The global burden of cancer attributable to infection in 2018: a global incidence analysis. Lancet Glob Health. 8 (2), e180-e190 (2020).
  11. Godbole, G., et al. Review: diagnosis of Helicobacter pylori infection. Helicobacter. 25 (S1), e12735(2020).
  12. Lee, Y. C., et al. Diagnosis and treatment of Helicobacter pylori infection. Annu Rev Med. 73 (1), 183-195 (2022).
  13. Fischbach, W., Malfertheiner, P. Helicobacter pylori infection. Ger Int Med J. 115, 429-436 (2018).
  14. Zhang, C., et al. Survey on the quantitative detection of serum Helicobacter pylori antibodies in clinical laboratories in my country. J Clin Lab Anal. 36 (1), e24069(2021).
  15. Wan, W. S., et al. Improving the detection rate of Helicobacter pylori in chronic gastritis biopsies: a comparative analysis of H&E, methylene blue, WarthinStarry, immunohistochemistry, and quantum dot immunohistochemistry. Front Oncol. 13, 1229871(2023).
  16. Bodo, J., et al. Quantitative in situ detection of phosphoproteins in fixed tissues using quantum dot technology. J Histochem Cytochem. 57 (7), 701-708 (2009).
  17. Chen, C., et al. Quantum dotbased immunofluorescence technology for quantitative determination of HER2 expression in breast cancer. Biomaterials. 30 (15), 2912-2918 (2009).
  18. Kuang, H., et al. Recent developments in quantum dot analytical applications. TrAC Trends Anal Chem. 30 (10), 1620-1636 (2011).
  19. Park, Y., et al. Medically transformable quantum dots for biosensing and imaging. J Photochem Photobiol C Photochem Rev. 30, 51-70 (2017).
  20. SanmartinMatalbobs, J., et al. Semiconductor quantum dots as target analytes: properties, surface chemistry and detection. Chem Detect Nanomaterials. 12 (14), 2501(2022).
  21. Katan, C., Mercier, N., Even, J. Quantum and dielectric confinement effects in lowerdimensional hybrid perovskite semiconductors. Chem Rev. 119 (5), 3140-3192 (2019).
  22. Chinese Medical Association Branch of Health Management. Physical examination population 13C expert consensus on technical specifications for urea breath tests. Health Exam Manag. 2 (2), 94-96 (2021).
  23. National Clinical Medical Research Center for Digestive Diseases. Expert consensus on clinical application of Helicobacter pyloriurea breath test (2020). Chin J Health Manag. 14 (2020), 510-513 (2020).
  24. Zhang, Y., et al. The influence factors of Helicobacter pylori infection were detected by urea breath test. Chin J Clin Gastroenterol. 32 (3), 197-202 (2020).
  25. Lin, B., et al. Diagnostic value of gastric function triad and Helicobacter pylori typing in chronic gastritis and gastric cancer. Labeled Immunoassays Clin Med. 30 (1), 74-76 (2023).
  26. Cardos, A. I., et al. Evolution of diagnostic methods for Helicobacter pylori infection: from traditional tests to hightech, advanced sensitivity and identification tools. Diagnostics. 12 (508), 1-23 (2022).
  27. Ding, S. Z., et al. Chinese consensus report on familybased Helicobacter pylori infection control and management (2021 edition). Gut. 71 (2), 238-253 (2021).
  28. Wan, W., et al. Comparison of quantum dot immunofluorescence histochemistry and conventional immunohistochemistry in detecting Helicobacter pylori infection in paraffinembedded tissue of gastric biopsy. J Mol Histol. 52, 461-466 (2021).
  29. Zhou, Y., et al. Development of a fast and sensitive doubleantigen sandwich lateral flow immunoassay based on quantum dot nanobeads and its clinical performance in detecting SARSCoV2 total antibodies. Sens Actuators B Chem. 343, 130139(2021).
  30. Liu, H., et al. Consistency analysis of highsensitivity cardiac troponin I in peripheral blood and venous blood using quantum dot immunofluorescence method and its clinical application in acute myocardial infarction. J Chest Dis. 14 (4), 1267-1274 (2022).
  31. Xirong, W., et al. Development of quantum dotbased lateral flow immunoassay test strips for rapid and sensitive detection of SARSCoV2 neutralizing antibodies. Sci Rep. 13, 22253(2023).
  32. Purwidyantri, A., et al. Programmable graphenebased microfluidic sensor for DNA detection. Sens Actuators B Chem. 367, 132044(2022).
  33. Lee, K. S., Wagner, M., Stocker, R. Ramanbased sorting of microbial cells to link functions to their genes. Microb Cell. 7 (3), 62-65 (2020).
  34. Hu, C., et al. Design and fabrication of carbon dots for energy conversion and storage. Chem Soc Rev. 48 (8), 2315-2337 (2019).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Wykrywanie Helicobacter pyloritypowanie wirulencjiwi zanie antygen przeciwcia oodczynniki do immunochromatografiipodw jna kanapka antygenowaprzesiewowe badanie w kierunku przewlek ego zapalenia o dkabiomarkery raka o dkacharakterystyka operacyjna odbiornikaczu o diagnostyczna

Powiązane artykuły