Artykuł badawczy

Multimodalna ocena ochronnego działania gentopikrozydu w indukowanym przez CDCA uszkodzeniu komórek HepG2

DOI:

10.3791/68320

⸱

25 lipca 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Internal Medicine of Traditional Chinese Medicine, Traditional Chinese Medicine Hospital of Meishan, 4Institute of High Altitude Multimorbidity/TCM-Integrated High Altitude Medicine Center, Hospital of Chengdu University of TCM, 5Chengdu Tianxing Zhiyuan Biotechnology Co., Ltd.

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To badanie wykazało, że gentiopicroside może leczyć cholestatyczne uszkodzenie wątroby poprzez kontrolowanie produkcji i metabolizmu kwasów żółciowych i lipidów oraz zapobieganie stresowi oksydacyjnemu i reakcjom zapalnym.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wykazano, że główny aktywny składnik Swertia chirayita, gentiopicroside (GPS), chroni wątrobę w przypadkach cholestazy. W celu wyjaśnienia mechanizmu ochronnego GPS na cholestatyczne uszkodzenie wątroby, komórki HepG2 potraktowano kwasem chenodeoksycholowym (CDCA) w celu symulacji środowiska cholestazy in vitro, a metodę CCK-8 zastosowano w celu określenia ochronnego wpływu GPS na komórki HepG2. Za pomocą zestawu biologicznego wykryto zawartość wewnątrzkomórkowych TBA, T-CHO, TG, ALP, ALT, AST, GSH, IL-1β, IL-6, TNF-α, SOD i MDA. Do potwierdzenia poziomu RFT wykorzystano konfokalną mikroskopię laserową. Ekspresję SHP-2, Tgr5, CYP7A1 i NTCP w komórkach HepG2 oceniano za pomocą analizy immunofluorescencyjnej i Western blot. Następnie wykorzystano oprogramowanie Autodock do weryfikacji dokowania molekularnego jego głównych składników aktywnych. Wyniki wykazały, że GPS znacząco zapobiegł uszkodzeniom, jakie CDCA spowodowało w komórkach HepG2. Ten efekt ochronny można było osiągnąć poprzez kontrolowanie produkcji i metabolizmu kwasów żółciowych i lipidów w komórce oraz zapobieganie stresowi oksydacyjnemu i reakcjom zapalnym.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Miejscem metabolicznym układu trawiennego organizmu jest wątroba. Wydzielanie żółci jest kluczowym mechanizmem w procesie katabolizmu tłuszczu w układzie wątrobowo-żółciowym. Podstawowe składniki żółci, kwasy żółciowe, są uwalniane przez komórki wątroby i mają kluczowe znaczenie dla utrzymania równowagi metabolizmu tłuszczów. Zarówno u osób zdrowych, jak i chorych, procesy fizjologiczne i patologiczne w wątrobie zależą od równowagi wolnych i sprzężonych kwasów żółciowych w wątrobie. Jeśli ta równowaga zostanie zaburzona, krążenie kwasów żółciowych nie będzie funkcjonować normalnie, co może prowadzić do wewnątrzwątrobowej cholestazy i późniejszego uszkodzenia wątroby1. Zgodnie z przeprowadzonymi już badaniami, cholestatyczne uszkodzenie wątroby (CLI) jest stanem związanym z zaburzeniami metabolicznymi, zaburzeniami równowagi mikrobioty jelitowej i martwicą komórek wątroby2. Jest to spowodowane niedrożnością przepływu żółci i gromadzeniem się kwasów żółciowych w komórkach wątroby dla CLI. Ciężkie przypadki CLI mogą przekształcić się w marskość wątroby, zwłóknienie wątroby i niewydolność wątroby3. Obecnie mechanizm leżący u podstaw CLI jest nadal nieco niejasny i złożony, a większość pacjentów otrzymuje niską skuteczność terapii farmakologicznej4 wraz z istotnymi skutkami ubocznymi5. W rezultacie, jednym z najbardziej palących problemów, przed którymi stoi obecnie społeczność medyczna, jest poszukiwanie skutecznych leków CLI.

Obecne badania wykazały znaczenie kilku receptorów jądrowych w metabolizmie kwasów żółciowych6. Wśród nich receptor kwasu żółciowego jest kluczowym receptorem regulatorowym kwasu żółciowego, który może wiązać się z BA i aktywować białkową fosfatazę tyrozynową (SHP)7. Z drugiej strony, nadmierna akumulacja BA w hepatocytach, która prowadzi do cholestazy, negatywnie hamuje receptor SHP i aktywuje receptor CYP7A1 (cytochrom P450 7A1), co prowadzi do produkcji kwasów żółciowych8. Dodatkowo zablokował on wydzielanie BA przez receptor kwasów żółciowych TGR5 sprzężony z białkiem G i stymulował receptor polipeptydu kotransportującego taurocholan sodu (NTCP) do transportu BA. Powoduje to gromadzenie się kwasów żółciowych w komórkach wątroby, co uszkadza wątrobę9. W związku z tym dodatkowe badania nad tym mechanizmem mogą rzucić światło na bardziej opłacalne opcje leczenia CLI.

