Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Budowa modelu ksenoprzeszczepu gruczolakoraka płuc u myszy i ocena skuteczności wywaru XY poprzez szlak MAPK

588 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/68023

⸱

25 kwietnia 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

W tym artykule

Podsumowanie

To badanie pokazuje, że wywar XY wywiera efekty terapeutyczne przeciwko gruczolakorakowi płuc poprzez regulację szlaku MAPK.

Streszczenie

Gruczolakorak płuc rośnie na całym świecie, co skłania do poszukiwania i opracowywania skutecznych metod leczenia. W ostatnich latach coraz częściej dostrzega się potencjał terapeutyczny tradycyjnej medycyny chińskiej w leczeniu gruczolakoraka płuc, takiego jak wywar XiaoYi (XY). Mechanizm działania tradycyjnej medycyny chińskiej w leczeniu gruczolakoraka płuc jest nadal wyjaśniany. W tym badaniu wykorzystano modele zwierzęce do zbadania efektów terapeutycznych wywaru XY w leczeniu gruczolakoraka płuc. Składniki chemiczne wywaru XY u myszy zostały oddzielone i przeanalizowane zarówno w trybie jonów dodatnich, jak i ujemnych przy użyciu UHPLC-QE-MS. Wyniki zostały następnie zweryfikowane w eksperymentach in vivo, które wykazały zmniejszenie wielkości guza, poprawę zmian patologicznych i zwiększoną apoptozę. W rezultacie zidentyfikowano piętnaście składników wchłanianych do krwi po podaniu wywaru XY: stachiozę, kwercetyno-3-O-beta-glukopirazylo-7-O-alfa-ramnopiranozyd; Imperialine; Spinozyna B; Peimine; Baza flawonowa + 3O, 2MeO, O-Hex; Picropodophylotoksyna; (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihydroksy-2 [[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-hydroksy-17-(2-hydroksy-6-metylohept-5-en-2-ylo) 4,4,8,10,14-pentametylo-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodekahydro-1H cyklopenta[a]fenantren-3-ylo]oksy]-6-(hydroksymetylo)oksan-3-ylo]oksy-6-(hydroksymetylo)oksan-3,4,5-triol; Tricin; Ginsenozyd Rg1; (20R)-ginsenozyd Rh1; Jujubozyd B; Aukubina; Ginsenozyd Rg3; i kwas beta-elemoninowy. Eksperymenty na zwierzętach wykazały, że wywar XY hamował wzrost guza, poprawiał zmiany patologiczne i promował apoptozę komórek nowotworowych w sposób zależny od dawki. Mechanizmy te mogą być związane z regulacją w górę ekspresji białka p-JNK i p-P38 w szlaku MAPK oraz regulacją w dół ekspresji białka p-ERK w szlaku MAPK. Podsumowując, wywar XY ma potencjał do regulowania szlaku MAPK i wywierania efektów terapeutycznych przeciwko gruczolakorakowi płuc.

Wprowadzenie

Zachorowalność na raka płuc rośnie na całym świecie. Odpowiada za 18% wszystkich nowotworów złośliwych i jest odpowiedzialny za znaczną liczbę zgonów związanych z rakiem1,2. Niedrobnokomórkowy rak płuca (NSCLC) jest powszechną postacią raka płuc, z gruczolakorakiem jako głównym typem patologicznym3. Ze względu na podstępne objawy, NSCLC jest często diagnozowany w zaawansowanym stadium i ma wysoki wskaźnik śmiertelności4,5. U pacjentów z NDRP w stadium IV pięcioletni wskaźnik przeżycia wynosi zaledwie 5%6, podczas gdy nawet chirurgicznie resekcyjny NSCLC we wczesnym stadium ma pięcioletni wskaźnik przeżycia wynoszący zaledwie 50%7.

Obecnie leczenie gruczolakoraka płuc obejmuje chirurgię, radioterapię, chemioterapię, immunoterapię i terapię celowaną. Dodatkowo, Tradycyjna Medycyna Chińska (TCM) w leczeniu gruczolakoraka płuc jest coraz częściej rozpoznawana i ceniona8. TCM ma długą historię i był stosowany w leczeniu różnych chorób onkologicznych ze skutecznymi wynikami terapeutycznymi9,10. Traktuje ludzkie ciało jako całość, a zasada terapeutyczna koncentruje się na przywróceniu ruchu Qi (Qi odnosi się do energii życiowej, która wspomaga krążenie krwi i płynów ustrojowych, przyczyniając się do wzmocnienia odporności i zmniejszenia stanu zapalnego u pacjentów z niedrobnokomórkowym rakiem płuca) w narządach wewnętrznych w celu przywrócenia ogólnej równowagi i zahamowania postępu raka.

TCM nie tylko leczy choroby onkologiczne o niskiej toksyczności, wielu celach i wysokiej skuteczności11, ale także ułatwia naprawę uszkodzeń spowodowanych radioterapią i chemioterapią, przedłużając tym samym przeżycie12.

