Nowa metoda fiksacji w leczeniu akupunkturą u szczurów

Podsumowanie

Tutaj opisujemy nową metodę unieruchamiania szczurów, która ułatwia akupunkturę i moksowanie na grzbiecie szczurów.

Streszczenie

Badacze zawsze napotykają problem polegający na tym, że zwierzęta są trudne do kontrolowania w eksperymentach na zwierzętach związanych z akupunkturą. Istnieją już pewne metody zapobiegania ucieczce zwierząt z miejsc leczenia. Jednak efekt tych metod utrwalania różni się od stanu leczenia u ludzi. Dlatego wynaleźliśmy nową metodę utrwalania, aby szczury były w pozycji leżącej, cichej i przytomnej podczas leczenia.

Sprzęt składa się z porowatej plastikowej platformy przytrzymującej, kwadratowej bawełnianej tkaniny i kilku pasów do mocowania szczurów. Najpierw wkręć pasy przytrzymujące w platformę przytrzymującą. Dla każdego paska przełóż go przez dwa otwory w tym samym rzędzie, pozostawiając między nimi dwa otwory. Po ustawieniu pierwszego paska, włóż drugi pasek do platformy w ten sam sposób, zapewniając czterorzędową przerwę między dwoma paskami. Po drugie, chwyć ogon szczura i wprowadź go do kanału utworzonego przez dwa pasy krępujące. Przykryj głowę szczura kwadratową bawełnianą szmatką. Po trzecie, zaciśnij pasek przytrzymujący na szyi, aby przymocować głowę i kończyny przednie. Następnie chwyć tylne kończyny szczura i zaciśnij drugi pasek, aby zamocować talię i tylne kończyny.

Ta metoda nie wymaga znieczulenia. Urządzenie jest proste i łatwe w obsłudze. Aby ocenić jego skuteczność i bezpieczeństwo, przeprowadziliśmy zabieg na 60 szczurach. Wszyscy ukończyli leczenie akupunkturą bez powikłań. Podczas gdy 14 szczurów wykazywało krótkie okresy walki podczas zabiegu, nie zaobserwowano żadnych działań niepożądanych. Wyniki pokazują, że metoda jest skuteczna i bezpieczna w stosowaniu.

Wprowadzenie

Zarówno modelowanie chirurgiczne, jak i interwencja in vitro wymagają odpowiednich metod fiksacji zwierząt. Dzięki temu zwierzęta znajdują się w najbardziej zwrotnej i stosunkowo wygodnej pozycji. Skupiamy się na metodzie fiksacji zwierząt do interwencji akupunktury. Akupunktura jest skuteczna w leczeniu wielu chorób^1,2. Badania nad mechanizmem akupunktury spotkały się z dużym zainteresowaniem. Obecnie akupunktura i moksowanie są gorącymi tematami badawczymi w kraju i za granicą. Patologiczny mechanizm leczenia akupunkturą wymaga dalszych badań, a oprócz eksperymentów klinicznych potrzebne jest również wsparcie w zakresie badań podstawowych^3,4. W podstawowych badaniach nad akupunkturą i moksowaniem fiksacja zwierząt jest ważnym krokiem technicznym.

Obecnie powszechnie stosowane metody fiksacji obejmują krępowanie, znieczulenie, huśtanie się, wysoką platformę i inne metody fiksacji. Zalety i wady tych metod przedstawiono poniżej.

