Identyfikacja inhibitorów PD-1/PD-L1 za pomocą technologii powierzchniowego rezonansu plazmonowego

Huifang Li; Tess Puopolo; Justin Gutkowski; Navindra P. Seeram; Chang Liu

doi:10.3791/67859

Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Identyfikacja inhibitorów PD-1/PD-L1 za pomocą technologii powierzchniowego rezonansu plazmonowego

1.6K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/67859

⸱

2 maja 2025

Huifang Li¹ , Tess Puopolo¹ , Justin Gutkowski¹ , Navindra P. Seeram¹ , Chang Liu¹

¹Department of Biomedical and Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of Rhode Island

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół opisuje test blokady dla inhibitorów PD-1/PD-L1 przy użyciu technologii powierzchniowego rezonansu plazmonowego. Wykorzystuje dwuetapową strategię unieruchomienia i dostosowany system buforowy do dokładnego pomiaru jednostek reakcji, ułatwiając ocenę wskaźników blokady dla związków lub leków biologicznych. Dodatkowo wspomaga wysokoprzepustową identyfikację inhibitorów PD-1/PD-L1.

Streszczenie

Zakłócenie interakcji PD-1/PD-L1 jest obiecującą strategią immunoterapii nowotworów. Wiarygodne platformy przesiewowe są niezbędne do oceny skuteczności inhibitorów PD-1/PD-L1. Wcześniej opracowany test blokady PD-1/PD-L1 u ludzi wykorzystujący technologię powierzchniowego rezonansu plazmonowego (SPR) (platforma przesiewowa SPR inhibitora PD-1/PD-L1 pierwszej generacji) wykazał wyniki porównywalne z wynikami uzyskanymi za pomocą jednorodnej fluorescencji rozdzielczej w czasie (HTRF) i testów komórkowych, z potencjałem do badań przesiewowych na dużą skalę. W niniejszym artykule przedstawiono zoptymalizowaną wersję tego testu (platforma przesiewowa SPR inhibitora PD-1/PD-L1 drugiej generacji), charakteryzującą się dwuetapowym procesem sprzęgania, który łączy sprzężenie aminy i bio-streptawidyny w celu poprawy kontroli orientacji PD-1 na chipie i zmniejszenia zużycia białka PD-1. Zaktualizowana platforma została pomyślnie zwalidowana przy użyciu inhibitora PD-1/PD-L1 BMS-1166, wykazując efekty blokady porównywalne z poprzednią metodą opartą na SPR i innymi uznanymi technikami, takimi jak ELISA. Wyniki te potwierdzają wiarygodność tego podejścia. Ta zoptymalizowana platforma przesiewowa SPR oferuje wysokowydajne i niezawodne narzędzie do identyfikacji nowych inhibitorów PD-1/PD-L1, postępu w badaniach nad immunoterapią nowotworów i podkreślenia potencjału SPR w badaniach przesiewowych inhibitorów immunologicznych punktów kontrolnych.

Wprowadzenie

Terapie blokujące immunologiczne punkty kontrolne, szczególnie te ukierunkowane na Programowaną Śmierć Komórki-1 (PD-1) i Ligand Programowanej Śmierci Komórki 1 (PD-L1), stoją w czołówce strategii immunoterapii raka. Terapie anty-PD-1/PD-L1 zostały zatwierdzone do stosowania w różnych typach nowotworów, takich jak rak hematologiczny, skórny, płucny, wątroby, pęcherza moczowego i nerki¹. PD-1 jest transbłonową glikoproteiną należącą do nadrodziny immunoglobulin, charakteryzującą się pojedynczą domeną podobną do zmiennej immunoglobuliny (IgV) na N-końcu, około 20-aminokwasową łodygą oddzielającą domenę IgV od błony plazmatycznej, domeną transbłon....