Z długą historią użycia w medycynie, Swertia chirayita jest chińską tradycyjną medycyną tybetańską. Jest uważany za najlepszy Tida i jest często używany przez miejscowych do leczenia chorób pęcherzyka żółciowego i wątroby10. Jest często stosowany w leczeniu kamicy żółciowej, zapalenia pęcherzyka żółciowego, marskości wątroby, zapalenia wątroby i innych chorób wątroby11. Ostatnie badania wykazały, że niektóre irydoidowe składniki chemiczne Swertii, a także jej składniki aktywne, mają dobry wpływ terapeutyczny na choroby wątroby, takie jak zwłóknienie wątroby i ostre uszkodzenie wątroby12,13,14. Aktywne składniki Swertia chirayita łagodzą choroby wątroby poprzez zmniejszenie stanu zapalnego15 i jego właściwości przeciwutleniające16. Nasze wstępne badania wykazały, że formuła złożona medycyny tybetańskiej z Swertia chirayita jako głównym składnikiem wykazuje korzystny efekt terapeutyczny na CLI, co sugeruje, że Swertia chirayita ma potencjał w leczeniu CLI17. Podstawowym składnikiem aktywnym, który jest ekstrahowany i oczyszczany z Swertia chirayita, jest GPS (Gentiopicroside)18, który ma szereg działań farmakologicznych, takich jak ochrona wątroby19, regulacja metabolizmu glukozy20, poprawa mikrobiomu jelitowego21, oraz właściwości przeciwnowotworowe22. Wcześniejsze badania wykazały, że GPS łagodzi uszkodzenia wątroby w warunkach cholestatycznych i zmniejsza cholestazę wewnątrzwątrobową poprzez zwiększenie ekspresji transporterów kwasów żółciowych23,24. Podobnie badania przeprowadzone zarówno in vivo, jak i in vitro wykazały, że GPS może zmniejszyć uszkodzenia wątroby poprzez poprawę metabolizmu lipidów, zmniejszenie stanu zapalnego i zmniejszenie stresu oksydacyjnego25,26.

Komórki HepG2 są często wykorzystywane w badaniach in vitro nad chorobami wątroby, ponieważ wykazują aktywność enzymów metabolicznych hepatocytów27. W międzyczasie hepatocyty mogą wydzielać więcej żółci, gdy są wystawione na działanie jednej z czterech form wolnych kwasów żółciowych, do których należą CDCA28. W rezultacie, CDCA może być wykorzystane do stworzenia modelu komórkowego cholestatycznego uszkodzenia wątroby i naśladowania środowiska cholestatycznego in vitro. Biorąc pod uwagę, że uszkodzenie hepatocytów wywołane przez CDCA jest krytycznie pośredniczone przez stres oksydacyjny i szlaki zapalne oraz biorąc pod uwagę udokumentowane antyoksydacyjne i przeciwzapalne działanie GPS w innych kontekstach wątrobowych26, stawiamy hipotezę, że GPS może zapewniać ochronę przed cholestatycznym uszkodzeniem wątroby poprzez łagodzenie cytotoksyczności wywołanej przez CDCA w komórkach HepG2. W ramach tej pracy zbadano ochronny wpływ GPS na CLI i jego mechanizm molekularny przy użyciu modelu indukowanego przez CDCA uszkodzenia komórek HepG2.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hodowla komórkowa i leczenie
Ogniwa HepG2 i pożywki MEM zostały zakupione od komercyjnego dostawcy. Komórki HepG2 hodowano w pożywkach MEM uzupełnionych 10% FBS, 1% 100 U/ml penicyliny i 100 U/ml streptomycyny, w temperaturze 37 °C i 5% atmosferzeCO2. Po adhezji komórek zmieniono pożywki hodowlane. Komórki hodowano w stosunku 1:3 po 2-3 dniach i wykorzystano je w eksperymencie, gdy hodowla komórkowa osiągnęła 80% konfluencji.