Technologia chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (LC-MS) integruje chromatografię cieczową ze spektrometrią mas w celu uzyskania separacji i wykrywania składników w złożonych mieszaninach związków13. LC-MS oferuje wysoką rozdzielczość, wysoką czułość i wysoką specyficzność, co pozwala na separację i identyfikację różnych składników chemicznych w wywarach tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM). W połączeniu z chemią medyczną surowicy, która oddziela i wykrywa składniki aktywne wnikające do krwi po podaniu doustnym14,15, LC-MS umożliwia przewidywanie i analizę potencjalnych mechanizmów działania leków. Takie podejście pomaga w zrozumieniu składu chemicznego i składników farmakologicznych wywarów TCM, dostarczając niezbędnych danych do dogłębnych badań nad ich efektami farmakologicznymi i zastosowaniami klinicznymi, dzięki czemu ma duże zastosowanie w badaniach TCM16,17.

Szlak sygnałowy MAPK odgrywa kluczową rolę w powstawaniu, progresji, przerzutach i inwazji raka płuc, z Erk, p38 i JNK jako ważnymi podrodzinami. Wykazano, że wywary TCM wpływają na ekspresję białek w szlaku MAPK18. Odwar XiaoYi (XY) pochodzi z wywaru YiGuan i jest stosowany w leczeniu gruczolakoraka płuc w Pierwszym Szpitalu Stowarzyszonym Uniwersytetu Medycyny Chińskiej w Changchun (Rysunek 1), wykazując precyzyjną skuteczność kliniczną. Jednak jego mechanizm terapeutyczny pozostaje niejasny.

W tym badaniu, ultra-wysokowydajna chromatografia cieczowa w połączeniu ze spektrometrią mas Q-Exactive Orbitrap (UHPLC-QE-MS) została wykorzystana do wyjaśnienia możliwego mechanizmu terapeutycznego wywaru XY przeciwko gruczolakorakowi płuc, a jego efekty zostały potwierdzone przez badania in vivo.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie procedury na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet Etyki Zwierząt Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Changchun (Etyka nr 2024008). Sześciotygodniowe samce myszy C57BL/6 (20 ± 2 g), hodowane w określonych warunkach wolnych od patogenów (SPF), wykazywały typowe wzorce aktywności fizycznej w kontrolowanym środowisku o stałej temperaturze i wilgotności. Miały one ad libitum dostęp do pożywienia i wody i były utrzymywane w 12-godzinnym cyklu światło/ciemność. Szczegółowe informacje na temat odczynników i sprzętu użytego w tym badaniu znajdują się w Tabeli Materiałów.

1. Przygotowanie wodnego ekstraktu z wywaru XY

  1. Żeń-szeń Panax C.A. Mey (Renshen, 15 g), Chinemys reevesii (Gray) (Guiban, 30 g) i Trionyx sinensis Wiegmann (Biejia, 30 g) umieścić w garnku z wywarem. Dodaj 1000 ml wody dejonizowanej i moczyć przez 30 minut w temperaturze pokojowej.
  2. Gotuj trzy zioła z kroku 1.1 przez 1 godzinę. Jednocześnie namocz Rehmannia glutinosa Libosch (Dihuang, 30 g), Trichosanthes kirilowii Maxim. (Tianhuafen, 30 g), Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (rzymski) Stapf (Yiyiren, 20 g), Paeonia lactiflora Pall. (Baishao, 30 g), Boswellia carterii Birdw. (Ruxiang, 7 g), Commiphora myrrha Engl. (Moyao, 7 g), Agrimonia pilosa Ledeb. (Xianhecao, 20 g), Alpinia oxyphylla Miq. (Yizhiren, 20 g), Ziziphus jujuba Mill. var. spinosa (Bunge) (Suanzaoren, 30 g), Melia toosendan Sieb. et Zucc. (Chuanlianzi, 5 g), Fritillaria thunbergii Miq. (Zhebeimu, 15 g), Anemarrhena asphodeloides Bge. (Zhimu, 10 g), Platycodon grandiflorum (Jacq.) (Jiegeng, 10 g), Polygala tenuifolia Willd. (Yuanzhi, 15 g) i Phragmites communis Trin. (Lugen, 30 g) w innym pojemniku przez 30 min. Po namoczeniu przenieś je do garnka z wywarem z kroku 1.1.
  3. Gotuj wszystkie 18 ziół z kroków 1.1 i kroku 1.2 przez 30 minut. Wylej płyn ziołowy, dodaj 1000 ml wody dejonizowanej i gotuj przez kolejne 30 minut. Powtórz ten proces gotowania trzy razy, aby uzyskać trzy porcje płynu ziołowego, a następnie połącz je i dokładnie wymieszaj.
  4. Przefiltruj zmieszany płyn ziołowy przez ściereczkę o oczkach 400. Zagęścić filtrat pod zmniejszonym ciśnieniem, a następnie przenieść skoncentrowany płyn ziołowy do sprzętu chłodzącego w celu dalszego przetwarzania.
  5. Wlej skoncentrowany płyn ziołowy do tacki liofilacyjnej i umieść go w komorze wstępnego zamrażania liofilizatora próżniowego. Po zakończeniu wstępnego zamrażania przenieś tackę do komory suszenia sublimacyjnego w celu usunięcia wody.
  6. Usuń resztki wilgoci w wysokiej temperaturze. Sproszkować liofilizowany ekstrakt ziołowy za pomocą rozdrabniacza, aby uzyskać drobno liofilizowany wywar XY w proszku (Rysunek 2).

