Protokół ten opisuje ekspresję nerek szczura metodą normotermiczną z maszyną ex vivo , przeznaczoną do późniejszego przeszczepu do szczura biorcy.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Normotermiczna perfuzja nerek szczurów do przeszczepu
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Technika perfuzji maszynowej normotermicznej (NMP) to obiecująca technologia konserwacji narządów, która zapewnia platformę do oceny i interwencji organów ex vivo . Ze względu na ograniczoną dostępność klinicznie odrzuconych organów oraz wysokie koszty modeli dużych zwierząt, model NMP dla małych zwierząt uważany jest za obiecującą alternatywę dla badań. Tutaj ustanowiliśmy ustandaryzowany protokół NMP i przeszczepów dla nerek szczurów, oferując krok po kroku przewodnik po poborze nerek, konserwacji NMP i przeszczepianiu. Szczegóły i parametry NMP zostały zarejestrowane. Wszyscy biorcerzy szczurzy przeżyli dzięki temu zabiegowi chirurgicznemu i technice NMP, a funkcja przeszczepu nerek pozostała prawidłowa po przeszczepie. Wskaźnik przeżywalności i histologia przeszczepów w NMP nie wykazały istotnych różnic w porównaniu do statycznego przechowywania w zimnie (SCS) w 7. dniu pooperacyjnym. Ta nowatorska strategia NMP w modelach zwierząt może przynieść korzyści podstawowym badaniom dotyczącym zachowania, oceny i interwencji narządów w przyszłości. Ponadto ten model oferuje opłacalną, skalowalną platformę do przedklinicznych testów terapii, technik obrazowania oraz interwencji związanych z perfuzją.
Wprowadzenie
Choroba nerek w końcowym stadium (ESKD) to szybko rosnące obciążenie dla systemów zdrowotnych i opieki zdrowotnej na całym świecie 1,2,3. Chociaż dializa jest dominującą terapią ESKD w większości krajów, przeszczep nerki pozostaje złotym standardem leczenia, zapewniając lepszą jakość życia oraz poprawiając przeżycie i rokowanie w porównaniu z dializami 1,3,4,5. Jednak niedobór nerek dawcy ogranicza dalsze rozpowszechnianie przeszczepów nerek i prowa....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Protokoły dotyczące zwierząt zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt w Centrum Zwierząt Laboratoryjnych Uniwersytetu Sun Yat-sena (nr SYSU-IACUC-2023-000717). Wszystkie zwierzęta w tym badaniu były samcami szczurów Sprague–Dawley w wieku 7–8 tygodni (250–300 g), Specyficznie Wolnymi od Patogenów (SPF), spełniającymi standardowe wymagania bezpieczeństwa zwierząt laboratoryjnych (patrz lista wykluczeń patogenów w Tabeli Uzupełniającej S1). Były karmione standardową dietą i przebywały w pokoju wolnym od patogenów w Centrum Zwierząt Laboratoryjnych Uniwersytetu Sun Jat-sena.
Przed eksperymentami sterylizuj wszystkie nar....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Dzięki opisanej metodzie izolowane nerki szczurów mogą pozostać żywotne do perfuzji maszynowej normotermicznej ex vivo przez co najmniej 3 godziny. Podczas NMP odporność perfuzyjną nerek (Rysunek 3A, pełny bazowy zestaw danych z Rysunku 3 i 4 jest dostępny w Tabeli Uzupełniającej S6.) utrzymuje się stabilnie na poziomie 5,958 ± 1,106 mmHg/(mL/min), co świadczy o stabilności naszego ustalonego systemu perfuz.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
NMP może skrócić czas trwania niedokrwienia przeszczepu oraz umożliwić ocenę i leczenie jakości przeszczepu ex vivo 16,17,18,19,20,32,33. Nie istnieje jednak jednolity standard dla modelu NMP dla modelu szczura. W tym artykule opracowaliśmy model zwierzęcy NMP oraz późniejszą transp.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają żadnych konfliktów interesów do ujawnienia.
Podziękowania
Prace te były wspierane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (Program Ogólny, Grant nr 82470778); Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (Projekt Fundacji Nauki Młodzieżowej, grant nr 82201961); Fundacji Nauk Przyrodniczych prowincji Guangdong (Program Ogólny, Grant nr 2024A1515011447); oraz Prowincjonalne Laboratorium Kluczowe Dawstwa Narządów i Immunologii Przeszczepów Guangdong (Grant nr 2023B1212060020); Sun Yat-sen University - ARM Laboratorium Regeneracji i Odbudowy Nerek (grant nr SYSU-50000-20240428-0001).
