Artykuł metodologiczny

Zmodyfikowany test liczbowy "Najbardziej prawdopodobny" w celu ilościowego określenia salmonelli w surowych i gotowych do przyrządzenia produktach z kurczaka

1.4K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/67910

⸱

31 stycznia 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Characterization and Interventions for Foodborne Pathogens, Eastern Regional Research Center, Agricultural Research Service (ARS), United States Department of Agriculture (USDA)

W tym artykule

Podsumowanie

Dokładne określenie ilościowe Salmonelli u drobiu na niskich poziomach jest aktualnym wyzwaniem przemysłowym i regulacyjnym. Protokół ten opisuje test MPN, który umożliwia ilościowe określenie salmonelli w surowych i gotowych do przyrządzenia produktach drobiowych. Metoda ta jest szybka, czuła i zgodna z wytycznymi FSIS, zwiększając bezpieczeństwo żywności i wspierając wysiłki na rzecz zdrowia publicznego.

Streszczenie

Salmonella jest główną przyczyną chorób przenoszonych drogą pokarmową w Stanach Zjednoczonych, szczególnie w produktach drobiowych. Tradycyjne metody wykrywania Salmonelli koncentrują się na rozpowszechnieniu, a nie na kwantyfikacji, co ogranicza ich użyteczność w ocenie poziomów skażenia i ryzyka. Badanie to wprowadza nowatorski test liczby najbardziej prawdopodobnej (MPN) przeznaczony do ilościowego oznaczania Salmonelli w gotowych do przyrządzenia produktach drobiowych, takich jak kurczak cordon bleu. Metoda polega na umyciu próbki drobiu, zagęszczeniu płukania przez odwirowanie i seryjnym rozcieńczeniu w bloku 48-dołkowym. Test MPN jest zintegrowany z metodą amplifikacji izotermicznej za pośrednictwem pętli (LAMP), aby zapewnić czułą, dokładną i szybką kwantyfikację zanieczyszczenia Salmonellą w tych samych ramach czasowych, co istniejące protokoły Służby Bezpieczeństwa i Kontroli Żywności (FSIS). Wyniki wskazują na silną korelację liniową między pomiarami MPN-LAMP a teoretycznymi poziomami inokulacji (R² = 0,933). Jednak zmienność przy niższych stężeniach uwypukla wyzwania związane z dokładnym wykrywaniem Salmonelli na tych poziomach, przy czym praktyczna dolna granica wykrywalności szacowana jest na około 300 jtk/g. Potencjalne udoskonalenia mające na celu poprawę możliwości zastosowania protokołu obejmują zwiększenie ilości pobieranych próbek w celu dalszej poprawy granicy wykrywalności, optymalizację preparatów pożywek wzbogacających oraz rozszerzenie detekcji molekularnej w celu ukierunkowania na wiele serowarów Salmonella. Ogólnie rzecz biorąc, badanie to stanowi praktyczne narzędzie dla przemysłu spożywczego, umożliwiające wiarygodne określenie ilościowe zanieczyszczenia Salmonellą w produktach drobiowych, przyczyniając się do poprawy bezpieczeństwa żywności i zdrowia publicznego.

Wprowadzenie

Jako główna przyczyna chorób przenoszonych drogą pokarmową, hospitalizacji i zgonów w USA, Salmonella ma znaczący wpływ na zdrowie publiczne i gospodarkę. Szacowane obciążenie ekonomiczne patogenu w samym tylko 2013 roku wyniosło 3,67 miliarda dolarów1. Chociaż ostatnie inicjatywy regulacyjne mają na celu zmniejszenie liczby salmonellozy o 25% do 2030 r2, luki w obecnych strategiach wykrywania i łagodzenia skutków pozostają widoczne, szczególnie w zakresie dostosowania nadzoru zakładu przetwórczego do wyników zdrowia publicznego3 .