2. Preparat surowicy zawierający lek

  1. Losowo przypisz sześciotygodniowe samce myszy C57BL/6 (20 ± 2 g) do grupy XiaoYi (XY) lub grupy kontrolnej.
    UWAGA: Dawka dla myszy została obliczona przy użyciu współczynnika konwersji między człowiekiem a myszą:
    Równoważna dawka doświadczalna dla myszy (g/kg) = {Dawka dla ludzi (g/kg) / Masa ciała (70 kg)} x 9,1
    Na podstawie tych obliczeń ustalono dawkę dla myszy na 2,6 g/kg.
  2. Odważyć 0,9152 g liofilizowanego wywaru XY w proszku i rozpuścić go w 3,2 ml wody destylowanej, aby przygotować roztwór leku.
    UWAGA: Myszy były na czczo przez 12 godzin przed podaniem doustnym.
  3. Podawaj wywar XY myszom w grupie XY przez zgłębnik, podając grupie kontrolnej równoważną objętość wody dejonizowanej.
  4. 2 godziny po podaniu doustnym znieczulić myszy pentobarbitalem sodu (zgodnie z instytucjonalnie zatwierdzonymi protokołami). Wyłuszczenie gałek ocznych za pomocą pęsety w celu pobrania próbek krwi, a następnie eutanazja myszy poprzez uduszenie CO2, a następnie zwichnięcie szyjki macicy zgodnie z wytycznymi etycznymi19.
  5. Pozostawić próbki krwi do ustabilizowania się w temperaturze pokojowej przez 90 minut. Wirować przy 3450 x g (4 °C) przez 15 minut w celu zebrania supernatantu.

3. Analiza UHPLC-QE-MS

  1. Dodać 100 mg liofilizowanego proszku wywaru XY do 500 μl roztworu ekstrakcyjnego (metanol: woda = 4:1). Dokładnie wymieszać, sonizować i inkubować w lodowatej kąpieli wodnej przez 1 godzinę.
  2. Utrzymywać mieszaninę w temperaturze -40 °C przez 1 godzinę, następnie odwirowywać w temperaturze 13 800 x g (4 °C) przez 15 minut. Przefiltrować supernatant przez membranę filtracyjną 0,22 μm, a następnie połączyć 100 μl każdego supernatantu w celu uzyskania próbek kontroli jakości (QC).
  3. Po rozmrożeniu próbek osocza należy pobrać 400 μl próbki osocza z grupy kontrolnej i 400 μl próbek osocza z grupy XY. Do każdej próbki dodać 40 μl kwasu solnego (2 mol/l). Wirować przez 1 minutę i odstawić mieszaninę w temperaturze 4 °C na 15 minut. Powtórz ten krok cztery razy.
  4. Dodać 1,6 ml acetonitrylu i wirować przez 5 minut. Wirować przy 13 800 x g przez 5 minut w temperaturze 4 °C. Poddać 1 800 μl supernatantu suszeniu azotem.
  5. Rozpuść wysuszone próbki w 150 μl 80% metanolu zawierającego 10 μg/ml wzorca wewnętrznego przez wirowanie przez 5 minut. Odwirować przy 13 800 × g przez 5 minut w temperaturze 4 °C, a następnie przenieść 120 μl supernatantu do świeżej szklanej fiolki w celu analizy LC-MS (Rysunek 3).

4. Hodowla komórkowa i przygotowanie zwierząt

  1. Wysiew 1 ml komórek raka płuc Lewisa w naczyniu hodowlanym zawierającym zmodyfikowane podłoże Eagle Medium (DMEM) firmy Dulbecco uzupełnione 10% płodową surowicą bydlęcą i 1% penicyliną/streptomycyną. Inkubować komórki w kontrolowanych warunkach w temperaturze 37 °C z 5% CO2 .
  2. Gdy komórki osiągną 80% konfluencji, przepuść je za pomocą 0,25% trypsyny. Kontynuuj pasażowanie, aż stan komórki się ustabilizuje, a następnie dostosuj stężenie komórek do 3 x 106 komórek/ml.
  3. Wstrzyknąć 0,1 ml przygotowanej zawiesiny komórkowej podskórnie do prawej pachy samców myszy C57BL/6 w celu ustalenia modelu gruczolakoraka płuc.
    UWAGA: Tkankę nowotworową można badać palpacyjnie pod pachą myszy 5 dni po inokulacji.
  4. Po 5 dniach losowo podziel myszy na pięć grup (n = 6 na grupę): Grupa modelowa (M) - Brak leczenia; Grupa wywaru XY o niskiej dawce (XY-L) - 1,3 g/kg; grupa średniej dawki wywaru XY (XY-Z) - 2,6 g/kg; grupa wysokiej dawki wywaru XY (XY-H) - 5,2 g / kg; Grupa cisplatyny (DDP) - leczona cisplatyną20.
  5. Rozpuścić wywar XY w proszku w 200 μl wody destylowanej w odpowiedniej dawce i podać przez zgłębnik. Grupy M i DDP otrzymują równą objętość wody destylowanej przez zgłębnik.
  6. Cisplatynę należy podawać grupie DDP we wstrzyknięciu dootrzewnowym (3 mg/kg) raz na 3 dni. Wstrzyknąć taką samą objętość soli fizjologicznej pozostałym grupom.