Pierwszym krokiem w wykonaniu metody utrwalenia znieczulenia jest znieczulenie szczurów. Stosując tę metodę, naukowcy stają w obliczu ryzyka, że szczury mogą umrzeć. Możliwa jest również bezpośrednia operacja bez ograniczeń po znieczuleniu⁵. Stosując metodę mocowania platformy skarpeta-królik, naukowcy wkładają głowę szczura do przyciętej skarpety, wysuwają przednie kończyny przez otwory i przymocowują nogi do platformy królika za pomocą gumek. Metoda ta ułatwia dobór punktów akupunkturowych na kończynach. Badacze muszą przyciąć skarpetę zgodnie z miejscem akupunktury, ale procedura jest nieco skomplikowana⁶. Niektórzy badacze opracowali urządzenie do utrwalania moksyfikacji składające się z trzech części: siedziska mocującego, klipsa mocującego i uchwytu na moksę. To urządzenie pozwala naukowcom na wykonywanie moksoterapii na wielu punktach akupunkturowych jednocześnie, utrzymując przy tym stosunkowo stałą temperaturę. Jednak ustalony stan tej metody różni się znacznie od klinicznego leczenia ludzi⁷. Owijanie szczurów szmatką i zawieszanie ich za pomocą zacisków może znacznie zmniejszyć wpływ unieruchomienia. Jednak zawieszona tkanina musi być wcześniej przecięta, aby odsłonić punkty akupunkturowe, co sprawia, że niewygodne jest odsłanianie miejsca zabiegowego⁸. Niektórzy badacze używają pasków, lin i małej kurtki z samoblokującym się paskiem na rzep, aby zabezpieczyć szczury na siatkowej pokrywie klatki. Urządzenie oferuje niskie koszty produkcji, wysoką praktyczność i prostą obsługę. Ale do ukończenia procesu ograniczania potrzebna jest więcej niż jedna osoba⁹. Niektórzy badacze konstruują cylinder do przytrzymywania ciała z drucianej siatki, zabezpieczają nogi szczurów zaciskami przytrzymującymi i mocują ich szyje za pomocą kija przytrzymującego. Ta metoda zapewnia mocne unieruchomienie. Korzystając z tej metody, naukowcy mogą lepiej operować na szczurach, ponieważ punkty akupunkturowe na całym ciele są odsłonięte. Problem polega na tym, że cylinder może być niezgodny z wielkością szczura. Dodatkowo, ta metoda stosuje większy stres w porównaniu z innymi technikami, więc szczury mogą być bardziej podatne na uduszenie¹⁰. Metoda fiksacji na wysokiej platformie wykorzystuje strach szczurów przed wysokością. Naukowcy umieszczają szczury na wysokim pedale platformy na wysokości 50 cm nad ziemią. Szczury pozostają w naturalnej pozycji leżącej bez konieczności stosowania dodatkowych ograniczeń. Ta metoda pozwala na nakłuwanie głowy i grzbietu szczurów. Metoda ta autentycznie symuluje środowisko leczenia, dzięki czemu wyniki eksperymentalne mają dobrą wartość referencyjną. Ponieważ szczury boją się wysokości, ich stan psychiczny staje się nienormalny, gdy zostaną umieszczone na takich wysokościach. To sprawia, że metoda ta nie nadaje się do badań nad chorobami psychicznymi i może mieć wpływ na wyniki eksperymentu¹¹. Niektórzy badacze używają regulowanej platformy przytrzymującej i pasów do mocowania szczurów, odsłaniając duży obszar leczenia. Jednak odtworzenie scenariusza klinicznego pozostaje wyzwaniem¹².

Istnieje pilna potrzeba rozwiązania problemu, że metody fiksacji nie są w stanie dokładnie symulować klinicznych warunków leczenia. Dołożyliśmy wszelkich starań, aby odtworzyć warunki leczenia klinicznego u ludzi. Metoda opisana w tym artykule należy do kategorii metody bondage. Sprzęt używany w tej metodzie obejmuje platformę krępującą i pasy krępujące, a także bawełnianą ściereczkę pomocną w zabiegu. Sprzęt jest stosunkowo prosty w obsłudze. W porównaniu z innymi metodami, ta metoda lepiej eksponuje punkty akupunkturowe na grzbiecie szczurów i zwiększa skuteczność leczenia.

Aby przetestować niezawodność urządzenia, do eksperymentu wykorzystano łącznie 60 szczurów. Wszystkie 60 szczurów podzielono na dwie grupy, z których każda zawierała 30 szczurów: grupę elektroakupunktury i grupę ciepłej akupunktury. Szczury zachowywały spokój podczas procesu leczenia, a ich ruch miał minimalny wpływ na zabieg. W grupie leczonej elektroakupunkturą 22 szczury ukończyły leczenie spokojnie, bez walki. W sumie 8 szczurów walczyło podczas operacji, a 6 wyłączyło igły. W sumie 24 szczury w grupie ciepłej akupunktury pozostały spokojne podczas leczenia. Pozostałe 6 szczurów wykazywało zachowanie szarpiące się, ale żaden z nich nie usunął kulek moksy. Te szczury, które walczyły, mogły się również uspokoić po przykryciu i pocieszeniu. Ostatecznie wszystkie szczury pomyślnie zakończyły leczenie.

Protokół

Niniejsza praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Naturalnych Chin (Nr 82205287). Protokoły eksperymentalne wykorzystane w tym badaniu zostały przejrzane i zatwierdzone przez Komisję Etyki ds. Eksperymentów i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Medycyny Chińskiej w Pekinie (Nr BUCM-2024052704-2223) przed przeprowadzeniem doświadczeń. Wszystkie zaprezentowane procedury muszą zostać zatwierdzone przez Instytucjonalną Komisję ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC).

