Wykrywanie kwasu nukleinowego Mycoplasma pneumoniae i genu oporności na leki

Podsumowanie

Protokół ten zapewnia szybki i niezawodny sposób wykrywania zakażeń Mycoplasma pneumoniae i identyfikacji oporności na antybiotyki. Pomaga lekarzom w szybszym doborze odpowiednich metod leczenia, poprawiając opiekę nad pacjentami z zapaleniem płuc i wspierając lepsze stosowanie antybiotyków

Streszczenie

Mycoplasma pneumoniae (Mp) jest jednym z najbardziej rozpowszechnionych patogenów odpowiedzialnych za pozaszpitalne zapalenie płuc (CAP) w populacjach pediatrycznych. Wykrycie genów oporności na Mycoplasma pneumoniae zapewnia solidne wsparcie techniczne i teoretyczne podstawy do precyzyjnej diagnozy klinicznej i leczenia zakażeń MP. Dokładna diagnoza i ocena lekooporności w zakażeniu Mp są niezbędne w leczeniu klinicznym. Typowe metody wykrywania Mycoplasma pneumoniae obejmują hodowlę, wykrywanie przeciwciał i testy oparte na biologii molekularnej. Posiew Mp jest złotym standardem w diagnostyce, ale wymaga specjalnego podłoża, jest czasochłonny i ma niską czułość. Wykrywanie Mp na podstawie przeciwciał jest szeroko stosowane; Jednak wyniki fałszywie ujemne mogą wystąpić we wczesnym stadium zakażenia. Wykrywanie oparte na biologii molekularnej zapewnia szybki zwrot, niskie ryzyko zanieczyszczenia, wysoką czułość, wysoką swoistość i nie jest ograniczone czasem pobrania próbki ani statusem immunologicznym. Dlatego został uznany za nowy złoty standard w diagnozowaniu zakażenia Mycoplasma pneumoniae . Leki makrolidowe są leczeniem pierwszego wyboru w przypadku zakażenia Mp u dzieci. Jednak wraz z szerokim stosowaniem makrolidów w zakażeniach dróg oddechowych u dzieci, częstość występowania lekoopornego zakażenia Mycoplasma pneumoniae wzrasta. Pacjenci zakażeni szczepami opornymi doświadczają znacznie dłuższego czasu trwania gorączki, przedłużonej hospitalizacji i przedłużonej gorączki po podaniu w porównaniu z osobami zakażonymi szczepami wrażliwymi. Zidentyfikowane do tej pory miejsca mutacji to 2063, 2064, 2067 i 2617. W Chinach mutacje punktowe zostały udokumentowane tylko na pozycjach 2063 i 2064, przy czym najczęstsza jest substytucja A-to-G na pozycji 2063. W tych miejscach zastosowano reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) w połączeniu z technologią sondy fluorescencyjnej do wykrywania kwasów nukleinowych i mutacji oporności na leki Mycoplasma pneumoniae w próbkach ludzkiej plwociny. Wykrywanie genów oporności na Mycoplasma pneumoniae zapewnia kluczowe wsparcie techniczne i teoretyczną podstawę do dokładnej diagnozy i skutecznego leczenia zakażenia MP.

Wprowadzenie

Mycoplasma pneumoniae (Mp) jest najmniejszym mikroorganizmem chorobotwórczym zdolnym do samodzielnego przetrwania, znajdującym się na pozycji pośredniej między bakteriami a wirusami. Jest on przenoszony głównie drogą kropelkową lub aerozolami z dróg oddechowych i stanowi drugi najczęstszy patogen związany z pozaszpitalnym zapaleniem płuc (CAP) u dzieci¹, odpowiedzialny za 20% do 40% przypadków CAP². Mp wykazuje wrodzoną oporność na antybiotyki β-laktamowe, takie jak penicylina i cefalosporyny, ze względu na brak ściany komórkowej, na którą antybiotyki te są ukierunkowane, utrudniając syntezę ściany komórkowej. G....

Protokół

Wszystkie protokoły badań zostały zweryfikowane i zatwierdzone przez Komisję Etyki Medycznej Szpitala Ludowego Heyuan (nr zatwierdzenia. YXYJLL-LW2025001). Wszyscy pacjenci wyrazili pisemną świadomą zgodę przed uczestnictwem.

1. Pobieranie próbek

UWAGA: Zachowaj ostrożność w utrzymywaniu techniki aseptyki podczas pobierania próbki.

1. Zbierz próbki plwociny pacjenta lub pacjenta podejrzanego o zakażenie. Próbki należy pobrać w ciągu 3 dni od wystąpienia choroby u pacjenta.
2. Poinstruuj pacjenta, aby przepłukał usta wodą, oddychał głęboko, wstrzymał oddech na 5 s i stopniowo wydychał powietrze.

Wyniki

Po upłynnieniu, ekstrakcji kwasów nukleinowych i amplifikacji fluorescencyjnej PCR próbek plwociny, wartość początkowa, wartość końcowa i wartość progowa linii podstawowej zostały zmodyfikowane po analizie krzywej amplifikacji. Wartość początkowa wynosiła 3, a wartość końcowa wynosiła 20.

Reprezentatywne wyniki tego eksperymentu były pozytywne dla kwasu nukleinowego M, a mutacja oporności A: G wystąpiła w 2063 lub 2064 miejscach.......

Dyskusja

PCR i jego pochodne wykazują wyższą czułość i swoistość w porównaniu z metodami serologicznymi w identyfikacji, typowaniu i wykrywaniu lekooporności w Mycoplasma pneumoniae (MP). Co więcej, techniki oparte na PCR zapewniają łatwość obsługi i mniejsze wydatki, co czyni je realną alternatywą dla rutynowej diagnostyki klinicznej³⁶. Mp jest znaczącym patogenem związanym z CAP i wykazuje znaczne rozpowszechnienie³⁷. Wybór odpowiednich antybiotyków może przyspieszyć powr.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Zautomatyzowany przyrząd do ekstrakcji kwasów nukleinowych	Kanton da 'an Gene Co., Ltd.	Inteligentny 32
Wskazówki dotyczące filtrów	Coring Life Science Co., Sp. z o.o.	29822001	0-10 i mikro; L
Wskazówki dotyczące filtrów	Coring Life Science Co., Sp. z o.o.	03023001	1-50 i mikro; L
Wskazówki dotyczące filtrów	Coring Life Science Co., Sp. z o.o.	05623001	5-300 i mikro; L
Mikrorurki	Coring Life Science Co., Sp. z o.o.	14124934	1,5 ml
Mycoplasma pneumoniae zestaw do wykrywania miejsc mutacji kwasów nukleinowych i oporności na leki (metoda fluorescencji PCR)	Jiangsu Mole Biotechnology Co., Sp. z o.o.	20241111
Odczynnik do ekstrakcji kwasów jądrowych (metoda kulek magnetycznych)	Shengxiang Biotechnology Co., Sp. z o.o.	G24004 powiedział:
Probówki do PCR	DN Biotech (Hongkong)  Sp. z o.o.	6121003	0,2 ml
Przyrząd do fluorescencyjnego PCR w czasie rzeczywistym	BIO-RAD	Silnik CFX96