Mrożone produkty drobiowe gotowe do przyrządzenia, które były zamieszane w wiele epidemii Salmonelli, stanowią poważny problem dla zdrowia publicznego. W odpowiedzi Służba ds. Bezpieczeństwa i Kontroli Żywności (FSIS) sklasyfikowała Salmonellę jako domieszkę w tych produktach. Obecnie FSIS Microbiology Laboratory Guidebook (MLG) 4.15 skupia się wyłącznie na określeniu częstości występowania Salmonelli w produktach drobiowych4. Zgodnie z tymi wytycznymi pobrane próbki są wzbogacane przez 18-24 godziny, a następnie poddawane badaniom przesiewowym za pomocą systemu wykrywania molekularnego (MDS), który identyfikuje obecność lub brak Salmonelli, ale nie daje wglądu w poziom zanieczyszczenia. Chociaż podejście to jest cenne dla wykrywania obecności patogenów, nie dostarcza informacji ilościowych, które mogłyby pomóc przetwórcom żywności w dokładniejszej ocenie ryzyka zanieczyszczenia i podjęciu ukierunkowanych działań naprawczych.

W tym badaniu opracowaliśmy metodę zwiększającą wykrywalność od rozpowszechnienia do kwantyfikacji patogenów mikrobiologicznych. Został zaprojektowany z myślą o bezproblemowej integracji z istniejącymi procesami wykrywania Salmonelli w produktach drobiowych przy minimalnym zakłóceniu obecnych protokołów FSIS. Zamiast po prostu wzbogacać próbkę główną, metoda rozpoczyna się od umycia produktów drobiowych przy użyciu pożywek zgodnych z obecnymi metodami FSIS. Płukanie jest następnie rozprowadzane do pierwszej kolumny bloku studziennego o głębokości 48 głębokości. Seryjne rozcieńczenia są wykonywane w pozostałych pięciu kolumnach, a blok jest inkubowany przez 18-24 godziny, zgodnie z protokołem MLG 4.15. Po inkubacji studzienki są testowane na obecność Salmonelli, a wyniki są wykorzystywane do obliczenia najbardziej prawdopodobnej liczby (MPN)5,6. Takie podejście pozwala na ilościowe określenie zanieczyszczenia w tych samych ramach czasowych, co obecny proces FSIS, co czyni je praktyczną opcją zarówno do zastosowań przemysłowych, jak i regulacyjnych. Rysunek 1 przedstawia schemat blokowy podsumowujący zmodyfikowany test MPN. Rysunek obejmuje fotografie wykonane na określonych etapach, 48-dołkowy blok wykorzystany do rozcieńczania i wzrostu kontrprób oraz trzy techniki użyte jako punkty odniesienia do oceny najbardziej prawdopodobnej liczby Salmonelli obecnej w mielonych kurczakach. W pierwszej fazie tego badania wykorzystaliśmy napromieniowanego mielonego kurczaka, aby zminimalizować wpływ mikroflory tła i niepewność pomiarów w stosunku do zweryfikowanego inokulum przed zastosowaniem protokołu do nienapromieniowanych próbek kurczaków.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

UWAGA: Wszystkie prace związane z tym protokołem powinny być prowadzone w laboratorium o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 2 (BSL-2). W stosownych przypadkach protokół ten powinien być przeprowadzany w komorze bezpieczeństwa biologicznego (BSC) w celu utrzymania warunków aseptycznych i zminimalizowania ryzyka zanieczyszczenia próbki lub narażenia operatora na patogeny mikrobiologiczne. Podczas przenoszenia próbek na zewnątrz BSC należy używać szczelnych pojemników, aby zachować integralność próbki i zapobiec rozlaniu w przypadku przypadkowego upuszczenia. Zaleca się, aby przez cały czas trwania procedury stosowano składniki jednorazowego użytku, aby ograniczyć możliwość zanieczyszczenia krzyżowego. W przypadkach, gdy produkty jednorazowego użytku nie są możliwe, przed użyciem upewnij się, że cały sprzęt i materiały są sterylne. Właściwa gospodarka odpadami ma kluczowe znaczenie; Wszystkie zużyte elementy jednorazowego użytku należy wyrzucić jako odpady stanowiące zagrożenie biologiczne. Autoklaw materiałów wielokrotnego użytku przed ponownym użyciem, aby zapewnić odpowiednią sterylizację i ochronę potencjalnie niebezpiecznych materiałów. Przestrzeganie tych środków ostrożności nie tylko chroni integralność próbki, ale także minimalizuje ryzyko narażenia operatora na patogeny mikrobiologiczne.