5. Analiza patologiczna tkanki nowotworowej

  1. Po 21 dniach poddaj eutanazji wszystkie myszy za pomocą uduszenia CO2, a następnie zwichnięcia szyjki macicy (zgodnie z wytycznymi etycznymi) i wyciąć tkankę nowotworową21. Zmierz objętość i masę guza (Rysunek 4).
  2. Utrwal wycięte tkanki nowotworowe w 4% paraformaldehydzie przez 24 godziny). Odwodnić tkankę za pomocą stopniowanych roztworów etanolu.
  3. Oczyść odwodnione bloki tkanek za pomocą ksylenu, a następnie zanurz je w stopionym wosku parafinowym. Pozwól, aby wosk zestalił się w blok parafiny. Pokrój blok tkanki na plastry o grubości 5 μm za pomocą mikrotomu.
  4. Odparafinować skrawki tkanek w ksylenie, a następnie ponownie uwodnić w stopniowanych roztworach etanolu. Zabarwić skrawki hematoksyliną przez 5 minut, a następnie spłukać wodą dejonizowaną.
  5. Przeciwbarwić skrawki 0,5% roztworem eozyny przez 1 minutę. Obserwuj zabarwione skrawki pod mikroskopem optycznym i uchwyć obrazy do analizy.

6. Analiza immunohistochemiczna tkanki nowotworowej

  1. Przeprowadzić deparafinację i ponowne nawodnienie zgodnie z procedurami opisanymi w krokach 5.2-5.4.
  2. Inkubować skrawki w endogennym blokerze peroksydazy w temperaturze pokojowej przez 15 minut. Zablokować niespecyficzne wiązanie poprzez inkubację skrawków z kozią surowicą.
  3. Zastosuj przeciwciała pierwszorzędowe: Ki-67 (1:600) i kaspazę-3 (1:100). Inkubować skrawki przez noc w temperaturze 4 °C. Przemyć buforem PBS), następnie zastosować przeciwciało drugorzędowe ogólnego przeznaczenia (1:500) i inkubować w temperaturze 37 °C przez 30 minut.
  4. Rozwiń reakcję barwną, dodając roztwór DAB. Przeciwbarwić skrawki roztworem hematoksyliny.
  5. Wykonaj odwodnienie, oczyszczenie i uszczelnienie poplamionych sekcji. Obserwuj ekspresję białek pod mikroskopem optycznym i rejestruj obrazy do analizy.