Test żywotności komórek
W pierwszym dniu komórki wysiewano w 2 x 104 komórkach HepG2 (2 x 105 komórek/ml, 100 μl na dołek) na 96-dołkowej płytce w sześciu powtórzeniach29. W drugim dniu, po 24 godzinach inokulacji, komórki traktowano CDCA różnymi stężeniami CDCA (0, 20, 40, 60, 80, 100 μM) przez 12 godzin. Żywotność komórek wykryto metodą CCK-8. Po 24 godzinach od początkowego wysiewu komórek, komórki traktowano CDCA w różnych stężeniach GPS (0, 25, 50, 100, 200, 400 i 800 μM) przez 24 godziny. W 3 dniu żywotność komórek wykryto metodą CCK-8. W dniu 4 2 x 104 komórki HepG2 (2 x 105 komórek/ml, 100 μl na dołek) wysiewano na 96-dołkowej płytce w sześciu powtórzeniach przez 24 godziny. W 5 dniu komórki są rozdzielane na sześć grup: kontrolną, modelową, kwas ursodeoksycholowy (UDCA) i GPS: 25 μM, 50 μM i 100 μM. Z wyłączeniem grupy kontrolnej, do wszystkich grup dodano 60 μM roztworu CDCA na 12 godzin. Następnie roztwór UDCA (60 μM) i roztwór GPS (25 μM, 50 μM i 100 μM) dodawano na 24 godziny odpowiednio do UDCA i 3 grup GPS. W 6 dniu żywotność komórek wykryto metodą CCK-8.

Test cytokinowy
Zgodnie z doniesieniami z literatury, zestawy TNF-α, IL-6 i IL-1β zostały użyte do wykrycia poziomów czynników zapalnych w komórkach HepG2 po różnych zabiegach30. Po 24 godzinach interwencji CDCA lub CDCA+GPS należy wyrzucić pożywkę hodowlaną i przepłukać ją PBS. Odwirować zawiesinę komórkową o sile 69 x g przez 10 minut, odrzucić supernatant i pobrać osad komórkowy. Dodaj roztwór PBS i homogenizuj w warunkach lodowatej kąpieli wodnej, aby przygotować homogenaty komórek. Po 10-minutowym odwirowaniu w temperaturze 10 005 x g i temperaturze 4 °C usunięto supernatant i zastosowano technikę BCA do pomiaru całkowitej zawartości białka w komórkach. Zgodnie z instrukcjami producenta, poziomy TNF-α, IL-6 i IL-1β w supernatance komórki zostały określone metodą ELISA. Absorbancję mierzono przy długości fali 450 nm za pomocą wielofunkcyjnego czytnika mikropłytek.

Wykrywanie TBA, TG i T-CHO
Testy TBA, TG i T-CHO zostały wykorzystane zgodnie z instrukcjami zestawu do identyfikacji metabolizmu kwasów żółciowych i lipidów w komórkach HepG231. TBA, TG i T-CHO zostały zakupione komercyjnie. Po rozdrobnieniu osadów komórkowych ultradźwiękowo w lodowatej kąpieli wodnej, homogenat komórek przygotowano przez dodanie lizatu RIPA przez 30 minut. Absorbancję mierzono przy długości fali 450 nm za pomocą wielofunkcyjnego czytnika mikropłytek. Po dodaniu roztworów roboczych BCA do każdej studzienki i homogenizacji komórek, absorbancję zmierzono przy 562 nm za pomocą enzymoleteru, a okres inkubacji wynosił 30 minut Absorbancję wzorcowego produktu wykorzystano do zbudowania krzywej wzorcowej, a do uzyskania wartości absorbancji użyto następującego wzoru:
Zawartość TBA (μmol/gprot) = (próbka-ślepapróba-A)/(Próba wzorcowa-A)×Kalibracja Cpr
Zawartość T-CHO, TG (mmol/gprot) = (próbka-Ślepapróba)/(Próba próbna-A)×Cnorma/Cpr

Ocena czynności wątroby
Czynność wątroby oceniano za pomocą AlAT, AspAT i ALP. ALT, AST i ALP zostały zakupione komercyjnie. Po dwóch rundach czyszczenia buforu PBS na pobranych komórkach, komórki odwirowywano przez 10 minut przy 69 x g, usunięto supernatant, komórki wytrącono, dodano bufor PBS, a homogenat utworzono przez ultradźwiękowe kruszenie w lodowatej kąpieli wodnej. Następnie ustawiono otwory testowe i kontrolne. Stół operacyjny był śledzony podczas dodawania odczynnika, delikatnie wstrząsając i mieszając płytkę otworu, a następnie pozostawiając ją w temperaturze pokojowej na 15 minut. Wartość OD każdej została określona za pomocą enzymoletera o długości fali 505 nm. Bezwzględna wartość OD została następnie wprowadzona do krzywej wzorcowej i przeprowadzono dodatkową analizę ilościową przy użyciu wzoru.