1. Przygotowanie próbek mięsa

  1. Pobieranie i przetwarzanie próbek mięsa
    1. Świeże mięso
      1. Kupuj mielonego kurczaka w dziale świeżego mięsa lokalnych sprzedawców detalicznych. Wszystkie próbki należy przenieść do magazynu w temperaturze 4 °C i przetworzyć w ciągu 24 godzin od otrzymania. Mięso należy podzielić w asepcie na próbki o wadze 25 g.
      2. Uszczelnić próżniowo i napromienić próbkę. Tutaj Texas A&M AgriLife National Center for Electron Beam Research napromieniowało mięso poddane dawce ~25 kGy.
        UWAGA: Chociaż napromienianie zostało użyte jako środek kontrolny w tym badaniu w celu zapewnienia eliminacji mikroflory tła, nie jest to warunek wstępny dla protokołu w praktycznych zastosowaniach, jak pokazano w przypadku nienapromieniowanych produktów gotowych do przyrządzenia użytych w następnej sekcji. W warunkach terenowych alternatywne metody, takie jak selektywne pożywki lub swoistość diagnostyki molekularnej, mogą rozwiązać problem potencjalnych zakłóceń powodowanych przez mikroorganizmy inne niż docelowe.
    2. Gotowe do przyrządzenia produkty z kurczaka
      1. Kupuj gotowe do gotowania produkty z kurczaka w dziale mrożonek lokalnych sprzedawców. Przeprowadzić aseptycznie podzielić na próbki o masie 25 g.
      2. Zbierz próbki ze środka poszczególnych kawałków, aby upewnić się, że wszystkie składniki (np. panierka i ser) są uwzględnione.
  2. Przygotowanie podłoża
    1. Przygotować buforowaną wodę peptonową (BPW), rozpuszczając 25 g proszku BPW w 1 l nanoczystegoH2O.
    2. Przygotuj płytki do infuzji mózgu i serca (BHI). Aby to zrobić, rozpuść 37 g proszku BHI w 1 l nanoczystego H2O i dodaj 15 g agaru do roztworu BHI. Sterylizować wszystkie podłoża w autoklawie w temperaturze 121 °C przez 15 minut. Wlej od 20 do 25 ml pożywki na szalki Petriego z przezroczystą pokrywką (100 mm x 15 mm).
      UWAGA: Najlepiej wlać płytki do komory bezpieczeństwa biologicznego, aby utrzymać warunki aseptyki.

2. Hodowla komórkowa

  1. Przygotować początkową hodowlę, rozsiewając serowar Salmonella enterica Typhimurium ATCC 14028 na płytce agarowej BHI i inkubować w temperaturze 37 °C przez noc.
  2. Przygotuj nocne kultury, zaszczepiając 25 ml bulionu BHI jedną kolonią świeżo wyhodowanej Salmonelli. Kultury uprawiać tlenowo przez noc w temperaturze 37 °C z wytrząsaniem przy 100 obr./min.

3. Inokulacja próbek drobiu

  1. Rozcieńczanie i powlekanie kultur
    1. Przygotować serię 10-krotnych rozcieńczeń nocnej kultury w BPW, aby osiągnąć końcowe stężenia około 1 x 108 do 1 x 101 CFU/ml. Załóżmy, że stężenie nocnej hodowli Salmonelli wynosi 1 x 109 CFU/ml.
    2. Przenieść 0,5 ml hodowli przez noc do 4,5 ml BPW, wymieszać, a następnie przenieść 0,5 ml rozcieńczenia do 4,5 ml BPW dla każdego dodatkowego rozcieńczenia.
      1. Rozprowadzić 10 μl rozcieńczenia 1 x 103 jtk/ml na płytce agarowej BHI w trzech egzemplarzach w celu zliczenia komórek w celu obliczenia stężenia hodowli przez noc.
  2. Inokulacja próbek mięsa
    1. Przenieść w asepcie 25 g napromieniowanego mielonego kurczaka do sterylnego worka stomachera w dwóch egzemplarzach. Torba ma wymiary 7,5 x 12 cali i jest oznaczona jako 1,63 l. Worek zawiera przegrodę filtracyjną o średnicy otworu 330 μm, a na każdy cm kwadratowy przypada 285 zł.
    2. Zaszczepić każdą próbkę 1 ml rozcieńczenia o stężeniu docelowym. Na przykład dodać 1 ml kultury z rozcieńczenia 1 x 10³ jtk/ml, aby osiągnąć poziom zanieczyszczenia około 1000 komórek/25 g kurczaka. Delikatnie rozprowadzić płynne inokulum na powierzchni próbek kurczaka za pomocą sterylnego rozsiewacza komórek i pozostawić na 1 godzinę w temperaturze 4 °C.
    3. Przygotować ujemne próbki kontrolne, dodając 1 ml sterylnego BPW.