7. Analiza Western blot

  1. Homogenizuj tkanki nowotworowe za pomocą lizera tkankowego. Wyekstrahować białko całkowite i oznaczyć jego stężenie za pomocą zestawu do oznaczania kwasu bicinchoninowego (BCA) (patrz tabela materiałów).
  2. Przeprowadzić kwantyfikację białka, a następnie elektroforezę SDS-PAGE i transfer białka na błonę.
  3. Inkubować błonę przez noc w temperaturze 4 °C z przeciwciałami pierwszorzędowymi: P38 (1:2000), p-P38 (1:1000), ERK (1:20000), p-ERK (1:500), JNK (1:2000), p-JNK (1:5000), β-aktyna (1:200) (patrz tabela materiałów).
  4. Następnego dnia inkubuj błonę z przeciwciałem drugorzędowym sprzężonym z peroksydazą chrzanową (HRP) w temperaturze pokojowej przez 1,5 godziny. Wykryj prążki białkowe za pomocą systemu wzmocnionej chemiluminescencji (ECL).
    UWAGA: Intensywność pasm białkowych określono ilościowo za pomocą oprogramowania ImageJ.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Roztwór proszku XY oraz próbki surowicy z grupy kontrolnej i grupy XY przeanalizowano za pomocą UHPLC-QE-MS, co wykazało dobrze rozdzielone piki. Całkowite widma jonizacji dla dodatniego i ujemnego trybu jonizacji przedstawiono na Rysunku 3. Skład odwaru XY zidentyfikowano na podstawie czasu retencji, trybu akwizycji oraz fragmentów widma masowego. Poprzez porównanie surowicy grup z grupy kontrolnej oraz grupy po doustnym podaniu odwaru XY ze składnikami rozt...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Zachorowalność na nowotwory rośnie z roku na rok, co cieszy się dużym zainteresowaniem klinicznym i badawczym22,23. Ostatnie badania wykazały skuteczność tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM) w leczeniu raka płuc 24,25,26. Na przykład wykazano, że wywar z Maimendong zwiększa liczbę i aktywność komórek NK, hamując w ten sposób przerzuty raka płuc27....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez Punkt Planu Rozwoju Nauki i Technologii Prowincji Jilin (YDZJ202301ZYTS459).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
AcetonitrylCNW Technologies5/8/1975
2-chloro-L fenyloalaninaShanghai Hengbo Biotechnology Co., Ltd.103616-89-3
Roztwór wodorotlenku amonu ChinaNational Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.#2028
Przeciwciało-β-aktynaAbcamab8228
Anty-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) PrzeciwciałoAbcamab4819
Przeciwciało anty-ERK1/ERK2Abcamab184699
Anty-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) PrzeciwciałoAbcamab76572
Przeciwciało anty-JNK1/JNK2/JNK3Abcamab208035
Technologia sygnalizacji komórkowejprzeciwciała anty-Ki67GB121141
Przeciwciało anty-p38 (fosfo T180)Abcamab178867
Przeciwciało anty-p38 alfa/MAPK14Abcamab170099
Zestaw do oznaczania stężenia białka BCATechnologia biologiczna Boster17E17B46
Albumina surowicy bydlęcej (BSA)DAKOBIOFROXX
Inhibitor fosfatazy o szerokim spektrum działania (100x)Boster Biological TechnologyAR1183
C57bl/6 myszyLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK2021-0006
Kolumna chromatograficznaWodyACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μ m2,1 * 100 mm
CisplatynaChiny Narodowa Grupa Farmaceutyczna Odczynnik chemiczny Co., Ltd.232120
Roztwór do odzyskiwania antygenu cytrynianu (pH 6,0)Wuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2010
Szkiełko nakrywkoweJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.10212432C
Etap kriogenicznyWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-L5
Zestaw chromogeniczny DABJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.
Wytrząsarka do odbarwianiaPekin Liu Yi Instrument FactoryWD-9405A
OdwadniaczWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JJ-12J
Piec suszącyShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
Zmodyfikowane podłoże orła firmy DulbeccoGibco8121587
EDTA (pH 8,0) Roztwór do odzyskiwania antygenuWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2001
EDTA (pH 9,0) Roztwór do odzyskiwania antygenuWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2002
Bufor do elektroforezyNCM Biotech20230801
Maszyna do zatapianiaWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
EosinChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
EtanolChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Surowica bydlęcapłodu Gibco2166090RP
Kwas mrówkowySIGMA64-18-6
Oprogramowanie GraphPad PrismOprogramowanie GraphPad, LLCWersja 9.0.0
HematoxylinChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.H3136
Wysokosprawna chromatografia cieczowaAgilent1260 Infinity II Prime
Wirówka z chłodzeniem o dużej prędkościThermo FisherScientific Legend Micro 17R
Spektrometria mas o wysokiej rozdzielczościThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus Sprzężona
z HRP kozia przeciw myszomSeraCare5220-0341
Sprzężone z HRP kozie przeciwciało anty-króliczeSeraCare5220-0336
Sprzężone z HRP kozie przeciwciało anty-króliczo-mysieDAKOK5007
Sprzężone z HRP kozie przeciwciało antyszczurzeSeraCare5220-0364
Królik anty-kozi sprzężony z HRPSeraCare5220-0362
Kwas solnyChińska Narodowa Grupa Farmaceutyczna Odczynnik chemiczny Co., Sp. z o.o.H9892
Nadtlenek wodoruChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.B12555
Nadczuły zestaw chemiluminescencyjny ECLOprogramowanie NCM BiotechP10300
ImageJNational Institutes of Healthv1.8.0
Nikon (Japonia)NIKON DS-U3
Komórki raka płuc LewisaNational Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Tkanina siatkowaBaijie100110779650
Metalowy przyrząd do kontroli temperatury ogrzewaniaBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
Mikropipeta MetanolAladynM116118
Dlab Scientific Co., Ltd.KE0003087/KA0056573
Szkiełko mikroskopoweJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.10212432C
Szanghaj Leica Instruments Co., Ltd.RM2016
Kuchenka mikrofalowaGalanz Kuchenka mikrofalowa Electrical Appliances Co., Ltd.P70D20TL-P4
Neutralny balsamChiny Narodowa Grupa Farmaceutyczna Chemical Reagent Co., Ltd.
Mikroskop optycznyNikon (Japonia)Nikon Eclipse CI
OvenShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
PAGE Zestaw do szybkiego przygotowania żeluBiosharpPL566B-5
ParaformaldehydChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.8.18715
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (1x)Gibco8120485
Wstępnie barwiony marker białkowy (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
Bufor ładujący białko (5X)Boster Biological TechnologyAR1112
pulverizerShangzhiqiao Co., Ltd.DFT-100A
PVDF (0,45 μ m)Cywin Innovation (Pekin) Biotechnology Co., Ltd.SW120-01
Rozwiązanie do szybkiego transferu membranyCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW171-02
Lizaat RIPABoster Biological Technology Co., Ltd.AR0105
TBS BuforNCM Biotech23HA0102
Stacja robocza do flotacji tkanekJinhua Kedi Instrument Equipment Co., Ltd., prowincja Zhejiang.KD-P
NCM Biotech23CA2000
Trypsyna (0,25%, 1x)HyCloneJ210045
Ultradźwiękowy aparat do rozbijania komórekNingbo Xinyi sprzęt ultradźwiękowy Co., Ltd.JY92-IIDN
Nikon (Japonia)Nikon Eclipse CI
Lanjing Co., Ltd.HD-LG20D
Mieszalnik wirowyKylin-BellXW-80A
KsylenChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
2005289212954493511 System obrazowania China 9002010410004160Bufor transbłonowy Pionowy mikroskop optyczny Liofilizator próżniowy 214736