Szczegóły dotyczące sprzętu użytego w badaniu znajdują się w Tabeli materiałów. Protokół można podzielić na cztery sekcje: przygotowanie eksperymentu, proces utrwalania, operację traktowania oraz demontaż sprzętu.

1. Przygotowanie eksperymentu (Rysunek 1)

1. Przygotować porowatą plastikową platformę unieruchamiającą. Platforma unieruchamiająca ma 500 mm długości, 300 mm szerokości i 5 mm wysokości. Otwory w platformie mają 7 mm długości i 3,2 mm szerokości. Odległość między dwoma sąsiednimi otworami wynosi 7 mm. Urządzenie to służy jako platforma do unieruchamiania szczurów.
2. Przygotować pasy unieruchamiające. Każdy pas ma 300 mm długości i 4,8 mm szerokości. Pasy są ząbkowane i posiadają klamrę na końcu, która może zostać zablokowana po wpięciu.
3. Przygotować kwadratową bawełnianą ściereczkę o wymiarach 30 cm x 30 cm. Służy ona do zasłonięcia pola widzenia zwierząt doświadczalnych.
4. Przygotować urządzenie do elektroakupunktury. Urządzenie to należy wykorzystać do przeprowadzenia procedur elektroakupunktury.
5. Przygotować igły do akupunktury (o średnicy 0,25 mm i długości 25 mm).
6. Przygotować parę lateksowych rękawiczek laboratoryjnych. Rękawiczki te stanowią podstawowy środek ochrony podczas eksperymentu.
7. Przygotować parę rękawic antyprzecięciowych, zaprojektowanych w celu ochrony badaczy przed ugryzieniami szczurów podczas eksperymentu.
8. Z moxa uformować kulki moxa o średnicy 5 mm, które zostaną wykorzystane do późniejszej terapii moksą.
9. Aby zapobiec oparzeniom szczurów, wyciąć kwadratowe kawałki papieru o wymiarach 2 cm x 2 cm.
10. Przygotować sterylną gazę do owinięcia ogona szczura, co zapewni przewodnictwo elektryczne podczas zabiegu elektroakupunktury.
11. Przygotowanie przed unieruchomieniem: Przed kontaktem ze szczurami założyć lateksowe rękawiczki laboratoryjne oraz rękawice antyprzecięciowe, aby zapobiec ugryzieniom.

Rysunek 1: Urządzenia wymagane do przeprowadzenia operacji. Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

2. Proces utrwalania

1. Przewlecz dwa pasy stabilizujące przez platformę do unieruchamiania. Wsuń każdy pas przez dwa otwory w tym samym rzędzie, zachowując odstęp dwóch otworów między nimi, tak aby pasy znajdowały się w odstępie czterech rzędów od siebie. Taki rozstaw odpowiada średnicy ciała szczura, ograniczając ruchy boczne podczas zabiegu (Rysunek 2). Dostosuj odległość w zależności od budowy ciała szczura i miejsc zabiegu, jeśli jest to konieczne.
2. Chwyć ogon szczura jedną ręką. Szczur instynktownie przesunie się do przodu (Rysunek 3A).
3. Ustaw szczura przy wejściu do kanału utworzonego przez dwa pasy stabilizujące. Szczur samodzielnie wślizgnie się do kanału (Rysunek 3B).
4. Przykryj głowę szczura kwadratową bawełnianą szmatką i tą samą ręką przytrzymaj go za kark. Drugą ręką chwyć ogon i kończyny tylne szczura. Ta metoda pozwala utrzymać prawidłową postawę zwierzęcia (Rysunek 3C).
5. Ręką trzymającą stronę głowy delikatnie dociśnij głowę i kark szczura. Drugą ręką wsuń pas stabilizujący do klamry i zaciśnij go. Upewnij się, że pas stabilizujący znajduje się za głową i przednimi kończynami, aby ograniczyć ruchy głowy (Rysunek 3D, E).
6. Trzymaj ogon szczura jedną ręką. Upewnij się, że pas stabilizujący znajduje się przed kończynami tylnymi szczura. Następnie zaciśnij klamrę, aby ograniczyć ruchy w obrębie talii (Rysunek 3F). Unieruchomionego szczura przedstawiono na Rysunku 3G.
7. Podczas wykonywania akupunktury u szczurów ta metoda unieruchamiania zapewnia stabilność w trakcie zabiegu. Jeśli szczur nadal silnie się szarpie, delikatnie przykryj jego głowę szmatką. Zasłonięcie całego pola widzenia i utrzymywanie zwierzęcia w ciemnym otoczeniu może go uspokoić.
   1. Jako przykłady wybrano punkty DU20, BL17 i BL23. Wybór tej odległości unieruchomienia lepiej eksponuje punkty akupunktury: DU20 znajduje się na środku głowy, BL17 pomiędzy dwoma pasami stabilizującymi, a BL23 po stronie ogona, przy zaciśniętym pasie w obrębi talii.
   2. Wkręć igłę w punkty akupunktury (Rysunek 4A). Szczura po zakończeniu zabiegu akupunktury przedstawiono na Rysunku 4B, C.

