Skuteczne techniki kompleksowego pobierania próbek dostępnych tkanek u dorosłych Xenopus

Summary

To jest pierwsza część kompleksowego protokołu próbkowania Xenopus. Pobrane tkanki to komora serca, pień tętniczy, lewy płat wątroby, pęcherzyk żółciowy, płuco, trzustka, śledziona, krtań, przełyk, żołądek, jelita, jądra, ciała tłuszczowe, jajowód, sparowane nerki, splot kulszowy, skóra, grasica i całe oko.

Abstract

Xenopus od dawna jest kluczowym organizmem modelowym do badania rozwoju i chorób kręgowców, oferując głęboki wgląd w procesy komórkowe i funkcje genów. Pomimo bogactwa informacji na temat embrionalnego Xenopusa, nadal istnieje znaczna luka w standaryzowanych metodach pobierania próbek z tkanek dorosłych, zwłaszcza w przypadku nowoczesnych podejść, takich jak proteomika ilościowa. Badanie to wprowadza kompleksowy protokół do szybkiego, precyzyjnego i wydajnego pobierania próbek z wielu tkanek u dorosłych Xenopus. Protokół odpowiada na wyzwania związane z subtelnymi różnicami anatomicznymi w porównaniu z innymi bezogonowcami, zapewniając powtarzalność nawet dla osób z ograniczonym doświadczeniem w sekcjach żab. Protokół ten jest zoptymalizowany pod kątem wysokiej jakości analiz biochemicznych poprzez priorytetowe traktowanie świeżości próbki. Umożliwiamy szybkie pobranie do 18 tkanek w ciągu godziny. Ponadto metody te mają zastosowanie do warunków perfuzji i nieperfuzji, zapewniając elastyczność dla szeregu potrzeb eksperymentalnych. Prace te nie tylko wypełniają krytyczną lukę metodologiczną dotyczącą Xenopus laevis i tropicalis, ale także służą jako cenne źródło informacji dla badaczy dostosowujących techniki do podobnych modeli, zwiększając w ten sposób zakres i wiarygodność porównawczych badań biologicznych i ewolucyjnych.

Introduction

Xenopus oferuje unikalną przewagę nad myszami, danio pręgowanymi i innymi organizmami modelowymi do badania chorób ludzkich, szczególnie w kontekście rozwojowym i ewolucyjnym. Jego zewnętrzny rozwój embrionalny i duże, łatwe do manipulowania zarodki umożliwiają obserwację w czasie rzeczywistym i interwencje eksperymentalne (np. przeszczep tkanki, edycję genów), które są trudne u myszy, które rozwijają się wewnętrznie i wymagają inwazyjnych procedur. Dodatkowo, trójkomorowe serce i czworonogi Xenopusa stanowią bardziej bezpośredni ewolucyjny pomost do badania wad wrodzonych¹, regeneration kończyn^2, oraz ....

Protocol

Wszystkie eksperymenty zostały zatwierdzone i przeprowadzone zgodnie z zasadami i przepisami Harvard Medical School IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee IS 00001365_3). Jeśli przed próbkowaniem przestrzegany jest protokół perfuzji¹³, przejdź do kroku 2.3.

1. Przygotowanie (bez perfuzji)

1. Upewnij się, że instytucja badawcza zatwierdziła technikę eutanazji opisaną w niniejszym protokole.
2. Przygotować roztwór 5 g/l MS-222 (metanosulfonian trikainy) i 5 g/l wodorowęglanu sodu (patrz tabela materiałów). Sprawdź pH, aby upewnić się, że wynosi ≥7,
   UWAGA: Objętość mu....

Results

Postępując zgodnie ze wszystkimi krokami tego protokołu, komora serca, pień tętniczy, lewy płat wątroby, pęcherzyk żółciowy, płuco, trzustka, śledziona, krtań, przełyk, żołądek, jelita, jądra, ciała tłuszczowe, jajowód, sparowane nerki, splot kulszowy, skóra, grasica i całe oko zostały czysto wycięte w ciągu godziny od eutanazji (zobacz Rysunek 1, Rysunek 2, Rysunek 3, Rysunek 4.......

Discussion

Przedstawiony tutaj protokół ma na celu zapewnienie elastyczności użytkownikom na różnych poziomach doświadczenia, przy jednoczesnym zapewnieniu pobierania niezbędnych tkanek w sposób terminowy i skuteczny. Zaleca się, aby nowi użytkownicy postępowali zgodnie z każdym krokiem w protokole, aby zapewnić systematyczne pobieranie tkanek. Bardziej doświadczeni użytkownicy mogą jednak zdecydować się na pominięcie niektórych kroków i pobranie próbek tylko tych tkanek, których potrzebują. Na przykład dostęp do śledziony, która z.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Corning	21-040-CV
5-krotne szkło powiększające ze światłem LED i podstawką		amazon.com B08QJ6J8P1	światło nie może wytwarzać ciepła
Jednorazowe pipety transferowe	VWR	414004-036
Kleszcze preparacyjne drobno spiczaste	Fisher Scientific	08-875
Nożyczki preparacyjne ostre, proste 6,5"	VWR	76457-374
Taca preparcyjna	Fisher Scientific	14-370-284	arkusze styropianu są akceptowalną alternatywą
Pojemnik do eutanazji	US Plastic	Pozycja  2860	alternatywnych nieprzezroczystych pojemników dopuszczalne
pokrywy pojemnika do eutanazji	US Plastic	Pozycja  3047
Nożyczki do irydektomii 6-calowe	nożyczki do irysa	VWR	470018-938
MS-222: Syncaina (dawniej trykaina)	Pentair AES	TRS1
5,5 cala, stal nierdzewna	Fisher Scientific	S08100
Wodorowęglan sodu, proszek, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Kleszcze do próbek, ząbkowane	VWR	82027-442
Kołki teowe do preparowania	Fisher Scinetific	S99385