Określenie działań SOD, MDA, GSH
Aktywność SOD, zawartość MDA i zawartość GSH oceniono odpowiednio zgodnie z instrukcjami producenta. SOD, MDA i GSH zostały zakupione komercyjnie. Krótko mówiąc, do zaszczepienia komórek użyto płytki z sześcioma dołkami. Po poddaniu działaniu substancji komórki poddano obróbce wstępnej (pobranie i rozbicie) zgodnie z instrukcjami doświadczalnymi zestawu. Odpowiednie roztwory robocze zostały następnie przelane na płytkę detekcyjną po ustawieniu pustych otworów, otworów standardowych i otworów pomiarowych zgodnie z krokami obsługi zawartymi w instrukcji. Następnie komórki są hodowane w temperaturze i czasie podanym w instrukcji zestawu. Następnie wykorzystano zestaw do wykrywania BCA do ilościowego określenia zawartości białka. Ostatecznie wyznaczono absorbancję przy odpowiedniej długości fali oraz przeprowadzono dokładniejszą analizę ilościową wskaźnika stresu oksydacyjnego.

Wykrywanie zmian w ROS w komórkach HepG2 za pomocą sondy DCFH-DA
Przeprowadzono rutynową hodowlę w celu zliczenia komórek. Komórki HepG2 o gęstości 1 x 105 komórek/ml inokulowano w naczyniach ze szklanym dnem po 1,5 ml każda i hodowano zgodnie z powyższą metodą. Po hodowli pożywkę wyrzucono, a komórki przemyto PBS. DCFH-DA rozcieńczono do stężenia 1:1000, dodano w ilości 1,5 ml rozcieńczalnika na studzienkę i inkubowano przez 20 minut. Po inkubacji komórki przepłukano 3-krotnie roztworem do hodowli podstawowej MEM. Następnie do każdej potrawy dodano 100 μl pożywki do mocowania zapobiegającego blaknięciu z DAPI. Fluorescencyjny mikroskop konfokalny został użyty do oglądania i wykonywania zdjęć przy długości fali 488 nm dla wzbudzenia i 525 nm dla emisji32.

Obrazowanie immunofluorescencyjne
Komórki po inkubacji przemyto 3x buforem PBS. Po utrwaleniu przez 30 minut 4% paraformaldehydem, komórki oczyszczono za pomocą buforu PBS na stole do wytrząsania. Rozcieńczalnik dodawano, a następnie przechowywano w lodówce w temperaturze 4 °C z dala od światła przez noc. Następnie komórki pokryto rozcieńczalnikiem fluorescencyjnym i inkubowano z dala od światła przez 1 godzinę w temperaturze 37 °C. Po inkubacji komórki przemyto trzykrotnie buforem PBS. Po utrwaleniu 4% paraformaldehydem przez 30 minut, komórki przepłukiwano buforem PBS na wytrząsarce obrotowej. Następnie dodano 150 μl pierwszorzędowego rozcieńczalnika przeciwciał i inkubowano przez noc w temperaturze 4 °C w warunkach ochrony przed światłem. Odzyskano pierwszorzędowy rozcieńczalnik przeciwciał, a następnie dodano odpowiednią objętość buforu PBS i wstrząsano przez 5 minut; Ta procedura mycia została powtórzona trzy razy. Każde naczynie otrzymało następnie 150 μl fluorescencyjnego rozcieńczalnika przeciwciał drugorzędowych i inkubowano w temperaturze 37 °C przez 1 godzinę w inkubatorze zabezpieczonym przed światłem. Do każdego naczynia dodawano odpowiednią objętość buforu PBS i myto na wytrząsarce obrotowej przez 8 minut, powtarzane przez trzy cykle. Na koniec komórki pokryto wystarczającą ilością roztworu barwiącego DAPI przez 10 minut, zamontowano za pomocą pożywki montażowej zapobiegającej blaknięciu i zobrazowano za pomocą systemu obrazowania o wysokiej rozdzielczości33.

Analiza Western blot
Po różnych zabiegach całe białko komórek HepG2 wyekstrahowano za pomocą lizatu RIPA, a stężenie białka ustalono za pomocą techniki BCA. Po wyizolowaniu białka docelowego za pomocą 10% SDS-PAGE, przeniesiono je do membrany PVDF o grubości 0,45 μm. Następnie membrana została zgrzewana na 1,5 godziny w temperaturze 25 °C przy użyciu 5% BSA. Pierwszorzędowe przeciwciała przeciwko SHP-2 (1:1000), CYP7A1 (1:1000), Tgr5 (1:1000), NTCP (1:1000) i β-aktynie (1:1000) inkubowano przez noc w temperaturze 4 °C. Następnie błonę inkubowano z kozim przeciwciałem drugorzędowym anty-króliczej immunoglobuliny G (1:10000) sprzężonym z peroksydazą chrzanową przez 2 godziny w temperaturze 25 °C. Pasma pokryte peroksydazą zostały następnie obejrzane przy użyciu ultraczułego roztworu chemiluminescencyjnego ECL, a zdjęcia wykonano za pomocą systemu obrazowania34.