4. Przetwarzanie próbek

  1. Dodaj 225 ml BPW do każdej próbki. Stosunek objętości do nośnika został wybrany tak, aby był zgodny z FSIS MLG 4.154.
  2. Homogenizuj próbki za pomocą klasy Stomacher7 z normalną prędkością i czasem trwania 120 s.
  3. Wirowanie i ponowne zawieszenie
    1. Ostrożnie usuń płyn z przefiltrowanej strony worka za pomocą pipety o pojemności 50 ml. Podziel płyn na dwie sterylne butelki wirówkowe.
    2. Zrównoważyć butelki sterylnym BPW, aby zapewnić równą wagę. Odwirować próbki o masie 10 000 x g przez 10 minut. Odrzucić supernatant. Zawiesić osad komórkowy w 3 ml bulionu BPW za pomocą sterylnej szpatułki.
    3. Dodaj dodatkowe 27 ml bulionu BPW i dokładnie wymieszaj, mieszając szpatułką. Połączyć zawartość obu butelek wirówkowych w jednej butelce dla każdej próbki.

5. Konfiguracja bloku MPN

UWAGA: Tabela 1 przedstawia schemat rozcieńczeń w bloku 48-dołkowym.

  1. Dodać 3 ml ponownie zawieszonej próbki do każdego dołka w kolumnie 1 bloku 48-dołkowego (8 powtórzeń).
  2. Przygotować serię 10-krotnych rozcieńczeń w kolumnach 1-6 w bloku za pomocą ośmiokanałowej pipety.
  3. Dodać 0,3 ml próbki do 2,7 ml pipety BPW w celu wymieszania. Powtórzyć te czynności dla każdego rozcieńczenia. Inkubować bloki przez noc (~18 h) w temperaturze 37 °C z wytrząsaniem przy ~100 obr./min.

6. Poszycie i wyliczenie

  1. Zmodyfikowano wyliczanie płyt zrzutowych
    1. Płytka 7 μl próbki z każdego rozcieńczenia wyhodowanej przez noc w siatce 4 x 6 na płytce agarowej za pomocą pipety wielokanałowej (Rysunek 2). Użycie siatki 4 x 6 na dwóch płytkach lepiej mieści 8 próbek, w przeciwieństwie do typowej siatki kropel 6 x 6 8.
    2. Pozostaw płytki do wyschnięcia na powietrzu przez 10 minut przed inkubacją. Inkubować płytki agarowe przez noc (~18-24 h) w temperaturze 37 °C. Po inkubacji policz liczbę kolonii na każdej płytce.

7. Wykrywanie Salmonelli metodą qPCR

  1. Ekstrakcja DNA za pomocą komercyjnego zestawu
    1. Wymieszaj kultury w bloku 48-dołkowym, kilkakrotnie pipetując w górę i w dół. Odpipetować 200 μl każdej kultury do 96-dołkowej płytki PCR.
    2. Zamknąć, a następnie odwirować płytkę o stężeniu 6 600 x g przez 10 minut. Usunąć supernatant i dodać 20 μl odczynnika z zestawu do osadu.
    3. Zawiesić osad, pipetując w górę i w dół. Uszczelnić i podgrzać płytkę w temperaturze 99 °C przez 10 minut, a następnie schłodzić do temperatury 20 °C.
    4. Ponownie odwirować przy 6 600 x g przez 10 minut. Użyć 2 μl supernatantu do analizy qPCR.
  2. Konfiguracja płyty
    1. Przygotować mieszaninę reakcyjną qPCR zgodnie z ustalonym protokołem9 w następujący sposób: 10 μL 2x Master Mix; 0,4 μL każdego startera i sondy (10 μM roztwór roboczy): invA do przodu: 5'-GTTGAGGATGTTATTCGCAAAGG-3', invA do tyłu: 5'-GGAGGCTTCCGGGTCAAG-3', sonda invA: 5'-CCGTCAGACCTCTGGCAGTACCTTTC-3' znakowana barwnikiem fluorenowym Cal Fluor Orange 560; 0,2 μL matrycy wewnętrznej kontroli amplifikacji (IAC) (6 x 104 copy/μL)9; 0,4 μL każdego startera i sondy IAC (10 μM): IAC do przodu: 5'-GGCGCCCTAACACATCT-3', IAC do tyłu: 5'-TGGAAGCAATGCCAAATGTGTA-3', sonda IAC: 5'-TTACAACGGGAGAAGACAATGCCACCA-3' znakowana barwnikiem TAMRA. Wyreguluj objętość za pomocą ddH2O do 20 μL ogółem.
    2. Wykonaj PCR w czasie rzeczywistym w następujących warunkach cyklicznych9: 95 °C przez 10 minut (początkowa denaturacja DNA i aktywacja polimerazy gorącego startu), 40 cykli po 95 °C przez 15 s i 60 °C przez 1 minutę, użyj domyślnych ustawień Ct, aby wyeksportować wyniki do analizy.