Bibliografia

  1. Ferlay, J., et al. Cancer statistics for the year 2020: An overview. Int J Cancer. 149 (4), 778-789 (2021).
  2. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  3. Ahn, M. J., et al. Asian Thoracic Oncology Research Group (ATORG) expert consensus statement on MET alterations in NSCLC: Diagnostic and therapeutic considerations. Clin Lung Cancer. 23 (8), 670-685 (2022).
  4. Seguin, L., Durandy, M., Feral, C. C. Lung adenocarcinoma tumor origin: A guide for personalized medicine. Cancers (Basel). 14 (7), 1759(2022).
  5. Nasim, F., Sabath, B. F., Eapen, G. A. Lung cancer. Med Clin North Am. 103 (3), 463-473 (2019).
  6. Miller, K. D., et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2022. CA Cancer J Clin. 72 (5), 409-436 (2022).
  7. Torrente, M., et al. Understanding prognosis and survival outcomes in patients with early-stage non-small-cell lung cancer. Clin Med (Lond). 22 (Suppl 4), 38-40 (2022).
  8. Li, Z., Feiyue, Z., Gaofeng, L. Traditional Chinese medicine and lung cancer--From theory to practice. Biomed Pharmacother. 137, 111381(2021).
  9. Wei, Z., et al. Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review. J Ethnopharmacol. 300, 115748(2023).
  10. Miao, K., et al. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  11. Wang, K., et al. Anticancer activities of TCM and their active components against tumor metastasis. Biomed Pharmacother. 133, 111044(2021).
  12. Chen, S., et al. Efficacy and safety of TCM combined with chemotherapy for SCLC: A systematic review and meta-analysis. J Cancer Res Clin Oncol. 146 (11), 2913-2935 (2020).
  13. Yu, Y., Yao, C., Guo, D. A. Insight into chemical basis of traditional Chinese medicine based on the state-of-the-art techniques of liquid chromatography-mass spectrometry. Acta Pharm Sin B. 11 (6), 1469-1492 (2021).
  14. Wei, J., et al. Integrated serum pharmacochemistry and network pharmacology approach to explore the effective components and potential mechanisms of Menispermi rhizoma against myocardial ischemia. Front Chem. 10, 869972(2022).
  15. Shao, D., et al. Identification of the active compounds and functional mechanisms of Jinshui Huanxian formula in pulmonary fibrosis by integrating serum pharmacochemistry with network pharmacology. Phytomedicine. 102, 154177(2022).
  16. Han, J., et al. Using network pharmacology to explore the mechanism of panax notoginseng in the treatment of myocardial fibrosis. J Diabetes Res. 2022, 8895950(2022).
  17. Wang, Y., et al. Mechanisms underlying the therapeutic effects of Qingfeiyin in treating acute lung injury based on GEO datasets, network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 145, 105454(2022).
  18. Rubio, K., et al. Non-canonical integrin signaling activates EGFR and RAS-MAPK-ERK signaling in small-cell lung cancer. Theranostics. 13 (8), 2384-2407 (2023).
  19. Guo, T. F., Li, W., Xi, B. Animal welfare and slaughter methods of fur animal. J Econ Anim. 15 (2), 112-119 (2011).
  20. Moar, K., et al. Synergistic anticancer activity of resveratrol with cisplatin and carboplatin in A549 lung adenocarcinoma cells. Int J Clin Exp Pathol. 17 (11), 411-420 (2024).
  21. Li, Z., et al. Exploring tumor-suppressive effect and mechanism of action of Zilongjin Tablets combined with icotinib in Lewis tumor-bearing mice based on EGFR/PI3K/Akt signaling pathway. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (2), 529-535 (2025).
  22. Mullard, A. Addressing cancer's grand challenges. Nat Rev Drug Discov. 19 (12), 825-826 (2020).
  23. Williams, P. A., Zaidi, S. K., Sengupta, R. AACR cancer disparities progress report 2022. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 31 (7), 1249-1250 (2022).
  24. Zhao, W., et al. Si Jun Zi decoction inhibits the growth of lung cancer by reducing the expression of PD-L1 through TLR4/MyD88/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 318 (Pt A), 116948(2024).
  25. Ye, Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the effects and mechanisms of Qinghao Biejia decoction and its active compound artemisinin B against non-small-cell lung cancer. Drug Des Devel Ther. 17, 2461-2479 (2023).