Dokowanie molekularne
Jak poinformowano, proces dokowania molekularnego został przeprowadzony zgodnie z następującymi procedurami35. Struktura leku small molecule.mol2 została pobrana z platformy ChemicalBook, a struktura białka ligandowego .sdf została pobrana z platform Uniprot i RCSBPDB. Cząsteczki liganda i wody zostały usunięte przez oprogramowanie Pymol, a białko liganda zostało zaimportowane do oprogramowania AutoDock w celu uwodornienia i wykrywania. Końcowe dane wyjściowe są w formacie .pdbqt. Analiza skrzynki dokującej, RunAutoGrid, RunAutoDock i AutoDock Tools została przeprowadzona w oprogramowaniu AutoDock, a minimalna energia wiązania każdej grupy wyników dokowania została zapisana. Wybrano konformację o najniższej energii wiązania swobodnego z każdej grupy, a jej konformację ligand-receptor wizualizowano za pomocą oprogramowania Pymol.

Analiza statystyczna
Wyżej wymienione dane zostały posortowane statystycznie za pomocą GraphPad Prism 9.2, a wszystkie wyniki eksperymentalne zostały przedstawione jako średnia ± SD. W celu statystycznego porównania danych między grupami zastosowano jednokierunkową ANOVA. Różnica między obiema grupami została uznana za znaczącą, gdyp < 0,05.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Stężenie CDCA zostało ustawione na 0 μM, 20 μM, 40 μM, 60 μM, 80 μM i 100 μM gradientu stężeń dla eksperymentów. Gdy stężenie CDCA wynosiło 60 μM, aktywność komórek znacznie różniła się od tej w grupie kontrolnej, a ostatecznie 60 μM użyto jako stężenia CDCA (Rysunek 1A). Wyniki wykazały, że po inkubacji przez 24 godziny po podaniu leku nie było znaczącej różnicy w aktywności komórek między każdą grupą a grupą kontrolną (Rysunek 1B), co wskazuje, że GPS nie miał hamującego wpływu n...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CLI jest chorobą wątroby spowodowaną niedrożnością tworzenia, wydzielania lub wydalania żółci. Klinicznie objawia się świądem, osteoporozą, a nawet przekształca się w zwłóknienie wątroby, marskość wątroby i inne choroby, które poważnie zagrażają życiu i zdrowiu 36,37,38. UDCA jest uznawany za najczęściej stosowany lek w leczeniu CLI39. Jednak ze względu na dużą liczbę pacjentów ze słabą odpowiedzią na UDC...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca jest wspierana przez Fundację Nauk Przyrodniczych Prowincji Syczuan (2024NSFSC0697), Wspólny Projekt Funduszu Innowacji Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chengdu (LH202402015).

Wkład autora:
Caitong Wu: Metodologia, analiza formalna, selekcja danych, pisanie oryginalnego szkicu oraz pisanie i redagowanie. Yang Xiao: Konceptualizacja, badanie, wizualizacja i walidacja. Fuhan Fan: Walidacja i edycja. Zhangli Lei, Xianhua Zhou i Xianli Meng: Redakcja i tłumaczenie. Yong Zeng, Hou Ya i Peng Shen: Konceptualizacja, metodologia, walidacja, badanie, przegląd i korekta projektu oraz nadzór.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
ALPInstytut Bioinżynierii Nanjing JianchengA059-2-2
ALTInstytut Bioinżynierii Nanjing JianchengC009-2-1
ASTInstytut Bioinżynierii Nanjing JianchengC010-2-1
BCABoster Biological Technology Co., LtdAR0146
CDCAChengdu Medesheng Technology Co., Ltd474-25-9
zestaw do liczenia komórek-8Boster Biological Technology Co., LtdAR1160-500
Cytochrom P450 7A1 PrzeciwciałoAbmart Shanghai Co., Ltd.
DAPIBeyotime BiotechnologyC1005
DMSOBoster Biological Technology Co., LtdPYG0040
Kozia IgG Anty-Królicza (H& L)Chengdu Zen-Bioscience Co., Ltd.
Koza anty-królicza IgG AF488Abmart Shanghai Co., Ltd.
GPSChengdu Medesheng Technology Co., LtdRP210717
GSHNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA006-2-1
Komórki HepG2Procell Nauki przyrodnicze i Technology Co., LtdCL-0103
HRP Koza IgG IgG IgGWuhan  ABklonalny  Biotechnology Co., Sp. z o.o. AS014
IL-1βElabscience Biotechnology Co., LtdE-EL-H0149c
IL-6Elabscience Biotechnology Co., LtdE-EL-H6156
MDANanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA003-1-2
Podłoże bazowe MEMProcell Nauki przyrodnicze i Technology Co., LtdPM150410
PBSBoster Biological Technology Co., LtdPYG0021
Bufor szybkiego transferu (20 razy;)NCM BiotechWB4600
RIPABoster Biological Technology Co., LtdBL651A
ROSBeyotime BiotechnologyS0033S
SHP2 Rabbit pAbWuhan  ABklonalny  Biotechnology Co., Sp. z o.o. A12486
SLC10A1 PrzeciwciałoAbmart Shanghai Co., Ltd.
SODInstytut Bioinżynierii Nanjing JianchengA001-3-1
TBAInstytut Bioinżynierii Nanjing JianchengE003-2-1
T-CHOInstytut Bioinżynierii Nanjing JianchengA111-1-1
TGInstytut Bioinżynierii Nanjing JianchengA110-1-1
TGR5 Przeciwciało poliklonalneFirma biotechnologicznaImmunoWay YT4636
TNF-αElabscience Biotechnology Co., LtdE-EL-H0109c
Roztwór trypsyny (0,25%)Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd40126ES60
UDCAChengdu Lemetian Medical Technology Co., LtdDSTDX007601
β-Actin Rabbit mAbWuhan  ABklonalny  Biotechnology Co., Sp. z o.o. Zobacz materiał AC026
TD2612S511202M21012MPU276166S