8. Wykrywanie za pomocą testu MDS 3M

  1. Postępuj zgodnie z protokołem zestawu do wykrywania molekularnego Salmonella. Wymieszaj kultury w bloku 48-dołkowym, kilkakrotnie pipetując w górę i w dół. Odpipetować 20 μl każdej próbki do rurki do lizy dostarczonej z zestawem.
  2. Podgrzewać próbki w temperaturze 100 °C przez 15 minut. Roztwór zmieni kolor z różowego na żółty. Próbki należy inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Roztwór zmieni się z żółtego na różowy.
  3. Przenieś 20 μl lizatu do probówki z odczynnikiem i załaduj probówki z odczynnikiem do uchwytu.
  4. Dodaj uchwyt do urządzenia MDS i skonfiguruj oprogramowanie tak, aby przekazywało informacje o zestawie i próbce. Przyrząd wymaga, aby każda studzienka była oznaczona numerem partii do testu i nazwą próbki. Uruchom oprogramowanie MDS i wyeksportuj raport.

9. Analiza danych

  1. Klasyfikacja wyników pozytywnych i negatywnych.
    1. W przypadku posiewu 4 x 6 kropli należy ocenić plamki na płytkach agarowych z co najmniej 1 kolonią jako dodatnie, a plamy na płytkach agarowych bez wzrostu jako ujemne.
    2. W przypadku qPCR studzienki, w których Ct jest mniejszy lub równy 30, należy ocenić jako dodatnie, a studzienki, w których Ct jest większe niż 30, jako ujemne.
    3. W przypadku MDS należy użyć wyników z systemu MDS, zgłoszonych jako dodatnie lub negatywne.
  2. Obliczanie MPN
    1. Analizuj pozytywy i negatywy z adnotacjami, korzystając z opisanej wcześniej metody prostej rozdzielczości maksymalnego prawdopodobieństwa (SMPR) 6 lub alternatywnych zweryfikowanych kalkulatorów MPN. 10

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Napromieniowane mięso
W analizie regresji nachylenie równe 1 oznacza, że dla każdej jednostki wzrostu zmiennej niezależnej (oś x) zmienna zależna (oś y) zwiększa się dokładnie o 1 jednostkę. Sugeruje to proporcjonalną zależność między dwiema zmiennymi, co oznacza, że zmiana zmiennej zależnej odzwierciedla zmianę zmiennej niezależnej. Punkt przecięcia równy 0 oznacza, że gdy zmienna niezależna ma wartość 0, zmienna zależna również ma wartość 0. Sugeruje to, że nie ma ustalonego przesunięcia ani odchyl...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Znaczenie protokołu
Salmonella pozostaje poważnym problemem w zakresie bezpieczeństwa żywności, szczególnie w produktach drobiowych, które często są przyczyną wybuchów epidemii chorób przenoszonych przez żywność13,14. Niezawodne metody wykrywania Salmonelli zarówno w świeżych, jak i gotowych do przyrządzenia produktach drobiowych, jako główna przyczyna chorób bakteryjnych przenoszonych drogą pokarmową w Stanach Zjednoczony...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Wszyscy autorzy deklarują, że nie ma konfliktu interesów.