  26. Zhang, J., et al. Ze-Qi decoction inhibits non-small cell lung cancer growth and metastasis by modulating the PI3K/Akt/p53 signaling pathway. J Tradit Complement Med. 13 (5), 417-429 (2023).
  27. Zhang, Z., et al. Maimendong decoction inhibits lung cancer metastasis by increasing the proportion and killing activity of NK cells. J Ethnopharmacol. 338 (Pt 3), 119127(2025).
  28. Zhang, W., et al. Explore the mechanism and substance basis of Mahuang FuziXixin decoction for the treatment of lung cancer based on network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 151 (Pt A), 106293(2022).
  29. Lee, J. Y., et al. Picropodophyllotoxin inhibits cell growth and induces apoptosis in gefitinib-resistant non-small lung cancer cells by dual-targeting EGFR and MET. Biomol Ther (Seoul). 31 (2), 200-209 (2023).
  30. Li, J. X., et al. Metabolomics and integrated network pharmacology analysis reveal Tricin as the active anticancer component of Weijing decoction by suppression of PRKCA and sphingolipid signaling. Pharmacol Res. 171, 105574(2021).
  31. Hong, J., Gwon, D., Jang, C. Y. Ginsenoside Rg1 suppresses cancer cell proliferation through perturbing mitotic progression. J Ginseng Res. 46 (3), 481-488 (2022).
  32. Wei, H., et al. Shuangshen granules attenuate lung metastasis by modulating bone marrow differentiation through mTOR signaling inhibition. J Ethnopharmacol. 281, 113305(2021).
  33. Nakhjavani, M., et al. Anti-Angiogenic properties of Ginsenoside Rg3. Molecules. 25 (21), 4905(2020).
  34. Liu, Z., et al. Insights into the antitumor mechanism of ginsenosides Rg3. Mol Biol Rep. 48 (3), 2639-2652 (2021).
  35. Huang, G., et al. Stachyose-induced apoptosis of Caco-2 cells via the caspase-dependent mitochondrial pathway. Food Funct. 6 (3), 765-771 (2015).
  36. Lin, Q., et al. Mechanistic and therapeutic study of novel antitumor function of natural compound imperialine for treating non-small cell lung cancer. J Ethnopharmacol. 247, 112283(2020).
  37. Zhang, T., et al. Peimine-induced apoptosis and inhibition of migration by regulating reactive oxygen species-mediated MAPK/STAT3/NF-κB and Wnt/β-catenin signaling pathways in gastric cancer MKN-45 cells. Drug Dev Res. 83 (7), 1683-1696 (2022).
  38. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  39. Zhang, P., et al. Jujuboside B suppresses angiogenesis and tumor growth via blocking VEGFR2 signaling pathway. Heliyon. 9 (6), e17072(2023).
  40. Guo, L., et al. Jujuboside B inhibits the proliferation of breast cancer cell lines by inducing apoptosis and autophagy. Front Pharmacol. 12, 668887(2021).
  41. Shao, M., et al. Aucubin exerts anticancer activity in breast cancer and regulates intestinal microbiota. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 4534411(2022).
  42. Yang, Z., et al. Jujuboside B reverses CUMS-promoted tumor progression via blocking PI3K/Akt and MAPK/ERK and dephosphorylating CREB signaling. J Immunol Res. 2022, 5211368(2022).
  43. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  44. Shan, X., et al. Ginsenoside Rg3-induced EGFR/MAPK pathway deactivation inhibits melanoma cell proliferation by decreasing FUT4/LeY expression. Int J Oncol. 46 (4), 1667-1676 (2015).
  45. Wang, J., et al. Low toxicity ginsenoside Rg1-carbon nanodots as a potential therapeutic agent for human non-small cell lung cancer. Colloids Surf B Biointerfaces. 246, 114392(2025).
  46. Colic, E., Patel, P. U., Kent, O. A. Aberrant MAPK signaling offers therapeutic potential for treatment of ovarian carcinoma. Onco Targets Ther. 15, 1331-1346 (2022).
  47. Bahar, M. E., Kim, H. J., Kim, D. R. Targeting the RAS/RAF/MAPK pathway for cancer therapy: From mechanism to clinical studies. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 455(2023).
  48. Sugiura, R., Satoh, R., Takasaki, T. ERK: A double-edged sword in cancer. ERK-dependent apoptosis as a potential therapeutic strategy for cancer. Cells. 10 (10), 2509(2021).
  49. Ullah, R., et al. RAF-MEK-ERK pathway in cancer evolution and treatment. Semin Cancer Biol. 85, 123-154 (2022).
  50. Romany, A., et al. Analysis of the ERK pathway cysteinome for targeted covalent inhibition of RAF and MEK kinases. J Chem Inf Model. 63 (8), 2483-2494 (2023).
  51. Ghosh, A. K., et al. Covalent inhibition in drug discovery. ChemMedChem. 14 (9), 889-906 (2019).