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Li, T., Hasan, M. N., Gu, L. Bile acids regulation of cellular stress responses in liver physiology and diseases. eGastroenterology. 2 (2), e100074(2024).
  2. Lin, S., et al. A systemic combined nontargeted and targeted LC-MS based metabolomic strategy of plasma and liver on pathology exploration of alpha-naphthylisothiocyanate induced cholestatic liver injury in mice. J Pharma Biomed Anal. 171, 180-192 (2019).
  3. Pouwels, S., et al. Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD): a review of pathophysiology, clinical management and effects of weight loss. BMC Endocr Disord. 22 (1), 63(2022).
  4. Wagner, M., Fickert, P. Drug Therapies for Chronic Cholestatic Liver Diseases. Ann Rev Pharmacol Toxicol. 60, 503-527 (2020).
  5. Nasr, P., Ignatova, S., Kechagias, S., Ekstedt, M. Natural history of nonalcoholic fatty liver disease: A prospective follow-up study with serial biopsies. Hepatol Commun. 2 (2), 199-210 (2017).
  6. Halilbasic, E., Claudel, T., Trauner, M. Bile acid transporters and regulatory nuclear receptors in the liver and beyond. J Hepatol. 58 (1), 155-168 (2013).
  7. Katafuchi, T., Makishima, M. Molecular Basis of Bile Acid-FXR-FGF15/19 Signaling Axis. Int J Mol Sci. 23 (11), 6046(2022).
  8. Ding, L., Yang, L., Wang, Z., Huang, W. Bile acid nuclear receptor FXR and digestive system diseases. Acta Pharma Sinica. B. 5 (2), 135-144 (2015).
  9. Wei, S., et al. The contribution of small heterodimer partner to the occurrence and progression of cholestatic liver injury. J Gastroenterol Hepatol. 39 (6), 1134-1144 (2024).
  10. Bhatt, A., Rawal, R. S., Dhar, U. Ecological features of a critically rare medicinal plant, Swertia chirayita in Himalaya. Plant Species Biol. 21, 49-52 (2006).
  11. Swati, K., Bhatt, V., Sendri, N., Bhatt, P., Bhandari, P. Swertia chirayita: A comprehensive review on traditional uses, phytochemistry, quality assessment and pharmacology. J Ethnopharmacol. 300, 115714(2023).
  12. Yong, Q., et al. Gentiopicroside improves NASH and liver fibrosis by suppressing TLR4 and NLRP3 signaling pathways. Biomed Pharmacother. 177, 116952(2024).
  13. Shi, M., Tang, J., Zhang, T., Han, H. Swertiamarin, an active iridoid glycoside from Swertia pseudochinensis H. Hara, protects against alpha-naphthylisothiocyanate-induced cholestasis by activating the farnesoid X receptor and bile acid excretion pathway. J Ethnopharmacol. 291, 115164(2022).
  14. He, X., et al. Swertia bimaculata moderated liver damage in mice by regulating intestine microbiota. Ecotoxicol Environ Saf. 263, 115223(2023).
  15. Lad, H., Bhatnagar, D. Amelioration of oxidative and inflammatory changes by Swertia chirayita leaves in experimental arthritis. Inflammopharmacology. 24 (6), 363-375 (2016).
  16. Chen, Y., et al. In vitro and in vivo antioxidant effects of the ethanolic extract of Swertia chirayita. J Ethnopharmacol. 136 (2), 309-315 (2011).
  17. Qin, J., et al. Determination of the pharmacodynamic substances and mechanism of Shiwuwei Saierdou Pills against cholestatic hepatitis through chemical profile identification and network pharmacology analysis. Arabian J Chem. 17 (2), 105504(2024).
  18. Guo, S., et al. Swertia L.: A comprehensive review of its genetic relationship, chemical compositions, pharmacological effects, toxicities, and applications. Phytother Res. 37 (6), 2605-2643 (2023).
  19. Zhang, Y., Pan, S., Yi, S., Sun, J., Wang, H. Gentiopicroside ameliorates CCl4-induced liver injury in mice by regulating the PPAR-γ/Nrf2 and NF-κB/IκB signaling pathways. J Int Med Res. 51 (10), 3000605231204501(2023).
  20. Xiao, H., et al. Gentiopicroside targets PAQR3 to activate the PI3K/AKT signaling pathway and ameliorate disordered glucose and lipid metabolism. Acta Pharma Sinica. B. 12 (6), 2887-2904 (2022).