Podziękowania

To badanie było wspierane przez Departament Rolnictwa Stanów Zjednoczonych, Służbę Badań Rolniczych (USDA-ARS), Narodowy Program 108, numery Systemu Informacji o Aktualnych Badaniach 8072-42000-093-000-D i 8072-42000-094-000-D. Wzmianka o nazwach handlowych lub produktach komercyjnych w tym artykule służy wyłącznie dostarczeniu konkretnych informacji i nie oznacza rekomendacji ani poparcia ze strony Departamentu Rolnictwa Stanów Zjednoczonych. USDA jest dostawcą równych szans i pracodawcą.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
48 Blok studni głębinowej 4,6 mlFisher Scientific International, IncNC1964628
Agar - Środek zestalający (Difco)Becton, Dickinson and Company (BD)281230
Waga analitycznaMettler ToledoJL602-G/LSprzęt 
Waga analitycznaMettler ToledoAB54-SSprzęt 
Autoklaw - Amsco Lab250, laboratoryjny sterylizator parowySteris plcLV-250Sprzęt 
Szafa bezpieczeństwa biologicznego, typ A2, oczyszczacz Logic+Labconco Corporation302411101Equipment 
Napar z mózgu i serca (BHI) BulionBecton, Dickinson and Company (BD)237500
Buforowana woda peptonowaBio-Rad Laboratories Inc.
Rozsiewacz komórek 3564684 - w kształcie litery LVWR76208-438
Wirówka do mikrowirówek 5424Eppendorf5424Wirówka sprzętowa
, Avanti J-25Beckman Coulter, Inc. Sprzęt
do ekstrakcji DNA - Odczynnik do przygotowania próbek PreMan Ultra Thermo Fisher Scientific Inc. 
Kurczak mielony Lokalni sprzedawcy
Do przodu IAC  podstawa: 5'-GGCGCCCTAACACATCT-3'Zintegrowanetechnologie DNA 
Sonda IAC: 5'-TTACAACGGGAGAAGACAATGC
CACCA-3' znakowana 5' TAMRA/3' BHQ-2		Biosearch Technologies
Odwrotny starter IAC: 5'-TGGAAGCAATGCCAAATGTGTA-3'Zintegrowanetechnologie DNA 
Inkubator - wytrząsarka inkubatora Inova 4230New Brunswick Scientific4230Sprzęt 
Pętla inokulacyjna - Pętla Combi  10&mikro; L oraz 1&mikro; L Fisher Scientific International, Inc22-363-602
invA forward primer: 5'-GTTGAGGATGTTATTCGCAAAG
G-3'Zintegrowane		technologie DNA 
Sonda invA: 5'-CCGTCAGACCTCTGGCAGTAC
CTTCCTC-3' znakowana 5' Cal Fluor Orange 560/3' BHQ-1		Biosearch Technologies
invA reverse starter: 5'-GGAGGCTTCCGGGTCAAG-3'Zintegrowanetechnologie DNA 
Leczenie napromienianiemTexas A& M Agrilife Research Narodowe Centrum Badań
Luria Bertani (LB) BulionBecton, Dickinson and Company (BD)244620
Pipeta ręczna Pipet-Lite LTS Pipeta L-1000XLS+Mettler Toledo17014382Equipment
Pipeta ręczna Pipet-Lite LTS Pipeta L-100XLS+Mettler Toledo17014384Equipment
Pipeta ręczna Pipet-Lite LTS Pipeta L-10XLS+Mettler Toledo17014388Equipment
Pipeta ręczna Pipet-Lite LTS Pipeta L-200XLS+Mettler Toledo17014391Equipment