Rycina 2: Montaż platformy unieruchamiającej i pasów unieruchamiających.Na rysunku przedstawiono platformę unieruchamiającą z włożonymi pasami. Każdy pas jest wprowadzany przez dwa otwory w tym samym rzędzie, z odstępem dwóch otworów, przy czym pasy są od siebie oddalone o cztery rzędy. Aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny, kliknij tutaj.

Rysunek 3: Proces unieruchamiania szczura. (A) Chwyć szczura za ogon. (B) Pozwól szczurowi uciec do przodu do kanału. (C) Przykryj głowę szczura bawełnianą szmatką. Przyciśnij kark i chwyć ogon oraz kończyny tylne. (D,E) Zaciśnij pasek na grzbiecie. (F,G) Zaciśnij pasek w pasie. Aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku, kliknij tutaj.

Rycina 4: Zabieg akupunktury u szczura. Jako punkty akupunkturowe w tej procedurze wybrano DU20, BL17 oraz BL23. (A) Wkręcanie igły w punkty akupunkturowe. (B,C) Przedstawiono szczura po zakończeniu zabiegu. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

3. Leczenie elektroakupunkturą

1. Po zakończeniu akupunktury podłącz urządzenie do elektroakupunktury. Włącz urządzenie do elektroakupunktury, naciśnij przycisk fala ciągła przycisk do wyboru formy stymulacji elektrycznej, a następnie obrócić pokrętło, aby ustawić natężenie prądu na 1 mA i częstotliwość na 2 Hz (Rysunek 5A).
2. Przyjmując DU20, BL17 i BL23 jako przykład, należy połączyć trzy pary elektrod, jak pokazano na Rycina 5W szczególności połącz BL17 i BL23 znajdujące się po tej samej stronie jako jedną parę (Rycina 5B, C). Połącz ogon, owinięty gazą nasączoną solą fizjologiczną, z DU20 na głowie (Rysunek 5D, E). Kierunek przepływu prądu jest zgodny dla wszystkich trzech par elektrod.
3. Obróć pokrętło ustawiania czasu, aby ustawić czas trwania zabiegu na 15 min.

Rycina 5: Procedura elektroakupunktury u szczura. (A) Ustawienie parametru na falę ciągłą oraz regulacja natężenia prądu i częstotliwości. (B,C) Parowanie punktów BL17 i BL23 po tej samej stronie. (D,E) Owinięcie ogona gazą nasączoną solą fizjologiczną i połączenie z punktem DU20. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

4. Leczenie akupunkturą ciepłą

1. Przygotuj następujące elementy, jeśli wymagane jest ciepłe leczenie akupunkturą: moksę, igłę do akupunktury (0,25 mm × 25 mm, taką samą jak użyta wcześniej) oraz kilka kwadratowych arkuszy papieru. Dodatkowo przygotuj wcześniej kulki moksy przed rozpoczęciem zabiegu (Rycina 1).
2. Weź kwadratowy kawałek papieru i ostrożnie użyj igły, aby przebić centralny punkt papieru (Rycina 6A). Następnie wprowadź igłę do wyznaczonego punktu akupunktury (Rycina 6B).
   UWAGA: W celach ilustracyjnych w tej procedurze wybrano punkt BL23.
3. Ostrożnie umieść kulki moksy na igle, a następnie je zapal (Rycina 6C- E).

Rycina 6: Zabieg ciepłej akupunktury u szczura. (A) Wyciąć kwadratowy kawałek papieru i przebić jego środek igłą. (B) Wprowadzić igły w punkty akupunkturowe. (C) Umieścić kulki moksy na igłach. (D,E) Przedstawiono szczura po zakończeniu zabiegu. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