  21. Wang, L., et al. Gentiopicroside improves high-fat diet-induced NAFLD in association with modulation of host serum metabolome and gut microbiome in mice. Front Microbiol. 14, 1145430(2023).
  22. Chen, Q., et al. Gentiopicroside inhibits the progression of gastric cancer through modulating EGFR/PI3K/AKT signaling pathway. Euro J Med Res. 29 (1), 47(2024).
  23. Tang, X., et al. Target profiling analyses of bile acids in the evaluation of hepatoprotective effect of gentiopicroside on ANIT-induced cholestatic liver injury in mice. J Ethnopharmacol. 194, 63-71 (2016).
  24. Han, H., Xu, L., Xiong, K., Zhang, T., Wang, Z. Exploration of Hepatoprotective Effect of Gentiopicroside on Alpha-Naphthylisothiocyanate-Induced Cholestatic Liver Injury in Rats by Comprehensive Proteomic and Metabolomic Signatures. Cell Physiol Biochem Int J Exp Cell Physiol Biochem Pharmacol. 49 (4), 1304-1319 (2018).
  25. Jin, M., et al. Gentiopicroside Ameliorates Oxidative Stress and Lipid Accumulation through Nuclear Factor Erythroid 2-Related Factor 2 Activation. Oxid Med Cell Longev. 2020, 2940746(2020).
  26. Huang, C., et al. Gentiopicroside improves non-alcoholic steatohepatitis by activating PPARα and suppressing HIF1. Front Pharmacol. 15, 1335814(2024).
  27. Choi, J. M., et al. HepG2 cells as an in vitro model for evaluation of cytochrome P450 induction by xenobiotics. Arch Pharma Res. 38 (5), 691-704 (2015).
  28. Labib, P. L., Goodchild, G., Pereira, S. P. Molecular Pathogenesis of Cholangiocarcinoma. BMC Cancer. 19 (1), 185(2019).
  29. Bai, J., et al. The enhanced mitochondrial dysfunction by cantleyoside confines inflammatory response and promotes apoptosis of human HFLS-RA cell line via AMPK/Sirt 1/NF-κB pathway activation. Biomed Pharmacother. 149, 112847(2022).
  30. Xie, N., et al. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 103, 154240(2022).
  31. Liu, Y. H., Guo, Y., Xu, H., Feng, H., Chen, D. Y. Impact of Non-Alcoholic Simple Fatty Liver Disease on Antituberculosis Drug-Induced Liver Injury. Infect Drug Resist. 14, 3667-3671 (2021).
  32. Fu, Q., Jiang, Z. Z., Zhang, L. Y. Impairment of triptolide on liver mitochondria in isolated liver mitochondria and HL7702 cell line. Chinese J Integrat Med. 19 (9), 683-688 (2013).
  33. Tang, Y., et al. Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection. Eur J Pharmacol. 912, 174617(2021).
  34. Wang, X., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA 210/ISCU1/2(COX10) signaling pathway. J Ethnopharmacol. 241, 111801(2019).
  35. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 109, 154568(2023).
  36. Yu, H., Wangensteen, K., Deng, T., Li, Y., Luo, W. MRGPRX4 in Cholestatic Pruritus. Semin Liver Dis. 41 (3), 358-367 (2021).
  37. Rini, S. S., Wibawa, I. D. N. Evaluation and Management of Chronic Cholestatic Liver Diseases. Middle East J Digest Dis. 15 (3), 148-155 (2023).
  38. Srivastava, A. Progressive familial intrahepatic cholestasis. J Clin Exp Hepatol. 4 (1), 25-36 (2014).
  39. Samant, H., et al. Cholestatic liver diseases: An era of emerging therapies. World J Clin Cases. 7 (13), 1571-1581 (2019).
  40. Younossi, Z. M., et al. Obeticholic acid for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis: interim analysis from a multicentre, randomised, placebo-controlled phase 3 trial. Lancet. 394 (10215), 2184-2196 (2019).
  41. Trauner, M., et al. Safety and Sustained Efficacy of the Farnesoid X Receptor (FXR) Agonist Cilofexor Over a 96-Week Open-label Extension in Patients With PSC. Clin Gastroenterol Hepatol. 21 (6), 1552-1560.e2 (2023).