Pipeta ręczna Pipet-Lite LTS Pipeta L-20XLS+Mettler Toledo17014392Equipment
Pipeta ręczna Pipet-Lite Multi Pipette L8-200XLS+Mettler Toledo 17013805Sprzęt
Pipeta ręczna Pipet-Lite Multi Pipette L8-20XLS+Mettler Toledo17013803Sprzęt
Butelka do przechowywania mediów -PYREX 1L Kwadratowe szkło  Butelka z nakrętką GL45Corning Inc.1396-1L
Butelka do przechowywania nośników - okrągła butelka z szerokimi ustami PYREX 2L, z zakrętką GLS80Corning Inc.1397-2LSprzęt Płytka
do mikromiareczkowania, płytka 96-dołkowa, płaskie dno, polistyren, 0,34cm2, sterylna, 108/csZ707902MilliporeSigma
- Vortex Genie 2Scientific Industries Inc.SI-0236Sprzęt
Zestaw do wykrywania molekularnego 2-SalmonellaPrzyrząd
 Sprzęt NeogenMDS100 
Sterownik pipet z napędem silnikowym, PIPETBOY2INTEGRA Biosciences Corp.155019Sprzęt PCR
Mastermix 2 razy; Ekspresja genu TaqMan Thermo Fisher Scientific Inc. 
Rotator szalki Petriego -  BioWORLD Gramofon do inokulacjiFisher Scientific International, Inc3489E20Sprzęt
Szalki Petriego z przezroczystą pokrywką (100 mm x 15 mm)Fisher Scientific International, IncFB0875713
Końcówki do pipet GP LTS 1000µ L S 768A/8Mettler Toledo 
30389273 Końcówki do pipet GP LTS 20µ L 960A/1030389270Mettler Toledo
GP LTS 200µ L F 960A/10Mettler Toledo30389276
Gotowy do gotowania produktów z kurczakaLokalni sprzedawcy
Zbiornik odczynnika, sterylny zbiornik 25 ml używany z pipetami wielokanałowymiThermo Fisher Scientific Inc. 8093-11
System PCR w czasie rzeczywistym - 7500 System PCR w czasie rzeczywistym (Applied Biosystems, Foster City, Kalifornia)2750036476Sprzęt Pipety
serologiczne, Pipety serologiczne Nunc (10 ml)Thermo Fisher Scientific Inc. 170356N
Pipety serologiczne, Pipety serologiczne Nunc (2 ml)Thermo Fisher Scientific Inc. 170372N
Pipety serologiczne, Pipety serologiczne Nunc (25 ml)Thermo Fisher Scientific Inc. 170357N
Pipety serologiczne, Pipety serologiczne Nunc (50 ml)Thermo Fisher Scientific Inc. 170376N
Rozsiewacz - Rozsiewacze komórkowe w kształcie litery L FisherbrandFisher Scientific International, Inc14-665-230
Torba stomacher, Nasco Whirl-Pak Write-On Homogenizator Blender Worki filtracyjneThermo Fisher Scientific Inc. 01-812
Stomacher 80 Biomaster Lab BlenderSeward30010019Sprzęt
Termocykler (GeneAmp PCR system 9700)Applied Biosystems535028293Sprzęt
do filtracji wody - Elga Veolia Purelab Flex Elga LabWaterPF2XXXXM1-USSprzęt
Worki Whirlpak 1.63L VWR11216-777
4318930Wiązki Elektronów Mieszalnik do wykrywania molekularnego Neogen MDA2SAL964369542 Końcówki do pipet