5. Demontaż urządzenia

1. Demontaż sprzętu do elektroakupunktury
   1. Po zakończeniu zabiegu elektroakupunktury wyłącz urządzenie do elektroakupunktury. Następnie ostrożnie odepnij klipsy elektrod od igieł akupunkturowych. Na koniec delikatnie wyjmij igły akupunkturowe z obszaru zabiegowego.
2. Demontaż sprzętu do akupunktury ciepłem
   1. Po zabiegu akupunktury ciepłem ostrożnie usuń popiół z kulek moksy i zutylizuj go, umieszczając w wodzie. Następnie delikatnie wyjmij igły i usuń wszelkie dołączone papiery.
3. Demontaż sprzętu do unieruchomienia
   1. Przykryj głowę szczura kwadratową bawełnianą ściereczką, jednocześnie poluzowując pasy mocujące. Poluzuj pas mocujący, zaczynając od zaciśniętego pasa w pasie szczura. Następnie jedną ręką pewnie chwyć tylne kończyny i obszar bioder szczura.
   2. Drugą ręką poluzuj pas zaciśnięty wokół szyi szczura, a następnie delikatnie wyciągnij szczura z pasów mocujących, trzymając go za ogon.

Wyniki

Aby ocenić skuteczność metody fiksacji, przeprowadziliśmy próbę na sumie 60 szczurów, które zostały podzielone na dwie grupy: 30 szczurów w grupie elektroakupunktury i 30 szczurów w grupie ciepłej akupunktury. Operacje lecznicze obejmowały odpowiednio elektroakupunkturę i akupunkturę ciepłą.

Po wprowadzeniu igieł do punktów akupunkturowych, akupunkturzysta wykonywał manipulacje podnoszeniem, pchaniem i obracaniem każdej igły, aby osiągnąć deqi. Podczas zabiegu zmagania zaobserwowano u 20 szczu...

Dyskusja

Szczury mają tendencję do zamieszkiwania ciemnych środowisk. Czują się bezpiecznie, gdy są pod osłoną i spokojnie reagują na bodźce, wykazując niższy poziom stresu. Opisana tutaj metoda wykorzystuje te cechy szczurów. Zalety tej metody utrwalania można podsumować w następujący sposób: (i) Ta metoda może zminimalizować reakcję na stres i ból doświadczany przez zwierzęta doświadczalne. Jest to zgodne z zasadami 3R etyki zwierząt, a mianowicie Redukcją, Udoskonaleniem i Zastąpieniem¹³. (ii) Schronie...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Igły do akupunktury	Beijing ZhongYan TaiHe Medical Instrument Co., Ltd.	20222200133	Specyfikacje igieł do akupunktury to średnica 0,25 mm i długość 25 mm.
Rękawice przeciwprzecięciowe	Fabryka produktów ochrony pracy Lvdazhou w dystrykcie Lanshan, miasto Linyi	H0315103941	Zaprojektowane, aby chronić badaczy przed ugryzieniami szczurów podczas eksperymentu.
Instrument do elektroakupunktury	Suzhou Medical Appliance Factory Ltd.	20172200675	To urządzenie służy do przeprowadzania zabiegów elektroakupunktury.
Rękawice lateksowe klasy laboratoryjnej	Zhonghong Pulin Medical Products Co., Ltd.	268237719221	Rękawice te stanowią podstawowy środek ochronny w eksperymencie.
Moxa	Pekin Tongrentang Xing'an Health Technology Co., Ltd.	152200000000613	Moxa służy jako materiał do wytwarzania kulek moksy o średnicy 5 mm, które są wykorzystywane do późniejszej terapii moksybucyjnej.
Porowata plastikowa platforma ograniczająca	Chuzhou Huaxin VinyIIndustry Co., Ltd.	341124000005877	Platforma przytrzymująca ma 500 mm długości, 300 mm szerokości i 5 mm wysokości. Otwory na nim mają 7 mm długości i 3,2 mm szerokości. Odległość między dwoma sąsiednimi otworami wynosi 7 mm. Ten sprzęt służy jako platforma do mocowania szczurów.
Pasy mocujące	Zhejiang Litai Plastic Co., Ltd.	331003000001553	Każdy pas przytrzymujący ma 300 mm długości i 4,8 mm szerokości. Pas przytrzymujący jest ząbkowany i posiada klamrę na końcu, którą można zablokować po włożeniu.
Kwadratowa ściereczka bawełniana	MUJI (SHANGHAI) Company Limited	WYLP20241105_1	Kwadratowa ściereczka bawełniana ma wymiary 30 cm i 30 cm. Służy do zasłaniania widoku zwierzętom doświadczalnym.
Papiery kwadratowe	DELI Group Co., Ltd.	7752-1114	Aby zapobiec poparzeniom szczurów, badacze wycinają kilka kwadratowych papierów o wymiarach 2 cm i 2 cm.
Sterylna gaza	Jiangxi Zhonggan Medical Devices Co., Ltd.	20172140084	Sterylną gazę nakłada się na owinięcie ogona szczura, zapewniając przewodność elektryczną podczas zabiegu elektroakupunktury.