  42. Sanyal, A. J., et al. Potent suppression of hydrophobic bile acids by aldafermin, an FGF19 analogue, across metabolic and cholestatic liver diseases. JHEP Rep Innovat Hepatol. 3 (3), 100255(2021).
  43. Iracheta-Vellve, A., et al. FXR and TGR5 Agonists Ameliorate Liver Injury, Steatosis, and Inflammation After Binge or Prolonged Alcohol Feeding in Mice. Hepatol Commun. 2 (11), 1379-1391 (2018).
  44. Han, H., Xu, L., Xiong, K., Zhang, T., Wang, Z. Exploration of Hepatoprotective Effect of Gentiopicroside on Alpha-Naphthylisothiocyanate-Induced Cholestatic Liver Injury in Rats by Comprehensive Proteomic and Metabolomic Signatures. Cell Physiol Biochem. 49 (4), 1304-1319 (2018).
  45. Lai, Q., et al. Mechanisms for Bile Acids CDCA- and DCA-Stimulated Hepatic Spexin Expression. Cells. 11 (14), 2159(2022).
  46. Li, X., et al. UDCA and CDCA alleviate 17α-ethinylestradiol-induced cholestasis through PKA-AMPK pathways in rats. Toxicol Appl Pharmacol. 311, 12-25 (2016).
  47. Sonne, D. P., et al. Postprandial Plasma Concentrations of Individual Bile Acids and FGF-19 in Patients With Type 2 Diabetes. J Clin Endocrinol Metabol. 101 (8), 3002-3009 (2016).
  48. Tang, X., et al. Target profiling analyses of bile acids in the evaluation of hepatoprotective effect of gentiopicroside on ANIT-induced cholestatic liver injury in mice. J Ethnopharmacol. 194, 63-71 (2016).
  49. Hao, J., et al. Gentiopicroside Ameliorated Ductular Reaction and Inflammatory Response in DDC-induced Murine Cholangiopathies Model. Curr Mol Pharmacol. , (2023).
  50. Han, S., et al. Probiotic Pediococcus pentosaceus Li05 Improves Cholestasis through the FXR-SHP and FXR-FGF15 Pathways. Nutrients. 15 (23), 4864(2023).
  51. Yan, M., et al. Diosgenin alleviates nonalcoholic steatohepatitis through affecting liver-gut circulation. Pharmacol Res. 187, 106621(2023).
  52. Huang, C., et al. Gentiopicroside improves non-alcoholic steatohepatitis by activating PPARα and suppressing HIF1. Front Pharmacol. 15, 1335814(2024).
  53. Xie, X., et al. Therapeutic effects of gentiopicroside on adjuvant-induced arthritis by inhibiting inflammation and oxidative stress in rats. Int Immunopharmacol. 76, 105840(2019).
  54. Peiseler, M., et al. Immune mechanisms linking metabolic injury to inflammation and fibrosis in fatty liver disease - novel insights into cellular communication circuits. J Hepatol. 77 (4), 1136-1160 (2022).
  55. Ren, G., et al. Synthesis and Biological Evaluation of Gentiopicroside Derivatives as Novel Cyclooxygenase-2 Inhibitors with Anti-Inflammatory Activity. Drug Des Devel Ther. 17, 919-935 (2023).
  56. Zhang, Y., Pan, S., Yi, S., Sun, J., Wang, H. Gentiopicroside ameliorates CCl4-induced liver injury in mice by regulating the PPAR-γ/Nrf2 and NF-κB/IκB signaling pathways. J Int Med Res. 51 (10), 3000605231204501(2023).
  57. Wu, L., et al. Lactobacillus acidophilus ameliorates cholestatic liver injury through inhibiting bile acid synthesis and promoting bile acid excretion. Gut microbes. 16 (1), 2390176(2024).
  58. Zhang, L., et al. Isoastragaloside I attenuates cholestatic liver diseases by ameliorating liver injury, regulating bile acid metabolism and restoring intestinal barrier. J Ethnopharmacol. 335, 118649(2024).
  59. Ma, X., et al. Paeoniflorin inhibited GSDMD to alleviate ANIT-induced cholestasis via pyroptosis signaling pathway. Phytomedicine. 134, 156021(2024).
  60. Zhang, Z., et al. Biliary NIK promotes ductular reaction and liver injury and fibrosis in mice. Nat Commun. 13 (1), 5111(2022).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Ochronna rola gentiopikrosyducholestatyczne uszkodzenie w trobyleczenie CDCAmetabolizm kwas w ciowychstres oksydacyjnyodpowied zapalnaWestern blotmikroskopia konfokalnadokowanie molekularne
Film wkrótce dostępny

Powiązane artykuły