Autorzy pragną podziękować Centrum Zwierząt Laboratoryjnych Uniwersytetu Sun Yat-sena za udostępnienie zwierząt ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Alkohol (75 %) | MUSIYAN | JJ-75-1 | |
| Aparat do transfuzji krwi | Foshan Youzhan Tech Co., Ltd | YZDW-15-5 | |
| Albumina surowicy bydlęcej (BSA) | Korpus Naukowy Aladyna. | B265991-100g | |
| Sit komórkowy (70 & mu; m) | Corning Life Science (Wujiang) Co., Ltd | 352350 | |
| Rurka wirówkowa (1,5 mL) | Corning Life Science (Wujiang) Co., Ltd | MCT-150-C-1 | |
| Rurka wirówki (15 mL) | ExCell Bio | CS015-0001 | |
| Wacik | Henan PiaoAn Group Co., Ltd | Mały rozmiar | |
| Patyk watowy | Foshan Shunde Kangzheng Sanitary Material Co., Ltd | KZ3-12 | |
| Kreatynina | Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd | S20198-100g | |
| Podwójny okrągły szw nylonowy (11-0) | Ningbo Medical Needle Co., Ltd | SYZ-11-0 | |
| Skala elektroniczna | SENSSUN | EHA17 | |
| Dystrybutor płynów | Zhiyu Medical | YZ-00-0231 | |
| Gaza | ZITTAR | C11001-001 | |
| Poduszka grzewcza | Guangzhou Dewei Biological Technology Co., Ltd | DK0032 | |
| Zastrzyk z heparyną sodową (12500 U, 2 mL) | Chengdu Hepatunn Pharmaceutical Co., Ltd | H51021209 | |
| Termometr na podczerwień | Delikatesy | DL333380 | |
| Strzykawka do wstrzykiwania (1 mL) | Zwycięzca Medical (Human) Co, Ltd. | ZT-ZS 1ml | |
| Strzykawka do zastrzyków (10 mL) | Zwycięzca Medical (Human) Co, Ltd. | ZT-ZS 10ml | |
| Strzykawka do wstrzykiwania (20 mL) | Zwycięzca Medical (Human) Co, Ltd. | ZT-ZS 20ml | |
| Izofluran | RWD Life Science Co., LTD | R510-22-10 | |
| i-STAT 1 Analizator krwi | Abbott | 04P75-03 (USA) | |
| Nabój i-STAT CG4+ | Abbott | 03P85-25 | |
| Wkład i-STAT CHEM8+ | Abbott | 09P31-25 | |
| Rurka przedłużająca ciecz | Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD | ZJ983 | |
| Micro-1 Rat Oxygenator | Dongguan Kewei Medical Instrument Co-, Ltd | Micro-MO | |
| Mikropompa | EDKAPITAN | SYS-3011 | |
| Filtr igielny (0,22 μ m) | Merck millipore | SLGPR33RB | |
| Rozwiązanie do konserwacji organów | Grupa Farmaceutyczna nad Jangcy | HCA II | |
| Oxygenator | Owgles | OZ-3-02HWO | |
| Penicylina-Streptomycyna (10 000 U/mL) | Thermo Fisher Scientific Inc. | 15140122 | |
| Pompa perystaltyczna | Kamoer Fluid Tech (Shanghai) Co., Ltd. | LLS Plus V2 | |
| Rura pompy perystaltycznej | Foshan Youzhan Tech Co., Ltd | LG-1-14 | |
| Szalka Petriego | BKMAM | BKM001 | |
| Czujnik ciśnienia | Korporacja Nauk Przyrodniczych Edwards | JIBPT-A-01-EDW | |
| Odbiornik czujnika ciśnienia | Singularity Medical | CB-202309001 | |
| RPMI 1640 (1x, 500 mL) | Corning Life Science (Wujiang) Co., Ltd | R10-040-CV | |
| Sól fizjologiczna | YXH PHARMACY | A1001346 | |
| Szczury SD | Centrum Zwierząt Laboratoryjnych Uniwersytetu Sun Yat-Sena | NA | |
| Golarz | Beyotime | FS600 | |
| Nylonowy szew z pojedynczym kątem igły (3-0) | Ningbo Medical Needle Co., Ltd | DJZ-3-0 | |
| Pojedyncza okrągła igła Nylon Suture (8-0) | Ningbo Medical Needle Co., Ltd | DYZ-8-0 | |
| Aparat do znieczulenia dla małych zwierząt | RWD Life Science Co., LTD | R500 | |
| Wielonarządowa maszyna do perfuzji Small Animal | Life Perfusor Medycyna | PU-100 | Zawiera metalową antenę, kąpiel wodną, pompę grzewczą i czujnik temperatury |
| Zestaw do chirurgii dla małych zwierząt | Beyotime | FS500 | |
| Roztwór wodorowęglanu sodu (NaHCO3, 5 %) | Dongguan Puji Medical Technology Co., Ltd | H20064480 | |
| Sterylna arkusz chirurgiczny | Technologia HengAo | SKR-BY-DD0001 | |
| Woda sterylna | Haiwang Bio | H35021140 | |
| Cewnik dożylny z prostą rączką (24 G) | Foshan Youzhan Tech Co., Ltd | 20230816-1 | |
| Mikroskop chirurgiczny | Murzider | MSD203 | |
| Taśma | Minnesota Mining and Manufacturing Co. Ltd | 1527C-0 | |
| Złącze T-Tee | Foshan Youzhan Tech Co., Ltd | WGST-10 | |
| Igła cewnika typu Y typu dożylnego (24 G) | JIANGXI FENGLIN | YZDW-7-5 | |
| Igła cewnika typu Y (26 G) | JIANGXI FENGLIN | YZDW-7-6 |
Bibliografia
- Collins, A. J., et al. Excerpts from the US Renal Data System 2009 Annual Data Report. Am J Kidney Dis. 55 (1 Suppl 1), A6-A7 A1-A420 (2010).
- Skorecki, K., Chertow, G. M., Marsden, P. A., Taal, M. W., Yu, A. S. L. Brenner & Rector's The Kidney. , 10th ed, Elsevier. Philadelphia, PA. (2016).
- Thurlow....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