Bibliografia

  1. Batz, M., Hoffmann, S., Morris, J. G. Disease-outcome trees, eq-5d scores, and estimated annual losses of quality-adjusted life years (qalys) for 14 foodborne pathogens in the united states. Foodborne Pathogens and Disease. 11 (5), 395-402 (2014).
  2. The Grand Challenge: Salmonella. , United States Department of Agriculture. https://tellus.ars.usda.gov/stories/articles/the-grand-challenge-salmonella (2024).
  3. National Advisory Committee on Microbiological Criteria in Foods (NACMCF). Response to questions posed by the food safety and inspection service: Enhancing Salmonella control in poultry products. J Food Prot. 82 (4), 645-668 (2019).
  4. Food Safety and Inspection Service. 4.15 Isolation and identification of Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, siluriformes (Fish) products and carcass and environmental sponges. , (2024).
  5. Irwin, P., Reed, S., Brewster, J., Nguyen, L., He, Y. P. Non-stochastic sampling error in quantal analyses for campylobacter species on poultry products. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 405 (7), 2353-2369 (2013).
  6. Irwin, P., Tu, S., Damert, W., Phillips, J. A modified gauss-newton algorithm and ninety-six well micro-technique for calculating mpn using excel spreadsheets. Journal of Rapid Methods & Automation in Microbiology. 8 (3), 171-191 (2000).
  7. Ravishankar, S. Food microbiology: A laboratory manual. Food Microbiology. Ahmed, E. Y., Carlstrom, C. 21, wiley-interscience. singapore. 489(2004).
  8. Chen, C. Y., Nace, G. W., Irwin, P. L. A 6 x 6 drop plate method for simultaneous colony counting and mpn enumeration of campylobacter jejuni, listeria monocytogenes, and escherichia coli. J Microbiol Methods. 55 (2), 475-479 (2003).
  9. Suo, B., He, Y., Tu, S. I., Shi, X. A multiplex real-time polymerase chain reaction for simultaneous detection of salmonella spp., escherichia coli o157, and listeria monocytogenes in meat products. Foodborne Pathogens and Disease. 7 (6), 619-628 (2010).
  10. Jarvis, B., Wilrich, C., Wilrich, P. T. Reconsideration of the derivation of most probable numbers, their standard deviations, confidence bounds and rarity values. J Appl Microbiol. 109 (5), 1660-1667 (2010).
  11. Stevens, R., Poppe, K. Validation of clinical prediction models: What does the "calibration slope" really measure. Journal of Clinical Epidemiology. 118, (2019).
  12. Miller, M. E., Hui, S. L., Tierney, W. M. Validation techniques for logistic regression models. Statistics in Medicine. 10 (8), 1213-1226 (1991).
  13. Galán-Relaño, Á, et al. Salmonella and salmonellosis: An update on public health implications and control strategies. Animals. 13 (23), 3666(2023).
  14. Gorski, L., et al. Growth assessment of salmonella enterica multi-serovar populations in poultry rinsates with commonly used enrichment and plating media. Food Microbiology. 119, 104431(2024).
  15. Schmidt, J. W., et al. Evaluation of methods for identifying poultry wing rinses with salmonella concentrations greater than or equal to 10 cfu/ml. J Food Prot. 87 (11), 100362(2024).
  16. Gorski, A., Liang, L. S. Effect of enrichment medium on real-time detection of salmonella enterica from lettuce and tomato enrichment cultures. Journal of Food Protection. 73 (6), 1047-1056 (2010).
  17. Guillén, S., Nadal, L., Álvarez, I., Mañas, P., Cebrián, G. Impact of the resistance responses to stress conditions encountered in food and food processing environments on the virulence and growth fitness of non-typhoidal salmonellae. Foods. 10 (3), 617(2021).
  18. Rohde, A., Hammerl, J. A., Appel, B., Dieckmann, R., Al Dahouk, S. Sampling and homogenization strategies significantly influence the detection of foodborne pathogens in meat. BioMed Research International. 2015, (2015).
  19. Wang, D., Wang, Z., He, F., Kinchla, A. J., Nugen, S. R. Enzymatic digestion for improved bacteria separation from leafy green vegetables. Journal of Food Protection. 79 (8), 1378-1386 (2016).
  20. Pitard, F. F. Theory of sampling and sampling practice. , Chapman and Hall/CRC. (2019).
  21. Sharpe, A. in Detecting pathogens in food. , Elsevier. 52-68 (2003).
  22. Hannah, J., et al. Effect of stomaching on numbers of bacteria recovered from chicken skin. Poultry Science. 90 (2), 491-493 (2011).
  23. Mcmeekin, T., Thomas, C. Retention of bacteria on chicken skin after immersion in bacterial suspensions. Journal of Applied Bacteriology. 45 (3), 383-387 (1978).
  24. Rodrigues-Szulc, U., Ventoura, G., Mackey, B., Payne, M. Rapid physicochemical detachment, separation and concentration of bacteria from beef surfaces. Journal of Applied Bacteriology. 80 (6), 673-681 (1996).
  25. Vibbert, H. B., et al. Accelerating sample preparation through enzyme-assisted microfiltration of salmonella in chicken extract. Biotechnol Prog. 31 (6), 1551-1562 (2015).
  26. Armstrong, C. M., et al. Use of a commercial tissue dissociation system to detect salmonella-contaminated poultry products. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 416 (3), 621-626 (2024).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Ilo ciowe oznaczanie Salmonellapatogeny przenoszone drog pokarmowamplifikacja zap tlona LAMProzcie czenia seryjneprob wki do wir wekekstrakcja DNAPCR w czasie rzeczywistymdetekcja molekularna

Powiązane artykuły