  52. Kaoud, T. S., et al. Modulating multi-functional ERK complexes by covalent targeting of a recruitment site in vivo. Nat Commun. 10 (1), 5232(2019).
  53. Qian, X., et al. Qingyihuaji formula promotes apoptosis and autophagy through inhibition of MAPK/ERK and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway on pancreatic cancer in vivo and in vitro. J Ethnopharmacol. 307, 116198(2023).
  54. Yue, S. J., et al. A ferulic acid derivative FXS-3 inhibits proliferation and metastasis of human lung cancer A549 cells via positive JNK signaling pathway and negative ERK/p38, AKT/mTOR and MEK/ERK signaling pathways. Molecules. 24 (11), 2165(2019).
  55. Ozgun, G. S., et al. Piperine induces cellular stresses, apoptosis, and cytotoxicity via JNK signaling and has concentration-dependently additive or synergistic effects with sorafenib in hepatocellular carcinoma: An in vitro study. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. , (2024).
  56. Martínez-Limón, A., et al. The p38 pathway: From biology to cancer therapy. Int J Mol Sci. 21 (6), 1913(2020).
  57. Xie, C. Q., et al. Triptolide exerts pro-apoptotic and cell cycle arrest activity on drug-resistant human lung cancer A549/Taxol cells via modulation of MAPK and PI3K/Akt signaling pathways. Oncol Lett. 12 (5), 3586-3590 (2016).
  58. Luo, Y. H., et al. Anticancer effects of baicalein on cervical carcinoma cells through down-regulation of the ERK/p38/MAPK pathway. J Biol Regul Homeost Agents. 35 (3), 945-952 (2021).
  59. Lan, H. Y., et al. Aidi injection induces apoptosis of hepatocellular carcinoma cells through the mitochondrial pathway. J Ethnopharmacol. 274, 114073(2021).
  60. Remnant, L., et al. The intrinsically disorderly story of Ki-67. Open Biol. 11 (8), 210120(2021).
  61. Ma, W., et al. Breast cancer Ki67 expression prediction by DCE-MRI radiomics features. Clin Radiol. 73 (10), 909.e1-909.e5 (2018).
  62. Ahmed, S. T., et al. Proliferative index (Ki67) for prediction in breast duct carcinomas. Asian Pac J Cancer Prev. 19 (4), 955-959 (2018).
  63. Sobecki, M., et al. Cell-cycle regulation accounts for variability in Ki-67 expression levels. Cancer Res. 77 (10), 2722-2734 (2017).
  64. Gown, A. M. The biomarker Ki-67: Promise, potential, and problems in breast cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 31 (7), 478-484 (2023).
  65. Piri, R., et al. Ki-67/MIB-1 as a prognostic marker in cervical cancer - A systematic review with meta-analysis. Asian Pac J Cancer Prev. 16 (16), 6997-7002 (2015).
  66. Pelosi, G., et al. Ki-67 antigen in lung neuroendocrine tumors: Unraveling a role in clinical practice. J Thorac Oncol. 9 (3), 273-284 (2014).
  67. Li, H., et al. A correlation research of Ki67 index, CT features, and risk stratification in gastrointestinal stromal tumor. Cancer Med. 7 (9), 4467-4474 (2018).
  68. Asadi, M., et al. Caspase-3: Structure, function, and biotechnological aspects. Biotechnol Appl Biochem. 69 (4), 1633-1645 (2022).
  69. Eskandari, E., Eaves, C. J. Paradoxical roles of caspase-3 in regulating cell survival, proliferation, and tumorigenesis. J Cell Biol. 221 (6), e202201159(2022).
  70. Jiao, C., et al. Caspase-3/GSDME mediated pyroptosis: A potential pathway for sepsis. Int Immunopharmacol. 124 (Pt B), 111022(2023).
  71. Zhou, M., et al. Caspase-3 regulates the migration, invasion and metastasis of colon cancer cells. Int J Cancer. 143 (4), 921-930 (2018).
  72. Ke, H., et al. Effect of weimaining on apoptosis and Caspase-3 expression in a breast cancer mouse model. J Ethnopharmacol. 264, 113363(2021).
  73. Xu, H., et al. The natural product dehydrocurvularin induces apoptosis of gastric cancer cells by activating PARP-1 and caspase-3. Apoptosis. 28 (3-4), 525-538 (2023).
  74. Huang, Y. L., et al. Expression levels of Caspase-3 and gasdermin E and their involvement in the occurrence and prognosis of lung cancer. Cancer Rep (Hoboken). 5 (9), e1561(2022).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Tradycyjna Medycyna Chi skaapoptoza nowotworuUHPLC QE MShamowanie wzrostu nowotworuekspresja bia ekmodel zwierz cy

Ten artykuł został opublikowany

Film wkrótce dostępny

Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.